ASOCIACION BIOQUIMICA ARGENTINA

Contenidos:
Clase 1- Introducción. Automatización-Generalidades.
Clase 2- Interferencias en el recuento de Hematíes.
Clase 3- Interferencias en el recuento de Leucocitos.
Clase 4- Interferencias en el recuento de Plaquetas. Pseudoplaquetopenia. Pseudotrombocitosis
Clase 5- TP autoevaluación
Clase 6- Interferencias y su sospecha a través de los índices que reportan los autoanalizadores.
Clase 7- Relevancia clínica del diferencial leucocitario-Importancia del recuento de granulocitos
Inmaduros y NRBC.
Clase 8- Alarmas.Validación de resultados.
Clase 9- Control de calidad en el Laboratorio de Hematología. Valores críticos
Clase 10- TP autoevaluación
Clase 11- Consultas
Clase 12- Evaluación final

Objetivos del curso

Luego de completar la lectura del material enviado a lo largo del desarrollo

del curso, el participante será capaz de:

Interpretar globalmente el reporte obtenido del contador hematológico

incluyendo histogramas, gráficos de puntos, índices y alarmas.

CLASEde1 eritrocitos, leucocitos y

Diferenciar causas de recuentos espurios
plaquetas, y aplicar medidas correctivas para informar un recuento
confiable.
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Un poco de historia
El desarrollo de instrumentos para realizar el estudio de las células sanguíneas comenzó
en la década del 50, cuando los hermanos Coulter, Wallace y Joseph, patentan su equipo
basado en el método de impedancia eléctrica, para contar
únicamente leucocitos (white blood cells ó WBC) y
eritrocitos (red blood cells ó RBC). Existía un reporte de
1934 que mencionaba un primer intento de otros autores
por contar células en forma automática, con un aparato
fotoeléctrico unido a un microscopio ocular, que detectaba
cambios de luz producidos por los eritrocitos.
Hasta 1973 los hermanos Coulter mantuvieron sus diseños
en forma exclusiva, desarrollándolos y mejorándolos. Posteriormente otros fabricantes
introdujeron nuevos modelos basados en el mismo principio, y por 1980 se introduce ya el
análisis diferencial de leucocitos de tres partes, junto al recuento de eritrocitos, la
determinación de hemoglobina (Hb), la derivación o cálculo de los índices eritrocitarios y
el agregado al recuento tradicional de plaquetas (PLT), de nuevos índices plaquetarios
como el volumen plaquetario medio, plaquetocrito e índices de variabilidad en el tamaño de
las plaquetas.
En las últimas décadas se han diseñado equipos que ofrecen un diferencial de cinco partes
a través del análisis de leucocitos por medio de luz láser, así como diferentes sistemas de
alarmas por hallazgos anormales en los distintos tipos celulares. Existen algunos modelos
que utilizan como método de análisis la radiofrecuencia, como también algunos con canales
de lobularidad y citoquímica, o centrifugación y análisis de capas.
Estos analizadores presentan además la posibilidad de llevar un sistema de registro de los
controles de calidad que permiten la manipulación de los datos para realizar análisis
estadísticos en muestras y controles.
En la actualidad, contamos con equipos que informan más de 23 parámetros. Entre ellos se
han consolidado determinaciones como el recuento de eritroblastos y granulocitos
inmaduros (fórmula leucocitaria expandida), mientras que otros parámetros están menos
estandarizados como la fracción de plaquetas inmaduras, parámetros reticulocitarios,
fragmentos eritrocitarios, etc.
Los analizadores actuales de hematología utilizan una combinación de tecnologías para
realizar el análisis completo de RBC, WBC y PLT: dispersión de luz láser, impedancia
eléctrica, fluorescencia, absorción de luz o conductividad eléctrica.
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Tecnologías:
Impedancia eléctrica basada en la diferencia de conductividad eléctrica entre las
células y el diluyente. El principio de impedancia en el conteo de
células sanguíneas se basa en el aumento de la resistencia
producida cuando una célula con baja conductividad pasa a
través de un campo eléctrico. Las células sanguíneas pasan a
través del orificio de apertura desplazando su propio volumen.
El incremento de la resistencia entre electrodos resulta en un
pulso eléctrico. RBCs y Plaquetas se cuentan juntos y se separan
por la altura de los pulsos. El flujo hidrodinámico fuerza a las
células a pasar en una fila única a través de la zona de sensado.
El número de intermitencias indica la cifra de células sanguíneas
y la amplitud de cada intermitencia es proporcional al volumen
de la célula.

