DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

La información genética está contenida en los genes, segmentos de ADN que llevan información para fabricar un
producto funcional determinado (proteína).

“La información genética fluye “La información no va siempre

del ADN al ARN por vía del ADN→ARN, en algunos casos la
proceso transcripción, y luego información puede fluir del
a la proteína por el proceso de ARN→ADN (fenómeno de la
traducción.” transcripción inversa)”

Francis Crick Howard Temin

REPLICACIÓN: El ADN se
duplica, antes de la división
celular.

TRANSCRIPCIÓN: Parte del

ADN (gen) es copiada a ARN.

TRADUCCIÓN: Construcción
de una secuencia de
aminoácidos (proteína) con la
información proporcionada
por la molécula de ARN.
 REPLICACIÓN DEL DNA
Es el mecanismo que permite al DNA duplicarse (es decir, sintetizar una copia idéntica). Lo que permite que
la información genética se transmita de una célula madre a las células hijas.

1ª PRINCIPIO GENERAL: Replicación Semiconservadora

¿cómo es posible células hijas sean genéticamente iguales que la madre? MODELOS DE REPLICACIÓN

CONSERVATIVO SEMICONSERVATIVO DISPERSIVO

 Se demostró el mecanismo de replicación semiconservadora
Experimento de M. Meselson y F. W. Stahl
del DNA.
2ª PRINCIPIO GENERAL: Síntesis Simultánea de Ambas Cadenas y Normalmente Bidireccional

¿Se desenrollan totalmente las cadenas de DNA parental antes que cada una sea replicada? ¿Empieza la
replicación en sitios al azar o en un único punto? ¿transcurre en una dirección o en ambas?

Experimento de J. Cairns en 1963 Timidina radiactiva

John Cairns concluyó

que la síntesis de
ambas cadenas de DNA
es simultánea
Caims propuso un modelo de la replicación del DNA, sugiriendo que el DNA contiene un sitio específico, llamado
origen de replicación, en el que empieza la síntesis de la copia; donde actúa un mecanismo de destorcimiento
para abrir la estructura helicoidal de la doble hélice del DNA.

Experimento de Ross Inman Técnica de cartografiado por desnaturalización

UNIDIRECCIONAL BIDIRECCIONAL
• Los lazos de replicación
siempre se inician en un
punto único denominado
origen (ori). Secuencias
ricas en pares de bases
A=T

• La replicación puede ser

unidireccional o
bidireccional.

• Es normalmente
bidireccional.
3ª PRINCIPIO GENERAL: la síntesis del DNA se desarrolla en dirección 5'→ 3' y es semidiscontinua

5’ fosfato EXTREMO 3’

Las enzimas
que actúan Se pierde 2 grupos
en la fosfato como una
molécula de Pirofosfato
replicación 3’ hidroxilo PPi y se libera energía.
son las DNA
polimerasas

Pirofosfato

Nucleótido Hidrólisis
trifosfato EXTREMO 5’
2 moléculas de
fosfato inorgánico
 5’ 3’ Si la síntesis transcurre siempre en la dirección 5'→ 3', ¿cómo pueden
sintetizarse las dos cadenas simultáneamente?

Reiji Okazaki y colaboradores en la década de 1960

Se descubrió que una de las cadenas nuevas de DNA se sintetiza en forma

de trozos cortos (semidiscontinua), denominados fragmentos de Okazaki.

Horquilla • La hebra continua o hebra conductora: dirección 5'→ 3'

• La hebra discontinua o hebra rezagada: dirección 5'→3'
3’ 5’
HEBRA CONDUCTORA

HEBRA REZAGADA

3’ 5’
5’ 3’
 REPLICACIÓN DEL DNA EN LOS PROCARIOTAS

La replicación del cromosoma de la Escherichia coli

La síntesis o replicación de una molécula de DNA se divide en tres fases:

1) Inicio

2) Elongación

3) Terminación
Cromosoma de la Escherichia coli
 INICIO 5 secuencias de 9 pb (Sitios R)
Sitios IHF (factor de integración del huésped)
Sitios FIS (factor de estimulación de la inversión)
oriC
Consta de 245 pb

Región rica en pares de bases A =T denominada

elemento de desenrollamiento del DNA (DUE) Sitios de unión para la proteína clave de inicio DnaA

Burbuja de replicación DnaA con ATP unido es activa

DnaA con ADP unido es inactiva.

