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Universidad Nacional de Tumbes

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA DE AGROINDUSTRIAS

TEMA:
Biotecnología y la generación de Antibióticos y
Enzimas de Uso Agroindustrial

CURSO:
BIOTECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL

DOCENTE:

ING. EDWIN TORRES INFANTE

ESTUDIANTES:

 MORENO CALDERON BRIAN


 DIANA SAAVEDRA SAAVEDRA
 JIRÓN DOMINGUEZ JAVIER

2014
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUMBES FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
ESCUELA DE ING. AGROINDUSTRIAL

PRESENTACION
El presente trabajo ha sido elaborado de manera comprometida Y

responsabilidad cuya finalidad es dar a conocer: Biotecnología y la generación

de Antibióticos y Enzimas de Uso Agroindustrial

Además cabe recalcar la importancia de este tema ya que es muy

significativo para nuestro desarrollo profesional, cuyos conocimientos

serán usados a lo largo de nuestra carrera.

LOS ALUMNOS

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INTRODUCCIÓN
La presente monografía titulada “Biotecnología y la generación de Antibióticos y
Enzimas de Uso Agroindustrial ”, Brinda a todo el público en general y en especial a
las personas que se interesan por saber algo nuevo cada día, un aporte que nos
permita conocer los beneficios que trae consigo la adaptación de este concepto
moderno de la biotecnología, la cual se ve reflejada en un mejor ambiente laboral, una
reducción de costos y una mejor posición competitiva en los mercados, dado que los
bienes y los servicios producidos puedan incluso superar ampliamente los
requerimientos del consumidor.

Para tomar conciencia de la importancia de este nuevo enfoque, basta con mirar a las
industrias del occidente que no han podido adaptarse a esta nueva filosofía, pues si
bien estas empresas desempeñan un buen trabajo, no es suficiente con los beneficios
que brindan aplicando la biotecnología enzimática industrial como medio de mejora.

Para el desarrollo de esta investigación se tuvieron fuentes primarias y secundarias,


tales como libros virtuales especializados, revistas.

Se tuvo algunas limitaciones en cuanto al acceso de mayor información en los libros.

Por otra parte el uso de antibióticos Los antibióticos producidos por fermentación, sea
para uso directo en terapia humana o como base para la síntesis de derivados
modificados químicamente de la estructura central del antibiótico, constituyen todavía
la contribución mayoritaria de los agentes antiterapéuticos al tratamiento de las
enfermedades humanas. Solo dos clases de agentes sintetizados químicamente
tienen un mercado significativo como antibióticos: Las sulfonamidas y las
fluoroquinolonas.Una nueva clase de productos químicos,las oxazolidinomas,han
entrado recientemente en el mercado,pero todavía no tienen una penetración
significativa en el mismo,y son utilizados cuidadosamente como antibióticos de
reserva.Desde el punto de vista actual del reembolso está claro que será

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extremadamente difícil para cualquier antibiótico competir económicamente con las β-


lactamas, las macrólidas y las tetraciclinas genéricas a menos que tengan una ventaja
clínica diferente y menor coste sanitario.

El continuo desarrollo de organismos resistentes a los antibióticos ha comenzado a


revelar las debilidades que existen en el arsenal de drogas actuales para tratar serias
infecciones adquiridas en la sociedad y en los hospitales. Por tanto la atención en el
descubrimiento de drogas se ha alejado de la identificación de antibióticos de amplio
espectro hacia la búsqueda de nuevas entidades que ataquen a los organismos
resistentes

CARACTERISTICAS GENERALES

Las enzimas son proteínas que se comportan como catalizadores; es decir, aceleran la
velocidad por la que las reacciones se llevan a cabo sin alterar el equilibrio y son
responsables de las transformaciones metabólicas en los seres vivos. Hay que ser
cuidadosos al hablar de “catalizadores biológicos” pues existen ya las llamadas
“xenoenzimas”, término empleado por Neidleman. Para referirse a catalizadores
proteicos creados en el laboratorio mediante algunas de las técnicas que más adelante
se mencionan. Más impactantes aún son las “abzimas”, anticuerpos monoclonales con
la actividad “enzimática” así como el hecho reconocido de que tanto el ARN como la
hemoglobina poseen actividades catalíticas.

Desde el punto de vista fisicoquímico, y como consecuencia de su estructura proteica, la


actividad catalítica de las enzimas depende del Ph y de la temperatura de reacción,
característica que resulta de fundamentar la importancia en una aplicación industrial. Se
presentan algunos ejemplos que ponen de manifiesto la importancia que pueden adquirir
estos dos parámetros en la aplicación de enzimas en la industria alimentaria.

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Tabla 1.
Algunos ejemplos de aplicaciones de enzimas en alimentos seleccionadas
por sus características de pH y temperatura.

ENZIMAS APLICACIÓN
Su aplicación en la isomerización de
glucosa no fue posible sino hasta que se
Glucosa isomerasa logró obtener una enzima que operase en
medio no alcalino (para evitar la
isomerización espontánea de glucosa a
psicosa).
α – amilasa termoresistente Gelatinización y licuefacción simultáneas
del almidón incrementando la
productividad.
Papaína En el ablandamiento de carnes por su
activación durante el conocimiento.
α – amilasa fungales Aplicación en panadería por su
desactivación durante el horneado.
Lactasa de levadura Aplicación en la leche por el pH óptimo de
actividad.
Lactasa fungal Aplicación en suero de leche ácido.

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IMPACTO ACTUAL EN LA TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS

Las enzimas intervienen en prácticamente todas las áreas involucradas en la tecnología


de alimento, por lo que el enzimólogo debe aprender a caracterizar y aplicar enzimas
exógenas, a activar o inhibir, dependiendo del alimento, enzimas endógenas, a
aprovechar su desestabilidad para asociar su desactivación con tratamientos térmicos y
emplearlas como parámetros de control de calidad o simplemente, aprovecharlas como
herramienta analítica.