Light scatter. Refiere a la luz (generalmente láser) dispersada, que es detectada a

varios ángulos y provee información sobre el tamaño celular y otras características
celulares como granularidad y/o complejidad. El principio de la dispersión óptica de la
luz en el conteo de células sanguíneas se basa en las mediciones de la dispersión de la
luz generada por una sola célula sanguínea que pasa a través de un haz de luz. Estas
células crean una dispersión hacia adelante y lateral, que es detectada mediante
fotodetectores. El grado de dispersión hacia adelante es una medición del tamaño
celular, mientras que el lateral es una medida de la granularidad de la célula.
Conductividad/radiofrecuencia. La conductividad medida por una corriente
electromagnética de alta frecuencia se modifica de acuerdo a la relación
núcleo/citoplasma, la densidad nuclear y la granularidad citoplasmática, y provee
información sobre la estructura y densidad intracelular.
Fluorescencia. Se combina generalmente con la dispersión de luz para analizar el
contenido de RNA/DNA celular.
Citoquímica combina la absorción de las células teñidas mediante reacciones
enzimáticas específicas (mieloperoxidasa), con la dispersión de luz.

El análisis del diferencial de leucocitos (DIFF) puede ser de 3 partes incluyendo

granulocitos, linfocitos y células intermedias o un diferencial de 5 partes que incluye
neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos.
La nueva generación de analizadores ofrece un sexto parámetro, que es la enumeración de
glóbulos rojos nucleados (NRBC), y en algunas líneas se incorporó además el recuento de
granulocitos inmaduros.
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Metodología de las principales

líneas de analizadores para la
generación del diferencial
leucocitario.

Series Abbott Cell-Dyn. Tecnología MAPSS: la dispersión de la luz se mide en múltiples

ángulos (Multi Angle Polarized Scatter Separation) en una celda de flujo óptica. El análisis
da información sobre el tamaño, granularidad, complejidad (estructura interna) y
lobularidad nuclear generando un diferencial de 5 partes. Los diferentes tipos
leucocitarios son clasificados y mostrados en un gráfico de puntos (scatterplots).
Más información en: https://www.abbottdiagnostics.com/en-us/products/hematology.html
Series Beckman Coulter LH. Tecnología VCS: medición simultánea de Volumen,
Conductividad y dispersión (Scatter) de luz en una celda de flujo electro-óptica. El
volumen se determina utilizando impedancia, la conductividad analiza las características
celulares internas y la dispersión de luz analiza las características de la superficie
externa y los gránulos. Esta información es procesada para generar el diferencial
leucocitario de 5 partes que se muestra en un gráfico de puntos. Más información en:
https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/wsr/diagnostics/clinical-products/hematology/index.htm
Series Sysmex XE/XT.Tecnología: citometría de flujo con fluorescencia y
radiofrecuencia. El análisis celular se realiza en un citómetro de flujo que detecta la
dispersión frontal de la luz (forward light scatter) que mide el tamaño celular, la
dispersión lateral (side scatter) que da idea de
la estructura celular interna y la dispersión
lateral de la fluorescencia (contenido de
RNA/DNA), que se combina con mediciones de
radiofrecuencia y resistencia a la corriente
continua para identificar los diferentes tipos
de leucocitos, construye un gráfico de puntos y
genera un diferencial de 5 partes.
Más información en:
https://www.sysmex.com/us/en/Products/Hematology/Pages/Sy
smex-Hematology-Overview.aspx
Series Siemens (anteriormente Bayer) Advia. Tecnología: citometría de flujo con
citoquímica. La determinación del tipo celular se realiza por la tinción selectiva de las
células basada en sus componentes enzimáticos (peroxidasa) y el análisis celular en una
celda de flujo electro-óptica. La dispersión de la luz (tamaño celular) y la absorción de la
luz (intensidad de la tinción) se utilizan para clasificar los tipos leucocitarios, generando
un citograma que muestra el diferencial de 5 partes.
Más información en: http://www.healthcare.siemens.com/hematology

