UNIVERSIDAD NANCIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TEMA:
Determinación de biomasa por gravimetría

PRESENTADO POR:
 Mostacero Chilon, Lissy Paola
 Castro Goicochea, Shoselin Liliana
 Marin Flores Alexander Jhonatan
 Campos Tarrillo Brayan

DOCENTE:

Ing. Ochoa Herrera Gladys

CURSO:

Bioingeniería Alimentaria

GRUPO
A2

Cajamarca, octubre del 2022

 DETERMINACIÓN DE BIOMASA POR GRAVIMETRÍA
I. INTRODUCCIÓN

En la industria y en sus aplicaciones es importante conocer el número de

microorganismos presentes en una muestra. Este conocimiento puede ser
utilizado en estudio de curvas de crecimiento, preparaciones de inóculos para
fermentación.
Biomasa es un término general que se refiere a los microorganismos presentes
en un sistema. Los microorganismos son una importante fuente de obtención de
metabolitos de interés biotecnológico. Una de las variables más importantes en
una fermentación es la biomasa. Independientemente de que se propague un
microorganismo o se produzca un metabolito de interés, siempre será deseable
conocer en tiempo real la concentración de biomasa.
Los métodos convencionales para determinar la biomasa fuera de línea son:
cuenta al microscopio, gravimetría, y métodos de siembra. Estos métodos son
complejos, repetitivos y consumen tiempo. Por otro lado, espectrofotómetros
conectados en línea pueden realizar la medición en tiempo real, pero requieren
diluciones en altas concentraciones celulares.
En este trabajo se determinará biomasa por gravimetría método que va a
registrar pesos (húmedo, seco) y por espectrofotómetro que mide colorimetría
espectral.

II. OBJETIVOS
 Determinar la biomasa presente en una solución de levadura mediante
diferentes mediante diferentes métodos de determinación de biomasa.
 Aprender y conocer los métodos más empleados en la determinación de
biomasa.

III. MARCO TEÓRICO

Determinación de biomasa: Existen varias maneras de determinar la biomasa

presente en un medio de cultivo, ya sea por métodos directos e indirectos. Los
métodos se diferencian en que los métodos directos son aquellos basados en
gravimetría, o en observar la actividad celular y los indirectos son aquellos que
se basan en la medición de un componente celular.

A. Métodos directos de determinación de biomasa: Se basan en el

número de células o en el peso celular, dentro de estos métodos podemos
distinguir a los siguientes:
 Métodos gravimétricos

.1 Peso húmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensión

que es pesada luego de la separación de las células por filtración
o centrifugación. Es una técnica útil para grandes volúmenes de
muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda
atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la
masa. La cantidad de líquido retenida puede ser importante, por
ejemplo, un pellet de células bacterianas muy empaquetadas
puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30%
del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular.

Para corregir el peso húmedo se determinará la cantidad de

líquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una
centrifugación, para ello se utilizan soluciones de polímeros no
iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio
intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.

.2 Peso seco: La cantidad total de biomasa presente en una muestra

puede medirse en términos de peso seco por unidad de volumen,
ya sea como sólidos en suspensión totales (SST) o sólidos en
suspensión volátiles (SSV). Las células se separan del líquido
bien por centrifugación bien por filtración. Se expresan en
g.m.s/mL.

La principal desventaja de estas técnicas es que su determinación

incluye no sólo microorganismos activos sino microorganismos
muertos, material inerte, polímeros extracelulares y materia
orgánica adsorbida. Además, no puede aplicarse cuando los
sustratos a degradar son insolubles. Los métodos gravimétricos
son simples, pero consumen bastante tiempo y son poco
reproducibles. A la vez este método este método los componentes
volátiles de las células pueden perderse en el secado y puede
existir alguna degradación. También la muestra seca pude
recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el
ambiente tiene humedad relativa alta.

 Métodos espectrofotométricos
Se basan en la existencia de una relación directa entre el número total de
microorganismos presentes en una muestra y su valor de turbidez. Tras
la determinación de la turbidez de la suspensión celular mediante
espectrofotometría, el resultado se expresa en unidades de absorbancia.
 Sin embargo, antes de utilizar la turbidez como método de recuento, hay
que realizar una recta de calibrado que relacione medidas directas
(microscópicas, por recuento en placa o peso seco) con las indirectas de
la turbidez. Esta recta contiene datos sobre el número de células,
permitiendo la estimación de tal parámetro a partir de una sola medida
de la turbidez. Se trata de métodos rápidos, pero de baja sensibilidad y
que presentan problemas de calibración (tipo de cultivo, medio de
cultivo) y de interferencias con partículas.

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

IV.1 Materiales biológicos

 Levadura
 Agua destilada

IV.2 Material de laboratorio

 Vasos Beacker
 Tubos de ensayo
 Pipeta

IV.3 Equipos
 Centrifuga
 Horno
 Espectrofotómetro
 Balanza

IV.4 Metodología

100ml de H2O
Peso húmedo
1. Pesar tubo
5g de levadura
de

ensayo (3 repeticiones)
2. Colar 5ml de muestra c/tubo
3. Pesar tubo 4 muestras
4. Centrifugación (4000 Rpm x 10 minutos)
5. Retirar fase liquida
6. Pesar tubo con muestra húmeda(Pf)
7. La ecuación que se determinará es:
 Peso seco
1. Pesar tubo de ensayo (3 repeticiones)
2. Colar 5ml de muestra c/tubo
3. Pesar tubo 4 muestras
4. Centrifugación (4000 Rpm x 10 minutos)
5. Llevar a horno (100 °C x 24h aprox)
6. Pesar y registrar peso constante (Pf)
7. La ecuación que se determinará es:

Espectrofotómetro

V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Peso de tubo inicial=10,9,11g
Peso total (tubo +muestra) =15,14,14g
Peso de la muestra seca o húmeda =?
Las ecuaciones para la determinación de peso seco y peso húmedo son:

Muestra en seco

P1= 15-9 = 1.2

5
P2= 14-11 = 0.6
5

P3= 14-10 = 0.8

5
Muestra en Humedo
peso de tubode muestra−peso de tubo vacio
P . de muestra humeda =
volumen de lamuestra

P1= 15-9 = 0.4

15
P2 = 16- 11 = 0.3
16
P3 = 14-10 = 0.3
14
 Peso de muestra seca
CM =
volumen de la muestra

peso de muestra humeda

CM =
volumen de lamuestra

Muestra Peso de tubo W tubo + W tubo + Peso en Peso en

vacío (g) muestra muestra húmedo seco
seca (g) húmeda (g) (g/ml) (g/ml)
1 9 15 15 0.4 1.2
2 11 14 16 0.3 0.6
3 10 14 14 0.3 0.8
Promedio - - - 0.3 0.3

Tabla 1: Resultados de absorbancia por el espectrofotómetro

Dilución Absorbancia nm
10
−1
1.68
10−2 0.184
10
−3
-0.0134
10−4 -0.0123
10
−5
-0.081

VI. RECOMENDACIÓN
VII. CONCLUCION
La biomasa de levadura es capaz de absorber cantidades apreciables de cationes y
otros elementos químicos en el medio de crecimiento, aun cuando estos no sean
necesarios para el funcionamiento adecua- do de su metabolismo.

VIII. BIBLIOGRAFIA
IX. ANEXOS
En seco: