

Historia del microscopio

Antes de la invención del microscopio ya estaba ampliamente extendido el
uso de lentes que permitían observar una imagen de forma aumentada y
que hoy en día se conocen como lupas. Las propiedades de este tipo de
lentes fueron detalladamente estudiadas por Roger Bacon en el siglo XIII.
No fue hasta finales del siglo XVI cuando Zacharias Janssen, un fabricante
de anteojos holandés, fabricó el primer microscopio compuesto. Este primer
microscopio consistía en dos lentes montadas en un tubo (de aquí el
nombre de microscopio compuesto) y permitía amplificar una imagen hasta
9 veces. Esto representó una mejora significativa respecto a los aumentos
obtenidos mediante lupas, también conocidas como microscopios simples.
Aproximadamente durante estas mismas fechas Galileo Galilei también
fabricó un microscopio combinando una lente convexa y una cóncava. Es
por eso que todavía hoy se debate entre los historiadores quién fue el
verdadero inventor del microscopio.
Sí está claro, sin embargo, que Giovanni Faber fue quien en 1625 utilizó por
primera vez el término microscopio para referirse a este nuevo invento.
Durante la segunda mitad del siglo XVII empiezan a aparecer las primeras
obras científicas documentando observaciones llevadas a cabo con el
microscopio. La primera de estas obras se tituló Micrographia, fue escrita por
Robert Hooke y publicada en 1665. En ella se pueden encontrar
ilustraciones de plantas e insectos observados a través del microscopio.

Ramón y
Cajal, conocido por desarrollar la doctrina de la neurona, con uno de sus microscopios

Otro gran personaje de este período es Antonie van Leeuwenhoek,

considerado el padre de la microbiología. Este comerciante y científico
 

holandés mejoró la calidad de los microscopios existentes hasta el momento

mediante la fabricación de mejores lentes. Esto le permitió descubrir las
bacterias y los glóbulos rojos en la sangre.
La tecnología del microscopio fue evolucionando y perfeccionándose
durante los siglos XVIII y XIX hasta resultar en el tipo de microscopio que
utilizamos hoy en día. Uno de los fabricantes de microscopios más
importantes del siglo XIX fue Carl Zeiss. Las innovaciones de su empresa
modernizaron el microscopio incorporando las teorías de óptica
desarrolladas por el físico Ernst Abbe.
Los avances científicos del siglo XX permitieron desarrollar nuevas técnicas
de microscopía resultando en nuevos tipos de microscopios entre los que
hay que destacar el microscopio electrónico.
Cronología de la evolución del
microscopio

Inicios – Producción de lentes

2000 a. C. Se fabrican en el imperio asirio las lentes más antiguas de las
cuales se tiene conocimiento.
500 a. C. Los griegos y los romanos utilizan lentes para concentrar los rayos
de luz en un punto y poder hacer fuego.
1021: Ibn al-Haytham (Alhazen) describe las propiedades de las lentes de
aumento libro de óptica.
1267 Roger Bacon documenta los resultados de sus experimentos con
lentes.
1285 Se construyen en Italia las primeras gafas con lentes convergentes.
1520 Se construyen las primeras gafas con lentes cóncavas para corregir la
miopía.

Siglo XVI – Invención del microscopio

compuesto
1590 Zacharias Janssen y su padre Hans Martens, fabricantes de anteojos
holandeses, construyen el primer microscopio compuesto.
1608 Hans Lippershey registra la primera patente del telescopio, construido
mediante una lente convexa y una cóncava. Según algunas fuentes podría
haber inventado también el microscopio antes que Zacharias Janssen.
 

1609 Galileo Galilei construye un microscopio compuesto, al que llamó

occhiolino, basándose en sus conocimientos de construcción de
telescopios. Utilizó para ello una lente cóncava y una convexa.
1619 Cornelius Drebbel presenta su versión de microscopio compuesto
utilizando dos lentes convexas.
1625 Giovanni Faber, miembro de la Academia Nacional de los Linces en
Roma, acuña la palabra microscopio para referirse al nuevo invento.
1625 Francesco Stelluti y Federico Cesi publican por primera vez
ilustraciones de observaciones realizadas con un microscopio.
1645 Antonius Maria Schyrleus de Rheita acuña los términos Objetivo y
Ocular. También publica “Oculus Enoch et Aliae sive Radius Sidero
Mysticus” donde describe conceptualmente el primer microscopio binocular.
1645 Eustachio Divino construye un microscopio equipado con un tubo de
longitud regulable entre ocular y objetivo que permite enfocar la muestra y
modificar el aumento.
1664 Henry Power construye un microscopio apoyado sobre una lámina de
vidrio para poder iluminar la muestra desde la parte inferior. Es el primer
intento de microscopio de luz transmitida.
1665 Robert Hooke publica su libro Micrographia, donde incluye
ilustraciones de sus observaciones realizadas con un microscopio
compuesto. Hooke acuñó el término célula para referirse a las estructuras
que observó en una muestra de corcho.
1672 Johann Christoph Sturm construye el primer objetivo con dos lentes.
1673 Johannes Hevelius incorpora un tornillo micrométrico en el
microscopio para poder enfocar la muestra.
1674 Antonie van Leeuwenhoek desarrolla una nueva técnica de fabricación
de lentes que le permite alcanzar aumentos de 200x con un microscopio
simple. La publicación de sus observaciones inician la era de la
microbiología.
1678 Cherubin d’Orleans construye el primer microscopio binocular
combinando dos microscopios monoculares. Se basó probablemente en las
indicaciones publicadas por Antonius Maria Schyrleus de Rheita en 1645.
1678 Samuel Joosten van Musschenbroek construye para su microscopio
un mecanismo para regular la cantidad de luz que atraviesa la muestra.
1690 Christiaan Huygens publica su ‘Tratado sobre la luz’ donde expone su
teoría ondulatoria de la luz. Huygens también desarrolla el primer ocular
compuesto para microscopio (ocular de Huygens).
1691 Filippo Bonanni introduce el portaobjetos y describe el concepto en su
libro “Micrographia Curiosa”
Siglo XVIII – Desarrollo del microscopio
1725 Edmund Culpeper desarrolla un tipo de microscopio sujetado con un
trípode que permite utilizarlo con luz transmitida así como con luz reflejada.
 

