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UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
Profesor: Juan Carlos Méndez Velásquez

MANUAL DE LABORATORIO
HEMOGRAMA

NORMAS PARA EL INGRESO AL LABORATORIO:

Leer la guía de laboratorio, siempre habrá quiz antes de empezar.


Elementos de protección personal (bata limpia y planchada, guantes).
Cabello recogido tanto para hombres como mujeres.
Calzado cubierto y ropa cubierta (no usar faldas ni pantalón corto).
No es permitido, comer, tomar agua, ni fumar en del laboratorio.
Las maletas deben colocarse en la parte trasera del laboratorio.
No realice procedimientos que no le hayan sido autorizados por el
profesor a cargo.
Recuerde que el material contaminado debe ser depositado en las
canecas rojas.
El material cortopunzante debe ser depositado en el guardián dispuesto
en la parte de atrás.

INTRODUCCION

HEMATOLOGIA: Es el estudio de los tejidos hematopoyéticos y de la sangre,


la cual necesita extraerse del organismo y en ocasiones separarse en sus
diferentes componentes: plasma, suero y células, para ser analizados en
búsqueda de alteraciones en dichos componentes.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR (VSG) Ó


ERITROSEDIMENTACIÓN (ESD)

OBJETIVO
Determinar en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los
eritrocitos ó glóbulos rojos para formar pilas de monedas. Sirve como
complemento diagnóstico en enfermedades hematológicas y no hematológicas.

FUNDAMENTO
La VSG se realiza por el método de Westergreen, considerado como el método
de referencia internacional. La sangre anticoagulada con EDTA se coloca en
una pipeta de vidrio en forma vertical y se deja en reposo durante una hora.
Los eritrocitos tienden a caer al fondo de la columna y las proteínas
plasmáticas (fibrinógeno, gammaglobulinas y otras) hacen resistencia a la
caída. El valor de la VSG corresponde al punto donde las células se separan
del plasma. En los individuos sanos la VSG ocurre lentamente y en procesos
patológicos ocurre más rápidamente. En algunos casos es proporcional a la
gravedad de la enfermedad.
CONSULTE: Como estará la VSG en un individuo con anemia?

MATERIALES
 Sangre con EDTA. (consulte qué es el EDTA y cuál es su mecanismo de
acción)
 Pipeta de Westergreen.
 Gradilla para sedimentación (Westergreen).
 Reloj o timer.
La pipeta es un tubo recto de 300 mm de longitud y 2.5 mm de diámetro y está
graduada de 0-200 mm. Se coloca en forma vertical en la gradilla de su mismo
nombre.

FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA VSG


En general la sedimentación está afectada por propiedades de los eritrocitos,
del plasma y por factores de tipo técnico. Entre ellos se encuentran:
 Tamaño y forma de los eritrocitos.
 Aglutinación de los eritrocitos.
 Composición del plasma.
 Viscosidad sanguínea.
 Calibre y longitud del tubo.
 Cantidad y calidad del anticoagulante.
 Efecto de la temperatura y tiempo.

METODOLOGÍA
 Mezclar suavemente la muestra por inversión del tubo.
 Utilizando el micropipetiador, aspirar la sangre y llenar la pipeta de
Westergreen hasta la marca cero (0).
 Llevar inmediatamente a la gradilla y fijar la pipeta evitando que se derrame
la sangre.
 Poner a correr el cronómetro durante 1 hora y leer exactamente cuando se
cumpla este tiempo.

IMPORTANCIA CLÍNICA:
La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnóstico inicial y seguimiento
de múltiples enfermedades, es importante en la detección de entidades ocultas
especialmente de origen neoplásico, en el seguimiento de enfermedades como
la fiebre reumática, tuberculosis e infarto al miocardio y para establecer
diagnósticos diferenciales. Por corresponder a un reactante de fase aguda se
convierte en un marcador inespecífico no asociado a ninguna enfermedad en
concreto, pero su elevación implica la existencia de un proceso inflamatorio,
infeccioso o neoplásico. Cifras mayores de 100mm/h se han asociado con
enfermedades malignas (Ca colón, Linfoma, Ca de mama, entre otros).
MEDICIÓN DEL HEMATOCRITO

OBJETIVO
Expresar en porcentaje (%) el número de células rojas empacadas en un
volumen de sangre total.

MÉTODO
El hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glóbulos rojos en
relación con el volumen total de sangre. Puede obtenerse por centrifugación
(micrométodo o microhematocrito) o por métodos electrónicos. Por
micrométodo, se determina aplicando una fuerza centrífuga de 3.000 r.p.m.
durante 3 minutos a una muestra de sangre total que está contenida en un
capilar especialmente diseñado para esta prueba.

