Universidad Nacional de San Agustín

Biotecnología de los Alimentos

PRACTICA N°3
CINETICA DE LA PRODUCCION DE METABOLITOS

I. OBJETIVOS

Los objetivos planteados en la presente práctica son:

 Hallar las curvas de la cinética de la producción de invertida(exo y endo),

producción de biomasa y la de consumo de sustrato (glucosa) a partir de la
Sacccharomyces cerevisiae.

 Hallar los valores de la velocidad de formación de invertasa I`p, la velocidad de

consumo de sustrato I`s, velocidad especifica de producción del metabolito Z, la
velocidad de producción de biomasa I`x, el coeficiente de conversión de sustrato
de biomasa Y(x/s) y la constante de mantenimiento ms.

II. MARCO TEORICO

III. MATERIALES Y MÉTODOS

Métodos de análisis
Los métodos a seguir son:
Determinación de azucares reductores: Se hara uso del Metodo de Miller (1959), los
resultados se expresaran en µ moles de azucares reductores expresados en glucosa.
Determinación de la actividad enzimática de la invertasa: En un tubo se llenara 5 ml
de la solución buffer acetato 0.1M, pH 5, contenido sacarosa al 4% y se mezclaran con 1
ml de la solución enzimática. Luego se llevara a incubación por 10 min a 50°C, pasado
este tiempo se procederá a inactivar a 100°C por espacio de 2 min, Luego a este sistema
se le medirá la cantidad de azucares reductores por el método del DNS.Una unidad de
actividad enzimática será definida como la cantidad de azucares reductores formados (µ
moles) por ml de enzima por minuto a las condiciones de 50°C y pH 5.0.
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Procedimiento
Se procederá de la siguiente forma:
Preparación del precultivo: Prepara un pre-cultivo de la levadura (Sacharomyces
cerevisiae) con un medio adecuado y dejar este a 30°C por espacio de 24 horas.
Preparación de la curva de producción de biomasa, consumo de sustrato (glucosa) y
producción de invertasa vs tiempo.
Se procederá a llenar 15 Erlenmeyer (100ml) con 20ml demedio de cultivo, luego de
esterilizados serán inoculados cada uno con un 5% del pre cultivo. Se llevaran los
Erlenmeyer a un shaker a la temperatura de 30°C con agitación constante.
Cada cierto tiempo será sacado un Erlenmeyer el cual será centrifugado y se obtendrán
dos fracciones el sobrenadante y las células. La fracción celular será diluida a una
concentración adecuada con una solución buffer y se leerá su D.O a la longitud de onda
de 600nm. Luego que se hallara la actividad enzimática de las invertasas endocelulares.
Para hallar los valores de biomasa se procederá de la misma forma como se trabajó en la
practica de curva de crecimiento microbiano. Al sobrenadante se le determinara en
primera instancia la concentración de azucares reductores expresados en glucosa y luego
se le determinara la actividad enzimática que presentan las invertasas exocelulares.

IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

V. CONCLUSIONES

VI. BIBLIOGRAFÍA