Este diseño fue muy popular entre distintos fabricantes durante el siguiente
siglo.
1730 Chester Moore Hall crea la primera combinación de lentes libres de
aberración cromática y esférica. Su descubrimiento es aplicado a los
telescopios y a las gafas pero no puede ser extrapolado al microscopio
debido a dificultades asociadas con la producción de lentes pequeñas.
1746 Georg Adams publica su obra ‘Micrographia Illustrata’ en la que
describe el microscopio y presenta el concepto del revólver para cambiar el
objetivo.
1770 Jan van Deyl y su hijo Harmanus construyen el primer objetivo
acromático para microscopio.
1776 Jeremiah Sisson construye el primer revólver para objetivos.
1810 Joseph Jackson Lister descubre que existe una relación entre el
ángulo de apertura del objetivo y la resolución de imagen obtenida.
1830 Joseph Jackson Lister construye las primeras lentes acromáticas para
microscopio que consiguen corregir también la aberración esférica.
1829 William Nicol inventa el prisma polarizador que permite desarrollar el
microscopio de luz polarizada.
1834 William Henry Fox Talbot construye el primer microscopio de luz
polarizada.
1839 Se funda la ‘Microscopical Society of London’, conocida a partir de
1866 como ‘Royal Microscopical Society’.
1840 Charles Louis Chevalier empieza a experimentar con la técnica del
daguerrotipo aplicada a un microscopio, sentando así las bases de la
microfotografía.
1845 Alfred Donné y Léon Foucault publican el primer libro que incluye
fotografías tomadas con un microscopio mediante daguerrotipo.
1846 Carl Zeiss abre su taller de instrumentos ópticos en Jena. Con los
años su empresa se convierte en una de las fabricantes de microscopios
más importante del mundo.
1847 Giovanni Battista Amici inventa los objetivos de inmersión, mejorando
así la resolución de los microscopios.
1849 Carl Kellner funda el instituto óptico en Wetzlar. Este instituto fue el
precursor de la empresa Leitz, fundada por Ernst Leitz en 1869.
1850 John Lawrence Smith inventa el microscopio invertido.
1851 John Leonard Riddell construye el primer microscopio binocular que
permite observar la muestra con dos oculares y un solo objetivo.
1872 Ernst Abbe desarrolla la teoría de la óptica moderna. Esta teoría
permite relacionar la resolución del microscopio con la longitud de onda de
la luz. Esto permite a Ernst Abbe calcular la máxima resolución alcanzable
con el microscopio óptico.
1878 Ernst Abbe acuña y define el término ‘apertura numérica’ para
caracterizar los objetivos.
 

1884 Se funda la empresa Schott AG que produce lentes de alta calidad

para los microscopios de Carl Zeiss.
1893 August Köhler desarrolla el tipo de iluminación Köhler que permite
iluminar la muestra de forma uniforme mejorando así la calidad de la imagen
de los microscopios.
Siglo XX – Técnicas modernas de microscopía
1902 Richard Adolf Zsigmondy inventa el ultramicroscopio. Este tipo de
microscopio permite observar muestras con mejores resoluciones que las
del microscopio óptico.
1904 August Köhler y Moritz von Rohr desarrollan el microscopio de luz
ultravioleta.
1913 Leitz empieza a comercializar el primer microscopio binocular
plenamente funcional desarrollado por Felix Jentzsch.
1931 Ernst Ruska, junto con el ingeniero Max Knoll construye el primer
prototipo del microscopio electrónico de transmisión.
1935 Frits Zernike inventa el microscopio de contraste de fases que permite
observar muestras biológicas transparentes. En 1953 recibe el premio Nobel
de Física por este invento.
1937 Manfred von Ardenne inventa el microscopio electrónico de barrido.
1955 George Nomarski desarrolla la microscopía de contraste de
interferencia diferencial. Esta técnica es ampliamente utilizada para
observar muestras biológicas con vida.
1957 Marvin Minsky patenta el microscopio confocal.
1981 Gerd Binnig y Heinrich Rohrer inventan el microscopio de efecto túnel
que permite observar superfícies a escalas atómicas. En 1986 recibieron el
premio Nobel de Física junto con Ernst Ruska.
1982 La empresa Carl Zeiss empieza a comercializar el primer microscopio
confocal láser de barrido.
Biografía de Zacharias Janssen
Zacharias Janssen fue un fabricante de lentes holandés que es considerado
uno de los posibles inventores del microscopio. Aunque distintas fuentes
citan a Zacharias Janssen como verdadero inventor del microscopio, existen
otros personajes del mismo período que han sido asociados con el invento,
por ejemplo, Hans Lippershey o Galileo Galilei.
 

Retrato de Zacharias Janssen

Vida y actividades profesionales

Zacharias Janssen nació en La Haya en algún momento entre 1580 y 1588.
Algunos de los registros locales parecen indicar que la fecha más probable
de nacimiento fue en 1585. Creció en la ciudad de Middelburg, la segunda
ciudad más importante de los Países Bajos en aquella época. Fue allí donde
empezó a fabricar lentes tras aprender el oficio de su padre, Hans Martens.
También en Middelburg desarrolló sus primeras actividades comerciales
como vendedor ambulante. Janssen se hizo un nombre en esta época como
falsificador de todo tipo de moneda, cosa que le generó distintos conflictos
con la justicia e incluso una condena a pena de muerte de la que pudo
escapar.
En 1610 se casó con su primera mujer, Catharina de Haene. Dos años
después, en 1612, tuvieron un hijo al que llamaron Johannes Zachariassen.
A partir de 1615 Zacharias Janssen se hizo cargo también de los dos hijos
de Lowys Lowyssen, un fabricante de anteojos de la ciudad. Existe la
posibilidad de que Zacharias Janssen empezara en realidad a practicar el
oficio de fabricante de lentes tras heredar también de Lowys Lowyssen las
herramientas necesarias para desarrollar esta actividad.
En 1618 Zacharias Janssen tuvo que mudarse junto con su familia a
Arnemuiden después de que su actividad como falsificador de moneda fuera
descubierta por las autoridades. El mismo hecho se repitió en 1619 y la
familia se trasladó de nuevo a Middelburg.
Su primera mujer murió en 1623 y Zacharias Janssen se casó de nuevo en
1624 con Anna Couget de Antwerp. A partir de 1626 vivieron en Amsterdam
donde Zacharias Janssen siguió practicando el oficio de fabricante de lentes
hasta su muerte. En 1628 tuvo de nuevo problemas con la justicia por
 