En la tabla 2, se resumen las principales aplicaciones de enzimas en el procesamiento


de alimentos. Como puede observarse gran parte de éstas aplicaciones son
consecuencia de la disponibilidad de enzimas de origen bacteriano. Aunque en ciertos
casos las enzimas de origen vegetal (papina, gromerina, etc.) o bien obtenidas de algún
órgano animal (quimiosina, tripsina, etc.), siguen siendo importantes desde un punto de
vista tecnológico y comercial; sin duda la capacidad de producción de enzimas mediante
el proceso de fermentación ha permitido la expansión de esta área. Es conveniente
algunas características y limitaciones relativas a la aplicación de enzimas en alimentos:

 La experiencia ha demostrado que se requiere 5 a 10 años para la realización


industrial de un desarrollo enzimático novedoso.

 La evolución de este sector ha sido lenta y caracterizada frecuentemente por


sustituciones más que por verdaderas innovaciones: hidrolisis de almidón,
inversión de sacarosa, sustitución de quimosina por “cuajos microbianos”, etc.

 Son escasos los procesos que realmente pueden llamarse enzimáticos


(producción de glucosa y de jarabes de fructuosa), ya que en la mayor parte de
los casos las enzimas fungen un papel de adictivos con funciones como
disminuir la viscosidad, mejorar la filtración, evitar la turbidez, clarificar, mejorar la
digestibilidad, mejorar la textura, evitar la cristalización y mejorar las
características organolépticas, entre otras.

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Tabla 2.
Principales aplicaciones

Enzima (origen) Aplicación

α –amilasa( bacillus licheniformis B, Licuefacción de almidón para obtener


hidrolizados con ED 8-12. Hidrolisis de
subtilis,B.
almidón residual de almidón en jugo de
caña. Aditivo de cervecería
α – amilasa (aspergillus oryzae , A. sojae, Obtención de hidrolizados de almidón con
A. effusus) alto contenido. Aditivo en panadería.

β- amilasa (malta, bacillus polymyxa Obtención de hidrolizados de almidón con


circulans, b .cereus alto contenido de maltosa

Amiloglucosidasa( aspergillus niger , A Obtención de glucosa a partir de


oryzae hidrolizados de almidón con amilasa.
Aditivo en la elaboración de cerveza ligera
dextranasa (penicillium Eliminación de dextranas en jugo de caña
funiculosum,P.lilacinum,c.gracilae de azúcar.

Ablandamiento de carne de res.

Papaína (papaya) Eliminación de la turbidez en fri de la


cerveza. Medicamento auxiliar digestivo.

Pectinadas ( aspergillus Níger) Extracción y clarificación de jugos de fruta

Renina(tenera, mucor mihei, M. pusillus Producción de queso.


endotia parasítica)
Lactasa (Aspergillus niger , A. oryzae, Hidrolisis de lactosa en leche y en suero
kluyveromuces fragilis) de leche.
Lisozima( clara de huevo, latex de papaya) Aditivo en leches maternizadas. Aditivo
como agente antibacteriano.
Antocianinasa (A. niger) Decoloración de jugos / vinos

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Glucosa oxidasa (Aspergillus niger) En combinación con catalasa en la


eliminación de glucosa en clara de huevo.
Estabilizante de alimentos por eliminación
de oxigeno( mayonesa, bebidas

Aspectos generales de los antibióticos

Las ventas mundiales de antibióticos y antifúngidos para terapia humana fueron


estimadas aproximadamente en 26.000 millones de dólares en 2001, de los cuales los
antibióticos de uso oral contaban aproximadamente 19.000 millones de dólares. Pese
a la expiración de las patentes de los 20 antibióticos de mayor venta, el mercado
mundial para los antibióticos continúa en expansión, debido principalmente al aumento
de su uso en la India y Asia. Sin embargo, una cantidad mucho más grande
(entoneladas) de antibióticos se utiliza todavía como agentes no terapéuticos en
agricultura. Es difícil obtener unas cifras exactas, pero parece que aproximadamente
7.500-12.500 toneladas de antibióticos se utilizan solo en Estados Unidos para uno no
terapéutico en agricultura, especialmente para facilitar el engorde en pollos, cerdos y
vacas. Algunos de ellos son agentes que son poco utilizados en terapia humana. La
situación en Europa ha cambiado, al prohibir la Unión Europea el uso de muchos
antibióticos utilizados para terapia humana como agentes que estimular el crecimiento
de animales, y las ventas han disminuido, pese al uso continuado de muchos
antibióticos con fines veterinarios.

En general los antibióticos que son útiles comercialmente se pueden dividir en unas
pocas clases principales. Esta clasificación se basa normalmente en las vías
biosintéticas y en los precursores que utiliza el organismo para producir estos
compuestos, seguido frecuentemente por modificaciones específicas y únicas. Las
principales clases incluyen:

 Antibióticos derivados de precursores aminoacídicos, bien a través de una vía


no ribosomal(β-Lactamas,péptidoscíclicos,lipopéptidos),o mediante una ruta
normal que utiliza ribosomas(nisinas)

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 Antibióticos producidos a partir de azúcares(aminoglicósidos)


 Antibióticos derivados de precursores de ácidos grasos (antibióticos
poliquétidos), como las tetraciclinas, las macrólidas y los polienos.

Frecuentemente estas rutas biosintéticas convergen para producir clases híbridas, por
ejemplo los glicopéptidos, que consisten en una base peptídica modificada por la
adición de residuos específicos de azúcares.

POTENCIAL DE LAS ENZIMAS DE LA BIOTECNOLOGIA ALIMENTARIA

Son varios los desarrollos científicos y técnicos que han incidido ya en la enzimología
alimentaria y que permiten prever una expansión importante en los próximos años. Se
ha afirmado que las enzimas son “una solución en busca de problemas” y el impacto de
diversas técnicas que más adelante describimos dependerá un tanto de la habilidad de
técnicos y científicos para encontrar nuevas aplicaciones, para mejores los productos
existentes (por ejemplo, glucosa isómearas insensible a iones calcio, mayor conversión
en la reacción) o bien lograr el aprovechamiento integral de materias primas (por
ejemplo, residuos sustitutos de sal, colorantes , etc.) o la sustitución de procesos
químicos actuales de bajo rendimientos, baja especificidad y alto costo energético.

