MODIFICACION Y TRANSPORTE DE

LAS PROTEINAS:
2.- EL APARATO DE GOLGI
El aparato de Golgi (AG) es un orgnulo localizado cerca del ncleo, y est
formado por agrupaciones de vesculas esfricas o aplanadas, llamadas cisternas (Figura
1). Cada conjunto de cisternas con forma discoidal forma una estructura que recuerda a
un montn de platos apilados, y recibe el nombre de dictiosoma. Un dictiosoma tpico
contiene unas 6 cisternas con un dimetro de alrededor de 1 m. Segn el tipo de clula,
el nmero de dictiosomas por clula vara desde unos pocos hasta varios cientos.
Asociadas a los dictiosomas se encuentran numerosas vesculas que emergen de sus
cisternas o que se funden con ellas.
El AG sirve de unin entre el retculo endoplsmico (RE) y la membrana
plasmtica o de otros orgnulos (Figura 2). Una protena tpica recin sintetizada reside
en el RE durante unos 10 minutos. Unicamente las protenas que estn correctamente
plegadas pueden entrar en las vesculas de transporte que las llevan al AG para
completar su maduracin. Las que no se han plegado correctamente permanecen en el RE
donde acaban por ser degradadas por protenas especializadas. Las protenas que
transportan estas vesculas se localizan en su interior (si van a ser secretadas), o
integradas en su membrana (si son protenas de membrana). Las vesculas de transporte
se dirigen hacia el AG, donde por medio de fenmenos de fusin de membranas
descargan sus contenidos o aportan sus protenas de membrana. Estos procesos de fusin
permiten, por un lado que las protenas de secrecin nunca estn en contacto con el
citosol, y por otro, que las protenas de membrana conserven su topologa.
Todas las clulas eucariotas tienen AG. Muchos tipos de molculas atraviesan el
AG durante alguna etapa de su biosntesis: protenas de secrecin, de membrana,
glicoprotenas, proteoglicanos, glicolpidos y en plantas, materiales de la pared celular.
Durante este recorrido, la protena puede sufrir una o varias modificaciones como
pueden ser: alteracin de las cadenas laterales de sus AA, la adicin o eliminacin de
azcares, ruptura proteoltica, formacin de puentes disulfuro, sulfatacin, adicin de
cidos grasos o la formacin de complejos con otras protenas. El AG no slo es
fundamental en las ltimas etapas de la sntesis de muchas protenas, sino que tambin
coordina el trfico intracelular, dirigiendo las macromolculas a su destino final. En
clulas secretoras el AG tambin sirve para concentrar y almacenar los productos en las
llamadas vesculas de secrecin que slo vaciarn sus contenidos en el exterior cuando
reciban el estmulo apropiado (Figura 3).
El AG posee tres regiones funcionales: (1) las vesculas alargadas prximas al RE
forman la cara cis del AG, (2) las vesculas de la zona intermedia constituyen la cara
media del AG y (3) las vesculas que estan en la periferia forman la cara trans y el
retculo trans-Golgi. Las vesculas de transporte que se dirigen hacia la cara cis del

