UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA

GUÍA PARA EL LABORATORIO

TEMA: HEMOLEUCOGRAMA

NORMAS PARA EL INGRESO AL LABORATORIO:

Leer y estudiar la guía de laboratorio con anterioridad (se requiere para

optimizar el desarrollo de la práctica y su contenido puede ser utilizado como
parte de la actividad evaluativa)
Utilizar los elementos de protección personal (bata limpia y planchada, guantes).
Llevar el cabello recogido, calzado cubierto y ropa cubierta (no usar faldas ni
pantalón corto).
No está permitido consumir alimentos ni bebidas, ni fumar dentro del laboratorio.
Las maletas deben colocarse en la parte trasera del laboratorio.
No realice procedimientos que no hayan sido autorizados por el profesor a cargo.
Recuerde que el material contaminado debe ser depositado en las canecas rojas.
El material cortopunzante debe ser depositado en el guardián dispuesto en la
parte de atrás.

INTRODUCCION

HEMATOLOGIA: Es el estudio de los tejidos hematopoyéticos y de la sangre, la cual

necesita extraerse del organismo y en ocasiones separarse en sus diferentes
componentes: plasma, suero y células, para ser analizados en búsqueda de
alteraciones en dichos componentes.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR (VSG) Ó

ERITROSEDIMENTACIÓN (ESD)

OBJETIVO
Determinar en unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los eritrocitos ó
glóbulos rojos para formar pilas de monedas. Sirve como complemento diagnóstico en
enfermedades hematológicas y no hematológicas.

FUNDAMENTO
La VSG se realiza por el método de Westergreen, considerado como el método de
referencia internacional. La sangre anticoagulada con EDTA se coloca en una pipeta
de vidrio en forma vertical y se deja en reposo durante una hora. Los eritrocitos
tienden a caer al fondo de la columna y las proteínas plasmáticas (fibrinógeno,
gammaglobulinas y otras) hacen resistencia a la caída. El valor de la VSG
corresponde al punto donde las células se separan del plasma. En los individuos
sanos la VSG ocurre lentamente y en procesos patológicos ocurre más rápidamente.
En algunos casos es proporcional a la gravedad de la enfermedad.

MATERIALES
 Sangre con EDTA
 Pipeta de Westergreen.
 Gradilla para sedimentación (Westergreen).
 Reloj o timer.
La pipeta es un tubo recto de 300 mm de longitud y 2.5 mm de diámetro y está
graduada de 0-200 mm. Se coloca en forma vertical en la gradilla de su mismo nombre.

FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA VSG

En general la sedimentación está afectada por propiedades de los eritrocitos, del
plasma y por factores de tipo técnico. Entre ellos se encuentran:
 Tamaño y forma de los eritrocitos.
 Aglutinación de los eritrocitos.
 Composición del plasma.
 Viscosidad sanguínea.
 Calibre y longitud del tubo.
 Cantidad y calidad del anticoagulante.
 Efecto de la temperatura y tiempo.

METODOLOGÍA
 Mezclar suavemente la muestra por inversión del tubo.
 Utilizando el micropipetiador, aspirar la sangre y llenar la pipeta de Westergreen
hasta la marca cero (0).
 Llevar inmediatamente a la gradilla y fijar la pipeta evitando que se derrame la
sangre.
 Poner a correr el cronómetro durante 1 hora y leer exactamente cuando se cumpla
este tiempo.

IMPORTANCIA CLÍNICA:
La VSG se utiliza como prueba de rutina en el diagnóstico inicial y seguimiento de
múltiples enfermedades, es importante en la detección de entidades ocultas
especialmente de origen neoplásico, en el seguimiento de enfermedades como la
fiebre reumática, tuberculosis e infarto al miocardio y para establecer diagnósticos
diferenciales. Por corresponder a un reactante de fase aguda se convierte en un
marcador inespecífico no asociado a ninguna enfermedad en concreto, pero su
elevación implica la existencia de un proceso inflamatorio, infeccioso o neoplásico.
Cifras mayores de 100mm/h se han asociado con enfermedades malignas (Ca colón,
Linfoma y Ca de mama).

MEDICIÓN DEL HEMATOCRITO

OBJETIVO
Expresar en porcentaje (%) el número de células rojas empacadas en un volumen de
sangre total.

MÉTODO
El hematocrito corresponde al volumen ocupado por los glóbulos rojos en relación con
el volumen total de sangre. Puede obtenerse por centrifugación (micrométodo o
microhematocrito) o por métodos electrónicos. Por micrométodo, se determina
aplicando una fuerza centrífuga de 3.000 r.p.m. durante 3 minutos a una muestra de
sangre total que está contenida en un capilar especialmente diseñado para esta
prueba.

