Hidrolisis de una proteína y ensayos para proteínas y aminoácidos

Alfaro M. Paola V. Vázquez M. Selene I. y Solís C. Korina A.

Resumen
Se llevó acabo la hidrolisis de una proteína así como su identificación, para ello se prepararon cuatro soluciones la A que fue a reflujo con
grenetina, B que es la solución A neutralizada con NaOH, la C grenetina con agua destilada y la D la albumina (clara de huevo) con agua,
procediendo a la identificación de aminoácidos con: reacción Xantoproteica, reacción de precipitación, reacción de Biuret, reacción de
nihidrina, reacción de ácido nitroso, acción reguladora de aminoácidos y cromatografía en placa fina.

Introducción
Las proteínas son biopolímeros de los α-aminoácido, llamados así polipéptido es un péptido que contiene muchos residuos de
debido a que el grupo amino esta enlazado al átomo de carbono α aminoácidos pero por lo general tiene una masa molecular de
adyacente al grupo carbonilo. Las propiedades físicas y químicas de alrededor de 5000. Las proteínas contienen más unidades de
una proteína están determinadas por los aminoácidos que la aminoácidos, con masas moleculares que van de alrededor de 6000
constituyen. Las subunidades individuales de los aminoácidos se a 40000000.
unen por medio de enlaces de amida llamados enlaces peptídicos.
Niveles de estructura de la proteína:
El termino aminoácido podría significar cualquier molécula que *estructura primaria: estructura enlazada de manera covalente de la
contenga un grupo amino y cualquier tipo de grupo acido; sin molécula, esta incluye la secuencia de los aminoácidos.
embargo, el termino casi siempre se usa para referirse a un ácido *estructura secundaria: tienden a formar arreglos ordenados
carboxílico α-amino. enlazados por puentes de hidrogeno.
*estructura terciaria: incluye todas las estructuras secundarias y
Un péptido es un compuesto que contiene dos o más aminoácidos todos los dobleces y plegados entre ellas.
unidos por medio de enlaces de amida entre el grupo amino de cada *estructura cuaternaria: a la asociación de dos o más cadenas de
aminoácido y el grupo carboxilo del aminoácido vecino. A cada péptidos en la proteína completa.
unidad de aminoácido en el péptido se le llama residuo. Un

Discusión de resultados

Se pudieron identificar distintos aminoácidos presentes en las

proteínas siguientes por medio de reacciones de identificación:

Esquema 2. Grenetina hidrolizada neutra

1. Hidrolisis de una proteína (Solución A):

En un matraz se colocaron 200mL, 1g de grenetina ,10mL de HCl
concentrado y 10mL de agua destilada, se colocó a reflujo y
calentamos durante 35 minutos, obteniendo una solución por a la
cual se le añadió un poco de carbón activado para eliminar estas
trazas de olor y color se calentó a ebullición por 2 minutos
posteriormente se filtró la solución, obteniendo la solución “A”,
(grenetina hidrolizada). Posteriormente se realizaron las pruebas de
identificaron para conocer los aminoácidos de nuestra solución A. La
reacción de hidrolisis de nuestra proteína fue la siguiente.
3. Solución de Grenetina sin Hidrolizar (Solución C):
En un vaso de precipitados añadimos 0.5g de grenetina y 20mL de
agua destilada y se agitamos vigorosamente, hasta disolución total.
Con lo cual se obtuvo nuestra grenetina desnaturalizada.
4. Solución de Albúmina (Solución D):
Se agito la clara de huevo por 10 segundos, se le agrego 50mL de
agua, agitamos y filtramos la solución. (Desnaturalización).
Posteriormente se realizaron las pruebas de identificación de
aminoácidos que poseían nuestras proteínas de grenetina y de
albumina