aparato de Golgi descargan sus contenidos o aportan sus protenas de membrana. Las
protenas siguen su curso hacia la cara trans del AG, donde entran en contacto con el
complejo entramado vesicular del retculo trans-Golgi. Es en este punto donde se realiza
la distribucin de cada protena hacia su punto de destino. A partir de aqu, las protenas
pueden (1) incorporarse a una vescula de secrecin, (2) ser enviadas hacia el lisosoma u
otros orgnulos, o (3) ser secretadas (Figura 4).
GLICOSILACION DE PROTEINAS EN EL AG
La modificacin mas frecuente en el AG es la glicosilacin. En eucariotas, los
oligosacridos se clasifican en dos tipos: Los del tipo O, y los del tipo N. Ambos tipos
difieren tanto en su estructura como en su composicin. Los oligosacridos del tipo O se
unen al oxgeno del grupo hidroxilo (OH) de los AA serina, treonina o tirosina. Sus
cadenas de oligosacridos son cortas (1-4 residuos), y contienen principalmente galactosa
y N-acetilgalactosamina. Los del tipo N se unen al nitrogeno del AA asparagina. Forman
largas cadenas de oligoscaridos (>5 residuos) y es la N-acetilglucosamina la que se une
a la asparagina, siendo adems ricas en manosa. Los azcares del tipo N forman diversos
tipos de estructuras, y su composicin es variable.
Los primeros pasos de la N-glicosilacin tienen lugar en el RE donde el
oligosacrido precursor se une a la protena. Despus, en el AG cada oligosacrido va
adquiriendo su forma caracterstica. Hay dos tipos de oligosacridos de tipo N: los de
alto contenido en manosa y los complejos (Figura 5). Los primeros slo tienen manosa
y N-acetilglucosamina, y los complejos tambin tienen galactosa, cido silico (que les
da carga negativa) y fucosa. Ambos tipos pueden coexistir en la misma glicoprotena.
Las glicoprotenas que abandonan el RE sufren posteriores modificaciones en sus
cadenas de oligosacridos a medida que atraviesan el AG hacia su destino final. Los
residuos de azcar se van aadiendo de uno en uno, y se requiere energa. Cada paso est
catalizado por una glicosil-transferasa distinta. Estos enzimas son protenas integrales de
la membrana, con el centro activo orientado hacia el interior AG. El proceso se completa
unos diez minutos antes de que la protena alcance su destino definitivo en la clula.
La O-glicosilacin es un proceso que tiene lugar exclusivamente en el AG. Este
proceso tambin est catalizado por una serie de glicosil-transferasas que aaden los
residuos de azcar de uno en uno al grupo OH de serina, treonina o tirosina. En general,
el primer azcar que se une a la protena es la N-acetilgalactosamina. De esta forma se
sintetizan en el AG los proteoglicanos, que son las protenas ms intensamente
glicosiladas que se conocen. Los proteoglicanos pueden secretarse para fomar parte de la
matriz extracelular, o pueden aparecer en forma de protenas integrales de la membrana.
Adems, en combinacin con otras protenas altamente glicosiladas componen las
mucosas que recubren y protegen muchos epitelios. Gran parte de los residuos de azcar
de los proteoglicanos estn sulfatados, de forma que presentan gran nmero de cargas
negativas.
MADURACION DE PROTEINAS DE SECRECION Y DE MEMBRANA

Hemos visto que las protenas de secrecin y de membrana pierden la secuencia

seal N-terminal durante su sntesis. En muchos casos, este paso es el nico necesario
para que la protena adquiera su forma activa. Sin embargo, otras protenas de secrecin
se sintetizan en la forma proprotena o prohormona, que es un intermediario inactivo
de vida media larga. Durante las fases finales del proceso de maduracin este precursor
se convierte en la forma activa por proteolisis. Este es el caso de las protenas del suero
(albmina) o de hormonas (insulina, glucagn). El fragmento del precursor que se corta
puede estar bien en uno de los extremos de la protena (como en la proalbmina), bien en
el interior de la cadena polipeptdica (como en la proinsulina o en el proglucagn). La
conversin de proinsulina en insulina tiene lugar en las vesculas de secrecin recin
formadas. El pH de estas vesculas es cido (pH=5.5). En estas condiciones la insulina
no se une a su receptor y por lo tanto no acta sobre la clula que la est sintetizando.
En algunos casos, el enzima del lisosoma se sintetiza como una forma inactiva,
llamada proenzima. La ruptura proteoltica de la proenzima resulta en la formacin de la
forma activa del enzima. Este corte tiene lugar, generalmente, en la vescula cida o en el
lisosoma. De esta forma la clula se protege de la actividad hidroltica de estos enzimas
antes de que lleguen a su destino.

ENVIO DE LAS PROTEINAS A SU PUNTO DE

DESTINO
Cada uno de los orgnulos de la clula (RE, AG, membrana plasmtica, lisosoma,
vesculas de secrecin) tienen su propio conjunto de enzimas necesarios para su
funcionamiento correcto. Las protenas destinadas a cada uno de estos orgnulos se
sintetizan en el RE rugoso y son transportadas a su destino mediante vesculas de
transporte. Las clulas eucariotas presentan gran cantidad de pequeas vesculas
asociadas al AG, algunas de las cuales presentan un revestimiento de clatrina. El AG
parece ser el principal director del trfico de macromolculas en la clula. Cmo son
capaces de determinar a qu orgnulo se dirigen?
ENVIO DE PROTEINAS AL LISOSOMA
Los enzimas de los lisosomas se ecumulan en el RE despus de su sntesis y se
unen a un oligosacrido de tipo N, como cualquier protena de secrecin (Figura 6). En la
cara cis del AG, uno o ms de los residuos de manosa del oligosacrido se fosforila.
Parece ser que el residuo de manosa fosforilado es la seal qumica que dirige la
protena al lisosoma. Este proceso requiere dos enzimas. La primera es la Nacetilglucosamina fosfotransferasa, que reconoce con gran precisin aqullas protenas
destinadas al lisosoma, y que transfiere un grupo N-acetilglucosamina-fosfato al carbono
6 de uno o ms residuos de manosa. El segundo enzima es una fosfodiesterasa, que
elimina el grupo N-acetilglucosamina, dejando al fosfato unido a la manosa. En el
interior del retculo trans-Golgi hay un receptor de manosa-6-fosfato que se une a la
manosa-6-fosfato de las protenas lisosomales y las dirige a su destino. Las zonas de la
membrana que contienen este receptor unido a la protena emergen del AG en forma de
vesculas forradas de clatrina, que tras perder el revestimiento de clatrina fusionan con

