Cuestionario Previo

1. Cul es la funcin de la sacarosa en la extraccin de DNA?

La sacarosa (que se encuentra como componente en el buffer de lisis 1) sirve

para desestabilizar la envoltura celular mediante un choque osmtico.

2. Qu propiedades qumicas presenta el DNA?

Molcula constituida por una cadena polinucleotdica en donde cada

nucletido est constituido por un azcar de cinco miembros cclico
(desoxirribosa), una base prica (Adenina o Guanina) o pirimdica (Timina o
Citosina) y un grupo fosfato.
Estructura de doble hlice que posee enlaces N-glucsido (pentosa), Anhdrido
fosfrico (grupo fosfato), Enlace fosfodister que une a los nucletidos y puentes
de hidrogeno (entre las bases complementarias).
Molcula flexible que puede presentar numerosas variaciones estructurales.
Las dos cadenas que lo conforman son antiparalelas
Susceptible a reacciones de hidrlisis y alquilacin.
Cadena de gran longitud, con alto peso molecular.
Pares de base separados 3.4 A. Una vuelta de hebra (3.4 nm) tiene aprox. 10
pares de base.
La posicin de los esqueletos azcar-fosfato definen surco mayor y menor.
Puede sufrir la desnaturalizacin y renaturalizacin.
Es una molcula que en la parte interior posee una zona hidrofobia y en la parte
exterior es altamente hidroflico y con carga neta negativa debido a la presencia
de un grupo fosfato en cada monmero. Por esta razn su solubilidad en
solventes polares es muy alta.

3. Cul es el fundamento de la extraccin del DNA por la tcnica de perclorato

de sodio?

En presencia de altas concentraciones de sales, la solubilidad de las protenas

disminuye y termina por precipitar mediante la deshidratacin (salting out) ya
que las interacciones protena-protena se hacen ms fuertes que las
interacciones protena-disolvente y la protena precipita. El perclorato de sodio
se utiliza para desprotonizar las preparaciones de DNA. A altas concentraciones,
 el perclorato de sodio elimina el SDS y las protenas asociadas con l, adems,
previene la precipitacin de las protenas con el cido nucleico en el paso final
con el etanol.

4. Explica cul es la funcin del buffer de lisis 1 y 2.

El buffer de lisis 1 se encarga de realizar la lisis de glbulos rojos (eritrocitos), el

cual posee como componentes principales detergentes que por su estructura
qumica permite romper las membranas celulares y solubilizar las protenas.
El buffer de lisis 2 se encarga de realizar la lisis de glbulos blancos (leucocitos).
(Con la rotura celular, se liberan enzimas proteasas que pueden degradar la
protena de inters. Por tanto, es importante evitar, durante la preparacin de la
muestra, cualquier actividad protesica.) Es as que este segundo buffer de lisis
contiene EDTA el cual acta como inhibidor de dichas proteasas; acta como
quelante de cationes divalentes como Ca2+ y Mg2+ ya que dichas proteasas
slo actan en presencia de dicho catin.

5. Qu funcin tiene el SDS en la metodologa?

El SDS (dodecilsulfato sdico) es un detergente que ayuda a solubilizar los

constituyentes membranosos y de esta manera completar la destruccin de la
envoltura nuclear.

Referencias
Riera M., Rojas M., Zapata P. (2010). Protocolo de extraccin de DNA por salting-out
para pequeos volmenes de sangre. Rev. Cientfica. Tecnolgica. Vol. 12, N 14,
Pg. 47

UNAM. (2001). Estructura y funcin del DNA. Recuperado el 25 de agosto de 2017

de http://smcg.ccg.unam.mx/enp-unam/01 IntrodYEvolucion/structfuncDNA.pdf

Ciocchini, A., Niemirowicz, G. (2009). cidos nucleicos. Recuperado el 25 de agosto

de 2017 de:
http://www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnologia/2009/QuiBiol/T
PN5.pdf