MATERIALES
 Sangre anticoagulada con EDTA.
 Capilar.
 Plastilina.
 Centrífuga.
 Tabla de lectura de capilares de microhematocrito.

METODOLOGÍA
 Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por un minuto para obtener
una buena homogenización.
 Llene el capilar con sangre aproximadamente ¾ partes.
 Selle el extremo inferior con plastilina.
 Llevar a la centrífuga durante 3 minutos a 3000 r.p.m.
 Después de centrifugar, retire el capilar y proceda a la lectura del
hematocrito en la tabla correspondiente.
 En el capilar se observan las células rojas empacadas, una capa
blanquecina que corresponde a los glóbulos blancos y plaquetas (que sólo
alcanzan un valor de 0.5 – 1 mm en condiciones normales) y el
sobrenadante correspondiente al plasma (en él pueden observarse cambios
en el color, normalmente = amarillo claro, Ictérico = amarillo fuerte,
hemolizado = rojizo, ó lipémico = lechoso).
 El volumen de células se lee desde cero (0) hasta donde termina la capa de
glóbulos rojos y empieza la capa de blancos, la cual no se incluye en la
lectura.
MEDICIÓN DE LA HEMOGLOBINA

OBJETIVO
Cuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glóbulos rojos.

MÉTODO
Método de la cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determina
la suma de todas las formas de hemoglobina presentes en el eritrocito
(oxihemoglobina, carboxihemoglobina, metahemoglobina y otras), lisando los
glóbulos rojos para obtener un compuesto estable conocido como
cianometahemoglobina, que puede ser medido en un espectrofotómetro, ya
sea por métodos manuales o automatizados.

FUNDAMENTO
La mezcla de reactivo de Drabkin (CIANURO) con la sangre, transforma la
hemoglobina en cianometahemoglobina. La intensidad del color de esta
reacción se mide en un fotocolorímetro o espectrofotómetro.

Pasos de la reacción:
1. Hemoglobina + ferrocianuro potásico = metahemoglobina.
2. Metahemoglobina + cianuro potásico = cianometahemoglobina.

MATERIALES
 Sangre venosa anticoagulada con EDTA o sangre obtenida por punción
capilar.
 Tubos de ensayo.
 Pipeta de Sahli (20 landas = 0.02 ml) o pipeta automática.
 Pipeta graduada de 5 ml.
 Tapones de caucho o papel parafinado.
 Fotocolorímetro debidamente calibrado.
 Cubetas para el Fotocolorímetro.
 Reactivo de Drabkin.

El reactivo de Drabkin es tóxico, contiene cianuro.


Evite el contacto con ojos, piel, mucosas.

INSTRUCCIONES DE PROCEDIMIENTO
 Deposite 5 ml del reactivo de Drabkin en el tubo de ensayo.
 Mida exactamente 20uL (0.02 ml) de sangre en la pipeta de Sahli.
 Limpie los excedentes de sangre por fuera de la pipeta.
 Lleve la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre expulsando y
aspirando varias veces para lavar internamente las paredes
 Tape el tubo y mezcle suavemente por inversión.
 Deje el tubo en reposo durante 10 minutos para que se produzca la
hemólisis total de las células rojas y se complete la reacción.
 Deposite la solución en la cubeta del Fotocolorímetro.
 Lea la solución obtenida, usando como blanco el reactivo de Drabkin.
 La concentración de hemoglobina se calcula multiplicando la
absorbancia por una constante que resulta de la calibración del método.
Ejemplo: Absorbancia de la muestra x 24.9= hemoglobina en g/dL

MÉTODOS ELECTRÓNICOS
En todos los analizadores semiautomatizados o automatizados, la hemoglobina
se determina con la misma fundamentación del método manual
(cianometahemoglobina), utilizando un hemoglobinómetro incorporado al
instrumento.

La OMS estableció como límites inferiores de normalidad valores: En el


hombre 13 gr/dL y en mujeres 12 gr/dL. Por debajo de estos valores se
considera anemia.

CONSTANTES CORPUSCULARES Ó ÍNDICES DE WINTROBE

Son el resultado matemático de la relación entre la hemoglobina, el hematocrito


y el recuento de eritrocitos por mm 3. Determinan el tamaño y el contenido de
hemoglobina de los eritrocitos bajo los conceptos del volumen corpuscular
medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración de la
hemoglobina corpuscular media (CHCM). Estos tres promedios o constantes
corpusculares de Wintrobe se constituyen en pilares para la clasificación
MORFOLÓGICA de las anemias.