unas vesculas cidas, cuyo interior tiene un pH=5. A pH cido, el receptor de manosa-6fosfato se disocia del enzima que lleva asociado, y sta se vuelve soluble en el interior de
la vescula cida, donde adems, por medio de la accin de las fosfatasas, pierde su grupo
fosfato, de forma que ya no puede volver a unirse al receptor. Al mismo tiempo, se
forman unas vesculas forradas que contienen el receptor, y que se desprenden de la
vescula cida para reciclarse (es un proceso similar al de endocitosis mediada por
receptor, donde intervenan las vesculas CURL).
El papel de la ruta de la manosa-6-fosfato en el envo de protenas al lisosoma se
descubri en pacientes con la enfermedad de las clulas I. En estas personas, un defecto
gentico provoca la ausencia de muchos enzimas lisosomales en fibroblastos y
macrfagos, de forma que se acumulan en el interior de la clula gran cantidad de
residuos txicos. Los fibroblastos de estos enfermos contienen grandes vesculas
intracelulares repletas de glicolpidos y de componentes extracelulares que normalmente
seran degradados por los lisosomas. Las clulas de estas personas sintetizan enzimas
lisosomales normalmente, y en la membrana del AG hay receptores de manosa-6-fosfato.
Sin embargo, el primer enzima implicado en la fosforilacin de la manosa est ausente, y
los enzimas hidrolticos son secretados en lugar de enviados al lisosoma. Si se cultivan
estas clulas en un medio que contiene enzimas lisosomales con la manosa fosforilada,
estos enzimas son internalizados por endocitosis mediada por receptor, y el contenido del
lisosoma se vuelve normal.
ENVIO DE PROTEINAS A LAS VACUOLAS
Las vacuolas de plantas y de algunos microorganismos como las levaduras se
parecen al lisosoma porque contienen enzimas hidrolticos. Los precursores de estas
enzimas se sintetizan en el RE y atraviesan el AG donde se distribuyen en vesculas
destinadas a las vacuolas. El envo de estos enzimas a las vacuolas no requiere la
modificacin de sus carbohidratos. En su lugar, los precursores de estos enzimas se
seleccionan mediante el reconocimiento de una secuencia de AA de 50-100 AA de
longitud. Una vez en el interior de la vacuola esta secuencia se separa del precursor,
originando la protena activa. Si por ingienera gentica se suprime esta secuencia del
precursor de la protena, sta ser excretada. Si a una protena de secrecin se le aade
esta secuencia, se dirigir hacia la vacuola. Por tanto, esta secuencia contiene la
informacin necesaria para dirigir una protena hacia la vacuola. En ausencia de esta
informacin, la protena se excreta.
ENVIO DE PROTEINAS A LAS VESICULAS DE SECRECION
Las vesculas de transporte que van a fusionarse con la membrana plasmtica
emergen de forma continuada del AG. Las protenas de membrana y los lpidos de estas
vesculas proporcionan los nuevos materiales para la membrana, mientras que las
protenas solubles son excretadas. Esta ruta constituye la secrecin constitutiva, y tiene
lugar en todas las clulas eucariotas (Figura 7).
Hay, sin embargo, clulas especializadas donde la secrecin tiene lugar en
respuesta a un estmulo extracelular. Se trata, por tanto, de una secrecin regulada

(Figura 7). En ellas las protenas de secrecin se concentran y almacenan en vesculas de