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CAPITULO I
ASPECTO HISTORICO CONTEXTUAL

TECNOLOGIA ENZIMATICA

Las enzimas son los catalizadores de los organismos vivos, sin ella no existiría la
vida tal como la conocemos. Las enzimas son proteínas productos directos de la
expresión génica la cual en forma altamente integrada, regulada e incluso
dinámica, canaliza modula y hace posible el vasto arreglo de vías metabólicas que
yacen en el centro de la biotecnología. Las enzimas también son productos de la
biotecnología. Estas se pueden separar en estado activo a partir de una célula
viva y usarse luego para llevar a cabo transformaciones químicas o más
estrictamente bioquímicas de una u otra clase.

La tecnología enzimática es una de las áreas de más rápido avance que


interactúan con muchos otros aspectos de la misma. Dada la estrecha relación
entre las enzimas la síntesis de proteínas y la expresión genética es posible
esperar que en el futuro estas áreas se desarrollen juntas.

De hecho que el hombre ha hecho uso de las enzimas por siglos, sin embargo
solo en los últimos 90 años se ha comprendido un poco de su naturaleza
propiedades y posibilidades, como la elaboración de pan, queso y yogurt.
Fermentación de la cerveza y el vino.

VISIÓN GENERAL DE LOS ANTIBIÓTICOS Β-LACTÁMICOS


Hay dos tipos principales de antibióticos β-Lactámicos producidos por
microorganismos que todavía se fabrican en cantidad, las penicilinas y las
cefalosporinas. Los antibióticos β-Lactámicos (Penicilinas,ampicilina,
cefalosporinas,etc.)Son antibióticos de estrecho y moderado espectro de acción ya
que algunos miembros son solo efectivos contra organismos Gran positivos, mientras
que otros miembros pueden también atacar a ciertas bacterias Gram negativas. Pese
a estas limitaciones su uso es amplio debido a que son generalmente seguros y al
desarrollo de las últimas generaciones de β-Lactamas con un espectro más amplio de
actividades antimicrobianas. El desarrollo de la amplia panaplia de penicilinas y
cefalosporinas de uso clínico ha dependido de la subsecuente manipulación química

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del núcleo central de estos antibióticos. Dos principales procesos biológicos estuvieron
implicados en la producción industrial de estas variantes de las penicilinas y
cefalosporinas.

EVOLUCIÓN DE LA BIOTECNOLOGÍA ENZIMÁTICA Y DE ANTIBIOTICOS

Los primeros pasos en la tecnología enzimática “moderna” surgieron en la década


de 1830 con el aislamiento de la enzima diastasa a partir de extracto de malta y uno
o dos años más tarde la pepsina a partir de las paredes estomacales de varios
animales. El aislamiento de ambas enzimas antecedió de hecho el uso de término
“enzima” el termino como tal fue utilizado primero por khune en 1878 y deriva del
griego levadura. Probablemente el primer intento serio para producir
comercialmente una enzima se produjo a fines de la década de 1890 con la
preparación de una mezcla rudimentaria de enzimas hidroliticas extraidas del hongo
aspergillus oryzae cultivado en salvado de trigo.

El desarrollo de programas de mejora de cepas que condujo a la obtención de cepas


de producción industrial de los organismos productores, capaces de producir
económicamente las toneladas de antibióticos necesarios para la subsecuente
manipulación de la mayor parte del antibiótico.
El desarrollo de métodos eficientes y económicos de corte enzimático a escala
industrial para eliminar las cadenas laterales no deseadas del material bruto
produciendo el núcleo central para su subsecuente manipulación. Estos métodos
enzimáticos han reducido significativamente el uso de solventes industriales y de esta
forma han contribuido a una reducción a una reducción de los costes del tratamiento
de los residuos de las plantas de producción.

LA BIOTECNOLOGÍA ENZIMÁTICA EN EL SIGLO XX

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El trabajo de los hermanos Buchner en la primera década del siglo XX marca quizás el
grupo principal de progreso en esta área ellos pudieron demostrar que era posible
aislar enzimas a partir de células de levadura y retener a un su capacidad catalítica y
propiedades fisicoquímicas sin la presencia del medio celular. Este hecho preparo el
terreno para el uso de las enzimas en alto estado de pureza para transformaciones
específicas en lugar de las preparaciones rudimentarias usadas antiguamente. Las
primeras enzimas tratadas de esta forma fueron la diastasa y la pepsina produciendo
una actividad enzimática mucho mayor. También en este siglo se descubrió que las
proteasas y las lipasas mejoraban la limpieza de la ropa que había sido precalentada
con las enzimas. Esto condujo a la inclusión posterior de las enzimas las llamadas
detergentes biológicos un tema que se tomara más adelante

CAPITULO II
2.1 TECNOLOGÍA ENZIMÁTICA MODERNA

La tecnología enzimática moderna ha hecho grandes avances durante el


curso de los últimos 50 años. Actualmente se cuenta con una gran cantidad
de información acerca de las propiedades de enzimas individuales y también
de métodos de extracción, purificación y estabilización. Además se ha
perfeccionado mucho la tecnología de las enzimas. Se puede percibir dos
enfoques al uso de las enzimas: como “auxiliares de proceso” y como
producto en sí. Se usan de muchas maneras, como la adición a un sistema
en un reactor grande, rociándola en una superficie o más recientemente se
les une a una matriz como un sistema enzimático inmovilizado que efectúa
biotransformaciones especificas a partir de precursores de poco valor a
productos de mucho valor. Todas estas situaciones se analizaran después.

MEJORA DE CEPAS
Hay tres aplicaciones fundamentales de la tecnología de ingeniería genética para la
producción de antibióticos:

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 Los programas de mejora cepas


 La introducción de genes para la producción de nuevos antibióticos
 La manipulación de cepas bacterianas yde las enzimas implicadas en los
procesos de producción
El creciente conocimiento de la vías biocinéticas está permitiendo un enfoque más
racional en la manipulación genética e lo microorganismo productores y está también
abriendo nuevos enfoques para la combinación de vías biositenteticas de diferentes
microorganismo, bien para optimizar la producción de los antibióticos ya conocidos o
para proponer la construcción de moléculas hibridas con característica nuevas o
mejoradas. Además se espera que algunas de las manipulaciones químicas llevada a
cabo sobre el núcleo central de las estructuras pueda ser remplazada por nuevos
enfoques enzimáticos para la producción de estos compuesto.

