Colegio

CURSO / CICLO: 2º LKB

ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea

CITOMETRIA DE FLUJO

FUNDAMENTO
La Citometría de Flujo (CMF) es una técnica de análisis celular multiparamétrico cuyo
fundamento se basa en hacer pasar una suspensión de partículas (generalmente células) alineadas
y de una en una por delante de un haz de láser focalizado. El impacto de cada célula con el rayo
de luz produce señales que corresponden a diferentes parámetros de la célula y que son recogidos
por distintos detectores. Estos convierten dichas señales en señales electrónicas que
posteriormente serán digitalizadas para permitir la medida simultánea de varios parámetros en
una misma célula. Estos parámetros son:

- Parámetros relacionados con características intrínsecas de la célula, como su tamaño y la

complejidad de su núcleo y citoplasma.

- Parámetros relacionados con características antigénicas de cada célula (inmunofenotipo).

Por lo tanto, la CMF es capaz de identificar una célula por medio de sus características
antigénicas y/o por sus características morfológicas de tamaño y complejidad.

LECTURA

Las señales producidas por la interacción de las células con el haz de luz son de dos tipos:

- Señales de dispersión.
- Señales de fluorescencia.

a) Señales de dispersión: La dispersión resulta de la interacción de la luz con una partícula que
produce un cambio de dirección (no de la longitud de onda) en todas las direcciones del espacio.
Las características morfológicas que determinan la dispersión de la luz son fundamentalmente el
tamaño celular, la membrana, el núcleo y el material granular del interior de la célula,
llamado complejidad.

En los Citómetros de Flujo se miden dos fracciones de dispersión:

Colegio ZABALBURU Ikastetxea 1

 -La luz dispersada en ángulo cónico pequeño (0-10º) que casi coincide con la dirección de la luz
incidente, llamada FSC (Forward Scatter). Es una medida proporcional al tamaño de la partícula
que produce la dispersión.

-La luz dispersada en ángulo recto llamada SSC (Side Scatter). Es proporcional a la complejidad
de la estructura interna de la partícula.

b) Señales de Fluorescencia: Un fluorocromo es una molécula química que absorbe luz a una
determinada longitud de onda (energía) y emite a una longitud superior (menor energía).

El espectro de absorción o excitación es el rango sobre el que un fluorocromo absorbe luz, y el

espectro de emisión es el rango sobre el que un fluorocromo emite luz. Cuando un fluorocromo
interacciona con la luz de excitación procedente del láser emite energía radiante. Debido a que
parte de la energía se utiliza para la absorción, la luz emitida es de menor energía que la luz de
excitación, es decir la longitud de onda emitida es mayor. La diferencia entre la longitud de onda
de absorción y emisión se denomina Stokes shiff.
Los citómetros de flujo permiten detectar señales de fluorescencia procedentes de complejos
Antígeno/Anticuerpo marcados con un fluorocromo y situados en una célula, siendo la cantidad
de señal de fluorescencia emitida igual a la proporción de la cantidad de componentes
fluorescentes de la partícula.

CARACTERISTICAS DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

La CMF es una técnica sencilla que se aplica en la rutina diaria de muchos laboratorios clínicos
y de investigación, capaz de proporcionar resultados de forma rápida que pueden ser aplicables
al diagnóstico. Gracias a su gran especificidad es capaz de distinguir entre varias poblaciones
celulares diferentes, y detectar una población celular en una muestra en la que predominan otras
poblaciones celulares mayoritarias.
Pero la principal característica de la CMF es que puede ofrecer información simultánea de
varios parámetros de cada una de las células analizadas y la relación entre los parámetros de
una célula y los de otra célula también analizada. Permite el análisis de dos parámetros de
dispersión, SSC/FSC y tres de fluorescencia (en equipos con un solo láser), Fl1, Fl2 y Fl3, y de
una cuarta fluorescencia en equipos con dos láseres.

VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

Debido a la necesidad de utilizar una suspensión de partículas (células, núcleos, cromosomas,

etc), para ser leídos de una en una hace que se pierda información sobre la arquitectura de los
tejidos que componen las células o de las propias células, así como la interacción entre estas y
2 Colegio ZABALBURU Ikastetxea
 Colegio
CURSO / CICLO: 2º LKB
ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea
el medio que las rodea (patrones nodulares o difusos de los linfomas). Frente a este
inconveniente, la CMF presenta múltiples ventajas frente al microscopio de fluorescencia y las
técnicas citoquímicas, como:

- Posibilidad de empleo de múltiples marcajes frente a un solo marcaje de la citoquímica y la

microscopia de fluorescencia.
- Posibilidad de analizar un elevado número de partículas en un corto período de tiempo (5000
partículas/segundo).
- Posibilidad de cuantificar la intensidad antigénica por medio de los canales medios de
fluorescencia.
- Mayor sensibilidad y objetividad que le permiten detectar enfermedad mínima residual y
caracterizar poblaciones celulares poco abundantes en condiciones normales como los basófilos.
- Posibilidad de analizar poblaciones celulares y epitopos celulares.
- Permite almacenar informáticamente la información del análisis para poderla utilizar en
cualquier momento y reanalizar análisis hechos con anterioridad.
- Posibilidad de cuantificar las moléculas antigénicas presentes en un grupo celular.

SELECCION DE UN FLUOROCROMO
-Su espectro de absorción debe ser lo más cercano posible al espectro de emisión del láser
utilizado.
-El espectro de absorción debe ser diferente al de emisión para asegurar que ambas señales se
separan.

FLUOROCROMOS

Los fluorocromos son moléculas químicas que absorben luz a una determinada longitud de
onda y emiten a otra diferente. Se caracterizan por sus espectros de excitación (o absorción) y de
emisión, por lo que su utilización está condicionada por el tipo de láser del que disponga el
citómetro y de la longitud de onda a la que se exciten ellos mismos.
El espectro de excitación y emisión varía con los diferentes fluorocromos. Si disponemos de una
láser con una longitud de onda de 488 nm los fluorocromos que utilicemos deberán ser capaces
de ser excitados a esta longitud de onda y además emitir en longitudes lo más lejanas posibles
entre ellas.

Los Fluorocromos más utilizados son:

- FITC: Isocianato de fluoresceina. Se excita con luz azul a 490nm y emite a 514nm.
- PE: Ficoeritrina. Se excita a 480nm pero no es su máximo (565nm) y emite a 578nm.
- PerCP: Proteína Clorofila Peridinina. Se excita a 488nm. y emite a
- TRITC: Isocianato de Tetrametil Rodamina se excita a 540nm y emite a 570nm.
- Rojo Texas: Se excita a 596nm y emite a 615nm.
- Ficocianina: Se excita a 620nm y emite a 650nm.
- Aloficocianina: Se excita a 650nm y emite a 660nm.
- Tricolor: Se excita a 540nm y emite a 570nm.
- APC: Utilizado como cuarto color en citometros de BD. Se excita a 635nm y emite a 670nm.

Colegio ZABALBURU Ikastetxea 3

 - Fluorocromos para marcar ácidos nucleicos son: Yoduro de Propidio que se excita a 493nm y
emite a 630nm, Bromuro de Etidio, Naranja de Acridina que para marcar DNA se excita a 480nm
y emite a 510nm y para RNA se excita a 440/470nm y emite a 650nm, Hoescht 33342 que se
excita a 343nm y emite a 482nm, ….