secrecin, de donde sern secretadas por exocitosis en respuesta a un estmulo. La seal
que dirige a las protenas de secrecin hacia las vesculas de secrecin no est clara, pero
parece que est determinada por su propia secuencia. Las vesculas de secrecin emergen
del retculo trans Golgi. En su formacin interviene la clatrina, en un mecanismo muy
parecido al de endocitosis mediada por receptor. La superficie de las vesculas que se
estn formando estn revestidas de clatrina. Este revestimiento se pierde una vez formada
la vescula. Adems, en aquellos casos en que la clula est polarizada (como las clulas
epiteliales), las vesculas de secrecin pueden dirigirse especficamente bien hacia la
membrana apical o bien hacia la membrana basolateral.
En muchos casos, las vesculas forradas , adems de clatrina poseen un
polipptido ms pequeo que se asocia a otras protenas integrales de la membrana de la
vescula. Estas protenas accesorias deben tener una doble funcin. En primer lugar,
proporcionan por el lado no citoslico de la membrana un centro de unin para la
protena especfica que vaya a transportar. En segundo lugar, dado que cada vescula se
dirige hacia un orgnulo distinto de la clula, debe haber varias poblaciones de vesculas,
cada una con una protena accesoria adecuada en su superficie, que posteriormente puede
ser reconocida por un receptor localizado en la superficie del orgnulo receptor. Las
vesculas forrradas pueden ser las responsables de la distribucin de los componentes
celulares (Figura 8).
EL CASO DE UN VIRUS
En algunos casos, el ciclo vital de un virus se aprovecha de las diversas rutas que
dirigen el trfico de protenas en la clula. El virus del Semliki forest (Figura 9) est
formado por una molcula de ARN rodeada de una cpsida icosadrica (de 20 caras)
formada por mltiples copias de una protena llamada protena C. El conjunto del ARN
ms la cpsida de protena C se llama nucleocpsida. La nucleocpsida, a su vez, est
rodeada de la envoltura, una bicapa lipdica en la que se insertan 3 glicoprotenas (E1,
E2 y E3). Estas glicoprotenas atraviesan la bicapa e interaccionan con la protena C.
La infeccin comienza cuando el virus se une al receptor de la membrana
plasmtica de la clula husped. Esta unin dispara los mecanismos de endocitosis
mediada por receptor: se forman hendiduras forradas que se convierten en vesculas
forradas, que cuando pierden su revestimiento de clatrina forman los endosomas. En este
punto, los endosomas, en vez de fusionarse con los lisosomas, fusionan con la bicapa del
virus, de forma que el ARN del virus penetra en el citoplasma y aprovecha la maquinaria
celular para (1) sintetizar mltiplas copias del ARN y (2) sintetizar las 4 protenas
distintas que componen el virus.
Las protenas de la cpsida y de la envoltura siguen rutas distintas (Figura 10).
Las protenas de la envoltura se sintetizan en ribosomas asociados a las membranas del
retculo endoplsmico (RE). Estas protenas se insertan en la membrana del RE donde
son glicosiladas y transportadas posteriormente al AG para su posterior maduracin. A
partir de aqu, son enviadas a la membrana plasmtica. La protena de la cpsida se
sintetiza en los ribosomas del citosol, y se asocian al ARN para formar nuevas

nucleocpsidas. Las nucleocpsidas interaccionan con las glicoprotenas de la envoltura

al nivel de la membrana plasmtica, de manera que se forma una nueva partcula vrica
que emerge de la superficie de la clula husped, arrastrando con ella parte de la bicapa.
RECICLADO DE LA MEMBRANA
Cuando la vescula de secrecin se funde con la membrana plasmtica, no slo se
descargan sus contenidos en el exterior, sino que la membrana de la vescula queda
incorporada a la plasmtica. Como la superficie de la membrana plasmtica es ms o
menos constante, algunos de sus componentes deben ser retirados (reciclados) a una
velocidad aproximadamente igual a la de exocitosis (Figura 11). Podemos considerar las
vesculas de transporte como sistemas transportadores de ida y vuelta. Por un lado
descargan sus contenidos mediante fusin con la membrana de destino, y despus se
desprenden (vaciadas de su contenido) para volver a fundirse con el orgnulo de donde
proceden.
Este mecanismo se ha podido evidenciar en la llamada unin neuromuscular,
que es el lugar donde se une una terminacin nerviosa a una clula muscular (Figura 12).
La zona terminal del axn nervioso contiene cientos de vesculas de unos 50 nm de
dimetro que contienen acetilcolina (un neurotransmisor). Al ser estimulado el nervio,
estas vesculas se funden con la membrana plasmtica, liberando la acetilcolina
(exocitosis), y provocando la contraccin del msculo adyacente. Despus del estmulo,
se produce la exocitosis. La fusin de las vesculas con la membrana plasmtica se
produce nicamente en las llamadas "zonas activas" de la membrana, que estn limitadas
entre dos hileras de partculas intramembranosas. En los segundos posteriores a la fusin
se puede observar que las protenas de la membrana de la vescula se van mezclando con
las de la membrana plasmtica por fenmenos de difusin lateral. Unos 10 segundos
despus de la estimulacin, aparecen numerosas hendiduras forradas en la membrana
plasmtica, a las cuales se asocian partculas intramembranales. A los 20 segundos puede
observarse la formacin de vesculas forradas a partir de las hendiduras forradas
(endocitosis), que contienen los componentes proteicos originales de la vescula de
transporte. A continuacin, la vescula forrada pierde su revestimiento de clatrina y se
vuelven a rellenar de acetilcolina para comenzar un nuevo ciclo.