TECNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE

ES una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una

evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la
determinación de presencia o ausencia (pos o neg) en réplicas de diluciones consecutivas de
atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por
lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo
particular de la población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad
poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de
una tabla probabilística.

Muestras: Colecte asépticamente muestras frescas de suelo (10 g) de varios lugares u obtenga
muestras de agua (10 ml) de lagos, ríos o charcas.

Extracción de microorganismos viables: Para muestras de suelo, las células podrán ser removidas
y homogenizadas añadiendo 1 g de muestra a un tubo de ensayo que contenga 9 ml de solución
salina. Agite moderadamente por 5 minutos en un vortex.

Diluciones en serie: El extracto de suelo puede ser diluido seriadamente transfiriendo 1 ml a un

tubo con 9 ml de 0.85% NaCl. Cada transferencia corresponde a una dilución de 1 en 10. Repita en
serie el procedimiento de dilución hasta alcanzar la dilución 10-7. Para muestras líquidas, mezcle
bien la muestra y proceda a preparar las diluciones seriadas como fueron descritas anteriormente.

Placas Petri: Utilizando un marcador, divida la placa Petri en cinco zonas de igual tamaño. Use una
placa por cada muestra. Rotule cada zona con el factor de dilución a ser inoculado

Inoculación: Transfiera 5 µl de la dilución apropiada al área correspondiente. Repita esta

operación cinco veces por cada dilución

Permita que el inóculo seque sobre el medio de crecimiento. Selle la placa con un Tirilla de
parafina. Invierta la placa e incube a 25°C por 7 días.

Evaluación de crecimiento: Para cada dilución en ascendencia evalué el crecimiento o no

crecimiento sobre cada réplica inoculada.

Algunas de las ventajas del NMP son:

· La capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un

proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinarla densidad poblacional de organismos
que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de infección de
plantas.

· Provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados.

· Determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente.

· Suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en
platos de cultivo, entre otros.
Se utiliza para contar microorganismos que son difíciles de cultivar en medio sólido. También se
usa para determinar el número de células de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio
líquido determinado. Por ejemplo, puede emplearse para determinar la contaminación del agua
potable, determinando el número de bacterias que pueden crecer en un medio que contiene
lactosa. Estas bacterias probablemente sean Escherichia Coli provenientes de aguas residuales
contaminadas, y la presencia de E. Coli en el agua potable es una prueba presuntiva de
contaminación.

Aplicación

Este método se usa para contar microorganismos difíciles de cultivar en medio sólido,o para
determinar el número de células que pueden crecer en un medio líquido determinado, como el
análisis para determinar la contaminación del agua potable, determinando el número de bacterias
Escherichia coli que pueden crecer en un medio con lactosa. La presencia de E. coli en el agua
potable es una prueba de contaminación.

En microbiología, el método se emplea habitualmente realizando diluciones en serie de un cultivo

de bacterias en un medio de crecimiento, y luego divisiones adicionales en serie hasta obtener
partes alícuotas. Los cultivos son incubados y evaluados a ojo, eludiendo el tedioso recuento de
colonias, o el caro y tedioso recuento microscópico.