MATERIALES
 Sangre anticoagulada con EDTA.
 Capilar.
 Plastilina.
 Centrífuga.
 Tabla de lectura de capilares de microhematocrito.

METODOLOGÍA
 Mezcle cuidadosamente la sangre anticoagulada por un minuto para obtener una
buena homogenización.
 Llene el capilar con sangre aproximadamente ¾ partes.
 Selle el extremo inferior con plastilina.
 Llevar a la centrífuga durante 3 minutos a 3000 r.p.m.
 Después de centrifugar, retire el capilar y proceda a la lectura del hematocrito en la
tabla correspondiente.
 En el capilar se observan las células rojas empacadas, una capa blanquecina que
corresponde a los glóbulos blancos y plaquetas (que sólo alcanzan un valor de 0.5
– 1 mm en condiciones normales) y el sobrenadante correspondiente al plasma (en
él pueden observarse cambios en el color, normalmente = amarillo claro, Ictérico =
amarillo fuerte, hemolizado = rojizo, ó lipémico = lechoso).
 El volumen de células se lee desde cero (0) hasta donde termina la capa de
glóbulos rojos y empieza la capa de blancos, la cual no se incluye en la lectura.

MEDICIÓN DE LA HEMOGLOBINA

OBJETIVO
Cuantificar la cantidad de hemoglobina presente en los glóbulos rojos.

MÉTODO
Método de la cianometahemoglobina: Al medir la hemoglobina se determina la
suma de todas las formas de hemoglobina presentes en el eritrocito (oxihemoglobina,
carboxihemoglobina, metahemoglobina y otras), lisando los glóbulos rojos para
obtener un compuesto estable conocido como cianometahemoglobina, que puede ser
medido en un espectrofotómetro, ya sea por métodos manuales o automatizados.

FUNDAMENTO
La mezcla de reactivo de Drabkin (CIANURO) con la sangre, transforma la
hemoglobina en cianometahemoglobina. La intensidad del color de esta reacción se
mide en un fotocolorímetro o espectrofotómetro.

Pasos de la reacción:
1. Hemoglobina + ferrocianuro potásico = metahemoglobina.
2. Metahemoglobina + cianuro potásico = cianometahemoglobina.

MATERIALES
 Sangre venosa anticoagulada con EDTA o sangre obtenida por punción capilar.
 Tubos de ensayo.
 Pipeta de Sahli (20 landas = 0.02 ml) o pipeta automática.
 Pipeta graduada de 5 ml.
 Tapones de caucho o papel parafinado.
 Fotocolorímetro debidamente calibrado.
 Cubetas para el Fotocolorímetro.
 Reactivo de Drabkin.

El reactivo de Drabkin es tóxico, contiene cianuro. Evite el contacto con ojos,

piel, mucosas.
INSTRUCCIONES DE PROCEDIMIENTO
 Deposite 5 ml del reactivo de Drabkin en el tubo de ensayo.
 Mida exactamente 20uL (0.02 ml) de sangre en la pipeta de Sahli.
 Limpie los excedentes de sangre por fuera de la pipeta.
 Lleve la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre expulsando y
aspirando varias veces para lavar internamente las paredes
 Tape el tubo y mezcle suavemente por inversión.
 Deje el tubo en reposo durante 10 minutos para que se produzca la hemólisis
total de las células rojas y se complete la reacción.
 Deposite la solución en la cubeta del Fotocolorímetro.
 Lea la solución obtenida, usando como blanco el reactivo de Drabkin.
 La concentración de hemoglobina se calcula multiplicando la absorbancia por
una constante que resulta de la calibración del método.
Ejemplo: Absorbancia de la muestra x 24.9= hemoglobina en g/dL

MÉTODOS ELECTRÓNICOS
En todos los analizadores semiautomatizados o automatizados, la hemoglobina se
determina con la misma fundamentación del método manual (cianometahemoglobina),
utilizando un hemoglobinómetro incorporado al instrumento.

La OMS estableció como límites inferiores de normalidad valores: En el hombre

13 gr/dL y en mujeres 12 gr/dL. Por debajo de estos valores se consideran
anemias.

CONSTANTES CORPUSCULARES Ó ÍNDICES DE WINTROBE

Son el resultado matemático de la relación entre la hemoglobina, el hematocrito y el

recuento de eritrocitos por mm3. Determinan el tamaño y el contenido de hemoglobina
de los eritrocitos bajo los conceptos del volumen corpuscular medio (VCM),
hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración de la hemoglobina corpuscular
media (CHCM). Estos tres promedios o constantes corpusculares de Wintrobe se
constituyen en pilares para la clasificación MORFOLÓGICA de las anemias.