Para un análisis técnico detallado, el lector debe consultar los sitios web de las empresas
fabricantes y los manuales de cada instrunmento en particular.
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Comparación de las Tecnologías y Métodos utilizados por las principales líneas de

Autoanalizadores Hematológicos para generar los diferentes parámetros del hemograma
Beckman Coulter
Parámetro Abbott Cell-Dyn Sysmex XE Siemens Advia
LH
WBC Recuento Óptico Impedancia Óptico (dos) Óptico (dos)
RBC Impedancia y óptico Impedancia Impedancia Óptico
Fotométrica 555 Fotométrica 546
HB Fotométrica 540 nm Fotométrica 525 nm
nm nm
Suma de altura
HTO RBCxVCM÷10 RBCxVCM÷10 RBCxVCM÷10
de pulsos de RBC
Media del
Media del histograma Media del
VCM HCT÷RBCx10 histograma de
de RBC histograma de RBC
RBC
HCM HGB÷RBCx10 HGB÷RBCx10 HGB÷RBCx10 HGB÷RBCx10

CHCM HGB÷HCTx100 HGB÷HCTx100 HGB÷HCTx100 HGB÷HCTx100

CV o DS del CV del
CV del histograma de CV o DS del
ADE (RDW) histograma de histograma de
RBC histograma de RBC
RBC RBC
Impedancia y
Impedancia y óptico
Plaquetas Impedancia óptico- Optico
(&)
Fluorescencia
Media del Media del
Media del histograma
VPM histograma de PCT÷PLTx1000 histograma de
de plaquetas
plaquetas plaquetas
Optico, Tinción Optico, Tinción
Optico, Tinción
Reticulocitos Optico, supravital fluorescente del de ácidos
fluorescente del RNA
RNA nucleicos
Citometría de
Tecnología VCS en Citometría de
Tecnología MAPSS en flujo con
Diferencial celda de flujo flujo con
celda de flujo óptica fluorescencia y
electro-óptica citoquímica
RF/DC
Optico,
GR nucleados Optico, fluorescencia Análisis de cluster
fluorescencia de Optico (2120)
(NRBC) de DNA celular
DNA
&: InmunoPTL (Sapphire); PCT: Plaquetocrito; RF/DC: radiofrecuencia/corriente contiua.

Interpretación de los gráficos de distribución

En primer lugar nos enfocaremos en la interpretación de los histogramas de distribución

de leucocitos, eritrocitos y plaquetas que proporcionan la mayoría de los contadores
hematológicos, con el fin de detectar potenciales fuentes de interferencias o situaciones
fisiológicas que generan alteración en los mismos.
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Los histogramas de WBC, RBC y PLT son
representaciones de la frecuencia o número relativo de
células de un determinado tamaño en el eje Y versus el
tamaño celular sobre el eje X. Son el resultado de
integrar las señales generadas por las células que pasan a
través de detectores (pulsos de voltaje), que discriminan
por su tamaño y frecuencia de ocurrencia, una
determinada población celular.

El patrón de distribución de una población normal de

células comienza sobre la línea de base (pocas
células), seguido de un pico a medida que la
frecuencia de células aumenta, retornando luego a la
línea de base.
Su desvío en una dirección o en otra puede ser de
importancia en el momento de interpretar los
resultados.

Los siguientes son los histogramas normales de leucocitos, eritrocitos y plaquetas:

Histograma de WBC
Las diferentes curvas corresponden a:
- Linfocitos (a la izquierda)
- Células intermedias (MID): eosinófilos,
monocitos, basófilos
- Neutrófilos (a la derecha)
Histograma de RBC

Los glóbulos rojos tienen un tamaño de 80 a

100fl y son contadas en el área entre 25 y
250fl.