INDUSTRIAS TRADICIONALES Y ENZIMAS ASOCIADAS

Las enzimas se usan en un gran número de sectores industriales de los cuales el


más grande en la industria alimentaria. Otras áreas son los detergentes, productos
medico farmacéuticos y textiles.
El hombre conoce unas 2000 enzimas y ya han sido clasificados. Kindel (1981)
estimo que existen más de 25000 enzimas en la naturaleza. Por lo tanto se puede
ver el grado del potencial de aplicaciones de las enzimas.
Hay muchas razones para usar las enzimas en la industria. En particular las
enzimas tienen muchas ventajas sobre los catalizadores tradicionales que son:
 Alto poder catalítico, se logran un aumento de hasta 10⁹ a 10¹² en la rapidez
sobre la actividad no enzimática.

 En tanto que las enzimas individuales tienen una alta especifidad por su
sustrato, las enzimas como un todo tienen un intervalo amplio de actividad.

 Las reacciones se puede realizar en condiciones modernas de ph, temperatura


y presión.

 Se puede crear un centro quiral dentro de un centro proquiral.

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 A pesar de esta ventaja y de un conocimiento bastante detallado de un gran


número de enzimas solamente 14 de ellas se usan a escala comercial mayor
ella son:

1. Carbohidrasas

 amilasa

 amilasa

 Gluco amilasa

 Invertasa

Proteasas
 Proteasas en general (obtenidas de hongos/bacterianos)
 Pancreatina
 Renina
 Pepsina
Papaína
 Lipasas
 Lipasa
Otras
 Glucosa isomerasa
 Glucosa oxidasa
 Pectinasa

La mayoría de las enzimas usadas industrialmente son hidrolasas (85% del total) el 15
% restante se divide entre oxidorreductasas e isomerasas. De la hidrolasas 70%
hidrolizan proteína 26% hidrolizan carbohidratos y los 4% hidrolizan lípidos. Notese

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que las enzimas transferasas liasas o ligasas no se presentan como enzimas


industriales principales. El hecho de que la mayoría de las enzimas industrializadas
sean de naturaleza hidrolitica suscita dos puntos:

1. muchas de ellas son potencialmente reversibles bajo ciertas condiciones de


reacciones criticas.
2. Consideraciones energéticas para el manejo de los procesos sintéticos.

Aplicaciones industriales Alimentos


Por lo general las enzimas se usan en la industria alimentaria como auxiliares de
proceso se usan de esta forma en diversos sistemas que incluyen el horneado
(amilasa y proteasa) elaboración de cerveza (amilasa, amiloglucosidasas y proteasas),
productos lácteos (renina y galactosidasa), saborizantes (edulcorantes, saborizantes y
aceites). De todos ellos posiblemente el uso mas importante de las enzimas es en la
hidrolisis de carbohidratos y proteínas.

Detergentes
Aunque a menudo se considera un descubrimiento reciente los detergentes son
enzimas datan de antes del siglo, sin embargo su uso principal de los detergentes
“biológicos” comenzó en los años 60 cuando la compañía danesa, novo saco a la
venta un detergente llamado Alkalasa. El componente clave de Alkalasa era una
proteasa alcalina mientras que al principio el producto fue un éxito pronto sucedió una
contrariedad importante. Pronto se notaron numerosos casos de dermatitis entre amas
de casa y trabajadores que manejaban el detergente, se descubrió que la proteasa era
capas de inducir respuestas alérgicas marcadas. Este problema se resolvió mas tarde
al encapsular la proteasa en una cubierta cerosa soluble no sin antes haber causado
un daño importante en las ventas de detergentes. Las enzimas utilizadas en los
detergentes provienen del Bacillus subtilis y B.licheniformis. una característica
importante de las enzimas usadas en detergentes es su capacidad para mantener una
actividad alta a temperaturas elevadas (hasta 60°C) e intervalos de pH de 6 a 9.5 una
dificultad particular en la formulación de detergentes biológicos tiene que ver con la
necesidad de un sistema de enzimas proteolíticas que pueden resistir condiciones
extremas de alcalinidad causadas por la naturaleza propia de los detergentes. La
temperatura no es mucho problema puesto que se conoce un gran número de
proteasas que operan a temperaturas de hasta 65°C.

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Tratamiento de desechos

Este es una área con gran potencial pero con relativamente poca aplicación hasta
ahora aquí son de mayor importancia los desechos proteicos y base de carbohidratos
los cuales serán objetivos de degradación claves en el futuro.

Productos médicos y farmacéuticos


hay dos categorías de enzimas con importancia en aplicaciones medico-
farmauceticas:
1. Productos aplicados en pacientes
2. Uso directo de enzimas en los medicamentos
Un ejemplo particular es la enzima penicilinasa usada en el manejo de antibióticos.

2.2.1 Ejemplos de aplicaciones industriales de las enzimas

industria sector enzima origen uso


alimentos horneado amilasas fungico Movilización de almidon
para producir azucares
simples las cuales son usadas
por la levadura.

proteasas fungico Producción de “pasta suave”


y reducción de proteína en
fluorita para la fabricación
de galletas.

Preparación de amilasas Grano de Degrada almidon y proteínas


cerveza cebada para liberar azucares y
péptidos usados usados por
la levadura para la
producción de cerveza.

proteasa bacteriano Degrada almidon y proteínas


para liberar azucares y
péptidos usados por las
levaduras en la producción
de cerveza.
Suavizadores ᵦ-gluconasa fungico Disminuye la viscosidad de
de carnes la cerveza.
papaina plantas Usada para suavizar carnes
Glucosa bacterias Producción de jarabes de alta

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isomerasa fructosa a partir de glucosa


~amilasa bacterias Solubilizacion de almidon y
producción de jarabes de
almidon.
Detergentes Vegetales Celulosas Fúngico Condimentos y ablandadores
polvos para proteasas y bacteriano Pre absorción remosion de
lavado amilasas residuos de proteínas
“biológico” bacterianas aplicación en polvos para
lavar vajillas para remover
residuos compuestos
básicamente de almidon de
cubiertos y losa.
Médico/farmacéutica diagnostico ~amilasas Amplia variedad de enzimas principalmente
textiles de origen microbiano con asimismo amplio
rango de aplicación
Bacterias usadas para reducir materiales con
alto contenido de residuos de almidon.

