IMPORTANCIA DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO EN

INMUNOLOGIA
 HISTORIA

1913: Milstein y Kóhler descubrieron los Anticuerpos

Monoclonales

1934: Moldaven: recuento fotoeléctrico.GB

1968: Dittich y Gohde: 1º citómetro
1970: Bonner y el matrimonio Herzenberg desarrollan
el equipo denominado FACS (Fluorescence activated
cell sorter ).
1980: Aplicación Clínica, diagnóstico y pronóstico
2000: Citómetros de 8 colores para diagnóstico
 DEFINICIÓN

“ Es la tecnología que mide

simultáneamente propiedades físicas y
biológicas de las células objetivamente;
bajo el principio célula por célula, a una
velocidad 1000 a 5000 células por
segundo, mediante el estudio de la
dispersión de luz y fluorescencia
emitidas cuando la célula atraviesa un
rayo láser”
 Qué es la
Fluorescencia ?
Es la propiedad de algunos
compuestos químicos que
tienen en su composición
anillos cíclicos y electrones
π, que absorben energía y
luego emiten fluorescencia.

20/03/2019
20/03/2019
 Espectros
 Espectro de Absorción
 Representación de la intensidad de absorción de
luz de distintas longitudes de onda por una sustancia.
 Espectro de Emisión
 Representación de la intensidad de emisión de una sustancia
excitada con luz de una determinada longitud de onda.

medida
excitación

20/03/2019
Laseres 350 457 488 514 610
comunes 300 nm 400 nm 500 nm 632 700 nm
600 nm
PE-TR Conj.

Texas Red

PI

Etidio

PE

FITC

Acido
Parinár
20/03/2019 ico
ESPECTRO Y COLOR DE LOS FLUOROCROMOS

20/03/2019
 Anticuerpos
monoclonales

20/03/2019
 Esquema de Inmunoglobulina

20/03/2019
 CITOMETRO DE FLUJO

CAMARA
DE FLUIDOS
LASER

SISTEMA DE FLUIDOS

Aguja de inyección

20/03/2019
 COMPONENTES

a) Sistema Fluidos: Medio de transporte de células

a través del sistema.
b) Sistema Óptico: Fuente láser, prismas, lentes,
detecta señal óptica, fotomultiplicadores. La
fluorescencia emitida por la célula es captada y
amplificada.
c) Sistema Eléctrico: Red de circuitos integrados que
transforma la energía óptica en energía eléctrica,
para cuantificarla
*Computadora: registra, almacena, recupera,
analiza datos e imprime INFORMACIÓN.
 SISTEMA DE FLUIDOS

Fuente: Leach, M. (2013). Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis

FACS: Flow Actived Cell
Sorter
Un láser :Azul

3 láseres: azul,
rojo y violeta
 SISTEMA ÓPTICO

Fuente: Leach, M. (2013). Practical Flow Cytometry in Haematology Diagnosis

SISTEMA ELECTRÓNICO

Fuente: Leach, M. (2013). Practical Flow Cytometry in Haematology

Diagnosis
 Separador de
células

20/03/2019
 APLICACIONES
1.- Maduración, diferenciación y linaje celular.
2.-Células Progenitoras: En evaluación para
TAMO, Stem cells con marcadores: CD34, CD45
y 7AAD.

3.-Cuantificación de Linfocitos: CD3, CD4 y CD8,

en pacientes portadores de Síndrome
inmunodeficiencia. Junto con la carga viral,
determinan el manejo clínico, tratamiento y
pronóstico.
20/03/2019
 APLICACIONES
 Inmunohematología:

 LLACD19/CD10/CD34;CD7/CD13/CD45;MPO/cCD79a
TdT/cIgM/CD20;
CD2/CD5/CD1a;CD4/CD8/CD3
 LMA:
CD14/CD33/CD45;HLADR/CD13/CD34;CD7/CD15/CD117
/MPO
 LLCCD5/CD23/CD19; CD200/CD20/CD45/iZAP 70
 Mieloma múltiple CD138/CD38/CD56/CD19/CD45
 Hemoglobinuria Paroxística Nocturna
Precursores
Gly inmaduros CD34/CD117/HLA-DR/TdT
A/CD59/CD45/CD16/CD13/CD14
Serie granulocítica CD13/CD33/MPO/CD11b/CD1
Serie monocítica 6 CD14/CD13/CD33/CD45
 Síndrome Mielodisplásico
 diferenciar líneas
Enfermedad celulares:
Mínima Residual
 FUNDAMENTO DE LA
CITOMETRIA DE FLUJO

20/03/2019
 DETECTOR SIDE SCATTER
(MIDE COMPLEJIDAD
CELULAR)

DETECTOR
FORWARD
SCATTER
(MIDE
INCIDENCIA
TAMAÑO
FUENTE DE
CELULAR)
LUZ

20/03/2019
 Análisis del resultado

CD
3

CD
20/03/2019 4
 FUENTES BIOLÓGICAS
•Leucemias : Aspirado de
médula ósea, Sangre periférica.

•Linfomas : Ganglios linfáticos,

piel, líquidos corporales, aspirados,
lavados bronquiales, otros.

20/03/2019
 MARCAJE CELULAR CON
ANTICUERPOS MONOCLONALES

a) Marcaje superficial

b) Marcaje intracitoplasmático

20/03/2019