SANTIAGO CHUAIRE

TP: INFORME ÁCIDOS NUCLÉICOS

TEORÍA:

a) Observa los siguientes links

https://www.youtube.com/watch?v=dKVqtyDM7s4 https://www.youtube.com/watch?
v=x4yC2cPsKSA
https://www.youtube.com/watch?v=f3W3F9UsPNk

y luego responde. Recuerda el empleo del vocabulario específico, la redacción y

ortografía.
Además de que no es copiar solamente sino de que intérpretes y construyas tus
propias
respuestas.

b) ¿Cuál es la composición química de las bases puricas y

pirimidicas y sus
diferencias?
Las bases púricas tienen un anillo doble y a este grupo pertenecen la adenina (A) y
la guanina (G). Las bases pirimidínicas presentan un solo anillo y son la citosina (C),
la timina (T).

c) ¿Cuáles son las funciones del ADN? Explícalas.

El ADN codifica la información que las células necesitan para producir proteínas.

d) ¿Qué características químicas diferenciales hay entre la ribosa y

desoxirribosa y
¿por qué?
La ribosa se diferencia con la desoxirribosa en el Carbono 2, la ribosa presenta un
grupo OH unido, en cambio la desoxirribosa como su nombre lo indica carece de
ese átomo de oxígeno.

e) Los ácidos nucleicos son polímeros ¿Cómo se denominan cada

unidad que lo
forman y qué moléculas intervienen? Realiza un dibujo del mismo.
Los polímeros son macromoléculas compuestas por una o varias unidades químicas
(conocidas como monómeros) que se repiten a lo largo de toda la cadena. Son
producidos tras un proceso denominado polimerización que consiste en enlazar
mediante enlaces covalentes miles de pequeñas moléculas orgánicas denominadas
monómeros, o meros.

f) ¿Cuál es la orientación de cada cadena de ADN y cómo se

relacionan con el
anti paralelismo de las mismas? Explica.
Las dos cadenas son complementarias, la adenina de una se une a la timina de la
otra, y la guanina de una a la citosina de la otra. Las dos cadenas son antiparalelas,
el extremo 3´de una se enfrenta al extremo 5´de la otra.

g) El ARN tiene diferencias con el ADN, explícalas y menciona

cuales son los tres
tipos principales las funciones de cada uno de ellos.?
El ADN está formado por dos cadenas largas que se enrollan entre sí en una
espiral, en cambio el ARN está compuesto por una única cadena con estructura
lineal y de menor longitud. El ARN tiene uracilo, pero el ADN lo sustituye por timina.
El ADN es una cadena doble y el ARN es una sola hebra.
FUNCIONES:
ADN: codifica la información que las células necesitan para producir proteínas.
ARN: Las células elaboran varias formas diferentes de ARN y cada forma cumple
una función específica en la célula.

SEGUNDA PARTE:
DISEÑO EXPERIMENTAL
TEMA: OBSERVACIÓN DE ADN EN ORGANISMOS PROCARIONTES
Y EUCARIONTES

Materiales:
1. Una bolsa de levadura de cerveza de 10 gs.
2. Agua fría.
3. Un limón, (zumo).
4. Filtro de café.
5. Probeta de 100ml.
6. Tubos de ensayo.
7. Detergente.
8. Cloruro de sodio.
9. Alcohol etílico frío.

PROCEDIMIENTO:

a) Mezclar media taza de levadura con 150ml de agua fría, 1/3 de cucharadita de
cloruro de sodio y 10 ml de jugo de limón.
b) Mezclar suavemente.
c) Verter la mezcla por un filtro y conservar la pulpa
d) Preparar 150 ml de agua fría con 1/3 de cucharadita de cloruro de sodio, tres
cucharaditas de alcohol etílico y dos gotas de detergente.
e) Agregar la pulpa y mezclar
f) Revolver suavemente durante 10 minutos
g) Agregar 3 cucharaditas de cloruro de sodio y agitar 5 minutos
h) Dejar reposar hasta que precipite, el cual debe ser extraído conservando la parte
líquida.
i) Diluir el líquido con tres veces el volumen de alcohol
j) Observa que va sucediendo.

