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MEDICIÓN DE CRECIMIENTO MICROBIANO I

MEDICIÓN DE CRECIMIENTO MICROBIANO I

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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE TAMAULIPAS

UNIDAD ACADEMICA MULTIDISCIPLINARIA MANTECENTRO
GRA. LAZARO CARDENAS DEL RIO FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGIA

Practica #1

MEDICIÓN DE CRECIMIENTO MICROBIANO I. VALIDACIÓN DEL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO POR EL MÉTODO DE PESO SECO CELULAR PARA LA MEDICIÓN DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

Integrantes De la Cruz Martínez Juan José Doria Zuñiga Araceli de Jesús Ferretiz Torres Marissa García Escobar Oscar Jaramillo Perales Jesús Martínez Ramos Luis Alberto

los tubos de centrifuga o las membranas durante el enfriamiento previo a la medida del peso después del secado. el peso de células secas se suele expresar en unidades de g/l. OBJETIVO: Determinar la cantidad de biomasa de levaduras de panificación mediante el método de peso seco. En ambos casos. Para evitar esto. VALIDACIÓN DEL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO POR EL MÉTODO DE PESO SECO CELULAR PARA LA MEDICIÓN DE CRECIMIENTO MICROBIANO. encontrar un factor de conversión y los métodos de peso seco. existe una relación directa entra la luz reflejada y el número de células presentes en el medio de cultivo.2 micras (mm). Para poder usar este método es necesario calibrarlo. Así. una importante fuente de error en la determinación del peso seco es la adsorción de humedad atmosférica por las células secas. midiendo las mismas muestras utilizando otro método. El precipitado se separa del sobrenadante y se disuelve con suero salino isotónico (9g ClNa/L). siguiendo la ley de Beer.[FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGÍA] Practica 1 MEDICIÓN DE CRECIMIENTO MICROBIANO I. Se utilizan longitudes de onda en torno a 600 nm. Normalmente se calibra por el método del peso seco celular. Las células retenidas en el filtro se lavan con suero salino isotónico y se dejan secar en un horno cono en el caso anterior. INTRODUCCION: Medida del crecimiento Microbiano Existen varios métodos para determinar el crecimiento microbiano. en el futuro con solo medir la 2 . Los más usados son:  Determinación de peso seco celular: el método más frecuentemente empleado para la medida del crecimiento microbiano es secar el volumen conocido de cultivo celular. El procedimiento consiste en centrifugar (4-6 x 103rpm) un volumen conocido de medio de cultivo en un tubo de centrifuga pre-pesado. lentamente hasta peso constante. Así. las muestras se filtraran a través de membranas hidrofilicas de tamaño de poro de 0. En el caso de cultivos de células bacterianas. Se vuelve a centrifugar y el precipitado una vez separado del sobrenadante se deja en un horno a 105˚C durante aproximadamente 10horas. En el caso de las levaduras se trata de separar los microorganismos del medio por medio de sedimentación. el enfriado a temperatura ambiente debe de realizarse en un desecador. El mayor inconveniente de este método es que es lento y requiere una cantidad grande de muestra (1-5 ml). Por regresión lineal obtenemos la ecuación que nos relaciona la absorción de la muestra con el peso seco. También debe tenerse en cuenta la presencia de sólidos en el medio y corregir el peso seco celular resultante.  Espectrofotometría: las células microbianas reflejan la luz.

MATERIAL.5 PROCEDIMIENTOS: Peso seco 3 . o por la presencia de sólidos en el medio.5 0.25 0. De levadura 0. Este método hay que usarlo con cuidado pues el coeficiente de la relación entre la absorbancia y peso seco puede variar con diferentes estados del crecimiento. SUBSTANCIA Y EQUIPO: MATERIAL Matraz de 250ml Tubos chicos con rosca Desecador Gradillas Vasos de precipitado Probeta Espátula Pipeta Pasteur SUSTANCIA Agua purificada Levadura para pan EQUIPO Balanza analítica Estufa Espectrofotómetro Computadora Incubadora Computadora CALCULOS: Concentración. Solución 1 2 3 4 5 6 Concentración 5g/L 10g/L 15g/L 20g/L 25g/L 30g/L g. Así mismo a los altos valores de absorbancia la respuesta deja de ser lineal.25 1.75 1 1.[FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGÍA] Practica 1 absorbancia en el espectrofotómetro y aplicando la ecuación obtenemos rápidamente la concentración de células microbianas en el medio. por ello hay que diluir muestras hasta estar en el intervalo de linearidad.

Repetir el paso anterior hasta que el sobrenadante no tenga color ni turbidez. 5. vortear y centrifugar Retirar el sobrenadante Repetir el paso anteriro hasta que el liquido no muestre color ni turbidez Espectrofotometría    Leer 2 veces cada solución en el espectrofotómetro a 600nw. 4. colocarlos. Retirar el sobrenadante. Diagrama (Peso seco) Colocar en el desecador por 10 minutos usando pinzas Pesar los tubos Pesar en la balanza analitica Centrifugar durante 10 minutos Tarar el tubo antes de colocar la muestra Agregar 2g de muestra aproximadamente Agregar agua. Diagrama (Espectrofotometría) 4 . Centrifugar durante 10 minutos y retirar el sobrenadante. Etiquetar los tubos. Pesar los tubos. Agregar agua. vortear y centrifugar. usando pinzas.[FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGÍA] Practica 1 1. 2. en el desecador de 10 a 15 minutos y pesar en la balanza analítica previamente calibrada. Tarar el tubo antes de colocar la muestra. 3. Anotar el peso completo. Anotar loa cuatro dígitos después del punto. Encender el equipo y elegir condiciones Colocar agua purificada en la celda. Colocar aproximadamente 2g de solución correspondiente en cada tubo.

[FUNDAMENTOS DE BIOTECNOLOGÍA] Practica 1 Encender el equipo Elegir condiciones Leer dos veces cada solicion Colocar agua puruficada en la celda OBSERVACIONES: RESULTADOS: CONCLUISIONES: REFERENCIAS:  Cuadernillo de trabajo. Fundamentos de Biotecnología. 5 . 8º semestre.

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