ANTICUERPOS (Ac)
Los Ac son Inmunoglobulinas (proteínas) producidas por las células plasmáticas (linfocitos B
activados y totalmente diferenciados) capaces de combinarse específicamente con el Ag que
causó su producción. Las Ig están presentes en el suero y fluidos tisulares, pudiéndose encontrar
en forma soluble como Ac o sobre la superficie de los linfocitos B como receptores de Ag.
Constan de dos cadenas pesadas y dos ligeras cada una de las cuales contiene una región variable
en un extremo. La gran diversidad en la secuencia de aminoácidos de estas regiones da cuenta de
las diferentes especificidades de unión a Ag de cada Ac.

ANTICUERPOS MONOCLONALES

Son el principal reactivo utilizado en CMF cuando están o pueden ser conjugados con
fluorocromos. Son Ac específicos para un solo determinante antigénico o epítopo. En CMF se
utilizan para identificar poblaciones celulares específicas gracias a combinaciones de Ac-Mon
para Ag presentes en estas células. Los Ac-Mon utilizados en CMF permiten de una forma rápida,
sencilla y objetiva diferenciar poblaciones y subpoblaciones celulares con distinta actividad
funcional, en distintas etapas de maduración o estados de activación y adhesión, pudiendo
tener una misma célula distinto fenotipo dependiendo de su función (linfocito T citotóxico o
linfocito T helper), estado de maduración (linfocito T CD3 en membrana o en citoplasma), estado
de activación (linfocito T CD25+) ó adhesión (células que expresan moléculas de adhesión). Son
producidos por fusión de una célula plasmática inmortalizada con células normales productoras
de Ac provenientes de un donante inmunizado (ratón). Las células resultantes pueden cultivarse
proporcionando Ac de una clase y especificidad antigénica dada.

ANTICUERPOS POLICLONALES

Son Ac. dirigidos contra distintos epítopos de un Ag. (varios Ac para un solo Ag con distintos
epítopos o lugares de reconocimiento de Ag.)

4 Colegio ZABALBURU Ikastetxea

 Colegio
CURSO / CICLO: 2º LKB
ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea

ANTIGENOS

Son moléculas (proteínas, hidratos de carbono o lípidos) presentes en las células y que son
capaces de unir Ac dirigidos específicamente contra ellos. También pueden ser sustancias
extrañas que producen una respuesta inmune al entrar en contacto con los tejidos ó células de un
animal susceptible, y combinarse con los linfocitos T o Ac específicos de la superficie celular,
citoplasma o núcleo, o en los fluidos tisulares.
En CMF son estructuras intracitoplásmicas o de la superficie celular reconocidas por los AcMo
marcados con fluorocromo.

SISTEMAS DE FLUIDOS
El sistema de fluidos transporta las células hacia el centro del láser de una en una. En la cámara
de flujo de un citómetro se produce un flujo laminar al interaccionar dos fluidos, el de la muestra
y el de la vaina o envolvente (PBS), que rodea el fluido que contienen la muestra. Cuando se
produce esta interacción, las células penetran en el centro de fluido de la vaina por medio de
diferentes presiones y velocidades de los fluidos. El PBS y la muestra no se mezclan. Por aumento
de la presión en el depósito del PBS se establece un flujo hacia abajo y las células salen por el
tubo que conecta con la muestra, al principio apelotonadas y desordenadas, pero después se
alinean hasta quedar en fila de modo que pasen de una en una ante el rayo láser. El que las células
pasen alineadas por el láser es esencial para que nos definan bien las poblaciones situándolas
en su sitio.

COMPONENTES DE UN CITOMETRO
Colegio ZABALBURU Ikastetxea 5
 Básicamente un citómetro está compuesto por:
a) Sistemas de fluidos:
- Inyección de la muestra.
- Cámara de flujo.
b) Sistemas ópticos:
- Fuentes de luz.
- Detectores.
c) Sistemas electrónicos y computadora:
- Amplificador-convertidor.
- Sistema informático.