1. V.C.M = Volumen corpuscular medio. También llamado Promedio de


Volumen Corpuscular (PVC)

Se refiere al tamaño de los eritrocitos, se expresa en femtolitros (fL) y se


obtiene al relacionar el volumen de células rojas empacadas (HTO) y el
recuento de glóbulos rojos, con la siguiente fórmula:

HTO (%)
VCM ó PVC = ----------------------------- x 10 Valor de Referencia
Rto de G.R./ millón 80-100fL

Una de las desventajas en el método clásico o manual es la variabilidad y el


error en el conteo de los glóbulos rojos. Pero el VCM obtenido por métodos
automatizados es mucho más confiable.
En el neonato el VCM varía de la siguiente forma: En el recién nacido 106 fL;
a la semana de nacimiento 101 fL, y durante la tercera y cuarta semana
después del nacimiento alcanza los valores normales del adulto.

2. HCM = Hemoglobina corpuscular media. También llamada


Promedio de Hemoglobina Corpuscular (PHC)

Representa la cantidad de hemoglobina presente en cada eritrocito,


expresada en picogramos (pg) como unidad de peso. Relaciona la
concentración de Hb y el recuento eritrocitario por milímetro cúbico, a través
de la siguiente fórmula:
Hb
HCM ó PHC = -------------------------------- X 10 Valor Referencia
Rto G.R. en millones 28-32pg

3. CHCM = Concentración de hemoglobina corpuscular media. También


llamada Promedio de la concentración de Hb Corpuscular (PCHC)

Relaciona el peso de la hemoglobina en un volumen total de eritrocitos


(HTO). Nos da una visión global de los niveles de hemoglobina y se expresa
en porcentaje (%). Se obtiene de la siguiente fórmula:

Hemoglobina (g/dL)
CHCM ó PCHC = -------------------------------- x 100 Valor Referencia
Hematocrito (%) 32-36%

Las constantes corpusculares se utilizan para determinar el tipo morfológico


de las anemias, de acuerdo al diámetro del glóbulo rojo y su contenido de
hemoglobina. Es importante interpretar estos promedios de acuerdo con la
evaluación morfológica de los glóbulos rojos, que se realiza por microscopía
en un extendido de sangre periférica.

CLASIFICACIÓN DE LA ANEMIA VCM - HCM - CHCM


Normocítica Normocrómica 80-100fl - 28-32pg - 32-36%
Macrocítica Normocrómica > 105fl - > 32pg - 32-36%
Microcítica Hipocrómica < 75fl - < 27pg - < 32%

La anemia microcítica hipocrómica típicamente se asocia con deficiencias de


hierro y talasemias. La anemia macrocítica normocrómica se asocia en
muchos casos con anemias megaloblásticas por deficiencia de vitamina B12
y/o ácido fólico. La anemia normocítica normocrómica puede relacionarse con
hemorragia aguda, anemias hemolíticas, hemoglobinopatías, insuficiencia
renal crónica.

RETICULOCITOS

Son eritrocitos jóvenes que se diferencian de los glóbulos rojos maduros


puesto que conservan en su citoplasma remanentes de RNA ribosomal,
mitocondrias, aparato de golgi, los cuales pueden ser identificados mediante
colorantes vitales (azul de cresilo brillante), haciendo que dicho RNA se
precipite en forma de gránulos.

VALORES NORMALES
Valores relativos:
 Adulto: 0.5 – 2.5 %
 Recién nacidos: 2.6 - 6.5% (en dos semanas alcanza el valor de adulto).
Valor absoluto: 22,5 – 147,5 x 109/L
INTERPRETACIÓN
El conteo de reticulocitos es importante porque refleja la cantidad de células
rojas viables que se producen en médula ósea (M.O). Una disminución en el
número de reticulocitos se asocia con anemia aplástica y con disminución en
la producción de células rojas en M.O. Los reticulocitos se encuentran
aumentados en anemias hemolíticas, anemias por deficiencias de hierro que
reciben tratamiento, talasemias, anemias sideroblásticas y pérdida de sangre
aguda o crónica.

La producción de reticulocitos se puede estimar basados en la siguiente


fórmula: Índice de Producción de Reticulocitos (IPR)

%reticulocitos x HTO (paciente)


IPR : ---------------------------------------------------------------------
Hematocrito normal (45%) x días de maduración (2)

El valor obtenido es evidencia de la respuesta medular a las necesidades del


individuo, cuanto más severa es la anemia mas inmaduro el reticulocito y por
ende la respuesta medular debe ser mayor. Los valores del IPR permiten
estimar los niveles de respuesta de la medula ósea. Si el valor es < 2 se
considera que es una medula hipoproliferativa y si es ≥ 2 es hiperproliferativa.