impago de los intereses de un préstamo. Este proceso terminó con

Zacharias Janssen declarándose en bancarrota y con la subasta de todos
sus bienes. Según las fuentes más fiables Zacharias Janssen murió en
Amsterdam en 1632, sin embargo, existen documentos que afirman que
vivió hasta 1638.
La invención del microscopio
Algunas pruebas documentales parecen indicar que Zacharias Janssen
podría ser el inventor del microscopio. Sin embargo, la historia del origen del
microscopio está llena de contradicciones, testimonios de dudosa
credibilidad y vacíos documentales. Es por esto que todavía hoy es un tema
controvertido entre historiadores.
Según la versión que reconoce Zacharias Janssen como inventor del
microscopio compuesto, este invento se produjo en 1590, aunque la fecha
1595 es también citada a menudo por otras fuentes.
Estas afirmaciones se basan en unas cartas entre el diplomático holandés
Willem Boreel y el médico del rey de Francia. En una de estas cartas,
Willem Boreel describe las características del microscopio y afirma que tuvo
conocimiento del invento gracias a una carta que recibió de Zacharias
Janssen a principios de la década de 1590. Según esta versión, Zacharias
Janssen era un adolescente cuando construyó el primer microscopio y, por
lo tanto, parece plausible pensar que su padre, Hans Martens, también
estuvo involucrado en la invención.
Por aquel entonces padre e hijo trabajaban como fabricantes de lentes y
anteojos en Middelburg. En la misma ciudad vivía también Hans Lippershey,
otro fabricante de lentes que registró la primera patente de invención del
telescopio y que según algunas versiones sería el verdadero inventor del
microscopio.
En algunas ocasiones se ha atribuido también a Zacharias Janssen la
invención del telescopio. Aunque está claro que el telescopio fue inventado
en los Países Bajos en algún momento a principios del siglo XVII, su
verdadero inventor, al igual que en el caso del microscopio, es un tema de
debate.
El microscopio de Zacharias Janssen
El microscopio inventado por Zacharias Janssen era una versión muy
rudimentaria en comparación con el microscopio que utilizamos
actualmente. El invento de Zacharias Janssen consistía en dos lentes
montadas dentro de un tubo. Era posible modificar la longitud tubo y de esta
forma variar la distancia entre lentes, cosa que resultaba en un distinto
aumento. Con este primer microscopio era posible obtener aumentos de
entre 3x y 9x.
 

Reproducción
del microscopio de Zacharias Janssen

El aumento obtenido con este primer microscopio estaba seriamente

limitado por la calidad de las lentes. En primer lugar no existían técnicas
avanzadas para producir vidrio de alta calidad. Además, no había
conocimiento sobre los fenómenos de aberración de la luz. Estos efectos se
multiplicaban al combinar dos lentes de modo que el aumento total posible
manteniendo una nitidez de imagen aceptable era muy reducido. Sin
embargo, el microscopio de Zacharias Janssen fue muy importante porque
demostró que era posible conseguir aumentos superiores a los de una sola
lente mediante la combinación de distintas lentes.

Partes del microscopio

 Objetivo
 Ocular
 Revólver
 Portaobjetos
 Base
El objetivo en un microscopio
El objetivo es el elemento más importante y complejo del microscopio
óptico. Es importante porque en el objetivo es donde se produce la mayor
parte del aumento aportado por el microscopio. Su complejidad radica en el
hecho de que para cumplir con su función necesita distintas lentes de alta
calidad y precisión.
 

Interior
de un objetivo de microscopio (Zeiss Microscopy)
La imagen obtenida una vez los rayos de luz han atravesado el objetivo se
denomina imagen real. Estos rayos de luz atraviesan a continuación el
ocular, dando lugar a una imagen virtual que es observada por el usuario
del microscopio.
Habitualmente los microscopios vienen equipados con 3 o 4 objetivos, cada
uno con un aumento distinto y que se puede seleccionar gracias al revólver.
Los microscopios utilizados en ámbitos profesionales pueden llegar a tener
5 o 6 objetivos en un solo revólver.
Características de un objetivo
Los objetivos de un microscopio se pueden caracterizar mediante su
número de aumento y su apertura numérica. El aumento de un objetivo es la
relación entre el tamaño de la imagen real y el tamaño del objeto observado
en realidad. Estas dos magnitudes pueden observarse en la siguiente
imagen.
 

El aumento de un objetivo suele variar entre 4x y 100x, si bien es cierto que

existen objetivos de alta calidad que pueden llegar a 250x. Al multiplicar
este aumento con el aumento aportado por el ocular se obtiene el aumento
total del microscopio.
El otro parámetro importante es la apertura numérica. Este parámetro se
puede entender como el tamaño del cono a través del cual llega luz al
objetivo. Es decir, los objetivos con una apertura numérica baja tienen un
cono de entrada de luz más pequeño que los objetivos con una apertura
numérica alta.