1. V.C.M = Volumen corpuscular medio. También llamado Promedio de

Volumen Corpuscular (PVC)

Se refiere al tamaño de los eritrocitos, se expresa en femtolitros (fL) y se obtiene al

relacionar el volumen de células rojas empacadas (Hematocrito) y el recuento de
glóbulos rojos, con la siguiente fórmula:

Hematocrito
VCM ó PVC = ----------------------------- x 10 Valor de Referencia
Recuento de GR 80-100fL

Una de las desventajas en el método clásico o manual es la variabilidad y el error en

el conteo de los glóbulos rojos. Pero el VCM obtenido por métodos automatizados es
mucho más confiable.
En el neonato el VCM varía de la siguiente forma: En el recién nacido 106 fL; a la
semana de nacimiento 101 fL, y durante la tercera y cuarta semana después del
nacimiento alcanza los valores normales del adulto.
2. HCM = Hemoglobina corpuscular media. También llamada Promedio de
Hemoglobina Corpuscular (PHC)

Representa la cantidad de hemoglobina presente en cada eritrocito, expresada en

picogramos (pg) como unidad de peso. Relaciona la concentración de Hemoglobina
y el recuento eritrocitario, a través de la siguiente fórmula:

Hemoglobina
HCM ó PHC = -------------------------------- X 10 Valor Referencia
Recuento de GR 28-32pg

3. CHCM = Concentración de hemoglobina corpuscular media. También

llamada Promedio de la concentración de Hb Corpuscular (PCHC)

Relaciona el peso de la hemoglobina en un volumen total de eritrocitos (Hematocrito).

Nos da una visión global de los niveles de hemoglobina y se expresa en g/dL. Se
obtiene de la siguiente fórmula:

Hemoglobina (g/dL)
CHCM ó PCHC = -------------------------------- x 100 Valor Referencia
Hematocrito (%) 32-36g/dL

Las constantes corpusculares se utilizan para determinar el tipo morfológico de las

anemias, de acuerdo al diámetro del glóbulo rojo y su contenido de hemoglobina. Es
importante interpretar estos promedios de acuerdo con la evaluación morfológica
de los glóbulos rojos, que se realiza por microscopía en un extendido de sangre
periférica.

A continuación se presenta un ejemplo de cómo se clasifica morfológicamente la

anemia, según algunas combinaciones de datos de las constantes eritrocitarias:

CLASIFICACIÓN DE LA ANEMIA VCM - HCM - CHCM

Normocítica Normocrómica 80-100fL - 28-32pg - 32-36g/dL
Macrocítica Normocrómica >100fL - ≥32pg - 32-36g/dL
Microcítica Hipocrómica < 80fL - < 28pg - < 32g/dL

La anemia microcítica hipocrómica típicamente se asocia con deficiencias de hierro

y talasemias. La anemia macrocítica normocrómica se asocia en muchos casos con
anemias megaloblásticas por deficiencia de vitamina B12 y/o ácido fólico. La anemia
normocítica normocrómica puede relacionarse con hemorragia aguda, anemias
hemolíticas, algunas hemoglobinopatías y la anemia por enfermedad crónica.

RETICULOCITOS

Son eritrocitos jóvenes que se diferencian de los glóbulos rojos maduros puesto que
conservan en su citoplasma remanentes de RNA ribosomal, mitocondrias, aparato de
golgi, los cuales pueden ser identificados mediante colorantes vitales (azul de cresilo
brillante), haciendo que dicho RNA se precipite en forma de gránulos.

VALORES NORMALES
Valores relativos:
 Adulto: 0.5 – 2.5 %
 Recién nacidos: 2.6 - 6.5% (en dos semanas alcanza el valor de adulto).
Valor absoluto: 22,5 – 147,5 x 109/L
 INTERPRETACIÓN
El conteo de reticulocitos es importante porque refleja la cantidad de células rojas
viables que se producen en médula ósea (M.O). Una disminución en el número de
reticulocitos se asocia con enfermedades como la anemia aplástica, las anemias
carenciales y en general con la disminución en la producción de células rojas
en M.O. Los reticulocitos se encuentran aumentados en anemias hemolíticas,
anemias por deficiencias de hierro que reciben tratamiento y pérdidas de sangre
agudas o crónicas.

La producción de reticulocitos se puede estimar con base en la siguiente fórmula:

% reticulocitos x Hematocrito del paciente

% corregido: ---------------------------------------------------------------------
Hematocrito normal (45%)

Índice de Producción de Reticulocitos (IPR): % corregido

2

El valor obtenido es evidencia de la respuesta medular a las necesidades del individuo,

cuanto más severa es la anemia mas inmaduro el reticulocito y por ende la respuesta
medular debe ser mayor. Los valores del IPR permiten estimar los niveles de
respuesta de la medula ósea. Si el valor es < 2 se considera que es una medula
hipoproliferativa y si es ≥ 2 es hiperproliferativa.