Histograma de Plaquetas
Las PLT tienen un tamaño entre 8 y 12 fl, y son
contadas en el área entre 2 y 30fl.
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Discriminador Zona intermedia

móvil entre PLT y GR
Para separar las curvas de distribución de
Plaquetas y la de eritrocitos, se utilizan
discriminadores fijos o móviles dependiendo del
autoanalizador.

Los RBC y PLT, analizados en el mismo canal, difieren claramente en tamaño y pueden ser
fácilmente distinguidos en los autoanalizadores que utilizan el principio de impedancia. La
medición de PLT por impedancia, de uso común, se caracteriza por su alta precisión y
exactitud, superior a la microscopía manual y comparable con el método óptico.
En una “muestra normal” los volúmenes medios de las PLT se distribuyen entre 6 y 10 fl.
Los contadores tipo-impedancia analizan partículas entre 2 a 20 fl. De acuerdo a la curva
generada (histograma), el valor límite o umbral superior que discrimina PLT de RBC puede
estar en 36 fl (discriminador fijo) o variar automáticamente (discriminador móvil),
dependiendo de las características del autoanalizador.
En los analizadores tipo láser (recuento óptico) cada partícula pasa a través de un haz
láser y dispersa luz que es detectada por un fotodiodo (o similar). La cantidad de luz
dispersada es proporcional al área, y de esta manera al volumen de la partícula. En estos
analizadores, las PLT son identificadas en un histograma de distribución basado en su
volumen y en valores del índice de refracción.
Hay que recordar sin embargo, que varios factores interfieren en la estimación de
plaquetas por impedancia y pueden afectar significativamente el resultado. Entre estos
factores podemos mencionar fragmentos de RBC o WBC, contaminación, burbujas de aire,
parásitos de la sangre, microcoágulos, etc.
Por otra parte, en ciertas condiciones patológicas, donde las PLT son mayores a 30 fL (ej.
PLT gigantes en la anomalía de May-Hegglin) o cuando los RBC son menores a 25 fL (ej.
fragmentos de RBC), no es posible garantizar una clara separación entre ambos tipos
celulares excepto que se utilice otro tipo de metodología como el recuento fluorescente
óptico de PLT. En estos casos anormales, el autoanalizador generalmente gatilla algún tipo
de alarma o un histograma aberrante que induce a realizar la confirmación de los
resultados por otro método. Actualmente, la aplicación de ambos métodos (óptico e
impedancia), constituyen una alternativa aceptable, especialmente en casos clínicamente
decisivos en los que un resultado confiable contribuye a mejorar el éxito de un
determinado tratamiento (ej. tratamiento citorreductor, evaluación de la respuesta
después de trasplante de médula ósea, aplasia medular, o en casos graves de
trombocitopenia).
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En la mayoría de las instancias se genera un resultado confiable. Sin embargo, como se
mencionó anteriormente, son varias las situaciones que pueden conducir a resultados
falsos o a la aparición de alarmas que pueden llevar a re-examinar el número de PLT por
ejemplo a través de su estimación en el frotis de sangre periférica. Estas situaciones se
describirán en la clase 4.

Análisis del histograma de leucocitos

Los primeros instrumentos que permitieron informar el recuento diferencial de células

reportaban un recuento diferencial de 3 partes.
Dado que no todos los laboratorios poseen tecnología de generación avanzada nos
referiremos primeramente a ellos.

En los contadores que informan el diferencial leucocitario de 3 poblaciones, el histograma

de tamaño leucocitario representa la clasificación de los leucocitos en base a su tamaño
luego de estar expuestos a un agente lítico, es decir que no refleja el volumen nativo u
original de las células, sino que el agente lítico lisa las células colapsando el citoplasma
alrededor del núcleo, produciendo una contracción diferencial. Las subpoblaciones que se
observan en el histograma reflejan por lo tanto, un tamaño celular relativo que depende
primariamente del tamaño nuclear. Cuando cada leucocito pasa a través de la abertura,
produce un cambio en la resistencia eléctrica que es proporcional a su volumen.

