MICOSIS SUPERFICIAL: Diagnóstico

Microanalítico (MALDI-TOF)

Blgo. Rolando Paredes Gago

Laboratorio de Referencia Nacional de Micologia
Centro de Nacional de Salud Pública
Instituto Nacional de Salud
 Identificación fúngica
(Dermatofitos)

metodología

fenotípico Microanalítico Genotípico

- Pruebas manuales
- Pruebas semi-automatizadas y MALDI TOF -18S rRNA
automatizadas - ITS 1 e ITS 2 (Internal
PATRON PROTEICO transcribed spacer regions 1
Y 2)
 Es una técnica de determinación estructural que permite
estudiar la distribución de las moléculas de una sustancia en
función de su masa

Fue desarrollada en 1987 por Koichi Tanaka

MALDI: Matriz asistida por laser desorción/ionización • Analiza proteínas intrínsecas
(ribosomales) de los

TOF: Tiempo de vuelo 1 microorganismos por

espectometria

2 • El patrón proteico (ESPECTRO)

se compara con base de datos

MALDI-TOF
• La concordancia de los
3 espectros (microorganismo /
base datos) se representa con
números 0-3

IDENTIFICIÓN
- BACTERIAS
- LEVADURAS
- HONGOS FILAMENTOSOS
No identifica
- ALGUNOS VIRUS Microorganismos
- MICOBACTERIAS modificados
- RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS Y ANTIFUNGICOS genéticamente
 3 elementos
• La fuente de ionización, laser ultravioleta que
produce la desorción e ionización
• El analizador, separa los iones procedentes de la
muestra en relación con su ratio masa/ carga.
• El detector, recoge la información del tiempo de
vuelo de un ion al alcanzarlo y lo representa en
una grafica.
 1° Irradiacion – desorción - Ionizacion

Conservarla alejada de la luz.

Mantener tapado el tubo.
 2° Tiempo de vuelo

las proteínas son aceleradas a través

de un campo electrostático y luego Un analizador de masas que separa
son expulsadas en un tubo de vuelo al los iones de acuerdo con su
vacío donde se separan en función de relación masa/carga
su velocidad o tiempo de vuelo
 3° Detector de Iones

El eje de las ordenadas del espectro de

masas se representan los valores de:
la ratio m/z = masa molecular (m) del
analito

El eje de las abscisas se

representa la intensidad
 Los hongos filamentosos tienen
una pared celular robusta y
rígida que las bacterias y
levaduras, por lo que la
preparación de la muestra
requiere un proceso de
extracción más agresivo
1

Extracción con agua-ácido fórmico

Extracción con zirconio-etanol-

acetonitrilo-ácido fórmico (E. zirconio )

Extracción -etanol-acetonitrilo-ácido
fórmico ✓
 Extracción en tubo con caldo
Sabouraud-etanol-acetonitrilo-ácido
fórmico

Recomendado por el fabricante

Caldo sabouraud:
• Se enriquece las condiciones de
crecimiento (48 horas).
• Cultivo mas joven (mejor expresión de
proteínas).

Etanol – acetonitrilo – ácido fórmico

 Bruker aplica criterios muy estrictos ya que:
- Identificación aceptable a nivel de género y especie scores ≥ a 2,0.
-Rechaza score inferiores a 1,7 como poco fiables. El agregado de base
de datos” IN HOUSE”
Las mayores limitaciones del uso de la espectrometría de masas para la identificación de mejora el
los hongos filamentosos son la extracción de proteínas en la etapa pre analítica y el rendimiento.
número de espectros en la base de datos
PUNTOS CRÍTICOS
GRACIAS

rparedes@ins.gob.pe