Objetivo de baja apertura numérica

 

Objetivo de alta apertura numérica

La definición exacta de la apertura numérica tiene en cuenta el tamaño del

cono previamente descrito así como el índice de refracción del medio a
través del cual se observa la muestra. Sin embargo, el motivo por el cual la
apertura numérica es importante es porque está directamente relacionada
con la resolución obtenida por el objetivo.
La resolución de un objetivo depende de la longitud de onda de la luz y de la
apertura numérica del objetivo. La relación exacta entre estos parámetros
es la siguiente:

Aplicando esta fórmula se puede deducir que mediante un objetivo de alta

apertura numérica se pueden apreciar más detalles que con un objetivo de
baja apertura numérica.
Diferencia entre objetivos secos y objetivos de
inmersión
Existen dos tipos básicos de objetivos: los objetivos secos y los objetivos de
inmersión. Estos dos tipos de objetivos se diferencian en función del medio
situado entre la muestra y la lente del objetivo. En el caso de los objetivos
secos, no hay ningún medio entre la muestra y el objetivo aparte del aire.
Los objetivos de inmersión, en cambio, están diseñados para observar la
 

muestra a través de una capa de medio de inmersión que normalmente

consiste en aceite. Esto significa que es necesario colocar la cantidad justa
de aceite entre el cubreobjetos que protege la muestra y la lente del
objetivo.
La ventaja principal de utilizar objetivos de inmersión es que la luz que llega
al objetivo no necesita atravesar el aire. Esto se traduce en un aumento en
la calidad de imagen ya que reduce la refracción de la luz incidente. En
consecuencia, los objetivos de inmersión son utilizados en aplicaciones
donde se requiere un gran poder de aumento y alta resolución.

Objetivo seco

Objetivo de inmersión
 

Los objetivos secos tienen una apertura numérica baja. El máximo valor de
apertura numérica que teóricamente puede alcanzar un objetivo seco es
1.0. Sin embargo, debido a limitaciones prácticas no es posible fabricar un
objetivo seco con una apertura numérica superior a 0.95.
Con la ayuda de los aceites de inmersión es posible alcanzar una apertura
numérica alrededor de 1.4. Esto supone una mejora sustancial en términos
de resolución obtenida. Los máximos aumentos que alcanza el microscopio
óptico se obtienen, por lo tanto, mediante objetivos de inmersión.
Nomenclatura de los objetivos
Las características del objetivo están siempre inscritas en su lateral. En
general, los fabricantes de objetivos de microscopio siguen un formato
estándar para indicar estas características. Esto permite reconocer
inmediatamente cualquier parámetro del objetivo independientemente del
fabricante.

Nomenclatura estándar del objetivo (Zeiss Microscopy)

Empezando desde arriba, las indicaciones inscritas en el objetivo son las

siguientes:

Nombre del fabricante: Zeiss, Olympus, Leica, Nikon, etc.

Correcciones ópticas: Indicaciones acerca del tipo de lentes utilizadas en
el objetivo para corregir las aberraciones ópticas. Existe una gran variedad
 

de opciones en este punto, la nomenclatura específica puede variar en

función del fabricante.
Aumento: Capacidad de aumento del objetivo, es decir, relación entre los
tamaños de la imagen real y el objeto real.
Apertura numérica: Indicación del tamaño del cono de luz incidente al
objetivo.
Longitud del tubo: Este número indica la distancia en milímetros que debe
haber entre el objetivo y el ocular para que la imagen se forme
correctamente. El símbolo infinito se utiliza para indicar que los rayos son
completamente paralelos al salir del objetivo.
Espesor del cubreobjetos: Este número indica el espesor en milímetros
del cubreobjetos que debe utilizarse para minimizar las aberraciones
ópticas.
Código de color: Mediante un código de colores suele indicarse el
aumento proporcionado por el objetivo. La mayoría de los fabricantes siguen
el estándar incluido en la siguiente sección de este artículo. Adicionalmente,
en el caso de los objetivos de inmersión, un segundo color indica el medio
de inmersión que debe utilizarse.
Código de colores de los objetivos
El código de colores es muy útil para identificar de forma inmediata el
aumento proporcionado por el objetivo. Cada color se corresponde a un
aumento determinado según está indicado en la siguiente imagen.

En el caso de los objetivos

de inmersión existe también un código de colores para indicar el medio de
inmersión que debe utilizarse. En este caso existen solo cuatro opciones
incluidas en la siguiente imagen.
 

El ocular del microscopio

El ocular de un microscopio es, junto con el objetivo, uno de los elementos
esenciales del sistema óptico. La función del ocular es magnificar la imagen
de la muestra que ha sido previamente aumentada por el objetivo. Es a
través del ocular que el usuario puede finalmente observar la muestra.
El ocular se encuentra acoplado al tubo, que es la pieza que conduce los
rayos de luz provenientes de la muestra desde el objetivo hacia el ocular.
Habitualmente es un elemento intercambiable, de modo que pueden
utilizarse oculares con distinto aumento para modificar el aumento total del
microscopio. En los microscopios profesionales su posición puede ajustarse
con un anillo giratorio para corregir los defectos de visión del usuario.
Aumento microscopio = Aumento objetivo × Aumento ocular
El aumento del ocular es en general inferior al del objetivo. Los aumentos
más habituales son 5x, 10x, 15x y 20x. El aumento proporcionado por un
ocular suele estar inscrito en su parte lateral.
 

Ocular
intercambiable de un microscopio

Mediante las lentes del ocular, la imagen real que ha sido generada con el
objetivo es otra vez aumentada dando así lugar a la imagen virtual que es
observada por el usuario del microscopio. Este principio de funcionamiento
está representado esquemáticamente en la siguiente imagen.
 