El análisis del diferencial de leucocitos (DIFF) de 3 partes incluye granulocitos,

linfocitos y células intermedias (MID). Los autoanalizadores que realizan un diferencial
de 5 partes discriminan neutrófilos, linfocitos, monocitos, eosinófilos y basófilos. La
nueva generación de analizadores ofrece un sexto parámetro, que es la enumeración de
glóbulos rojos nucleados (NRBC).
Para considerar que un histograma de leucocitos es válido, se debe observar una depresión
o valle entre cada una de las poblaciones. Un tamaño celular anormal o la presencia de
partículas anormales pueden causar patrones anómalos que disparen una alarma específica
para la región donde existe el patrón anormal.
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Histograma de WBC: Las células son clasificadas como
Neutrófilos, Linfocitos y Mixtas con discriminadores
generalmente fijos.
En la primera zona, a la izquierda, se separan los restos
celulares de los linfocitos; en la parte central se separan los
leucocitos de una población mixta de células intermedias
consistente en su mayoría en monocitos y eosinófilos además
de basófilos; y en la tercera parte se separan los
granulocitos.
Por lo tanto en estos equipos se debe realizar el diferencial
manual para identificar las células incluidas en la región
intermedia.

Analicemos algunos ejemplos:

El siguiente es un histograma que corresponde a una linfocitosis absoluta donde se

observa un pico muy marcado en la zona de linfocitos, pero hay que tener en cuenta que
este mismo histograma se puede observar en caso de neutropenia (linfocitosis relativa).
Rcto manual
9
WBC: 7.9x10 /l Cayados: 4%
LYM: +64.7% Neu:20%
MXD: 15.8% Li: 64%
NEUT: - 19.5% Mo: 4%
Histograma de Leucocitos
Eo: 5%
Ba: 0%
Linf Atip:13% Linfocitosis

El siguiente caso corresponde a una neutrofilia Neutrofilia

WBC: +23.8x109/l

LYM: 8.1%
MXD: 7.9%
NEUT:84.0%

Nota: Se observa un pico prominente

Diferencial Manual
en la zona de leucocitos grandes. En
NC: 8% Ne:77%
caso de linfopenia se observa una
Eo: 1%
curva similar
Ba: 0%
Li: 7% Mo: 7%
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Bajo la influencia del agente lítico, los monocitos, las células más grandes en SP, se hacen
menores que los neutrófilos. De manera que, en el histograma, se localizarán en la zona
central. Un patrón similar se puede observar en las eosinofilias.
Ambas situaciones se deben diferenciar con un recuento manual.
Histograma de WBC
WBC: 7.7x109/l Diferencial Manual Monocitosis
Bandas:8%
LYM: 13.2% Ne:37%
MXD: 37.7% Li:17%
NEUT: 49.1% Mo: 35%
Eo: 1%
Ba: 0%
Metamielocitos: 1%
Linf Atip:3%

Eosinófilos y basófilos también reducen su tamaño, apareciendo en una zona de menor

tamaño en relación al tamaño de los neutrófilos, debido a la contracción que sufren bajo la
influencia del reactivo de lisis. Como se mencionó anteriormente, en el histograma, se
localizan en la zona central donde también están presentes los monocitos. Ambas
situaciones se deben diferenciar con un recuento manual.

Diferencial
de de 5 partes
de 5 partes

o
El recuento diferencial de leucocitos derivado de los autoanalizadores de última
generación, determina 5 poblaciones: polimorfonucleares neutrófilos (incluidas las
bandas), eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos. Dependiendo de la tecnología
utilizada, van a enumerar o arrojar alarmas ante la presencia de células nucleadas como
eritroblastos o leucocitos inmaduros no clasificables dentro de los 5 grupos citados, para
que el operador las defina tras la observación del extendido de sangre periférica.

