Anlisis bioqumico cuantitativo en

sangre
Arboleda. M., Espn. S.
Universidad de las fuerzas Armadas ESPE, Bioqumica II, 13 febrero 2014
Resumen
El metabolismo celular se lleva a cabo de reacciones qumicas dentro de la
clula, dichas reacciones se generan tanto anablica o catablicamente
segn los requerimientos energticos y los productos metablicos se
trasportan a travs de la sangre hasta tejidos perifricos ya sea para actuar
como componentes celulares o molculas energticas.
El anlisis bioqumico de sangre permite establecer parmetros de un
desarrollo metablico ya sea en condiciones normales, necesidad energtica
o alteraciones metablicas, este proceso analtico se efecta sobre cuatro
biomolculas importancia: glucosa, colesterol, triglicridos y urea que
cuantifican por medio de tcnicas enzimticas de colorimetra donde las
biomolculas descritas reaccionan con enzimas revelndose por un color
caracterstico.
Abstract
The cellular metabolism works with chemistry reactions inside the cell, this
reactions go as well as anabolic or catabolic along the energetic needs and
the metabolism products are transported through the blood to periphery
tissues to act as cellular components or energetic molecules.
The blood biochemistry analysis allows to set up parameters of the
metabolic develop in normal conditions, energetic necessity or metabolic
alterations, the analytic process perform on important biomolecules as
glucose, cholesterol, triglycerides and urea that are quantified by enzymatic
colorimetric techniques where the biomolecules react with the enzymes
showing of as a specific color.
Introduccin
Las
vias
metablicas
se
interrelacionan por medio de
reaciones qumicas colectivas que
presentan intermediarios adems
de molculas energticas como el
ATP a dicho compendio de
reacciones
se
conoce
como
metabolismo (Strayer, 2012), el
propsito de
estas vas es
sintetizar o degradar molculas
que
provean
de
energa
bioqumica
a
la
celula

promoviendo su desarrollo y ciclo

celular
permitiendo
funciones
fisiolgicas como el movimiento
muscular.
La forma qumica de energa se
conoce
como
ATP,
adenosin
trifosfato, molcula reguladora,
conformacional
de
bases
nitrogenadas
y
mediadora
fisiolgica
(Madrigal,
2010)
durante requerimiento energtico.

Acta como intermediario de

reacciones qumicas adems de
fosforilar
molculas
durante
mecanismos
qumicos
y
se
determina
como
dadora
de
energa (Strayer, 2012) dado a la
hidrolisis de sus grupos fostato
generando reaaciones exergonicas
favorables termodinmicamente.
La sntesis y regreneracin de ATP
se presenta por reacciones de
catabolismo a partir de molculas
carbonatadas que son degradadas
en
una
via
metablica
de
importancia biolgica, la glicolisis,
por medio de esta ruta se
degradan carbohidratos de la dieta
como
sacarosa,
maltosas
y
lactosas
de
oligosacridos
a
monosacaridos esenciales como la
glucosa, esta molecula entra a la
via glicolitica por medio de una
fosforilacin sediendo un grupo
fosfato por una molcula ATP , la
ruta
continua
con
otras
fosforilaciones un corte aldlico
que convierte una molecula de
seis carbonos a una molecula de
tres, desfosforilaciones donde se
obtiene energa neta y
la
obtencicon de una molecula de
tres carbonos conocida como
piruvato.
Glucosa+

2Pi

2ADP+2NAD+

2 piruvato + 2ATP + 2

NADH+2H+ + 2H2O
Figura 1.
Reaccin general de la va
glicoltica
(Strayer, 2012)

Dentro de la principal va descrita

el ATP actua como activador o
inhibidor segn el requerimiento
energtico de la degradacin de
glucosa, a su ves esta molcula
estimula la degradacin cuando se
encuentra en grandes cantidades

o promueve su almacenamiento
en forma de glucgeno (Strayer,
2012).
La importancia de la glucosa
radica en su estructura por su
grupo adlico formando azucares
reductores de enlaces sencillos
(Universidad de Cantabria), su
almacenamiento en forma de
glucgeno proporciona energa
rpidamente hacia tejido muscular
que demanda gran cantidad de
ATP para su fisiologa.
El transporte de la glucosa se da
por la sangre, ya que se absorbe
por las clulas del intestino y
recorre a travez de la sangre
(Strayer,
2012)
donde
se
proporciona
glucosa
continuamente a las clulas e
ingresa por medio de receptores
de membrana e insulina, dicha
hormona estimula la absorcin de
glucosa hacia la celula y la
cantidad de glucosa en sangre es
un primer indicator de una
alteracin metabolica ya que
indica
un
fallo
estructural
hormonal, alteracin pancretica o
fallas genticas durante la via de
la
degradacin
(Diabetes:
Definicin y Etipatogenia ).
Para evaluar estas patologas se
toman rangos establecidos, un
anlisis en la sangre puede tener
una concentracin de 70 a 100
mg/dl o el anlisis en el suero de la
sangre los parmetros son entre
75 a 115 mg/dl (Human, 2005).
Proceso de anlisis

Proceso de extraccin de
sangre

Este proceso debe considerarse

como general para todos los
anlisis de biomolculas aqu
descritas.

