Práctica N.

°11

"DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE
COLESTEROL"

BIOQUÍMICA
GRUPO "A"

Profesor
Juan Carlos González Hernández
Alumno
Ashley Lizeth Luna Garduño
Lesly Adriana Calderon Flores
No. de Control
20120874
20120830
Fecha
21 de Noviembre del 2022
 INTRODUCCIÓN

El colesterol es una sustancia cerosa, cristalina; se trata de un lípido (grasa). Esta

sustancia es vital para el organismo ya que forma parte de las membranas
celulares, por lo que, naturalmente existe en todas las partes del cuerpo. El
colesterol, es la materia prima de muchas de las hormonas (principalmente de las
hormonas sexuales y suprarrenales), se requiere para la producción de las sales
biliares, las cuales se necesitan para la adecuada absorción de algunas vitaminas y
alimentos en el intestino (González Santoyo, 2011).
El colesterol es un alcohol esteroide insaturado muy soluble en grasas pero poco
hidrosoluble. El colesterol presente en el organismo tiene un doble origen: ß El que
procede de la dieta -exógeno- se encuentra en su mayor parte en forma libre –no
esterificado-. El colesterol esterificado es hidrolizado por la colesterol esterasa
pancreática dando colesterol libre y ácidos grasos ß. El colesterol endógeno
-aunque puede ser potencialmente sintetizado por todas las células- se forma
fundamentalmente a nivel hepático e intestinal y es eliminado por el hígado -con la
bilis- o utilizado para la síntesis de ácidos biliares. El colesterol circula en sangre
unido a las lipoproteínas: ß Las LDL transportan el 70% del colesterol ß Las HDL del
15 al 20% ß El resto, circula unido a las VLDL y a los quilomicrones. El aumento de
la concentración plasmática de colesterol, se asocia a un incremento del riesgo de
sufrir enfermedades cardiovasculares, por lo que su regulación tiene un alto interés
epidemiológico.
El cuerpo necesita determinada cantidad de colesterol para funcionar
adecuadamente. Pero el exceso de colesterol de la sangre, combinado con otras
sustancias, puede adherirse a las paredes de las arterias. Esto se denomina placa.
Las placas pueden estrechar las arterias o incluso obstruirlas. Los niveles de
colesterol elevados en la sangre pueden aumentar el riesgo de enfermedades
cardiacas, y estos tienden a aumentar con la edad. El aumento de colesterol no
suele tener signos ni síntomas, pero puede detectarse con una prueba de sangre
realizada en un laboratorio clínico. Las probabilidades de tener un nivel de colesterol
alto son mayores si se tiene antecedentes familiares, sobrepeso o consume muchas
comidas grasosas.

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 OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
Determinar la concentración de colesterol en mg/dL en muestras de suero
sanguíneo de dos personas, una en ayunas y otra sin ayuno.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
● Conocer el principio que rige la utilización de método enzimático a utilizar.
● Conocer la importancia y función del colesterol en los organismos vivos.
● Determinar y analizar los niveles de colesterol en las muestras de suero
sanguíneo, comparándolos con los valores de referencia.

HIPÓTESIS

Por medio de la utilización del kit enzimático Cholesterol-LQ (Método CHOD - POD)
se comprueba, por medio de la generación de un compuesto coloreado, la presencia
de colesterol en las muestras de sangre analizadas y, con el adecuado uso e
interpretación de los datos del espectrofotómetro UV-Vis, se determina la
concentración de colesterol en el suero sanguíneo de las muestras de dos
individuos diferentes. La intensidad de color y la absorbancia en las muestras son
proporcionales a la concentración de colesterol en el suero sanguíneo.

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 MATERIALES Y EQUIPOS

Materiales y equipos
- Espectrofotómetro UV-Vis
- Centrífuga
- Termobaño a 37°C (±0.1°C)
- Tubos para centrifuga de 5 mL
- 4 cubetas de 1 cm de paso de luz
- 1 Pipeta Pasteur
- Micropipetas (1-10 µl y 100-1000 µl)
- Puntas estériles
- Guantes de látex
- Cubre bocas
- 1 jeringa estéril de 5 mL
- 1 tubo de ensaye

Reactivos
- Suero o plasma sanguíneo
- Kit enzimático que se compone de dos partes:
● R
- PIPES pH 6.9 ………………………………………. 90 mmol/L
- Fenol ………………………………………………… 26 mmol/L
- Colesterol esterasa (CHE) ………………………… 1000 U/L
- Colesterol oxidasa (CHOD) ………………………. 300 U/L
- Peroxidasa (POD) …………………………….…… 650 U/L
- 4-Aminofenazona (4-AF) …………………………. 0.4 mmol/L
● Cholesterol Cal: Patrón primario acuoso de Colesterol a 200 mg/dL

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DIAGRAMA DE FLUJO

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 RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Para realizar el experimento, primero se prepararon las muestras agregando los

reactivos descritos en la tabla 12 del manual.