Gráficos de dispersión de puntos (Scatterplot)

Cualquiera sea la metodología utilizada por en annlizador, en este tipo de gráfico cada
célula individual es representada por un punto que refleja el volumen celular y las
características de la luz dispersada por cada célula. Dado que las células que pertenecen a
un mismo tipo presentan características similares, son graficadas en la misma región
formando una población o nube de puntos bien definida. Se pueden identificar así, clusters
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de células correspondientes a monocitos, eosinófilos, linfocitos y neutrófilos, basados en
su posición relativa. Para cuantificar los basófilos se generan diagramas de dispersión
separados que comparan las propiedades del volumen celular y la conductividad.
A través de discriminadores móviles se examinan y delimitan las distintas áreas entre las
diferentes poblaciones celulares. El desafío que deben enfrentar los analizadores, es
discriminar entre elementos celulares diferentes pero que caen en un área similar del
gráfico (por ejemplo linfocitos y glóbulos rojos nucleados). poblaciones pero que y se
generan alarmas específicas para anormalidades en las distintas regiones. De esta manera
vamos a obtener alarmas de sospecha (linfocitos variantes, granulocitos inmaduros, etc.),
alarmas definitivas (eosinofilia, monocitosis, etc.) o mensajes del tipo “Review slide” que
aparecen junto con los resultados y que deben ser confirmadas a través de la revisión
microscópica.

Scatterplot- Tecnología Coulter

3D data plot (WBC diferencial)

Utilizando la tecnología VCS (Volumen-

Conductividad-Dispersión de luz) los
contadores Coulter generan un gráfico de
puntos que representa el diferencial
leucocitario de 5 partes.

2D data plot (diferencial de WBC)

Gráfico de puntos en una muestra

normal identificando las 5 poblaciones.

Ubicación de poblaciones anormales: 1-Sospecha de blastos de neutrófilos

2- Sosecha de blastos de monocitos
3-Sospecha granulocitos inmaduros
4- Sospecha de blastos linfoides
5- Linfocitos variantes
6- eutrófilos envejecidos o dañados
7- Plaquetas gigantes
8- GR nucleados (NRBC)
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Scatterplot Tecnología Sysmex (Series XE y XN)
Ubicación de los diferentes tipos leucocitarios en el diagrama de dispersión de puntos

El diferencial se genera a través de la medición de la

dispersión frontal de la luz, la dispersión lateral y la
fluorescencia lateral.
La fluorescencia se representa en el “eje y”, y la luz
dispersada en el “x”.
Los puntos cerca de la base corresponden a restos
celulares.

Canal WBC/BASO

El recuento de basófilos deriva del canal WBC/BASO

en el cual los basófilos, al ser resistentes a los
reactivos líticos, conservan su tamaño y forma,
constituyendo un cluster de células grandes diferente
a otras células nucleadas cuya membrana es sensible al
agente lítico.

Promielocitos La información sobre las células mieloides inmaduras

deriva de las lecturas en el canal IMI (immature
myeloid information) y permite realizar un recuento
confiable de granulocitos inmaduros (promielocitos,
Mielocitos mielocitos y metamielocitos). Estos muestran mayor
fluorescencia que los neutrófilos y están
representados por puntos que aparecen encima de los
Metamielocitos neutrófilos, lo que demuestra la más alta
fluorescencia. Las células más maduras
(metamielocitos) están en la zona más cercana a los
neutrófilos

Scatterplot - Tecnología ADVIA

Los equipos de la línea ADVIA realizan el diferencial leucocitario analizando la dispersión
de la luz láser y la tinción de peroxidasa.
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Las células son coloreadas con un reactivo de peroxidasa y

analizadas de acuerdo al tamaño y la intensidad de la tinción.

Se utilizan reactivos líticos específicos para separar los

basófilos de las demás células nucleadas

Los basófilos son sustraidos del cluster linfocito/basófilo

en el canal de peroxidasa para calcular el número de
linfocitos.