Aumento y resolución de un ocular

El aumento total del microscopio se obtiene multiplicando el aumento del
ocular por el aumento del objetivo. Sin embargo, no todas las
combinaciones de ocular y objetivo que resultan en el mismo aumento
alcanzan la misma resolución.
Esto es debido al hecho que la resolución depende de la apertura numérica
del objetivo y no directamente de su aumento. Por ejemplo, un objetivo de
40x (con apertura numérica igual a 0.65) combinado con un ocular de 10x
alcanza el mismo aumento que un objetivo de 20x (con apertura numérica
igual a 0.4) combinado con un ocular 20x. En los dos casos el aumento total
es de 400x. Sin embargo, el objetivo de la primera opción tiene mayor
apertura numérica. Esto implica que la resolución de imagen será mejor en
la primera opción que en la segunda.
Tipos de oculares
Los elementos básicos dentro de un ocular son como mínimo dos lentes y
un diafragma. Las dos lentes son necesarias ya que con una sola lente
sería imposible corregir la aberración cromática. La lente situada en la parte
superior, es decir, cerca del ojo, se denomina lente ocular. La lente situada
en la parte inferior se denomina lente colectora o de campo.
El diafragma está situado en el plano focal del ocular y su función es
minimizar la reflexiones de luz producidas por la misma superficie del
ocular.
En función de la disposición de estos tres elementos en el interior del ocular
puede distinguirse entre dos tipos de oculares: oculares positivos y oculares
negativos.
 Oculares positivos: El diafragma está situado debajo de las dos
lentes. El ocular más común con esta disposición es el ocular de
Ramsden.
 Oculares negativos: El diafragma está situado entre las dos lentes. El
ocular más común con esta disposición es el ocular de Huygens.
 

Otros tipos de oculares cuyo uso es habitual son el ocular Kellner, el ocular
Plössl o simétrico y el ocular ortoscópico de Abbe.
La diferencia entre los distintos oculares radica en la técnica utilizada para
corregir las aberraciones ópticas. Muchas veces, el tipo de ocular utilizado
debe elegirse en función del objetivo del microscopio. Por este motivo, los
microscopios de alta calidad tienen objetivos y oculares diseñados para que
su combinación minimice las aberraciones introducidas.
Revólver de un microscopio
El revólver es una parte del microscopio óptico que da versatilidad al
instrumento y facilita su uso. La función del revólver es permitir cambiar
fácilmente el objetivo utilizado para observar la muestra. Normalmente se
pueden montar tres o cuatro objetivos en un revólver de modo que esta
pieza nos permitirá observar la muestra con tres o cuatro aumentos
distintos.
Todos los microscopios profesionales vienen equipados con un revólver.
Aun así es verdad que no es una pieza imprescindible y que existen muchos
microscopios básicos sin revólver. En estos casos el microscopio está
equipado con un solo objetivo que puede desenroscarse y sustituirse por
otro en caso que sea necesario cambiar el aumento.
Funcionamiento
Un revólver para microscopio suele tener entre tres y cuatro orificios para
colocar objetivos. En cada orificio puede acoplarse un objetivo de distinto
aumento. El revólver completo puede girar en torno a un eje de modo que
permite seleccionar el objetivo adecuado.
Existen dos tipos principales de revólveres para microscopio, los
de objetivo fijo y los de objetivo intercambiable. En los revólveres de
objetivo fijo los objetivos y el revólver forman una sola pieza. Este es el caso
más habitual en los microscopios más básicos. Estos microscopios permiten
utilizar objetivos de distinto aumento pero no permiten desenroscar los
objetivos para instalar nuevos objetivos con características distintas.
 

Los revólveres de objetivo intercambiable son los más avanzados. Esta es

la opción más adecuada para una mayor versatilidad. Con un revólver de
objetivo intercambiable podemos instalar en él los objetivos que más nos
convengan para un tipo determinado de muestras. Ya sean objetivos de
bajo aumento, alto aumento o de inmersión.

Revólver de un microscopio en detalle

Historia
Los primeros microscopios compuestos no disponían de revólver. Estos
microscopios estaban equipados con un solo objetivo y tenían, por lo tanto,
un aumento determinado y fijo.

En 1746 George Adams describe teóricamente el concepto de un revólver

para microscopio en su libro Micrographia Illustrata. Treinta años más tarde,
en 1776, Jeremiah Sisson construye por primera vez un revólver para
microscopios.
A partir de este momento las ventajas de esta pieza se hacen evidentes y
empieza a incorporarse en todos los nuevos microscopios. A día de hoy es
una pieza esencial de los microscopios profesionales.

Portaobjetos para microscopio

El portaobjetos de laboratorio es una pieza clave para observar
una muestra en el microscopio. Un portaobjetos es una lámina
rectangular de vidrio transparentesobre la cual se coloca la muestra que
deberá ser observada con el microscopio.
Las dimensiones de un portaobjetos estandarizadas según la norma DIN
ISO 8037-1 son de 76 x 26 mm. Su espesor suele ser de entre 1 y 1.5 mm.
Aún así, pueden encontrarse portaobjetos con dimensiones distintas para
 

algunas aplicaciones específicas. Por ejemplo, es frecuente encontrar

portaobjetos de 76 x 52 mm o 48 x 28 mm.
Los portaobjetos suelen fabricarse con vidrio sodocálcico o vidrio
borosilicatado.

Tipos de portaobjetos
Existen algunas variaciones en las características del portaobjetos
tradicional que dan lugar a distintos tipos de portaobjetos.
El tipo más sencillo de portaobjetos es simplemente rectangular y de vidrio
transparente. A partir de esta versión básica se fabrican también
portaobjetos con las esquinas esmeriladas a 45º. Esto facilita su
manipulación y reduce el riesgo de cortarse. Existen un tipo de platinas que
mantienen fijo el portaobjetos con la ayuda de un muelle. Para este tipo de
platinas es adecuado utilizar portaobjetos con las esquinas esmeriladas.
También existen portaobjetos con banda mate. En estos portaobjetos una
parte del vidrio en un extremo es semisatinado. De este modo puede
escribirse con bolígrafo el nombre de la muestra.
Algunos portaobjetos están divididos en compartimentos para poder
colocar en ellos más de una muestra. Estos portaobjetos se utilizan para
observar más de una muestra en el microscopio sin necesidad de cambiar
el portaobjetos.
Existen portaobjetos diseñados con una superficie cóncava donde se
coloca la muestra. Estos portaobjetos son útiles para observar muestras con
un poco de espesor. También son utilizados para mantener la muestra
hidratada con algún tipo de líquido.
Para ámbitos profesionales pueden encontrarse también portaobjetos que
tienen grabada una cuadrícula. Esto es útil para calibrar y medir fácilmente
el tamaño de las muestras observadas.
 