INGENIERÍA GENÉTICA E INGENIERÍA DE PROTEÍNAS ENZIMATICAS


La tecnología del DNA recombinante ha permitido la transferencia de genes de
enzimas útiles de un organismo a otro, asi cuando se identifica un buen candidato
enzimático para uso industrial el gen relevante puede clonarse en un microorganismo
que los produzca de forma mas adecuada. En este sentido es posible producir
enzimas industriales en gran cantidad y pureza.
Los microorganismos recombinantes están llegando a ser una fuente dominante de
una amplia variedad de tipos enzimáticos. Esta tendencia se incrementara en el futuro
debido a las facilidades proporcionadas por la ingeniería genética y a la casi ilimitada
variedad de enzimas disponibles a partir de diferentes microorganismos desde
aquellos que viven en condiciones ambientales diversas y extremas a
microorganismos fastidiosos y a otros potencialmente patógenos. Las enzimas de
extremofilos tales como los microorganismos capaces de crecer a altas temperaturas
(90-100°C) pueden ahora crecer en microorganismos mesofilicos y producir enzimas
con alta resistencia a la temperatura que puede utilizarse en procesos industriales.
Un ejemplo resiente de esta tecnología es el detergente enzimático Lipolasa producido
por Novo Nordisk A/S que ha mejorado la eliminación de manchas de grasas en los
tejidos.
La enzima fue identificada inicialmente en el hongo Humicola lanuginosa a niveles
inapropiados para su producción comercial el fragmento génico de DNA para las
enzimas se clono para su producción en Aspergillus oryzaealcanzándose asi niveles

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enzimáticos comerciales. La enzima a probado su eficacia en muchas condiciones de


lavado siendo también muy estable a gran variedad de temperaturas y de pH
importantes en los lavados. Además la lipolasa es muy resistente a la actividad
protoelitica de las proteasas de detergentes comúnmente utilizados.
Para mejorar la actividad de las moléculas enzimáticas se ha utilizado la ingeniería de
proteínas o “cirugía molecular”. La ingeniería de proteínas enzimáticas implican la
creación de modelos graficos tridimensionales de la enzima purificada obtenida a partir
de datos de la critalografia de reyos X. después pueden considerarse cambios en la
estructura de las enzimas que resulten en una mayor estabilidad como por ejemplo
cambios en el pH y temperatura y cambios moleculares precisos sobre el gen que
codifica para la enzima.
Se ha abierto dos grandes líneas de investigación para alterar el rendimiento de las
enzimas. Una producción metodológica utilizada la mutagenesis de residuos de
aminoácidos de productos génicos clonados localizados en determinadas posiciones
en las estructuras de la enzima remplazándolo por otros residuos de aminoácidos de
productos génicos clonados localizados en determinada posiciones en la estructura de
las enzimas reemplazandolo por otros residuos de los de aminoácidos
apropiadamente codificados el gen alterado se transforma después en un organismo
huésped adecuado y la enzima mutante se produce subsiguientemente con los
cambios en la posición requerida. Este proceso se le conoce como “mutagenesis
dirigida”. El segundo método utilizando implica el aislamiento de la enzima natural y
modificación de su estructura mediante métodos enzimáticos o químicos: a veces
referidos como “mutaciones químicas”. Un ejemplo exitoso de ingeniería de proteínas
es la modificación estructural de la fosfolipasa A2 enzima ampliamente utilizada como
emulsificante alimentario para hacerla resistente a altas concentraciones de ácido.
Claramente la ingeniería genética y la ingeniería de proteínas tendrán un gran impacto
en distintos aspectos de la industria enzimática.

Objetivos de preparación de enzimas modificadas


1. Mejora la actividad de la enzima
2. Mejora la estabilidad

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3. Permitir funcionar a la enzima en un ambiente diferente


4. Cambiar el pH o temperatura optimos de una enzima.
5. Cambiar la especifidad de una enzima de forma que pueda catalizar la
conversión de un sutrato diferente.
6. Cambiar la reacción catalizadora
7. Mejorar la eficiencia de un proceso

Las enzimas como productos obtenidos a gran escala


La producción controlada de enzimas derivadas de microorganismos es relativamente
más reciente, por el contrario las enzimas que se producen en masa solamente se
purifican hasta el grado necesario para conseguir los requerimientos reales de los
consumidores para su actividad y estabilidad aunque la seguridad es todavía un
requerimiento real de los consumidores para su actividad y estabilidad aunque la
seguridad es todavía un requerimiento en términos de manejo. En aplicaciones a
ingredientes de alimentos la necesidad de controlar los costes es dominante.
Lo más importantes enzimas comerciales y sus principales aplicaciones están listadas
junto a otros organismos productores, el modo de uso y las condiciones de pH de
temperaturas que esta impone y notas de activadores estabilizadores e inhibidores
importantes y de entidades inactívate. Y aparte de la glucosa isomerasa todas las
enzimas son hidrolasas.
La tecnología de la producción de enzimas
Es seguro que la mayor parte de los futuros desarrollos en la tecnología enzimática se
sustentara en la utilización de enzimas de origen microbiano incluso en el proceso de
malteado en la fermentación de cerveza en la que se usan amilasas de cebada
germinada que hidrolizan el almidón de forma relativamente barata y alrededor de la
cual se a desarrollado la tecnología actual de fermentación de cerveza existen algunos
procesos competitivos que implican enzimas microbianas.
El uso de microorganismos como fuente de producción de enzimas se a desarrollado
por varia razones importantes:

1. Existe normalmente una alta actividad específica por unidad de peso seco del
producto.
2. No existen épocas potenciales de escasez de materias primas debidas a
variaciones estacionales y a cambios políticos.

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3. En los microorganismos existen normalmente un amplio espectro de


características enzimáticas para escoger tales como el rango de pH y
resistencia a alta temperatura
4. La genética industrial ha mejorado mucho las posibilidades de optimización del
rendimiento y tipo enzimático a través de la selección de estirpes, mutaciones,
inducción y selección de las condiciones de crecimiento y mas recientemente
mediante el uso de las innovadoras ventajas que ofrecen las tecnologías de la
transferencia génica e ingeniería de proteínas.
5. Ahora pueden producirse nuevas enzimas a partir de fuentes no usuales
mediante clonación de los genes relevantes en microorganismos bien
caracterizados y fáciles de desarrollar tales como Aspergillus Oryzae.

El proceso racional para la selección entre diferentes microorganismos es complejo


e implica muchos factores mal definidos tales como la economía de los cultivos si
la enzima se secreta en caldo de cultivo o es retenida en la celula y la presencia de
enzimas nocivas. Dependiendo de la materia de origen las enzimas difieren
enormemente en su estabilidad a temperaturas y pHs extremos asi las proteasas
de Bacillus subtilisson relativamente estables al calor y activas en condiciones
alcalinas y han sido mas apropiadas como aditivos de jabones en polvo. En
contraste, las amilasas fúngicas a causa de su mayor sensibilidad ala calor se han
utilizado mas en el horneado industrial. Cuando se selecciona una enzima para la
producción el genetista industrial debe esforzarse para optimizar las propiedades
deseadas (alto rendimiento enzimático, estabilidad, independencia de los
inductores, buena recuperación, etc) tratando a la vez de suprimir propiedades no
deseadas (metabolitos acompañantes perjudiciales, olores, colores, etc.) en la
práctica no se han utilizado mucho las técnicas genéticas sofisticadas sino que la
mayoría de los productores utilizan fundamentalmente la autogénesis combinada
con buenos métodos de selección. Una característica común de la mayor parte de
los organismos productores industriales es que su genética es muy poco conocida
sin embargo la tecnología de transferencia génica junto a la ingeniería de proteínas
permitirá alterar esta presentando asi nuevos horizontes para la tecnología
enzimática.
Las materias primas para las fermentaciones enzimáticas industriales se han
limitado normalmente a sustancias fácilmente disponibles en grandes cantidades a
bajo costo y nutricionalmente saludables. Algunos de los sustratos usados mas

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comúnmente son el hidrolizado de almidon. Molasas, licores a base de cereales,


suero y muchos cereales.
La producción enzimática industrial de microorganismos utiliza predominantemente
bien condiciones de liquido sumergido o fermentaciones de sustratos solidos.
Los métodos de sustrato solido en la producción de enzimas fugicas tienen
múltiples aplicaciones desde muy antiguo particularmente en japon y otros países
del lejano oriente. En la práctica este método usa trigo mojado o salvado de arroz
con sales nutrientes añadidas como sustratos. El crecimiento se realiza
normalmente en bandejas rectangulares o circulares dentro de habitaciones a
temperatura constante. Las enzimas comercialmente importantes de esta forma
incluyen las amilasas fúngicas, proteasas, pectinasas y celulasas.
Ya que las enzimas microbianas son en general de bajo volumen y los productos
son de costo medio los métodos de producción utilizados sistemas de líquido
sumergido se usan generalmente en biorreactores de diseño y funciones similares
a los procesos de producción de antibióticos. La elección del medio de
fermentación es importante ya que proporcionan la energía necesaria así como las
fuentes de carbono y nitrógeno. El coste de materia prima estará estrechamente
relacionado con el valor del producto final.
La síntesis de enzima en microorganismos esta con frecuencia reprimida es decir
la enzima se producirá solo en presencia de una molecula inductora mas
frecuentemente el sustrato. El inductor funciona interfiriendo con el control del
represor como se ejemplifica por el almidon en la producción de amilasa y de
sacarosa en la producción de invertasa. La reto-represion puede darse con
proceso de biosíntesis de pequeñas moléculas en la que normalmente la primera
enzima en la cadena de producción es inhibida por el producto final. En algunos
casos el exceso de nutrientes específicos como el carbono, nitrógeno, etc. Puede
bajar o reprimir la producción de enzimas implicadas en compuestos relacionados
o no represión catabólica.

El uso de inductores para la producción industrial de enzimas puede con


frecuencia ser dificultoso y la solución mas común es producir mutantes
reguladores en los que se ha eliminado la dependencia del inductor mediante la
creación de mutantes constitutivos. Se ha desarrollado también mutantes
resistentes al fenómeno de represión catabólica siendo posible controlar el efecto

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de estos sustratos mediante su alimentación de birreactores mediante un régimen


de alimentos por lotes.
Todos los procesos enzimáticos microbianos que se usan en aspecto relacionados
con la alimentación y la medicina requieren tener especificaciones muy estrictas
con respecto a la toxicidad actualmente un numero pequeño de microorganismos
para la producción de enzimas. La responsabilidad para la seguridad de un
producto enzimático recae sobre el fabricante. En la práctica un producto
enzimático debe tener bajo potencial alergénico y estar libre de elementos tóxicos
y de microorganismos nocivos. Las enzimas procedentes de animales y plantas no
requieren la realización de estudios toxicológicos. Cuando las enzimas derivan de
microorganismos usados tradicionalmente en alimentos o elaboración de los
mismos no requieren análisis las enzimas procedentes de otros microorganismos
pueden requerir amplios ensayos y también análisis de metabolitos toxicos como
exo- y endotoxinas y micotoxinas. Todos los productos enzimáticos se suministran
con un certificado de material seguro muy detallado que cubre los daños
potenciales y el procedimiento de manipulación para el uso de enzima.

MEJORA CONVENCIONAL DE CEPAS


Los programas de mejoras cepas han sido o bien empíricos en su naturaleza, por
ejemplo mutación y selección de organismo para la producción mejorada de un
antibiótico, o más recientemente dirigidas por el conocimiento de las vías implicadas
en los procesos biosinteticos. Los objetivos en estos programas de mejora de cepa
incluyen:
 Conseguir aumentar la producción por cepas ha sido manipulado y que están
cercanas a los límites de sus capacidades biocinéticas.
 El mantenimiento de los niveles de reproducción en un ambiente industrial
donde se produce frecuentemente la reversión a bajos niveles de producción.
 La adaptación a materias primas más baratas.