Scatterplot-Tecnología de la línea Abbot

Estos analizadores utilizan la tecnología denominada
MAPSS(del inglés, Multiangle Polarized Scattergram
Separation) que significa separación mediante dispersión
lumínica polarizada en múltiples ángulos.
Para clasificar las subpoblaciones leucocitarias y obtener
las alertas morfológicas se utilizan distintos detectores
para medir la dispersión de la luz a distintos ángulos:
- 0 – 3° para el tamaño celular
- 10° para la complejidad interna
- 90ºpolarizado para la lobularidad y
-90ºdepolarizado para granularidad y la identificación
específica de eosinófilos.

Además, el analizador examina el área bajo la nube linfocitaria y por encima del umbral. Toda
partícula comprendida en esta zona es separada de los linfocitos mediante un umbral dinámico.En
esta región pueden aparecer los siguientes tipos de células: eritrocitos nucleados,
eritrocitos no hemolizados, plaquetas gigantes y agregados de plaquetas. La validación
interna del recuento óptico de WBC (WOC) y del recuento por impedancia (WIC) asegura
el correcto recuento de leucocitos aún en presencia de condiciones anormales como las
mencionadas anteriormente. La presencia de un agente lítico detergente y de un modo
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especial de análisis para glóbulos rojos resistentes a la lisis minimiza la interferencia
causada por estas células.

Nuevas perspectivas en la automatización.

Equipos automatizados para la realización y tinción de extendidos y digitalización de
imágenes

En las últimas décadas se han desarrollado sistemas que pueden realizar extendidos en
forma automática y llevar a cabo la tinción de los mismos con diferentes colorantes.
Estos sistemas se pueden integrar al contador hematológico para agilizar el flujo de
trabajo, fundamentalmente de laboratorios de hematología con un alto volumen de
muestras.

Entre los equipos diseñados para la realización (slide-maker) y coloración de extendidos

de sangre se encuentra el Sysmex SP-10™. Este sistema puede programarse para realizar
el extendido en forma refleja cuando alguno de los parámetros del CBC lo amerita, o para
que realice el extendido en todas las muestras una vez que fueron procesadas en el
contador hematológico. El ángulo del extensor cambia dependiendo del hematocrito de la
muestra, obteniéndose una película uniforme de sangre con una correcta monocapa de
células que facilita la observación del extendido. Al slide-maker se le puede acoplar un
módulo de tinción también automático que permite adaptar diferentes protocolos de
tinción para que cada laboratorio utilice el su elección.

El sistema CELL-DYN SMS (SlideMaker/Stainer)

de Abbott puede procesar más de 80 extendidos
por hora y permite programar 10 métodos
diferentes de coloración. El operador solo tiene que
cargar el tubo primario de muestra.

El Sysmex DI-60 IPS (Integrated

Slide Processing) permite integrar
el análisis del CBC, preparación y
coloración del extendido y la
digitalización de las imágenes con
la pre-clasificación de las células.
El microscopio del DI-60 escanéa el extendido coloreado, toma imágenes digitales e
identifica automáticamente las células realizando una pre-clasificación basada en
características medibles de las células.
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Las imágenes
son mostradas
en la pantalla y
el profesional
puede realizar
cambios en la
clasificación si
lo considera
necesario.

Morfología celular digital automatizada

En los últimos años se han desarrollado sistemas automáticos para el análisis del
diferencial leucocitario sobre el frotis de sangre periférica. Son sistemas que combinan la
miscroscopía con la digitalización de imágenes para producir un sistema automático de
análisis celular.
Entre estos equipos se encuentran los de la línea CellaVision® en sus diferentes versiones
DM96 en 2004 y DM1200 en 2010, diseñada para laboratorios grandes (introducida en
EEUU por Sysmex). Este sistema automatizado permite realizar automáticamente un
recuento diferencial preliminar sobre el extendido de sangre periférica u otros fluidos
corporales. El sistema escanéa el extendido con bajo aumento identificando los leucocitos
y luego toma fotografías a mayor aumento. Las imágenes son comparadas con una base de
datos y las células son preclasificadas de acuerdo al tipo de leucocito mediante una red
neuronal artificial (basada en características morfológicas de alrededor de 37.000
células). Para realizar la preclasificación de una célula determinada, el equipo la analiza
utilizando un algoritmo, teniendo en cuenta cientos de cálculos a partir de más de 100
aspectos morfológicos tales como coloración, tamaño, forma y textura de las células.Las
células son presentadas en la pantalla para que el operador confirme esta pre-clasificación
o reclasifique las células.
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Los extendidos que se

