7 PASOS PARA EL MEJORAMIENTO CONTINUO DEL METODO

DE LA TINCION GRAM

1. Seleccin de los problemas (Oportunidad de mejoras)

a. Descripcin del proceso

La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin
diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias, Se
utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como
para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana,
considerndose bacterias Gram positivas a las que se visualizan de color
morado, y bacterias Gram negativas a las que se visualizan de color rosa,
rojo o grosella.
b. Conceptos de Calidad y Productividad del Grupo
El cristal violeta penetra en todas las clulas bacterianas a travs de la pared
bacteriana.
El lugol es un compuesto formado por yodo en equilibrio con yoduro de
potasio y Siulterio, los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y
actan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor
intensidad a la pared de la clula bacteriana.
El yodo entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin
acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la
decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo yodo/cristal violeta.
Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram
negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin
de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como
la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas
Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen
violetas.

c. Caracterizacin del proceso

Fijacin de la
muestra

Cubrir la
superficie con el
Colorante Cristal
Violeta

Seleccin de
materiales

Lavar

Cubrir con el
mordiente
(Lugol)
Lavar

Lava
r

Sec
ar

Cubrir la
superficie con
Safranina

Lava
r

Baar con
Alcohol Acetona

Observacin al
Microscopio

Entrad
Proces
Salida

d. Estado Deseado y Requerido

Un microorganismo Gram positivo debe presentar una pared celular sana. El

mismo microorganismo, si sufre dao de la pared por una u otra causa, se
vuelve Gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la
retencin o el escape del colorante. Una posible teora del mecanismo de
tincin es la siguiente:
El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una
laca insoluble en agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar,
deshidratan las paredes de los microorganismos Gram positivos, tratados
con mordiente, y forma una barrera que la laca no puede atravesar. En las
clulas Gram negativas, los lpidos de la pared (ms abundantes que en las
clulas Gram positivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el
escape del complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan
esta teora, pero es indudable la importancia general de la pared celular.

e. Listado de Problemas

Reactivos de tincin.
pH de los colorantes de fijacin
Fijacin de la muestra
Tiempo de tincin
Asepsia del Laboratorio
Temperatura
Integrantes del proceso
Conocimientos previos

f. Preseleccin y jerarquizacin del Problema

.
- Falta de control en la calidad de los reactivos que puede afectar
directamente nuestros resultados.
- El mal control del tiempo es muy importante en este proceso
- La descoordinacin de los integrantes para realizar este proceso.
- El desorden del Laboratorio.
g. Seleccin del problema
-

La falta de control en el estado de los reactivos, orden del laboratorio y

coordinacin del equipo para la tcnica de coloracin Gram lo que origina
un error en los resultados.

2. Cuantificacin y subdivisin del problema

seleccionada.

u oportunidad de mejora

a. Indicadores
El problema se puede evidenciar cuando encontramos falsos negativos
dentro de nuestro proceso, en el caso de analizar una bacteria de E. coli y
tener como resultado una Gram positiva, cuando esta es negativa,
resultado que se puede originar por una mala aplicacin de los reactivos.
b. Sub Divisin del Problema
-

Los reactivos estn vencido

Los integrantes del grupo no tienen conocimientos del proceso
El laboratorio se encuentra contaminado
No se siguen en exactitud los tiempos del proceso
Sobrecalentamiento de la muestra en el momento de la fijacin
Variacin del pH de los reactivos por un mal almacenamiento
c. Cuantificacin de la Subdivisin del Problema.

Los reactivos estn vencido

Los integrantes del grupo no tienen conocimientos del proceso
El laboratorio se encuentra contaminado

3. Anlisis de Causas races especificas

a. Listado de Causas por subdivisin.

-

La deficiente gestin para acelerar los reactivos necesarios en Laboratorio.

El descuido por adquirir ms conocimientos sobre el proceso en el que se
trabajara.
El limitado espacio y la mala ubicacin de los materiales provoca un
desorden el cual conlleva a una contaminacin total del rea de trabajo.
La descoordinacin de labores provoca el cambio de tiempos.
Ausencia de prctica en la tcnica de fijacin de muestras.
Mala ubicacin de los reactivos.

b. Agrupacin de Causas (Diagrama de Causa y Efecto)

Mano de
Obra

M.
Ambiente

Contaminaci
n
Falta de
conocimien
tos

Desorde
n del
laborator
io

Reactiv
os
vencido

Variacin
de pH en
reactivos

Materiales

Descoordinaci
n

Falta
de
prctic

FALTA DE
CONTROL EN EL
ESTADO DE LOS
REACTIVOS,
ORDEN EN
LABORATORIO Y
COORDINACION
DEL GRUPO PARA
EL PROCESO DE

Mtodo

c. Cuantificacin de las causas a travs del Diagrama de Pareto

La deficiente gestin..
El descuido por adquirir ms conocimientos sobre el proceso.
El limitado espacio y la mala ubicacin de los materiales
La descoordinacin de labores ..
Ausencia de prctica en la tcnica de fijacin de muestras
Mala ubicacin de los reactivos..
Otros....

Tabla 1. Datos de Diagrama de Pareto

Datos Ordenados
La deficiente gestin
El descuido por adquirir ms
conocimientos sobre el

Frecue
ncia

%
Acumul
Relativo ado
29.0909 29.0909
80
091
091
25 9.09090 38.1818
909
182

80
25
65
43
12
20
30

proceso
El limitado espacio y la mala
ubicacin de los materiales
La descoordinacin de
labores
Ausencia de prctica en la
tcnica de fijacin de
muestras
Mala ubicacin de los
reactivos

65
43
12
20

Otros
Total

30
275

23.6363
636
15.6363
636

61.8181
818
77.4545
455

4.36363
636
7.27272
727
10.9090
909
100

81.8181
818
89.0909
091
100

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%

250
200
150
100
50
0

Frecuencia

Acumulado

80-20

4. Nivel de desempeo requerido

Implementacin de un mejor laboratorio, para una mejor coordinacin y un buen
almacenamiento de reactivos.
a. Pasos para atacar las causas Races.
-

Organizacin de un buen equipo para acelerar la gestin de solicitud de

mejoramiento de laboratorios.
Coordinacin y apoyo de los colaboradores del grupo

Ampliacin del Laboratorio

Mejorar la calidad de prcticas en el laboratorio

b. Impacto Gradual esperado

Entonces, a travs del cumplimiento de estos pasos se lograra lograr la
exactitud de nuestros resultados,
5. Diseo y Programacin de soluciones.
a. Listado de Soluciones
-

Implementacin inmediata de los laboratorios

Grupo capacitado y organizado para cumplir todos los procesos de
laboratorio
Ampliacin y ordenamiento inmediato del laboratorio
Practica eficientes y controladas

b. Seleccin de Soluciones ms factibles

-

Implementacin inmediata de los laboratorios

Grupo capacitado y organizado para cumplir todos los procesos de
laboratorio

6. Implantacin de Soluciones
-

Verificar que se cumplan todas las soluciones

7. Establecimiento de Acciones de Garanta

-

Normalizar practicas consecutivas para el mejoramiento y aprendizaje de la

tcnica
Elaborar un plan de ordenamiento mensual del laboratorio para constatar
que todo se encuentre en el lugar indicado.
Capacitaciones continuas del equipo de trabajo
La verificacin que todos los reactivos se encuentren en la fecha de uso
adecuada.