El proceso de extraccin de sangre

venosa se realiza como un proceso
anterior al anlisis qumico con
gran importancia dada a la calidad
de la muestra obtenida, los
resultados que arroje la muestra
sern ms fiables y aplicables.
1. Recoleccin de material a
usar
En el area de trabajo cerca del
paciente se situa el matetrial a
usar, jeringuilla, torundas con
alcohol,
torniquete,
tubo
contenedor, rotulador y aposito
adhesivo o curita.
2. Rotular
Se identifica el tubo contenedor
del paciente, con su nombre
completo y fecha.
3. Observacin y deteccin de
la vena
Las venas ms externas al brazo
son el lugar optimo del cual
eztraer sangre, la vena ceflica y
media del brazo suelen ser mas
prominentes y menos dolorosas al
momento de extraccin que la
vena basilica, adems el area de
donde se extraiga no debe estar
contusionada o afectada de alguna
forma (MedicinABC, 2013).
Una rpida deteccin es por la
coloracin
verdosa,
la
vena
tambin puede ser palpable y con
la ayuda del torniquete se
sobresaltan
facilitando
su
facilidad, para no confundir con
tendones
el
paciente
debe
movilizar sus dedos y asegurarse
que la vena encontrada no se
mueve.
4. Colocacin del torniquete
Se coloca cuatro dedos arriba del
dobles del brazo, con una nudo
sencillo que al momento de jalar

de uno de sus extremos se pueda

liberar.
5. Pusion con jeringuilla
Se asegura la ajuga de la
jeringuilla y libera el embolo antes
de punsar, con ambas manos se
retira la tapa, posteriormente se
sujeta el codo del paciente con
una mano y con la otra en un
ngulo de 45 se direcciona la
aguja con el vicel arriba para
incrustar en la vena.
6. Recoleccin de la muestra
Sin empujar o extraer la aguja de
la vena se libera el embolo
absorbiendo la sangre venosa de
manera ligera, no estirar el embolo
de manera violenta, liberar el
torniquete y jalar el ambolo hasta
que la jeringuilla contenga la
muestra requerida.
Sin presionar se coloca una
torunda en el lugar de la punsin,
se retira suevemente la aguja y
cuando este completamente fuera
se presiona con la torunda por
unos segundos.
Se tapa la jeringuilla apoyando la
tapa en la mesa aledaa.
7. Colocacin
contenedor

en

el

tubo

Se coloca el aposito en la punsion

del paciente y al terminar el
proceso se retira la ajuga de la
jeringuilla sin presionar el embolo
y se trasvasa la sangre en un tubo
sin anticoagulante de tapa roja, la
sangre debe recorrer por la pared
de los tubos de manera delicanda
no violenta para evitar emolisis.

Proceso
glucosa

de

anlisis

en

La glucosa es analizada por una

oxidacin enzimtica por medio de

la enzima glucosa oxidasa (GO)

encontrada en el reactivo de
trabajo en una solucin buffer de
fosfato, la enzima, peroxidasa
(POD),
fenol
como
mas
importantes,
la
reaccin
indicadora
de
presencia
de
glucosa se debe colorear rosa
parda. La reaccin se da de la
siguiente manera:

4. Anlisis
espectofotmetro

En celdas limpias se coloca las

soluciones de cada tubo, se encera
con una celda con agua destilada
a una longitud de onda de 500 nm,
y se calcula la absorbancia la
muestra 1 y 2 y la solucin
estndar.

Glucosa+O2 + H 2 O GO cido glucnico+ H 2 O2

2 H 2 O2+ 4 aminofenazona+ fenol

1. Obtencin
sangre

de

suero

POD

Estndar
Muestra 1
Muestra 2

de

Se da por la siguiente formula:

concentracin=

1000

STD

Donde

1000
10

M1

A muestra
x 100 mg/dl
A standar

A muestra

es

L A standar la absorbancia de la
muestra estndar y 100 es la
concentracin de la muestra
estndar en mg/dl

M2

Proceso
3. Incubacin

En un equipo de bao maria se

colocan
los
cuatro
tubos
distribuidos para que las enzimas
acten simulando la temperatura
corporal de 37C por 5 minutos

la

absorbancia
de
la
muestra
obtenida por el espectrofotmetro,

STD

Absorbanci
a
0,286
0,385
0,294

5. Calculo de la concnetracion
de glucosa en sangre

2. Distribucin de reactivo de
trabajo y muestra
Blanco

Muestra

quinoneimina+ H 2 O

La sangre en el tubo contenedor

sin anticoagulante se coloca en la
centrifuga por cinco minutos a las
revoluciones que vengan dadas en
el equipo

RGT

por

Muestra 1

0,385
x 100
0,286

Muestra 2

0,294
x 100
0,286

Resultados

Con
135

103