analizan en estos
sistemas pueden ser
realizados y
coloreados en forma
manual o en alguno de
los sitemas disponibles
para la realización y
coloración automática
de extendidos (slide-
makers).

Una nueva aplicación del CellaVision (Advanced RBC Application) permite realizar una pre-
caracterización de los eritrocitos en 17 categorias morfológicas que agiliza el flujo de
trabajo y ofrece una nueva manera de revisar y analizar la morfología eritrocitaria.
En la figura siguiente se muestra la morfología de los eritrocitos con la posibilidad de
seleccionar un tipo morfológico específico, por ej. aquellos eritrocitos clasificados como
acantocitos como se muestra en la imagen inferior. Permite además magnificar y
reclasificar células (Fuente: www.cellavision.com).
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Figura: ejemplo de una imagen tomada en el Cella

Vision DM96 mostrando una grilla que facilita la
estimación del número de plaquetas.

(Más información en video disponible en:

http://www.cellavision.com/?id=5223)

Otro sistema, el HemaCAM, fue desarrollado por científicos del Instituto Fraunhofer
(Erlangen, Germany). El fundamento de este sistema diagnóstico es una base de datos en
la que cada célula se cargó manualmente. Un algoritmo computarizado usa estos datos para
analizar y precaracterizar cada célula analizada en el slide. Cada célula anormal es
documentada individualmente y el profesional es quien chequea, verifica y acepta o no esta
reclasificación.

Otro equipo para el análisis digital automático de células es el Nextslide Digital Review
Network (Nextslide). Este sistema fue co-desarrollado por Nextslide Imaging (Cleveland,
Ohio) y el Departamento de Laboratorios Hospitalarios de la Universidad del
Massachussets Memorial Medical Center. En forma similar a los sistemas descritos
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anteriormente, consiste en un escaner de alta resolución acoplado a un procesador de
imágenes que identifica y clasifica los leucocitos. Escanea el extendido, toma fotografías,
tiene la posibilidad de cargar los resultados del CBC para optimizar la revisión. Permite
escanear 26 extendidos por hora. Una vez completado el escaneo, se cargan las imágenes
de alta resolución (3100) al centro de datos y la aplicación de procesamiento de imágenes
analiza cada imagen y clasifica cada leucocito.
El profesional examina 110 imágenes de leucocitos y un sector del extendido para evaluar
la morfología de la serie roja y las PLT, y estimar el recuento de PLT del mismo modo que
se hace en una revisión microscópica manual. Las imágenes de los leucocitos son
presentadas al revisor en una galería agrupadas por clases. El revisor confirma la
clasificación y anota las anormalidades morfológicas si es que existen.
El profesional que revisa el
extendido puede ajustar el brillo y el
zoom cuando sea necesario. El zoom
se usa en forma similar al ajuste de
objetivos en el microscopio manual.
Los resultados del CBC pueden estar
disponibles en el módulo de validación
para facilitar el proceso de revisión.
Las ventajas de estos sistemas que
intentan imitar el ojo humano
incluyen entre otras, un mejor
tiempo de respuesta de los
resultados, disminuye la subjetividad
en la selección del área adecuada del
frotis para realizar el recuento, y
permite guardar las imágenes para
una posterior discusión del caso o
docencia.
Nextslide, an Automated Digital Imaging System—Yu et al.
ch Pathol Lab Med 2012

Sin embargo esta tecnología no está al alcance de todos los laboratorios de análisis
clínicos, por tal motivo no será objeto de estudio de este curso donde nos avocaremos a
las tecnologías disponibles en la mayoría de los laboratorios.