Cómo utilizar el portaobjetos

Un portaobjetos debe utilizarse conjuntamente con un cubreobjetos. El
cubreobjetos es también una lámina de vidrio pero con mucho menos
espesor y, por lo tanto, mucho más frágil. Las dimensiones más habituales
del cubreobjetos son de 18 x 18 mm.
En primer lugar se coloca la muestra sobre el portaobjetos y a continuación
esta se recubre con el cubreobjetos. Esta disposición permite que
el espesor de la muestra debajo del cubreobjetos sea uniforme. De esta
forma se facilita el enfoque de la muestra.
Gracias al portaobjetos y al cubreobjetos también se protege la muestra de
una posible contaminación. También se impide dañar el objetivo si por error
este se acerca demasiado a la muestra.

En algunos casos es posible sellar el contacto entre el cubreobjetos y el

portaobjetos. Esto se utiliza para guardar la muestra y permitir su
observación de nuevo en un punto futuro.

Una vez la muestra está preparada en el portaobjetos, este debe colocarse

en la platina de modo que la luz del foco ilumine la muestra. A continuación
pueden utilizarse los tornillos macrométrico y micrométrico para ajustar
la posición de la platina y así enfocar la muestra.
Almacenamiento de portaobjetos
Existen cajas diseñadas para guardar portaobjetos, ya sean para preparar
nuevas muestras o para guardar muestras que han sido fijadas en el
portaobjetos.

Gracias a la definición de unas dimensiones estándar internacionales del

portaobjetos (DIN ISO 8037-1) es posible comprar estas cajas de distintos
fabricantes. Solo hay que vigilar que las cajas hayan sido fabricadas con las
dimensiones estándar.
 

Base del microscopio

Base del microscopio

La base del microscopio es unos de los elementos del sistema mecánico
cuya función es dar estabilidad al microscopio. Para cumplir con esta
función la base suele ser la parte más pesada del microscopio.
La base está conectada estructuralmente al brazo del microscopio. Además,
sobre la base suele estar montada también la fuente de luz que ilumina la
muestra. Esta fuente puede ser directamente un foco de luz o bien un
pequeño espejo que refleja la luz proveniente de otro punto. Es habitual, por
lo tanto, encontrar también en la base un interruptor para encender o apagar
la fuente de luz. Además puede encontrarse también una rueda giratoria
para regular la cantidad de luz emitida por la fuente de luz.
En los microscopios actuales la forma más habitual de la base es
simplemente rectangular. Sin embargo, a lo largo de la historia de los
microscopios ha habido distintos tipos de base que han sido utilizados.
Durante mucho tiempo, un diseño muy habitual consistía en montar el
microscopio en una base en forma de trípode. También ha habido
microscopios con la base en forma de Y. Otra alternativa muy habitual,
 

sobretodo en microscopios sencillos de tipo monocular, son las bases en

forma de herradura.

Base en forma de trípode

Base en forma de Y (Fuente: Andy Mabbett)

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Base en forma de U (Fuente: Zeiss Microscopy)

Base del microscopio estereoscópico

En el caso los microscopios estereoscópicos la disposición del sistema
mecánico es distinta que en los microscopios convencionales. Los
microscopios estereoscópicos son microscopios de luz reflejada. Esto
implica que no es necesario iluminar la muestra por debajo como en el caso
de los microscopios de luz transmitida.
Por este motivo, en los microscopios estereoscópicos la base y la platina
son el mismo elemento. En estos casos, la base/platina está situada en la
parte inferior del microscopio y tiene suficiente peso para dar estabilidad al
resto de la estructura.

Base del microscopio invertido

En el microscopio invertido la base también es el elemento que le da
estabilidad. Sin embargo, en este tipo de microscopios el foco de luz nunca
está montado en la base ya que la muestra es iluminada desde la parte
superior. Si que es habitual, en cambio, que en este tipo de microscopios el
revólver con los objetivos esté montado en la base.
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Base del microscopio

invertido (Fuente: Zeiss Microscopy)

Tipos de microscopios
Existen distintos tipos de microscopios y también muchos criterios para
clasificarlos. En este artículo te presentamos una clasificación básica para
identificar los tipos de microscopía más relevantes que existen.

Tabla de contenidos
 Microscopios según el sistema de iluminación
o 1) Microscopio óptico
o 2) Microscopio electrónico
o 3) Microscopio de luz ultravioleta
o 4) Microscopio de luz polarizada
o 5) Microscopio de fluorescencia
 Microscopios según el número de lentes
o 1) Microscopio simple
o 2) Microscopio compuesto
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 Microscopios según la transmisión de la luz

o 1) Microscopio de luz transmitida
o 2) Microscopio de luz reflejada
 Microscopios según el número de oculares
o 1) Microscopio monocular
o 2) Microscopio binocular
o 3) Microscopio trinocular
 Microscopios según la configuración de los elementos
 Microscopios digitales
 Microscopio estereoscópico
 Otros tipos de microscopios
o 1) Microscopio confocal
o 2) Microscopio de campo oscuro
o 3) Microscopio de contraste de fases

Microscopios según el sistema de iluminación

A un nivel básico podemos diferenciar los microscopios según el medio
utilizado para iluminar la muestra. El sistema más habitual es iluminar la
muestra con luz visible, dando lugar al microscopio óptico. Sin embargo,
existen alternativas.

1) Microscopio óptico
En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto
significa que existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma
luz es conducida a través del objetivo y del ocular hasta llegar a formar la
imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio más
habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz.
El aumento máximo que se puede obtener con este tipo de microscopio
alcanza alrededor de 1500x.