5) Indaga bibliográficamente que otros procedimientos se usan

para extraer ADN. Explicar.
Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos: Si se opta
por realizar el lisado de las células mediante un proceso mecánico hay que tener en
cuenta la posibilidad de ruptura de las moléculas de ADN que se intentan separar,
por lo que este debe bastar para lograr la lisis de las células, pero no ser muy
agresivo para proteger el ADN. Este método puede ser usado para extraer ADN de
material crudo, liofilizado o congelado, que puede romperse con un mortero, por
congelación-descongelación o usando ultrasonidos.
Uso de la proteinasa K y el dodecilsulfato de sodio: El procedimiento conocido
como PK-SDS por sus siglas en inglés proteinase K - sodium dodecyl sulfate, es
uno de los más usados para la extracción de ADN ya que la digestión de la muestra
se puede realizar con proteinasa K que es activada por el dodecil sulfato de sodio.
Método de extracción de ADN con yoduro de sodio como agente caotrópico en
un único tubo: pone a disposición de los investigadores y empresas varios kits de
ADN que usan yoduro de sodio como agente caotrópico, que tienen la ventaja de
que la extracción se realiza en un único micro tubo de centrifugado. El yoduro de
sodio además de provocar la lisis celular rompe la capa de hidratación que rodea el
ADN y logra que las cargas negativas de los grupos fosfatos del ADN queden más
expuestas.
Extracción con gradientes de cloruro de cesio – bromuro de etidio: El ADN
genómico puede ser purificado por centrifugación selectiva a través de la generación
de gradientes de cloruro de cesio. Primeramente, se lleva a cabo el lisado celular
por métodos mecánicos o químicos y la mezcla es centrifugada durante varias horas
en presencia de bromuro de etidio. Como hay bromuro de etidio en el medio, se
pueden visualizar las diferentes capas en las que se agrupan los ácidos nucleicos
según su densidad con luz ultravioleta. Se obtienen varias capas que pueden
separarse y recuperar el ADN purificado.
Intercambio aniónico para la extracción de ADN del lisado celular: La
cromatografía en fase sólida de intercambio aniónico se basa en la interacción que
se establece entre los grupos fosfatos cargados negativamente del ADN y la matriz
molecular con que se compacta la columna. Esta interacción hace que las
moléculas de ADN queden retenidas en la fase estacionaria de la columna y puedan
separarse de las proteínas y demás metabolitos presentes. Luego añadiendo una
alta concentración de sales a la fase móvil se logra eludir el ADN, que si es
necesario es precipitado con alcohol para futuras aplicaciones, si no puede utilizarse
directamente disuelto en el buffer con sales en el que se elude.
Uso de resinas de intercambio iónico: Para la extracción del ADN también se han
diseñado resinas que son capaces de formar complejos con el ADN. El uso de
resinas hidrocarbonadas con estructuras rígidas en tres dimensiones permite que la
superficie se encuentre cargada con alguna sustancia como el dietilaminoetilo que
puede protonarse en medio ácido y quedar cargado positivamente por lo que
interacciona con los grupos fosfatos del ADN. Esto es un método directo, que puede
realizarse en un solo tubo y relativamente rápido, pero tiene como inconveniente
que se aíslan cadenas sencillas de ADN, y este no puede ser utilizado por ejemplo
para el análisis de la variación de polimorfismos en fragmentos de restricción
(RFLP).

1)Registra fotográficamente o dibuja lo observado.

3) ¿Qué función cumple el detergente para la extracción de ADN?
¿Por qué?
La función que cumple el detergente es de romper las membranas celular y nuclear,
dejando el ADN libre.

2) ¿Por qué se utiliza alcohol para separar el ADN de las células?

La adición de alcohol frío precipita el ADN dado que es insoluble en altas
concentraciones de sal y alcohol. El ADN precipitado forma unas finas hebras
blancas y visibles en el límite de separación de la fase de alcohol, mientras que el
resto de las sustancias permanecen disueltas.

4) ¿Qué función tiene el jugo de limón?

La función que cumple el jugo de limón es el de las enzimas y atacan a las proteínas
de las células, lo que permite romperlas y separarlas del ADN.