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TecnicBasic-Diluciones 6526
TecnicBasic-Diluciones 6526
Preparar adecuadamente las muestras de los alimentos bajo estudio, as como las
diluciones que les permitan investigar su contenido microbiolgico.
Determinar el nmero de diluciones adecuado, con base en las caractersticas y
datos de la muestra y de los microorganismos que sern investigados.
GENERALIDADES
Los microorganismos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, por lo que
siempre se encuentran presentes en diversos productos, especialmente en aquellos
que favorecen de algn modo su sobrevivencia o desarrollo.
Los alimentos por su produccin primaria, generalmente tienen una importante
microbiota normal, segn la regin y condiciones en que se producen; adems, su
composicin tiende a conservar dicha flora y, por supuesto, le proporciona nutrientes de
manera que, si las condiciones lo permiten, los microorganismos pueden multiplicarse
en los alimentos. Como consecuencia de este desarrollo microbiano, los alimentos
pueden deteriorarse y perder sus atributos.
Adems de la microbiota normal, los alimentos son susceptibles de contaminacin
durante su manejo, ya sea por operadores, equipo, fauna nociva, o por contaminacin
cruzada; algunos de los microorganismos contaminantes pueden ser patgenos y en tal
caso, su desarrollo e incluso su mera sobrevivencia, pueden ocasionar desde el
incumplimiento de normas de higiene y seguridad, hasta la aparicin de enfermedades
transmitidas por alimentos (ETAs).
Dado el tamao de las poblaciones microbianas que pueden estar presentes en un
alimento, que van desde algunos miles hasta varios millones de clulas por gramo, su
determinacin cuantitativa requiere la preparacin de diluciones conocidas de la
muestra; y es costumbre utilizar cifras decimales para facilitar los clculos. En esta
prctica se establece la forma general de preparar dichas diluciones. En vista de la gran
cantidad de productos alimenticios y de la diversidad de sus caractersticas, algunos
pueden requerir modificaciones o mtodos especficos pero, en todos los casos donde
sea posible, se recomienda apegarse a estas guas y modificarlas nicamente cuando
sea necesario.
Lo ms adecuado es preparar una dilucin primaria y, a partir de ella, todas las
necesarias para poder contar los microorganismos presentes; pueden ser dos
diluciones decimales consecutivas, es decir, 1:10 y 1:100 o superiores, segn la carga
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el Anlisis
Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el Anlisis
Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.
MATERIAL Y EQUIPO
NOTA
a
Camacho,PREPARACIN
A., M.Giles, A.Ortegn,YM.Palao,
B.Serrano
y O.Velzquez.
2009. PARA
Tcnicas para
el Anlisis MICROBIOLGICOS
Microbiolgico de Alimentos. 2 ed.
DILUCIN
DE
MUESTRAS
ANLISIS
Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.
1.0 mL
10-1
10-2
1.0 mL
10-3
Homogeniza
r con 90 mL
de solucin
dilucyente
Pesar 10 g de
muestra en
condiciones
de asepsia
10-4
Homogeneizar la
muestra con el
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el
Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.
PROCEDIMIENTO
1. Preparacin de la dilucin primaria:
1.1. Muestras lquidas no viscosas (como agua, leche, refrescos, etc. en las
cuales la distribucin de microorganismos es homognea o fcilmente
homogeneizable por medios mecnicos como agitacin)
1. Agitar la muestra manualmente en un arco de 30 cm., con 25 movimientos
de arriba abajo, efectuados en un tiempo de 7 segundos.
2. En condiciones aspticas, tomar 10.0 mL de la muestra y
3. Diluir con 90.0 mL del diluyente el cual debe encontrarse a una temperatura
similar a sta, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente.
1.1.1. Alimentos originalmente lquidos o licuables y congelados:
1. Fundir por completo en bao de agua entre 40 y 45C en un tiempo mximo
de 15 minutos y homogenizar agitando vigorosamente.
2. Proseguir como se indica en el punto 1 para muestras lquidas no viscosas.
1.1.2. Parte lquida de una muestra heterognea que sea considerada
suficientemente representativa de la muestra total:
1. Proseguir como se indica en el punto 1 para muestras lquidas no viscosas.
1.2. Muestras slidas o semislidas.
1.2.1. Muestras slidas y semislidas no congeladas:
1. Pesar una cantidad de 10.0 g de la muestra por analizar en un recipiente o
bolsa plstica estril de tamao adecuado.
2. Adicionar un volumen de 90.0 mL del diluyente, segn sea el caso, llevado
a una temperatura similar a la de la muestra.
3. Operar la licuadora o el homogeneizador peristltico de 1 a 2 minutos hasta
obtener una suspensin completa y homognea, segn se indique en la
tcnica correspondiente para cada alimento. An en los equipos ms lentos,
el tiempo de homogenizacin debe ser < 2.5 minutos.
4. Permitir que las partculas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad
deseada (alcuota), tomando sta de las capas superiores de la suspensin.
NOTAS
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el
Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.
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Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.
Intervalo de sensibilidad
Hongos y levaduras
Staphylococcus aureus en
placas extendidas en agar Baird Parker
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Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.
BIBLIOGRAFA
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Muestras de Alimentos para su Anlisis Microbiolgico. Norma Oficial
Mexicana. Mxico.
Food and Drug Administration (2003) Bacteriological Analytical Manual. 9th
ed. Arlington, VA: AOAC.
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Swanson K.M., Petran R.L., Hanlin J.H. (2001) Culture Methods for
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http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-1.htmL
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el
Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica, UNAM. Mxico.