Universidad Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud, Licenciatura en Biologa Experimental.

Cuantificacin de protenas por el mtodo de Bradford

Jany Mariela Corona Leo

Protenas
Son macromolculas formadas por residuos de aminocidos. Pueden tener distintas funciones:

Defensa Trasporte Reserva Enzimas Movimiento Estructurales Regulacin

Es importante contar con una tcnica que permita determinar la cantidad presente en una muestra biolgica (orina, sangre, plasma, extracto vegetales, semillas, clulas, tejidos, etc.).
Purificacin de protenas. Actividad Enzimtica. Diagnostico de enfermedades

Mtodos
Mtodos de Absorcin: Propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV.

Mtodos Derivados Fluorimtricos: Formacin de derivados qumicos.

Mtodos Colorimtricos La capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes.

Mtodos Colorimtricos

Mtodo de Bradford

Fue diseado por Bradford en 1976. Barato, solo se utiliza un reactivo el colorante Comassie Blue G-250. Sensible (1-100 g). Rpido, la reaccin finaliza a los 5 min. y es estable hasta una 1 hr.

Sencillo
La Absorbancia se lee a 595 nm

Mtodo
Realizar una curva estndar con BSA (0.5 mg/ml). Se colocan el reactivo de Coomassie y se deja incubar por 5 min.

Se lee la absorbancia a 595 nm en el espectrofotmetro y se grafican los datos obtenidos.

0.7

y = 5.2361x + 0.0102 2 R = 0.998

0.6

0.5

0.4
Abs (595 nm)

y = Abs 595 m = pendiente

0.3

x= la concentracin de protenas b = ordenada al origen

0.2

0.1

0 0 -0.1 Albmina (mg)

Abs promedio )Lineal (Abs promedio

0.02

0.04

0.06

0.08

0.1

0.12

Anlisis de la muestra problema

Se preparan diluciones con la solucin de NaCl 0.15 M: 1:10,1:20,1:50 Se toman 200 ul de cada una de las diluciones y se les agrega 2 ml de reactivo de coomassie. Se mide la absorbancia 595 nm , y los datos se interpolan en la ecuacin de la recta y=mx +b

Bradford MM (1976): A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72: 248-254.