Biología Molecular

Laboratorio Híbrido
Docente: Karla Selene Moran Santibañez
Práctica 3. Preparación de reactivos para extracción de
ADN.
Felipe Roel Mares Rodriguez, Fernanda Aisliin Mendivil
Villarreal, Regina Michelle Martinez Esquivel, Priscila
Jazmin Garcia Acuña.
 19 de Febrero de 2022

Diagrama de Flujo

Cálculos para preparación de soluciones.

Preparación Tris-Base 1M
M=mol/L
mol= M(L)
mol= (1M)(0.05L)=0.05
gr= (mol)(PM)
gr= 0.05 (121.14)= 6.057
Preparación EDTA
M=mol/L
mol= M(L)
mol= (0.5M)(0.01L)=0.005mol
gr= (mol)(PM)
gr= 0.005 (372.24)= 1.86 gr
Preparación NaCl 2.5 M
M=mol/L
mol= M(L)
mol= (2.5M)(0.05L)=0.125mol
gr= (mol)(PM)
gr= 0.125 (58.44)= 7.30 gr
Preparación SDS 20%
20%--20mL
20%---20g---100mL
X-----20mL
X=4g
Buffer TE

Resultados
Se prepararon las soluciones con su concentración requerida y ajustadas al pH correcto ,
cada una de estas soluciones cumplira su funcion cuando se haga la extracción de ADN,
actuando como lizantes de la célula y exponiendo el adn esto ocurre por acción del SDS, u
otra solución que también se preparó fue una solución de NaCl a 2.5 M la cual provocará que
se precipite el adn. Hubo detalles en la preparación de las soluciones de SDS y EDTA, y se
realizaron 2 veces.

Conclusión:
Las soluciones que se pueden emplear en la extracción de ADN pueden variar, esto debido a que
pueden diferir en el objetivo a detectar, pero todas guardan una cierta similitud en los pasos a
realizar, siguiendo el mismo fundamento de lisis celular, purificación y precipitación.

a) Investigar ¿qué función tiene la solución de Tris-base para el aislamiento de DNA?

Es un amortiguador. Los amortiguadores se encargan de mantener el pH en la solución. Este en
específico es una substancia básica. Con esto, se evita que se degrada el DNA y el RNA en las
células.

b) Investigar ¿qué función tiene la solución de EDTA para el aislamiento de DNA?

Una vez el ADN es liberado del núcleo, queda expuesto a las enzimas DNAsas de la célula que
degradan el ADN. Para evitar la degradación se usa el EDTA, agente quelante que atrapa los
iones Mg2+ usados por las DNAasas como cofactores

c) Investigar ¿qué función tiene la solución de NaCl para el aislamiento de DNA?

Las sales aumentan el poder iónico de la solución y ocasionan la precipitación del ADN

d) Investigar ¿qué función tiene la solución de SDS para el aislamiento de DNA?

Es un detergente aniónico que solubiliza los lípidos y proteínas, y desestabiliza la estructura de la

membrana celular (Rocha, 2002).

e) Investigar ¿qué función tiene el buffer TE en el aislamiento de DNA?

Aumenta la estabilidad del ADN en muestras almacenadas a largo o de uso frecuente, pues
inhibe DNasas presentes en la muestra

¿Qué otros reactivos son empleados para el aislamiento de DNA?

Proteinasa K: Es una enzima que sirve para romper/degradar a las proteínas que están unidas al
ADN

Centrífuga: equipo que ayuda a separar los diferentes componentes de una muestra por medio
de una fuerza giratoria

RNAsa: proteína (enzima) que rompe el ARN

b) Investiga y compara los componentes de un kit comercial con las soluciones que preparaste y
responde:

¿Cuáles son las soluciones que difieren entre ambos?

- En comparación con el kit comercial, las soluciones que difieren son casi la mayoría,
usando como ejemplo el kit de extracción de ADN TIS, el cual está basado en la acción
del yoduro de potasio, también es que este kit no es de aplicación tan general, y va más
indicado para extracciones de ADN en tejidos.
Identifica una solución que esté presente en el kit e investiga su función en el proceso de
aislamiento del DNA

- Yoduro de sodio, este componente provoca la lisis celular rompe la capa de

hidratación que rodea el ADN y logra que las cargas negativas de los grupos fosfatos
del ADN queden más expuestas.

REFERENCIAS :
Equipo DNA extractor TIS. (s. f.). wakolatinamerica. Recuperado 19 de febrero

de 2022, de

https://www.wakolatinamerica.com/productos-wako/marca/product/equipo-dna

-extractor-tis/#:%7E:text=El%20Kit%20para%20aislamiento%20de,del%20uso%

20de%20fenol%2Fcloroformo

Velázquez, L. P. A., MdCA, M., & Romero, A. C. (2014). Extracción y purificación de ADN.
Herramientas moleculares aplicadas en ecología: aspectos teóricos y prácticos