UNIVERSIDAD DR.

JOS MATAS DELGADO

FACULTAD DE AGRICULTURA E INVESTIGACIN AGRCOLA
JULIA HILL DE OSULLIVAN

MICROBIOLOGA
Mtodo Del Nmero Ms Probable
Docente: Lic. Cristabel Cruz
Alumno/a: Martha Guadalupe Amaya Romero
Carn: 201501981
Grupo: 1-1
Carrera: Ingeniera en alimentos

Fecha de entrega: lunes 30 de mayo del 2016

INTRODUCCIN
En este reporte se llegar a identificar el mtodo NMP (Nmero ms
probable, el cual consiste en una tcnica de estimacin estadstica
basada en el hecho que a mayor nmero de bacterias en una muestra,
mayor ser la dilucin necesitada para reducir la densidad hasta el
punto en que ninguna bacteria se le permita crecer en la serie de
tubos de dilucin. Muestras microbianas son aadidas a tubos con
caldos de lactosa y la presencia o ausencia de gas formado en la
fermentacin y da un estimado de nmero de clulas. Este mtodo es
ms til cuando las bacterias que estn siendo contados no crecern
en medios slidos, como en el caso de las bacterias nitrificantes
quimioauttrofas. Tambin es til cuando el crecimiento de la bacteria
es en un medio lquido diferencial, usado para identificar microbios,
como en bacterias coliformes. El NMP es la nica afirmacin en la cual
existe 95% de probabilidad que la poblacin bacteriana sea de rango
correcto, siendo el nmero estadstico ms probable. Un sustrato es
donde crecen y se desarrollan los microorganismos el sustrato puede
ser de diferentes tipos, estos podran ser las personas los animales y
las plantas hasta el mismo medio ambiente.
Para ello se utilizan diluyendo la muestra y poder realizar los
recuentos en las diluciones, si la muestra es slida se utiliza 1gr y si es
lquida es un 1ml.

OBJETIVO GENERAL
La Microbiologa es una ciencia bsica que requiere un enfoque
eminentemente aplicado, ya que constituye la base de conocimiento
para

diferentes

actividades,

por

ejemplo:

caracterizar

las

enfermedades infecciosas, sus mecanismos de patogenicidad ;

entender el fundamento del tratamiento teraputico, de la higiene y
tecnologa de los alimentos, de las aplicaciones industriales y
ambientales de los microorganismos, etc.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
Adquirir un concepto claro de los diferentes grupos de hongos y
levaduras.
Conocer la estructura y los tipos de colonia de los mismos.
Conocer la biologa de los microorganismos: su multiplicacin;
fisiologa; mecanismos genticos; taxonoma, etc.
Estudiar sus actividades en la naturaleza con objeto de
aplicarlas para su aprovechamiento y a nivel industrial.

PROCEDIMIENTO

 Materiales y reactivos

14 tubos de ensayo
1 mechero
Desinfectante
Caldo: Lauril
algodn
alcohol
Papel toalla
Jeringas
Muestra: Leche

Se limpi y se desinfecto el rea de trabajo donde se iba a llevar a cabo el

desarrollo del laboratorio.
Se procedi a encender el mechero para tener un espacio libre de
microorganismos.
Se desinfecto con alcohol cada tubo y luego se rotularon con una vieta con
nuestros respectivos datos.

 Luego se prepararon el medio este fue lauril

Se les coloco 9 ml de medio a cada tubo.

Un tubo se dej sin muestra, y a este se le llamo testigo
Luego se puso 1 ml de la muestra (en este caso fue leche) al tubo que se le
coloco la vieta que dice patrn.
Al tubo de 1:10 se le coloco 1 ml del patrn y as sucesivamente como lo
muestra la imagen de abajo.

 Luego del tubo 1:10 se sacaron otras tres muestras (1:10, 1:100 y 1:1:000)
y se hizo el mismo procedimiento que se muestra en la imagen.
Se repiti el mismo proceso con el tubo de 1:100 y el 1:1000.
Luego se introdujeron los 14 tubos envueltos en papel aluminio en una olla
con agua hirviendo.

1
Luego

se

enfriar
Se

en agua.
dejaron en un

raquet y se introdujeron en la incubadora por 24 horas.

RESULTADOS
Leche (Patrn)
1:10

+++++

1:100

++++

1:1000

+++

dejaron

Muestra del tubo 1:10

A1

++++

A2

+++

A3

++

Muestra del tubo 1:100

B1

++++

B2

++

B3

Muestra del tubo 1:1000

C1

++

C2

C3

Tubos Inoculados:
3 con 1 ml de dilucin 1:10 = 0.1 ml de muestra
3 con 1 ml de dilucin 1:100 = 0.01 ml de muestra
3 con 1 ml de dilucin 1:1000 = 0.001 ml de muestra

Nmero Ms Probable De Organismos

3 tubos
3 tubos
3 tubos
1:10
1:100
1:1000
3
3
1
Nmero Ms Probable (NMP)
460.0 NMP/g

CONCLUSIONES
El mtodo del Nmero ms probable (NMP), tambin conocido
como el mtodo de los ceros de Poisson, es una forma de
obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos

discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa.

