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FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
Profesor: Juan Carlos Méndez Velásquez
MANUAL DE LABORATORIO
HEMOGRAMA
INTRODUCCION
OBJETIVO
Determinar en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los
eritrocitos ó glóbulos rojos para formar pilas de monedas. Sirve como
complemento diagnóstico en enfermedades hematológicas y no hematológicas.
FUNDAMENTO
La VSG se realiza por el método de Westergreen, considerado como el método
de referencia internacional. La sangre anticoagulada con EDTA se coloca en
una pipeta de vidrio en forma vertical y se deja en reposo durante una hora.
Los eritrocitos tienden a caer al fondo de la columna y las proteínas
plasmáticas (fibrinógeno, gammaglobulinas y otras) hacen resistencia a la
caída. El valor de la VSG corresponde al punto donde las células se separan
del plasma. En los individuos sanos la VSG ocurre lentamente y en procesos
patológicos ocurre más rápidamente. En algunos casos es proporcional a la
gravedad de la enfermedad.
CONSULTE: Como estará la VSG en un individuo con anemia?
MATERIALES
Sangre con EDTA. (consulte qué es el EDTA y cuál es su mecanismo de
acción)
Pipeta de Westergreen.
Gradilla para sedimentación (Westergreen).
Reloj o timer.
La pipeta es un tubo recto de 300 mm de longitud y 2.5 mm de diámetro y está
graduada de 0-200 mm. Se coloca en forma vertical en la gradilla de su mismo
nombre.
METODOLOGÍA
Mezclar suavemente la muestra por inversión del tubo.
Utilizando el micropipetiador, aspirar la sangre y llenar la pipeta de
Westergreen hasta la marca cero (0).
Llevar inmediatamente a la gradilla y fijar la pipeta evitando que se derrame
la sangre.
Poner a correr el cronómetro durante 1 hora y leer exactamente cuando se
cumpla este tiempo.
IMPORTANCIA CLÍNICA:
La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnóstico inicial y seguimiento
de múltiples enfermedades, es importante en la detección de entidades ocultas
especialmente de origen neoplásico, en el seguimiento de enfermedades como
la fiebre reumática, tuberculosis e infarto al miocardio y para establecer
diagnósticos diferenciales. Por corresponder a un reactante de fase aguda se
convierte en un marcador inespecífico no asociado a ninguna enfermedad en
concreto, pero su elevación implica la existencia de un proceso inflamatorio,
infeccioso o neoplásico. Cifras mayores de 100mm/h se han asociado con
enfermedades malignas (Ca colón, Linfoma, Ca de mama, entre otros).
MEDICIÓN DEL HEMATOCRITO
OBJETIVO
Expresar en porcentaje (%) el número de células rojas empacadas en un
volumen de sangre total.
MÉTODO
El hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glóbulos rojos en
relación con el volumen total de sangre. Puede obtenerse por centrifugación
(micrométodo o microhematocrito) o por métodos electrónicos. Por
micrométodo, se determina aplicando una fuerza centrífuga de 3.000 r.p.m.
durante 3 minutos a una muestra de sangre total que está contenida en un
capilar especialmente diseñado para esta prueba.
MATERIALES
Sangre anticoagulada con EDTA.
Capilar.
Plastilina.
Centrífuga.
Tabla de lectura de capilares de microhematocrito.
METODOLOGÍA
Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por un minuto para obtener
una buena homogenización.
Llene el capilar con sangre aproximadamente ¾ partes.
Selle el extremo inferior con plastilina.
Llevar a la centrífuga durante 3 minutos a 3000 r.p.m.
Después de centrifugar, retire el capilar y proceda a la lectura del
hematocrito en la tabla correspondiente.
En el capilar se observan las células rojas empacadas, una capa
blanquecina que corresponde a los glóbulos blancos y plaquetas (que sólo
alcanzan un valor de 0.5 – 1 mm en condiciones normales) y el
sobrenadante correspondiente al plasma (en él pueden observarse cambios
en el color, normalmente = amarillo claro, Ictérico = amarillo fuerte,
hemolizado = rojizo, ó lipémico = lechoso).
