Laboratorio de Microbiologa Ing. Agroindustrial.

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CURVA DE CRECIMIENTO PARA HONGOS NO FILAMENTOSOS

FUNGUS GROWTH CURVE FOR NON FILAMENTOUS Fredic Yohany Rojas P. 117002634, Nataly Johana Mican 117002622, Cristian Camilo Londoo 117002620

RESUMEN

La curva del crecimiento resulta de la representacin grfica de la determinacin peridica del nmero de clulas viables por mililitro que existen en un lquido inoculado con clulas microbianas provenientes de un cultivo que ha crecido previamente hasta la saturacin. En el laboratorio, la levadura Saccharomyces cerevisiae facilita el monitoreo del crecimiento celular mediante recuento directo al microscopio utilizando la Cmara de Neubauer para estimar el nmero de levaduras viables/ml (N). La viabilidad de las clulas de levaduras es demostrada aplicando el colorante azul de metileno en solucin acuosa, que al reducirse (agente oxidante) muestra clulas incoloras. En diversos procesos industriales, las levaduras se cultivan para obtencin de biomasa como fuente de alimento, fabricacin de pan y bebidas fermentadas (cerveza, vino) as como para la obtencin de vitaminas y otros factores de crecimiento. Palabras clave: curva, crecimiento, levaduras, biomasa. ABSTRACT

Is the growth curve of the graphical representation of the periodic determination of viable cell number per milliliter which exist in a liquid inoculated with microbial cells from a culture that has previously grown to saturation. In the laboratory, the yeast Saccharomyces cerevisiae facilitates the monitoring of cell growth by direct counting under a microscope using a Neubauer chamber to estimate the number of viable yeasts / ml (N). The viability of yeast cells is demonstrated using the methylene blue dye in aqueous solution at reduced (oxidizing agent) shows cells colorless. In various industrial processes, yeasts are grown for production of biomass for food, making bread and fermented beverages (beer, wine) and to obtain vitamins and other growth factors.

Keywords: curve, growth, yeast biomass.

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INTRODUCCION.

El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido desde diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede llegar a determinar la medida del crecimiento mediante diversas metodologas. Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que tienen las clulas individuales, esto es iniciar y completar una divisin celular; para determinar el nmero total de microorganismos en una muestra se puede utilizar el recuento microscpico de partculas, en el laboratorio se us una cmara de Neubauer que es un instrumento utilizado en medicina y biologa para realizar el recuento de clulas en un medio lquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, liquido sinovial, etc. Esta cmara de contaje est adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrcula de dimensiones conocidas. Se cubre la cmara con un cubrecmaras que se adhiere por simple tensin superficial. Luego se introduce el lquido a contar, al que generalmente se ha sometido a una dilucin previa con un diluyente, por capilaridad entre la cmara y el cubrecmara; puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultneamente. Para contar las clulas se observa el retculo al microscopio con el

aumento adecuado y se cuentan las clulas. Con base en la cantidad de clulas contadas, conociendo el volumen de lquido que admite el campo del retculo, se calcula la concentracin de clulas por unidad de volumen de la muestra lquida inicial

METODOLOGIA. Queriendo Determinar la formacin de biomasa en funcin del tiempo mediante la tcnica de recuento en cmara de Neubauer. Se utilizo materiales y reactivos como: Caldo para levaduras Solucin salina 0.85 % p/v Colorantes de Gram Azul de metileno Pipetas Cmara de Neubauer Gradillas Capilares Tubos de ensayo Microscopio

Para hacer el recuento en la cmara de neubauer primero se realiz las disoluciones con las horas correspondientes (hora 4 y 7), se tom 0,1 ml de azul de metileno a una concentracin del 0,1% y se adiciono en el tubo marcado con la dilucin 10-1. Luego se tom 0,5 ml de la muestra y se deposit en el Tubo de la dilucin 10-1 y a partir de este se realiz diluciones seriadas hasta 10-5. Despus de esto con el capilar, se tom la muestra de la

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dilucin 10-5 y se coloc en la cmara de Neubauer y se observ en El microscopio a 40x

RESULTADOS. Tabla Curva de crecimiento para Saccharomyces cerevisiae Tiem Concentracin Porcentaje Porcentaje de de po de clulas/ml
Viabilidad gemacin

0 2 4 6 7 8 9 10

0 50x10^6 2.95x10^9

0 0 No hubo

0 0 1 gemante 0

1.8x10^10

7x10^11

No hubo

1 gemante

Esta seria mas o menos el modelo de la curva de crecimiento ya que la concentracion de celulas van asecendiendo y los datos indican de que se puede ver claramente la fase exponencial.

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Los microorganismos pueden crecer en una variada gama de pH que va desde pH = 2 para los acidfilos hasta pH = 11 para alcalfilos. En general los microorganismos que toleran pH cidos no toleran pH alcalinos y viceversa En la grfica se puede ver una Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es mxima y el tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias consumen los nutrientes del medio a velocidad mxima. Esta fase corresponde a la de infeccin y multiplicacin dentro del organismo del agente infeccioso. Para el crecimiento bacteriano hay que tener en cuenta factores fsicos y qumicos que influyen por ejemplo Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento adecuada. Si consideramos la variacin de la velocidad de crecimiento en funcin de la temperatura de cultivo, podemos observar una temperatura mnima por debajo de la cual no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento lineal de la velocidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se alcanza la temperatura ptima a la que la velocidad es mxima. Por encima de esta temperatura ptima, la velocidad de crecimiento decae bruscamente y se produce la muerte celular. El aumento de la velocidad de crecimiento con la temperatura se debe al incremento generalizado de la velocidad de las reacciones enzimticas con la temperatura. Se denomina coeficiente de temperatura a la relacin entre el incremento de la velocidad de reaccin y el de temperatura, tambin el pH es un parmetro crtico en el crecimiento de microorganismos ya que cada tipo de microorganismo tiene un rango de pH en el que puede vivir adecuadamente, fuera de este rango muere, el pH intracelular es ligeramente superior al del medio que rodea las clulas ya que, en muchos casos, la obtencin de energa metablica depende de la existencia de una diferencia en la concentracin de protones a ambos lados de la membrana citoplsmica.

BIBLIOGRAFIA. Microbiologa, Roger Y. Stanier, Segunda Edicin, Reverte, 1992, pg. 445 Induccin a la microbiologa, Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case, Ed. Mdica Panamericana, 2007. Pg. 332

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