UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD DE INGENIERÍA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

CURSO: BIOLOGÍA.

TRABAJO: INFORME PRÁCTICA DE LA LABORATORIO 06: TINCIÓN GRAM.

ALUMNA: ZELADA SILVA, Jhomayra del Carmen.

DOCENTE: MEDINA CAMPOS, Candy Azucena.

 INTRODUCCIÓN

Coloración Gram: El método de tinción diferencial más importante usado en

bacteriología es la tinción de Gram, llamada así en honor al Dr. Hans Christian
Gram. Este método divide las bacterias en dos grandes grupos, las Gram-negativas y
las Gram-positivas. Esto es esencial para la clasificación y diferenciación de
microorganismos. La reacción a la tinción de Gram está basada en la diferencia en la
composición química de la pared celular bacteriana. Las bacterias Grampositivas
tienen una gruesa capa de peptidoglicano o mureína, mientras que esta capa es más
fina en las Gram- negativas y está rodeada por una bicapa lipídica externa. El
Peptidoglicano es un polisacárido formado por dos subunidades químicas, N-
acetilglucosamina y ácido Nacetilmurámico.

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver
con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la
célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste
es la utilización de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el
contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos que
usan un solo colorante llamados de tinción simple. Sin embargo, a menudo se
utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso
denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción
Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterías pueden dividirse en
dos grupos: grampositivas y gramnegativas.

Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica

diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias. Mientras que
las bacterias gramnegativas son constantes en su reacción, los microorganismos
grampositivos pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son
Gram lábiles).
Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias grampositivas pierden la
propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tiñen por la safranina
apareciendo como gramnegativas. Análogo efecto se produce en ocasiones por
cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecución de la
técnica. Por este motivo, es preciso atenerse, en la práctica, al procedimiento
establecido.

Para explicar el mecanismo de la tinción de gram se han propuesto varias hipótesis

fundadas en la naturaleza química de las paredes celulares de los microorganismos.

Aquí puedes ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared
bacteriana:

Pared Gram +
Ácidos teicoicos
Polisacáridos
proteínas (pocas veces)
glicopéptido (50% del peso seco)

Pared Gram -

lipopolisacáridos

lipoproteínas
proteínas
glicopéptido (10% del peso seco)

El mecanismo de la tinción Gram es la reseñado en el siguiente esquema:

Productos que se utiliz Reacción y coloración de las bacterias
GRAM + GRAM -
1) Cristal violeta Células color violeta Células color violeta
2) Lugol solución iodad Se forma el complejo C LasSe forma el complejo CV-I. Las cél
células contin teñidas decontinúan teñidas de color violeta.
color violeta.
3) Alcohol Se deshidratan las pare Eliminación por extracción de grasas las
celulares. Se contraen poros. paredes celulares. Aumenta
Disminuye porosidad. El complejo CV-I se separ la
permeabilidad. El comp célula.
CV-I no sale de las cél que
continúan teñidas
color violeta.
4) Safranina Células no decolora Células decoloradas; se tiñen de c
quedan teñidas de c rosado.
violeta.
 OBJETIVOS:

 Realizar correctamente un frotis y tinción de Gram para observar morfología de

colonias bacterianas.

MATERIAL NECESARIO:

• Cristal violeta.

• Lugol.

• Alcohol acetona.

• Safranina.

• Gorro o cofia.

• Guantes.

• Portaobjetos.

PROCEDIMIENTO: Coloración Gram:

 Extensión:

1. En un portaobjetos limpio colocaremos una gota de agua destilada con un asa

de siembra redonda.

2. Ahora con la misma asa tomaremos un poco de nuestra cepa contenida en un

vial y la extenderemos sobre el portaobjetos.

3. Cuando la muestra está bien extendida la secaremos en el mechero.

 Tinción:

1. Colocamos cristal violeta x 1min.

2. Enjuagamos.

3. Colocamos lugol x 30 seg.

4. Enjuagamos.
 5. Colocamos el alcohol acetona x 15 seg.

6. Enjuagamos

7. Colocamos safranina x 1 o 2 min.

8. Enjuagamos

9. Secamos en el mechero

Una vez seca la muestra, observaremos en el microscopio con aceite de inmersión a 1000
aumentos.

 Observación

Debe utilizarse el objetivo de inmersión.

Se coloca una gota de aceite de cedro sobre la preparación.
 AUMENTO 100 X.
 SE OBSERVA QUE LA MUESTRA ES DE COLOR PÚRPURA-VIOLETA, PODEMOS
CONCLUIR QUE LAS BACTERIAS SON GRAM +.

TAREA A REALIZAR:

¿Qué forma tienen las bacterias observadas?

Los organismos Gram positivos pueden ser cocos, como Staphilococos,
Streptococos o Enterococos, o bien bacilos, como Bacilus y Listerias. Los
cocos tienen forma redondeada y los Bacilos, forma alargada o de
 bastón.

¿Las bacterias aparecen aisladas o agrupadas?

Las bacterias aparecen agrupadas.

En caso de que aparezcan agrupadas indicar el tipo de asociación. Indica tipo de

Gram.
Cuando observamos en el microscopio aparecen agrupadas y se identificó su
forma redonda (cocos), alargada (bacilos). Tipo de Gram: GRAM POSITIVAS.

¿Por qué a unas se les introduce el colorante y a otras no?

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de

ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el
contraste es la utilización de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el
contraste de las células para la microscopía, son suficientes los procedimientos
que usan un solo colorante llamados de tinción simple. Sin embargo, a menudo
se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso
denominado tinción diferencial.

Menciona 3 aplicaciones de la tinción.

La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar

donde se sospecha una infección, como la garganta, los pulmones, los
genitales o las lesiones en la piel. Las tinciones de Gram también se
pueden usar para detectar bacterias en ciertos fluidos corporales, como
la sangre o la orina.

Beneficios de saber clasificar bacterias Gram + o -.

Saber si las bacterias son grampositivas o gramnegativas ayuda a su
profesional de la salud a identificar el tipo de infección y los antibióticos más
eficaces.
Las bacterias se clasifican por su aspecto al microscopio y por otras
características. Las bacterias gramnegativas se clasifican por el color que
adquieren después de aplicarles un proceso químico denominado tinción
de Gram. Las bacterias gramnegativas se tiñen de rojo cuando se utiliza
este proceso. Las bacterias grampositivas se tiñen de azul. Las bacterias
gramnegativas y las grampositivas se tiñen de forma distinta porque sus
paredes celulares son diferentes. También causan diferentes tipos de
infecciones, y hay distintos tipos de antibióticos eficaces contra ellas.