El volumen de células se lee desde cero (0) hasta donde termina la capa de
glóbulos rojos y empieza la capa de blancos, la cual no se incluye en la
lectura.
MEDICIÓN DE LA HEMOGLOBINA
OBJETIVO
Cuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glóbulos rojos.
MÉTODO
Método de la cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determina
la suma de todas las formas de hemoglobina presentes en el eritrocito
(oxihemoglobina, carboxihemoglobina, metahemoglobina y otras), lisando los
glóbulos rojos para obtener un compuesto estable conocido como
cianometahemoglobina, que puede ser medido en un espectrofotómetro, ya
sea por métodos manuales o automatizados.
FUNDAMENTO
La mezcla de reactivo de Drabkin (CIANURO) con la sangre, transforma la
hemoglobina en cianometahemoglobina. La intensidad del color de esta
reacción se mide en un fotocolorímetro o espectrofotómetro.
Pasos de la reacción:
1. Hemoglobina + ferrocianuro potásico = metahemoglobina.
2. Metahemoglobina + cianuro potásico = cianometahemoglobina.
MATERIALES
Sangre venosa anticoagulada con EDTA o sangre obtenida por punción
capilar.
Tubos de ensayo.
Pipeta de Sahli (20 landas = 0.02 ml) o pipeta automática.
Pipeta graduada de 5 ml.
Tapones de caucho o papel parafinado.
Fotocolorímetro debidamente calibrado.
Cubetas para el Fotocolorímetro.
Reactivo de Drabkin.
INSTRUCCIONES DE PROCEDIMIENTO
Deposite 5 ml del reactivo de Drabkin en el tubo de ensayo.
Mida exactamente 20uL (0.02 ml) de sangre en la pipeta de Sahli.
Limpie los excedentes de sangre por fuera de la pipeta.
Lleve la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre expulsando y
aspirando varias veces para lavar internamente las paredes
Tape el tubo y mezcle suavemente por inversión.
Deje el tubo en reposo durante 10 minutos para que se produzca la
hemólisis total de las células rojas y se complete la reacción.
Deposite la solución en la cubeta del Fotocolorímetro.
Lea la solución obtenida, usando como blanco el reactivo de Drabkin.
La concentración de hemoglobina se calcula multiplicando la
absorbancia por una constante que resulta de la calibración del método.
Ejemplo: Absorbancia de la muestra x 24.9= hemoglobina en g/dL
MÉTODOS ELECTRÓNICOS
En todos los analizadores semiautomatizados o automatizados, la hemoglobina
se determina con la misma fundamentación del método manual
(cianometahemoglobina), utilizando un hemoglobinómetro incorporado al
instrumento.
HTO (%)
VCM ó PVC = ----------------------------- x 10 Valor de Referencia
Rto de G.R./ millón 80-100fL
Hemoglobina (g/dL)
CHCM ó PCHC = -------------------------------- x 100 Valor Referencia
Hematocrito (%) 32-36%
RETICULOCITOS
VALORES NORMALES
Valores relativos:
Adulto: 0.5 – 2.5 %
Recién nacidos: 2.6 - 6.5% (en dos semanas alcanza el valor de adulto).
Valor absoluto: 22,5 – 147,5 x 109/L
INTERPRETACIÓN
El conteo de reticulocitos es importante porque refleja la cantidad de células
rojas viables que se producen en médula ósea (M.O). Una disminución en el
número de reticulocitos se asocia con anemia aplástica y con disminución en
la producción de células rojas en M.O. Los reticulocitos se encuentran
aumentados en anemias hemolíticas, anemias por deficiencias de hierro que
reciben tratamiento, talasemias, anemias sideroblásticas y pérdida de sangre
aguda o crónica.