I. Reacción Xantoproteíca:

Los aminoácidos aromáticos como la tirosina, el triptófano y la

Esquema 1. Hidrólisis de una proteína
2. Solución neutralizada de hidrolizado
Grenetina (Solución B):
Para la neutralización de la proteína, se colocaron 5mL de la
grenetina hidrolizada y NaOH al 10%, hasta obtener un pH de
7(neutro), lo cual se verifico con ayuda de papel pH, obteniendo
nuestro compuesto llamado zwitterión que es un aminoácido
estabilizado por una carga positiva y una negativa (Ver esquema 2).
fenilalanina presentes en las proteínas dan un precipitado de color
de amarillo cuando son calentados con HNO3 concentrado. Con adición
de un medio alcalino, el precipitado se vuelve naranja debido a la
nitración del anillo aromático. La reacción solo dio positiva a la
solución D ya que esta proteína (albumina de huevo) cuenta con
tirosina, triptófano y fenilalanina en su estructura. Mientras que la
solución A (grenetina) solo tiene trazas de tirosina y fenilalanina, pero
carece de triptófano.
II. Reacción de Precipitación:
El enlace disulfuro es un enlace covalente que se produce cuando V. Reacción con ácido nitroso
dos grupos sulfhidrílo (SH) reaccionan para formar un puente
disulfuro (SS). Los residuos de cisteína pueden formar puentes Esta reacción determino la cantidad de grupos aminos libres de los
disulfuro. Pueden unir 2 cadenas peptídicas o una sola para formar péptidos y las proteínas midiendo la cantidad de nitrógeno liberado y
un anillo. Dicha prueba identifica los enlaces disulfuro de las esto se puso de manifiesto mediante un burbujeo.
proteínas, en donde a mayor parte las proteínas que contengan un
número mayor de puentes disulfuro, Solución Reaccionó
“A”(Grenetina) Si
Sustrato Observaciones “C” (Grenetina desnaturalizada) No
Solución “A”(Grenetina)
FormacióFormación de precipitado blanco “D” (Albúmina) No
Solución “D” (Albúmina)
FormacióFormación de precipitado café H2O (sin proteína) No

VI. Acción reguladora de aminoácidos

III. Reacción de Biuret
Los -aminoácidos son anfóteros. La zona de viraje del rojo congo
La reacción de Biuret es un método general para la determinación de es de 5.2, así que el empleo de gotas de HCl para alcanzar una
proteínas o péptidos, se basa en la reacción del sulfato de cobre con coloración azul en la solución B confirma que se lleva a cabo una
compuestos que tengan 2 o más enlaces peptídicos, en un medio reacción ácido-base. La zona de viraje de la fenoftaleina es en un pH
alcalino. El producto es un complejo color violeta, cuya intensidad de 8.6, de tal manera que la adición de unas gotas de NaOH a la
depende la cantidad de enlaces peptídicos presentes. Los di solución B demuestra la propiedad anfótera.
péptidos y aminoácidos dan esta prueba negativa.
Solución Indicador Color Gotas Color
Esquema 3. Reacción Biuret inicial final
Agua Rojo Congo Rojo 1 HCl Azul
En nuestro
Sol. B Rojo Congo Rojo 5 HCl Azul
caso la prueba
dio positiva en la solución C y D, solo en Agua Fenoftaleina Transparente 1 NaOH Rosa
presencia de hidróxido de sodio, por lo tanto las Sol. B Fenoftaleina Transparente 4 NaOH Rosa
soluciones C y D tienen enlaces peptídicos.
VII. Cromatografía en Capa fina
IV. Reacción con ninhidrina
Por medio de la cromatografía en capa fina se separaron la mezcla
Cuando la ninhidrina reacciona con un aminoácido uno de los de aminoácidos de la solución B con 2 aminoácidos patrones
productos es un anión violeta obscuro estabilizado por resonancia (Fenilalanina y glicina) tomando como base su polaridad.
llamado purpura de Ruhemann. La ninhidrina produce este mismo
colorante purpura sin importan la estructura del aminoácido original, Dependiendo de sus polaridades, los aminoácidos tienen diferentes
por lo tanto, va identificar aminoácidos libres primarios, como afinidades a la fase móvil y la estacionaria y en consecuencia
resultado nuestra solución B y patrón tomaron una tonalidad violeta. ascienden en la placa con distinta rapidez. Los aminoácidos menos
polares ascienden por la placa con una mayor rapidez por su afinidad
a la placa obteniéndose los siguientes resultados:
 Sustancia Rf
Solución “B” No corrió
Fenilalanina 0.75
Glicina 0.39

Conclusión: enlaces peptídicos, la reacción con ninhidrina para

Existen varios métodos para identificar los aminoácidos
presentes en una proteína como es la reacción
Xantoproteica para identificar aminoácidos aromáticos, la
reacción de precipitación para identificar enlaces disulfuro
en los aminoácidos, la reacción de biuret para identificar
identificar aminoácidos libres , la reacción con ácido
nitroso para identificar aminos libres de los péptidos, por
último en la cromatografía identificar los aminoácidos
presentes en una proteína hidrolizada con base a su
polaridad.

Bibliografía
Wade, Leroy. Química Orgánica, Volumen 2. Séptima. México: PEARSON EDUCACION, 2011. Paginas consultadas: 1153