Ocho moléculas de proteína DnaA ensamblan para formar

un complejo helicoidal que abarca los sitios R e I en oriC.

La tensión producida en el DNA provoca la

desnaturalización de la región DUE rica en A=T

Otras proteínas de unión al DNA, HU, IHF y FIS, que facilitan

la curvatura del DNA

2
2
Las topoisomerasas ( Topoisomerasa I
corta una hebra y Topoisomerasa II o DNA
girasa corta 2 hebras utiliza ATP)
La proteína DnaC unida a ATP facilita la unión de la
proteína helicasa DnaB a las hebras separadas de la
región desnaturalizada.
La interacción DnaC-DnaB abre el anillo de DnaB, dos
helicasa DnaB se asocian a DUE, uno a cada cadena de
DNA.
El ATP unido a DnaC; se hidroliza, liberando
DnaC y dejando DnaB unida al DNA.
Carga de las helicasas DnaB
• Desenrollan el DNA a medida que avanza en dirección 5'→3'
• Como hay 2 viajan en direcciones opuestas.
• Crean dos horquillas de replicación.
La hidrólisis del ATP provoca el desmantelamiento
del complejo DnaA en el origen.
 La proteína DnaC unida a ATP facilita la unión de la
proteína helicasa DnaB a las hebras separadas de la
región desnaturalizada.

2
Carga de las helicasas DnaB
• Desenrollan el DNA a medida que avanza en
dirección 5'→3'

2 Topoisomerasa II
Horquilla de replicación (Replicón)

Proteína de unión al DNA de cadena sencilla (SSB) Proteínas

SSB
• Mantener separada la doble hélice.
Helicasa DnaB

Las topoisomerasas ( Topoisomerasa I y

Topoisomerasa II o DNA girasa)
• Alivia la tensión creada más allá de la horquilla por la
reacción de desenrollamiento.
Para iniciar la replicación en el origen de E. coli participan al menos 10 enzimas o proteínas diferentes.
 ELONGACIÓN
Los procesos de síntesis de la cadena conductora y de la cadena rezagada difieren radicalmente.

SÍNTESIS DE LA CADENA CONDUCTORA

Movimiento de la horquilla El ARN primasa (proteína DnaG)

Cadena conductora • Sintetiza un corto cebador de RNA o

primer (10 a 60 nucleótidos) en el origen
de replicación.
Helicasa DnaB
III
DNA polimerasa III
• Añade los desoxirribonucleótidos en el
ARN cebador, en dirección de la horquilla.

Cadena rezagada

La síntesis de la hebra conductora transcurre de manera continua, al mismo ritmo que el desenrollamiento del DNA
en la horquilla de replicación.
SÍNTESIS DE LA CADENA REZAGADA

Se realiza de manera discontinua a trozos de corta longitud, llamado fragmentos de Okazaki.

El ARN primasa (proteína DnaG)

• Sintetiza un corto cebador de RNA o

primer.

DNA polimerasa III

• Añade los desoxirribonucleótidos en el

ARN cebador, en dirección opuesta al
movimiento de la horquilla.

En las bacterias, los fragmentos de Okazaki tienen una longitud de 1.000 a 2.000 nucleótidos. En las células
eucariotas tienen de 150 a 200 nucleótidos.
 DNA polimerasa I
Cebador de RNA • Elimina los cebadores de RNA o primer de las cadena conductora y
rezagada (una vez ha finalizado la síntesis de un fragmento de
Okazaki) y las reemplaza con DNA.
• En dirección 5’→3’
DNA ligasa

• Une los fragmentos de DNA, al catalizar la formación de un enlate

fosfodiéster entre un 3’ hidroxilo, al final de una hebra de DNA y
un 5' fosfato al final de otra cadena.

DNA polimerasa II

• Corrige errores
DNA Polimerasas

No son auto iniciadoras, necesitan un terminal 3'-OH para polimerizar.

La ecuación general:
1. Se usan como sustrato
desoxirribonucleótido (dNTP)
2. Se necesita Mg++ para que la actividad sea
óptima
3. Se requiere un DNA patrón para la síntesis
de la copia.
4. La pauta de inserción de los nucleótidos es
el de la síntesis 5' → 3'

En la E. coli se han encontrado 5 DNA polimerasas.

“Una cualidad de todas las DNA-polimerasas es la

precisión con que realizan la replicación,
estimándose en Escherichia coli que se comete un
error en uno de cada 10(9) a 10(10) nucleótidos”
 Repara el DNA

DNA Polimerasa I

Quita cebadores de
RNA y los sustituye

DNA Polimerasa II

DNA Polimerasa III

Corrección de 3’ → 5'
Es la encargada de añadir Polimerización 5' → 3'
desoxirribonucleotidos por
su gran procesividad.

Corrección de 3’ → 5'

DNA Polimerasa IV DNA Polimerasa V

La síntesis de la hebra conductora y de la hebra rezagada están coordinadas al mismo ritmo que el desenrollamiento
del DNA en la horquilla de replicación. ¿Cómo lo hace?

EL REPLISOMA
Conjunto de proteínas de una horquilla de replicación. Complejo DNA Polimerasa III

El replisoma efectúa una rápida síntesis de DNA a un ritmo de unos

1.000 nucleótidos por segundo en cada hebra (conductora y
rezagada).
Tiene 13 subunidades.
 TERMINACIÓN
Las dos horquillas se encuentran en una región terminal
que contiene múltiples copias de una secuencia de 20 pb
denominada Ter.

Las secuencias Ter son lugares de unión para una proteína

denominada Tus. El complejo Tus-Ter, puede detener sólo la
replicación desde una dirección. Sólo actúa un único complejo
Tus-Ter por ciclo de replicación

Cuando una u otra horquilla de replicación topa con un

complejo funcional Tus-Ter se detiene; la otra horquilla se
detiene cuando encuentra la primera horquilla (ya detenida).
El resultado final son dos cromosomas circulares
OTRO MECANISMO DE REPLICACIÓN: CÍRCULO RODADOR (BACTERIÓFAGO)

Endonucleasa
• Corta una de las hélices (hélice externa) y el
extremo 5' se fija a la membrana.

DNA Polimerasa
• Utiliza como cebador el extremo 3'-OH
producido por el corte, para ir añadiendo
nucleótidos y copiando la otra hélice
(hélice interna). Por el otro extremo de la
hélice cortada (el extremo 5') también se va
sintetizando una nueva hebra.

Endonucleasa ter
• Reconoce la secuencia de 12 pb de los
extremos cohesivos del fago y produce un
corte para liberar copias independientes
del DNA doble hélice lineal del fago.
 REPLICACIÓN DEL DNA EN LOS EUCARIOTAS
Proceso de replicación muy similar al procariota, se sintetiza durante la fase S del ciclo celular
Número de orígenes y términos de replicación Número de DNA polimerasa

• Eucariotas: Muchos orígenes y muchos lugares

terminales.
• Procariota: 1 solo origen y 1 un lugar terminal

Velocidad de replicación 10 veces menor que en

procariota, por el empacamiento del DNA en cromatina

• Procariota: 5 DNA polimerasas

• Eucaritoa: 13 DNA polimerasas
 EL PLÁSMIDO
Moléculas de ADN extracromosómico, que se replican y
transmiten independientes del ADN cromosómico
Su tamaño varía desde 3 a 10 kb

El término plásmido, Joshua Lederberg en 1952.

vectores de clonación.

En Gram + se
replican por el
mecanismo de
círculo rodante
En Gram - se replican
de modo similar al
cromosoma.
 Un epísoma es un plásmido que puede integrarse por sí mismo al ADN cromosomal
del organismo huésped y se replican bajo el control del cromosoma

Tipos de Plásmidos
• Plásmidos conjugativos: dirigen su propia transferencia mediante el contacto entre
células.
• Plásmidos no conjugativos: que no pueden transferirse por sí mismos a otra célula.
• Plásmidos crípticos: que solo se sabe que se replican, no se sabe qué otra función
tienen.

 Plásmidos de fertilidad (F)

 Plásmidos de resistencia (R)

 Col-plásmidos

 Plásmidos degradativos
 Plásmidos virulentos
 Plásmidos metabólicos