Es una estrategia eficiente para estimar densidades de poblacin
que se emplea cuando una evaluacin cuantitativa de elementos
individuales no es factible. El mtodo se basa en determinar la
presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos
especficos de microorganismos en copias obtenidas por
diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros
ambientes. Se basa en el principio de que una nica clula viva
puede desarrollarse y producir un cultivo turbio.
El mtodo requiere la realizacin de una serie de diluciones en
serie de la muestra de cultivo, en un medio lquido adecuado
para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez
veces mayor. Luego, se incuban las muestras deseos tubos y,
pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que
recibieron una o ms clulas microbianas procedentes de la
muestra, se pondrn turbios, mientras que los tubos que no
recibieron ninguna clula permanecern transparentes.

RECOMENDACIONES
Medir bien los medios para que estos alcancen.
Cumplir con las indicaciones respectivas para realizar las practicas.
Tener el rea limpia y desinfectada para que no haya ninguna alteracin
en el resultado de la prctica.
Poner en prctica siempre los mtodos de esterilizacin.
Ser puntual y responsable con la hora indicada para iniciar y finalizar la

prctica.

ANEXOS
Caldo Lauryl Tryptose

Medio recomendado por A.P.H.A. para deteccin y recuento de coliformes en

aguas, aguas residuales y alimentos.
Fundamento
Medio rico en nutrientes, que permite un rpido desarrollo de los microorganismos
fermentadores

de

la

lactosa,

an

de

los

fermentadores

lentos.

La triptosa es la fuente de nitrgeno, vitaminas, minerales y aminocidos, la

lactosa es el hidrato de carbono fermentable, las sales de fosfato proveen un
sistema

buffer,

el

cloruro

de

sodio

mantiene

el

balance

osmtico

Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la

flora

acompaante.

Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y gas, ste ltimo se evidencia

al utilizar las campanas Durham.

Frmula (en gramos por litro)

Triptosa

20.0

Instrucciones
Suspender 35,6 g del polvo en 1

Lactosa

5.0

Cloruro de sodio

5.0

litro de agua destilada. Dejar

reposar 5 minutos. Calentar a
ebullicin

Lauril

sulfato

de 0.1

total.

sodio

hasta

Distribuir

conteniendo

Fosfato dipotsico

2.75

Fosfato

2.75

la

fermentacin.

disolucin
en

tubos

tubos

de

Esterilizar

en

autoclave durante 15 minutos a

121C.

monopotsico
pH final: 6.8 0.2
Siembra

Para recuento de coliformes totales, tcnica del Nmero Mas Probable:

a.- Para el anlisis de muestras fluidas como el agua, sembrar por triplicado: 10 ml
en caldo doble concentracin y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentracin.

Nmero Volume

Volume

n de la n
de

muestr

tubos

Concentraci

de n

medio

del medio

10 ml

10 ml

Doble

1 ml

10 ml

Simple

0.1 ml

10 ml

Simple

b.- Para muestras slidas (alimentos, cosmticos, frmacos), efectuar diluciones

seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilucin por triplicado en medio de cultivo
simple concentracin.

Nmero

Diluci
n

Volume

Volume

dela n de la n

Concentraci

de n

de

muestra muestra medio

del medio

10-1

1 ml

10 ml

Simple

10-2

1 ml

10 ml

Simple

10-3

1 ml

10 ml

Simple

tubos

Incubacin
Incubar los tubos 24-48 horas a 35-37 C.
Resultados
Considerar como positivos aquellos tubos que presentan gas.

Microorganismos

Crecimiento

Produccin
de gas

Enterobacteraerogenes

Bueno

a +

excelente
Escherichiacoli

ATCC Bueno

25922

a +

excelente

Salmonella typhimurium Bueno

ATCC 14028

excelente

Staphylococcusaureus

Inhibido

a -

Inhibido

ATCC 25923

El resultado del nmero ms probable se expresa por 100 ml para muestras

fluidas y por gramo para muestras slidas.

Caractersticas del medio.

Medio preparado: mbar claro a ligeramente opalescente. Si se conserva en fro,
generalmente flocula o forma precipitado.
Almacenamiento:
Si se conserva entre 25-30 C o estufa de incubacin a 35-37 C permanece claro.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02- x 500g :Cdigo:
174-05

174-06

B02-