Todas las muestras contenían 1 ml de solución R, la cual está compuesta de varios

reactivos los cuales están descritos en la sección de materiales y reactivos. La
muestra con el blanco solo contenía la sustancia R, las otras tres muestras
contenían 10 µL de diferentes muestras. El patrón contenía la sustancia de
referencia del método, las otras dos muestras contenían 10 µL de suero sanguíneo
de dos individuos con y sin ayuno.
Una vez preparadas las sustancias y habiendo dejado pasar el tiempo de incubación
se pudo observar que estas tomaron una coloración rojiza clara; la muestra que
tenía la coloración con menor intensidad, fue la muestra alimentado, la siguiente fue
el patrón y la última, la muestra con ayuno, fue la que presentó la coloración más
intensa de las 3 muestras. Después de analizar visualmente las muestras, se
colocaron dentro del espectrofotómetro en las celdas correspondientes y se
prosiguió a leer la absorbancia de cada una de las muestras a 505 nm.
Las lecturas de absorbancia obtenidas se muestran en la Tabla 1.

Como se puede observar en la Tabla 1, la muestra con la mayor absorbancia fue la

segunda, la muestra con ayuno. La muestra con el menor valor de absorbancia fue
la muestra sin ayuno, visualmente, era la muestra que presentaba una coloración
muy diluida; más clara que las otras muestras.

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Para calcular la concentración de las muestras se realizaron las operaciones
necesarias utilizando la fórmula y conversión anteriores. Los resultados se muestran
en la tabla 2.

Después de obtener los resultados, se realizó una comparación con los valores de
referencia en personas adultas. Esto se muestra en la tabla 3.

Comparando los resultados, la muestra con ayuno resultó tener mayor

concentración de colesterol que la muestra alimentado, La muestra con ayuno se
encuentra en el nivel Alto de colesterol en la sangre, lo que significa que el individuo
con ayuno está en riesgo de ataque al corazón, un derrame cerebral u otros
problemas de salud.
En el caso del individuo sin ayuno, su nivel de colesterol es considerablemente más
bajo que el individuo con ayuno, se encuentra en un nivel óptimo, sin riesgo de sufrir
un infarto u otros problemas de salud asociados a la acumulación de colesterol en la
sangre.

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 CUESTIONARIO

1.- Define químicamente que es el colesterol y los tipos que existen.

Es un esterol que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma sanguíneo,
es un lípido esteroide constituido por 4 carbociclos condensados o fundidos que
presentan varias sustituciones: 2 radicales metilo, cadena alifática, grupo hidroxilo,
insaturación en carbonos 5 y 6. Se distingue porque tiene una cabeza polar por el
grupo hidroxilo y otra apolar formada por el carbociclo de núcleos condensados. Es
una molécula hidrófoba y es soluble en disolventes como cloroformo.

2.- ¿Qué relación existe entre lípidos y membranas?

Tiene lugar en el RE Liso (1) donde 3 moléculas de acetil-CoA se combinan entre sí
formando mevalonato el cual es fosforilado a 3-fosfomevalonato 5-pirofosfato.
(2) 3-fosfomevalonato 5-pirofosfato es descarboxilado y desfosforilado a 3-isopentil
pirofosfato.
(3) Ensamblaje sucesivo de seis moléculas de isopentil pirofosfato para originar
escualeno.
(4) circulación de escualeno a lanosterol
(5) El lanosterol se convierte en colesterol después de numerosas reacciones
sucesivas, enzimáticamente catalizadas implican la eliminación de 3 grupos metilo,
el desplazamiento de un doble enlace y reducción del doble enlace de la cadena
lateral.

3.- ¿Cuáles son las funciones del colesterol en el organismo vivo?.

Es un componente importante de las membranas plasmáticas, es un precursor de
vitamina D, hormonas sexuales, corticoesteroides, sales biliares y balsas de lípidos.

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4.- Investigue y describa cuales son las reacciones que intervienen en este
método.

1) Una colesterol ester hidrolasa (CEH) hidroliza los ésteres de colesterol a

colesterol y ácidos grasos libres.
2) Una colesterol oxidasa (COD) oxida todo el colesterol a colestenona y peróxido
de hidrógeno
3) El peróxido de hidrógeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-
aminofenazona da lugar a la formación de una quinona roja. La cantidad de esta
quinona (505 nm) es proporcional a la concentración de colesterol de la muestra.

5.- ¿Existen moléculas similares en la membrana?¿Cuáles son?

Los fitoesteroles y los fitoestanoles, que son moléculas muy parecidas al colesterol.

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6.- ¿Cuáles son los valores clínicos normales para esta prueba?

7.- ¿Cuáles son las enfermedades relacionadas con valores anormales de

colesterol?
Enfermedades del corazón:
-si se bloquea el flujo de sangre al corazón, causa un ataque al corazón
-si se bloquea el flujo de sangre al cerebro, causa accidentes cerebrovasculares
-si se bloquea el flujo de sangre a piernas o brazos, causa enfermedad arterial
periférica

8.- Diferentes métodos para detección del colesterol.

-métodos enzimáticos comerciales
-saponificación de los ésteres de colesteril, extracción y cuantificación del colesterol
con el reactivo de Lieberman-Burchard. (Método de referencia Abell-Kendall)

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9.- ¿Cuáles son las características del método utilizado o kit utilizado?
Rango de medida: Desde el límite de detección 0,113 mg/dL hasta el límite de
linealidad 750 mg/dL. Si la concentración de la muestra es superior al límite de
linealidad, diluir 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisión:

Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0,0015 (A).

Interferencias: No se han observado interferencias de hemoglobina hasta 5 g/L y
bilirrubina hasta 10 mg/dL 1.2. Se han descrito varias drogas y otras substancias
que interfieren en la determinación del colesterol por este método.

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 CONCLUSIONES
Con esta práctica se logró entender y reconocer la gran importancia del colesterol
en el cuerpo, el hecho que sea un precursor importante para distintas hormonas o
que forme parte de las membranas celulares nos hace comprender que el colesterol
no es una simple estructura y que no necesariamente es mala, tiene sus funciones
específicas y en niveles adecuados, no conlleva ningún peligro. Cuando los niveles
de colesterol en el organismo son superiores a los normales, ahí sí que hay algo por
lo que preocuparse, y es donde uno debe analizar cuál es la dieta que se está
llevando, qué alimentos se están consumiendo o qué hábitos están provocando una
elevación en la concentración de colesterol en la sangre. Tener el colesterol
elevado, por arriba de lo normal conlleva mucho riesgo, principalmente a lo que se
refiere al corazón, ya que si existe un estrechamiento en las arterias por
acumulación de colesterol, puede provocar un ataque cardíaco o un accidente
cerebrovascular, ambos mortales para las personas. Es muy importante estar
realizando chequeos con frecuencia para reconocer cuando se está en peligro y
tomar medidas al respecto, de lo contrario puede ser fatal y es que la gravedad y
peligrosidad de tener niveles altos de colesterol radica en que es asintomática, si
una persona no se checa con cierta frecuencia, nunca va a sentir que está en
peligro hasta el momento en que sucede un ataque que puede ser mortal.
Para el caso de los individuos a los cuales se les tomó la muestra de sangre, el
individuo en ayuno está en el nivel alto de riesgo, su concentración de colesterol es
peligroso, teniendo lo que se llama hipercolesterolemia y se recomienda tomar
medidas en cuanto a su dieta y hábitos, así como realizar un análisis profundo de
los factores de riesgo y hacer una visita con su médico para un análisis más
profundo y exacto de su situación. Para el caso de la persona sin ayuno que se
encuentra en un nivel adecuado de colesterol en sangre, se recomienda mantener la
dieta y hábitos normales, y seguir realizando chequeos frecuentes de colesterol para
prevenir cualquier tipo de riesgo y una buena calidad de vida.
En general, se cumplieron todos los objetivos de la práctica, se comprendió el
principio que rige la utilización de método enzimático utilizado, se logró determinar la
concentración de colesterol en muestras de suero sanguíneo de dos personas y se
realizó la comparación de los resultados con los valores de referencia.

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 FUENTES BIBLIOGRÁFICAS

● González Santoyo, H. M. (2011). El colesterol y otras grasas: información

para la población en general.. Editorial Alfil, S. A. de C. V. Pág. 6
● Herrera, E., Ramos, M. del P., Roca, P. & Viana, M. (2014). Bioquímica
básica : Base molecular de los procesos fisiológicos. Elsevier.
● Lupano, C. E. (2013). Modificaciones de componentes de los alimentos:
Cambios químicos y bioquímicos por procesamiento y almacenamiento (1.a
ed.). EDULP.
● SPINREACT. Manual de uso del kit Cholesterol-LQ. 2014.

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