Muestra en un microscopio óptico

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Partes del microscopio óptico

En un microscopio óptico podemos distinguir entre el sistema óptico y el
sistema mecánico.
 El sistema óptico incluye el conjunto de lentes y elementos de
manipulación de la luz necesarios para generar una imagen
aumentada.
 El sistema mecánicoproporciona el soporte estructural a los
anteriores elementos. La siguiente imagen muestra las partes
esenciales del microscopio.

Partes del microscopio

Dentro del sistema óptico se incluye un foco (también denominado fuente

de luz) que emite rayos de luz dirigidos hacia la muestra. Antes de llegar a
la muestra los rayos atraviesan un condensador, la función del cual es
concentrar los rayos de luz sobre la preparación a observar. Habitualmente
el condensador está acoplado con un diafragma para regular la cantidad de
luz incidente. El siguiente elemento óptico es el objetivo. Esta parte del
microscopio consiste básicamente en un conjunto de lentes que reciben la
luz proveniente de la muestra y permiten aumentar la imagen observada.
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Por último, el ocular amplía la imagen proveniente del objetivo y es a través

de él que se puede observar finalmente la muestra.
En cuanto al sistema mecánico hay en primer lugar una base o pie que
permite mantener el microscopio en posición estable. El brazo es la
estructura principal del microscopio y conecta la base con el sistema óptico.
El sistema mecánico incluye también la platina, es decir, la pieza horizontal
donde se coloca la muestra. La platina no está conectada de forma fija con
el brazo sino que su posición se puede regular mediante los tornillos
macrométrico y micrométrico. El revólver es la parte del microscopio
donde están montados los objetivos, normalmente 3 o 4, y que puede girar
para seleccionar el objetivo deseado. Finalmente, el tubo conecta los
objetivos con el ocular.

2) Microscopio electrónico
En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino que
se utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra dentro de
una cámara de vacío. Existen diferentes tipos de microscopio electrónico
pero su principio de funcionamiento se basa siempre en capturar los
electrones dispersados u omitidos por la muestra y así poder reconstruir una
imagen.
La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un
nivel de aumento muy superioral del resto de microscopios. Sin embargo, es
necesario preparar la muestra y colocarla en una cámara de vacío de modo
que no es posible observar muestras biológicas vivas. Los dos tipos de
microscopio electrónicos principales son el microscopio electrónico de
barridoy el microscopio electrónico de transmisión.
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Muestra
observada en un microscopio electrónico

3) Microscopio de luz ultravioleta

Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre
indica, con luz ultravioleta. Este tipo de luz tiene una longitud de onda más
corta que la luz visible utilizada en los microscopios ópticos. La ventaja
principal de utilizar esta técnica es que puede alcanzarse una resolución
mejor que con luz visible. Además, el contraste obtenido en la muestra es
distinto que en los microscopios ópticos. De este modo, con el microscopio
de luz ultravioleta pueden observar muestras que aparecen transparentes si
son observadas con luz visible.
4) Microscopio de luz polarizada
También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es
en realidad un tipo de microscopio óptico al que se la han añadido
dos polarizadores. Esto significa que la onda de luz utilizada para observar
la muestra tiene una dirección de oscilación concreta. Este tipo de
microscopio es muy útil para observar estructuras cristalinas de rocas y
minerales.
5) Microscopio de fluorescencia
Los microscopios de fluorescenciason aquellos que utilizan las
propiedades de fluorescencia para generar una imagen de la muestra. Este
microscopio permite observar sustancias que emiten luz propiacuando son
iluminadas con una longitud de onda determinada. Para ello la muestra es
habitualmente iluminada con una lámpara xenón o con una lámpara de
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vapor de mercurio. Estos microscopios incorporan además filtros de luz

para aislar la luz correspondiente a la muestra.

Muestra
observada en un microscopio de fluoresencia (Fuente: Zeiss Microscopy)

Microscopios según el número de lentes

En el caso concreto del microcopio óptico puede hacerse una distinción
según el número de lentes de su sistema óptico.
1) Microscopio simple
Este tipo de microscopio dispone de una única lente y es más habitualmente
conocido como lupa. Aún así, con un microscopio simple pueden
conseguirse grandes aumentos. Hay que destacar que durante el siglo XVII,
Antonie van Leeuwenhoek utilizó este tipo de microscopios para conseguir
el mayor aumento alcanzado hasta el momento. A día de hoy, uno de los
conceptos basados en la misma idea es el Foldscope.
2) Microscopio compuesto
Este tipo de microscopio es aquél que dispone de por lo menos dos lentes.
Este es el caso más habitual en todos los microscopios modernos.
Normalmente los microscopios disponen de distintas lentes tanto en
el objetivo como en el ocular para corregir las aberraciones ópticas y
alcanzar una imagen con buena calidad. La invención del microscopio está
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asociada con la invención del microscopio compuesto. Este apareció en los

Países Bajos a finales del siglo XVI.
Microscopios según la transmisión de la luz
Existen dos tipos básicos de microscopio óptico según el camino seguido
por la luz hasta llegar el objetivo: microscopios de luz transmitida y los
microscopios de luz reflejada.
1) Microscopio de luz transmitida
En este tipo de microscopio la luz atraviesa la muestra. Para esta clase de
microscopios es necesario preparar la muestra cortándola en láminas muy
finas. La muestra se ilumina desde debajo la platina. La preparación de la
muestra hace que esta sea semitransparente y parte de la luz pueda
atravesarla y llegar al objetivo para ser observada posteriormente a través
del ocular. En general este es el sistema de iluminación más utilizado entre
los microscopios ópticos.
2) Microscopio de luz reflejada
En este caso la luz ilumina la muestra y parte de esta es reflejada y dirigida
al objetivo. De este modo es necesario iluminar la muestra desde la parte
superior de la platina. Este tipo de microscopía es utilizada para
examinar materiales opacos como pueden ser estructuras metálicas,
materiales cerámicos, etc. Existen microscopios ópticos que permiten los
dos tipos de iluminación de modo que es posible observar tanto muestras
semitransparentes como opacas. Los microscopios
estereoscópicos (permiten observar la muestra en tres dimensiones) son
siempre de luz reflejada.

Microscopios según el número de oculares

Los microscopios también pueden ser clasificados según el número de
oculares. En base a este criterio puede distinguirse entre
microscopios monoculares, binoculares o trinoculares.
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1) Microscopio monocular

Microscopio monocular

Este tipo de microscopio dispone de un solo ocular a través del cual se

puede observar la muestra. Es el tipo más sencillo y es ideal para
aficionados a la microscopía o para alguien que se introduce en este
campo. Su desventaja principal es que puede resultar un poco incómodo si
tiene que utilizarse durante largos periodos de tiempo. Por este motivo los
microscopios monoculares no son en general utilizados en ámbitos
profesionales.
2) Microscopio binocular
Los microscopios binocularesdisponen, como indica su nombre, de dos
oculares. Esto permite observar la muestra simultáneamente con los dos
ojos resultando en una mayor comodidad para el usuario. Este es el tipo de
microscopio más utilizado en los laboratorios de investigación. La distancia
entre los dos oculares puede regularse para adaptarse a las necesidades
del usuario. No hay que confundir el microscopio binocularcon
el microscopio estereoscópico. El microscopio estereoscópico siempre es
binocular. Sin embargo, no todo microscopio binocular es estereoscópico.
3) Microscopio trinocular
El microscopio trinocular está equipado con dos oculares para observar la
muestra además de un tercer ocular para conectar una cámara. En el caso
de conectar una cámara digital esta puede conectarse a un ordenador para
ver la imágenes de la muestra en tiempo real. Con este microscopio es
posible observar la muestra y al mismo tiempo tomar fotografías o videos
con la cámara.
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Microscopios según la configuración de los

elementos

Microscopio invertido (Fuente: Zeiss Microscopy)

Los microscopios convencionales tienen una configuración vertical. Esto

significa que el foco de luz se encuentra en la parte inferior de la estructura.
A continuación hay la platina donde se coloca la muestra y finalmente el
cabezal con los objetivos y el ocular en la parte superior. Esta es la
configuración más habitual pero no la única.
Existen también los microscopios invertidos. Esto microscopios tienen una
configuración totalmente opuesta a la del microscopio vertical. La muestra
es iluminada desde la parte superior y los elementos ópticos se encuentran
debajo la platina. Con este tipo de microscopio es posible observar
muestras colocadas en el fondo de un recipiente. Esto es muy útil para
mantenerlas hidratadas y poder así observar muestras vivas y procesos
biológicos que duran días.
Microscopios digitales
Los microscopios digitales son aquellos que capturan una imagen
digital de la muestra. Esto se consigue conectando una cámara digital en
lugar del ocular. Existen microscopios digitales con distintas
configuraciones. Habitualmente deben conectarse al ordenador para poder
transmitir las imágenes y a continuación visualizarlas. También es cierto que
existen microscopios digitales con una pantalla incorporada. Estos
permiten ver la muestra en la pantalla y almacenar imágenes que pueden
transmitirse a continuación a un ordenador mediante conexión
USB o tarjeta SD.
Un tipo especial de microscopios digitales son los microscopios USB. Estos
microscopios consisten únicamente en una lente de gran aumento y
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una cámara digital. El aumento que se alcanza es limitado en comparación

con un microscopio óptico convencional. Aún así son instrumentos muy
versátiles y útiles para observar objetos cotidianos. Los microscopios USB
se conectan al ordenador mediante conexión USB y permiten guardar
imágenes de la muestra.

Microscopio digital con pantalla de la marca

Bresser

Microscopio estereoscópico
El microscopio estereoscópico es un tipo de microscopio que permite
observar la muestra de forma tridimensional. Estos microscopios están
equipados siempre con dos oculares. La imagen de la muestra que llega a
cada ocular es ligeramente distinta de modo que cuando se combinan se
consigue el efecto 3D. Este efecto no podría conseguirse si la muestra se
observara con un solo ocular.
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El aumento que se consigue con el microscopio estereoscópico es inferior al

que se consigue con un microscopio óptico convencional. Sin embargo, los
microscopios convencionales solo permiten una observación bidimensional
de la muestra. Los microscopios estereoscópicos son muy utilizados en
aplicaciones donde debe manipularse la muestra mientras se observa. Por
ejemplo para el montaje de circuitos o relojes.
Otros tipos de microscopios
Además de los microscopios anteriormente presentados existen multitud de
técnicas de microscopía adicionales optimizadas para tipos de muestra
específicas. Algunos de los que vale la pena mencionar son:
1) Microscopio confocal
Este es un tipo de microscopio de fluorescencia. En lugar de iluminar la
muestra de forma global se ilumina punto a punto de forma sucesiva y se
reconstruye la imagen al final del proceso. Este proceso de escaneado de la
muestra es similar al que se produce en los microscopios electrónicos de
barrido. Este tipo de microscopio fue inventado por Marvin Minsky en 1957.
2) Microscopio de campo oscuro
Esta técnica de microscopía consiste en iluminar la muestra oblicuamente.
De este modo los rayos de luz que llegan al objetivo no provienen
directamente del foco de luz sino que han sido dispersados primero por la
muestra. Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no serían
visibles debido a su transparencia. También tiene la ventaja que no requiere
teñir la muestra para aumentar su contraste y poder observarla.

Muestra
observada en un microscopio de campo oscuro
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3) Microscopio de contraste de fases

La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del medio de propagación.
Esta propiedad es utilizada en el microscopio de contraste de fases ya que
la luz atraviesa la muestra con distintas velocidades en distintas secciones.
Este efecto es amplificado para generar la imagen de la muestra. Mediante
esta técnica no hace falta utilizar tintes y, por lo tanto, pueden observarse
células vivas. El microscopio de contraste de fases fue inventado por Frits
Zernike en 1932 y recibió por ello el premio Nobel de física en 1953