INGENIERIA GENÉTICA DE ANTIBIOTICOS

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En la manipulación genética de las cepas productoras de antibiótico se ha tomado una


aproximación racional al secuenciar los gemonas de las cepas productoras, o al
menos al secuenciar las agrupaciones de los genes responsables por la producción de
antibióticos. Con los descubrimientos de que muchos genes de biosíntesis de
antibióticos para un conjunto importante de familia están agrupados en los
cromosomas de los organismos productores y se regala conjuntamente, ha resultado
claro que la manipulación de estos genes de una forma sistemáticas puede conducir a
mejorar la producción y a producir nuevos antibióticos. Este claramente el caso con las
agrupaciones de genes de poliquetidos responsables de la producción de las
macrolidas. Los procesos de oxidación y deshidratación que se producen en cada
etapa en la biosíntesis de estas moléculas pueden ser manipulados por apropiada
delecion o inserción de genes en las agrupaciones génicas de biosíntesis. Muchas
compañías están activamente trabajando para conseguir el objetivo de producir
nuevos antibióticos o moléculas centrales que pueden ser utilizados en la
manipulación semisintética de sus estructuras finales. Además el análisis genético de
las cepas de mayor productividad puede ser explicada por duplicación de las
agrupaciones de los genes, en el mismo o diferente cromosomas, en relaciones a las
cepas originales de baja producción.
Un área interesante que se explota en el futuro, es la creación de antibióticos híbridos
insertando genes de organismo diferente. unos pocos ejemplos han sido descritos en
la serie de antibióticos del grupo de antraciclina, pero el desafio es mucho más mayor
debido a la existencia y dificultad de modificaciones de la especificidad de las enzimas
biosinteticas, modificar una cepa a fin de que produzca una cefalosporina directamente
extraíble con solvente, como la cefalosporina G o la V, añadiendo derivados
aromáticos del ácido acético, como el fenilacetico o fenoxiacetico al núcleo de los
cefalosporinas utilizando una combinación de las enzimas de biosíntesis de la
penicilina V y a la cefalosporina C ha sido durante mucho tiempo considerado como el
santo grial. Pese al considerable esfuerzo realizado, no sido todavía posible
conseguirlo. Otro desafio que todavía no se ha conseguido es la alternativa de
introducir la expandasa de cephalosporium en penicilium para producir, de nuevo
directamente, cefalosporina, extraíble con solvente orgánicos.

ENZIMAS INMOVILIZADAS

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Casi el 95% de las enzimas comerciales se obtiene en forma soluble siendo la mayoría
utilizadas de forma directa en un solo uso en las áreas mostradas. El uso de enzimas
en forma soluble o forma libre debe considerarse como anti – económico ya que la
enzima no puede recuperase al final de la reacción. Un área nueva y valiosa de la
tecnología de las enzimas es la relacionada con la inmovilización de enzimas sobre
polímeros insolubles, tales como membranas y partículas que actúan como soportes o
transportadores de la actividad enzimática. Las enzimas están físicamente aisladas
durante un proceso catalítico continuo y pueden recuperarse de la mezcla de reacción
y re-utilizarse una y otra vez lo que mejora la economía del proceso es simplemente
una vuelta al estado al estado natural inmovilizado de la mayor parte de las enzimas
en los sistemas vivos. Algunas enzimas que son rápidamente inactivadas por el calor
cuando están en forma libre de células pueden estabilizarse por unión a soportes
poliméricos inertes, mientras que en otros casos tales enzimas insolubilizadas pueden
usarse en medios no acuosas. Las células microbianas completas pueden también
inmovilizarse dentro de esferas de poliacrilamida y usarse asi para un amplio rango de
funciones catalíticas. La gran variedad de nuevas enzimas y sistemas en organismo
completo que llegara a estar disponible a buen precio presenta excelentes
posibilidades para el futuro, especialmente en los campos farmacéuticos y de
diagnóstico.
Las aplicaciones actuales de las enzimas inmovilizadas se limitan principalmente a los
procesos industriales como la producción de L-aminoácidos ácidos orgánicos y jarabe
de fructosa. El potencial futuro para los biocatalizadores inmovilizados se sustenta en
las nuevas aplicaciones y en el desarrollo de nuevos productos más que en ofrecer
una alternativa a los procesos existentes que utilizan biocatalizadores no
inmovilizados.

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Industria Enzimas Metodo de proceso


inmovilizacion
Alimentacion Glucosa isomerasa AE-celulosa Conversión de
glucosa en
Homogenados fructosa
celulares
entrecruzados con
glutaraldehido
DEAE-Sephadex

Aminoacilasa
Resolucion de
DL-aminoacidos a
L-forina

Lacteos Lactasa Fibras de acetato Hidrolisis de


de celulosa lactosa a glucosa y
galactosa
Farmacéuticos Penicilina G/V Sephadex activado Producción de 6-
acilasas por Br CN APA a partir de
penicilina G
Fibras de
triacetato de
celulosa

policrilamida
Químicos Nitrilasa poliacrilamida Producción de
acrilamida a partir
del acrilonitrilo Algunas
aplicaciones industriales de las enzimas inmovilizadas

PROCESO DE PRODUCCIÓN

La producción industrial de antibióticos supone muchas etapas, cada una de las cuales
ha cambiado desde los primeros tiempos de su producción en los años 40 y 50 hasta
el proceso actual de producción. Eficientemente controlado mediante ordenadores.
Esta mejora se ha producido como consecuencia de la demanda constante para
aumentar el rendimiento y disminuir los costes de producción. El proceso consiste en
un conjunto de etapas que incluyen:
 El mantenimiento de cultivo y su reparación para el salto de escala.
 El escalado de inóculo para la producción.

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 El proceso de fermentación y,
 La reparación y etapas de post -procesamiento.
 Además,fueras de estos procesos de fabricación están los:
 Procesos para manipular las cepas de producción a fin de continuar generando
nuevas cepas con la característica que desea.
 La mejora de las característica física de la fermentación y
 Mejorar las cepas que puedan utilizar meterias primas más baratas.
En las siguientes secciones se tratara de cada uno de estos aspectos para mostrar
que los procesos biotecnológico modernos para la producción de antibióticos se
han vuelto más complejo y sofisticados

PROCESO DE FERMENTACIÓN

El proceso de producción de penicilinas puede ser utilizado como ejemplo del flujo de
un proceso implicado en la producción a escala industrial de antibióticos y algunos de
los cambios que han ocurrido alo largo de los últimos 30 años. La producción de
penicilina en los años 50 se llevaba a cabo típicamente por un proceso discontinuo.
No solo era el propio proceso de fermentación discontinuo, si no que el proceso de
esterilización del medio era también el proceso in situ en el fermentador. El medio
consistía en latosa, el ciclo de tiempo era de unas 120 horas y se utilizaba un mínimo
control del proceso. la morfología del organismo era filamentosa. La separación de
micelio era por filtración discontinua y habla muchas etapas subsecuentes de
extracción. Los volúmenes del tanque eran de 50 – 100m3. El titulo el producto
obtenidos era 0, 5 – 1 ,0 gl la eficiencia del proceso de era del 70 – 80 % y al coste
era 275 $/350kg
En contraste,las modernas fermentaciones son procesos altamente eficientes, fuente
de carbono más baratas y fácilmente disponibles como glucosa sacarosa se alimenta
de forma continua y controlada en el fermentador, primero para facilitar el crecimiento
y luego para mantener la fase de producción máxima. El medio se esteriliza de forma
continua y el modo operacional es semicontinuo, sacándose y procesándose parte del
caldo de fermentación continuamente. Las variables de la fermentación, como pH y la
aireación se controlan por ordenador. El crecimiento actualmente es forma de bolas
(pellets) y el procesamiento está basado en la recuperación del caldo total (sin separar
la biomasa) y extracción continua,con recuperación de los solvente y precursores

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después de su separación. Los volúmenes de los tanques de fermentación son más


grandes (100 – 200 m3) y los títulos de productos son ahora superiores de 40gl la
eficiencia del proceso es superior al 90%. Estos factores han disminuido los costes
hasta 15 – 20 kg. Mejora similares se han producido en otras fermentaciones de
antibióticos con la consecuente mejora la escala de producción y la reducción de
costes del antibiótico en bruto y de los precursores necesarios para obtener derivados
semissintetico.

EL MEDIO DE CRECIMIENTO

El medio para construir biomasa celular se diseñó para proporcionar un crecimiento


rápido en forma discontinua con cambios mínimos en el pH. Los componentes del
medio individual no tienen que ser superiores al 3 – 5% y proporciona una fuente de
carbohidratos fácilmente disponible .como glucosa o sacarosa y una forma soluble de
nitrógeno, como líquidos de maceración de maíz o extracto de levadura, se añaden
carbono cálcico o fosfato si se requiere tamponar, lo que frecuentemente es el caso
debido a la producción de ácidos orgánicos procedentes del metabolismo de los
azucares, se pueden utilizar amoniaco para proporcionar nitrógeno adicional.

EL MEDIO DE PRODUCCIÓN

Los medios de producción son propiedad de las empresas y han sido desarrollados y
refinados a lo largo de años invariablemente son un compromiso entre su coste y sus
comportamientos. Los medios más adecuados son los que utilizan materias primas
baratas en combinación, de forma que se produzcan la máxima producción. Durante la
etapa de producción la fermentación es alimentada, lo que proporciona la oportunidad
de optimizar la fermentación para proporcionar el fino balance entre un crecimiento
controlado y la máxima biosíntesis.Las materias primas que se utilizan en la fase inicial
discontinua tienen que proporcionar nutrientes solubles de uso inmediato así como
nutrientes menos solubles y d duración más larga. Las fuentes de carbono inicialmente
son las menos críticas ya que pueden añadirse en forma soluble. Durante la
fermentación las fuentes de nitrógenos son más críticas ya que sirven como nutrientes
principal a lo largo de fermentación. Las fuentes ideales del nitrógeno tienen un origen
agrícola,lo que da lugar a diferencia en calidad y a variabilidad tanto a lo largo de una
estación como estaciones. Esto supone una preocupación continua para mantener

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reproductibles la fermentación. Para mejorar esta situación se puede utilizar diferente


materias primas para impedir el exceso de variación.
En algunos de las actuales fermentación altamente productivas no hay clara
separación entre metabolismo primario (trofofase) y metabolismo secundario (idiofase)
para obtener la máxima velocidades de fermentación se crean condiciones que
puedan proporcionar un crecimiento rápido y una producción de antibióticos temprana
con un crecimiento celular continuado y estos son las condiciones de fermentación
empleadas más frecuentemente en una moderna planta de producción de antibiótico,
las materias primas que se suplementan son solubles y rápidamente utilizable-son
carbohidratos adecuados, la sacarosa la glucosa o jarabes obtenido por hidrolisis
enzimáticos del maíz también se puede utilizar otras fuentes de carbono. Si es
necesario se puede suplementar con nitrógenos soluble del líquido de maceración del
maíz .la alimentación con un carbohidrato fácilmente utilizable, como glucosa, pueden
impedir la represión catabólica, ya que el azúcar se mantiene siempre a concentración
muy baja.

Factores nutricionales y ambientales en el desarrollo de enzimas


comercialmente importantes

Fuentes de carbono fuentes de nitrógeno Elementos y vitaminas


Maíz, harina de maíz Harina de soja Liquido de maceración de
Harina de trigo Harina de pescado maíz
Almidón de maíz, trigo Liquido de maceración de Sales de calcio, hierro y
liquido de maceración de maíz. sodio (carbonatos, sulfatos y
maíz. Hidrolizado y extracto de citratos)
Cebada levadura.
Goma arábica Caseína
Almidón de maíz Amoniaco
Hidrolizada Sales amónicas
Lactosa
Glucosa
Pulpa de remolacha
Energía necesaria para los Requerimientos de aireación
requerimientos mecánicos de para mezclado y oxigenación
mezcla y de dispersión de velocidad de volumen de
gas por volumen de medio. gas/volumen de medio.

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 DISCUCIONES

 CONCLUCIONES

 RECOMENDACIONES

 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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