SISTEMAS OPTICOS

El sistema óptico origina (sistema de iluminación) y recoge (detectores) los impulsos

luminosos de acuerdo con las señales de dispersión y fluorescencia. Consta en primer lugar de
una fuente de iluminación excitante y en segundo lugar detectores que se encargan de recoger las
señales de luz emitida.
La fuente luminosa es uno o dos láseres concentrados dentro de una elipse que se dirige hacia la
muestra gracias a unas lentes. El punto en el que el láser y las células chocan debe ser siempre
constante. Los detectores son de 2 tipos, fotomultiplicadores para detección de señales SSC y
fotodetectores para la detección de señales FSC.

SISTEMAS ELECTRONICOS

El sistema electrónico convierte todo en señales digitales para almacenar en el ordenador

EL CITOMETRO

6 Colegio ZABALBURU Ikastetxea

 Colegio
CURSO / CICLO: 2º LKB
ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea
El citómetro es un aparato capaz de medir varios parámetros celulares a partir de una suspensión
celular por medio de la interacción de las células con un haz de luz láser guiado mediante un
flujo continuo.

ADQUISICION CELULAR

La adquisición celular es la visualización en tiempo real y por medio de citogramas de los

parámetros de dispersión y fluorescencia que presentan las células de la muestra a analizar, y que
pueden ser almacenados para su posterior análisis. Para ello, gracias al sistema de inyección de
muestra se hacen pasar las células por delante del haz de luz para su posterior procesamiento
informático y presentación de los citogramas en pantalla.
Durante la adquisición podemos realizar una discriminación de células por medio de regiones de
exclusión llamadas "ventanas" o “gates”. De esta manera adquirimos, analizamos o simplemente
visualizamos el comportamiento físico y antigénico de la población seleccionada.
Programas como Cell-Quest de BD, proporcionan entre otros parámetros el número de células
adquiridas, el número de células que se están adquiriendo por segundo, el número de células
adquiridas dentro de una determinada ventana, su porcentaje en cuanto al total de células
adquiridas. Además, permite decidir de antemano el número de células que deseamos adquirir en
total y en la ventana de adquisición, deteniéndose esta adquisición al llegar a estas cifras.

Mediante el conocimiento del número de células adquiridas en una ventana, el número total
de células adquiridas y el número de células por microlitro de la muestra podemos calcular
el número absoluto de una población determinada cuando esta sea analizada.

Poblaciones leucocitarias en sangre periférica

1 Linfocitos 2 Monocitos 3 Granulocitos

MUESTRAS
Todas las muestras utilizadas para la determinación de inmunofenotipo de células
hematológicas por medio de CMF deben ser convertidas en una suspensión celular. Estas
muestras pueden proceder de:

Colegio ZABALBURU Ikastetxea 7

 - Médula ósea.
- Sangre periférica.
- Exudados y trasudados (Ascíticos, pleurales, pericárdicos).
- Líquido cefalorraquídeo (LCR).
- Tejidos sólidos como ganglios.
- Células procedentes de cultivos celulares.
- Productos de aféresis.

Las más utilizadas en el laboratorio de hematología son la sangre periférica y la médula ósea.

APLICACIONES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

Esta técnica tiene innumerables aplicaciones, tanto en el diagnóstico de múltiples enfermedades

como en el seguimiento del tratamiento aplicado. Es muy valiosa su contribución al diagnóstico
de tumores por diferenciación antigénica de células y para algo no menos importante, la detección
de la enfermedad mínima residual (EMR).

Los tratamientos actuales contra el cáncer son cada vez más exitosos, con una elevada incidencia
de remisiones completas. Sin embargo, un porcentaje importante de estos pacientes sufre una
recaída debido a la persistencia de células tumorales residuales. Esto es lo que llamamos
enfermedad residual mínima.
De todas las técnicas desarrolladas, la citometría de flujo y las técnicas de biología molecular son
las más adecuadas para detectar esa EMR, debido a su rapidez, a la alta sensibilidad y a la
objetividad en los resultados.
La citometría de flujo también tiene un papel destacado en el diagnóstico de leucemias y
linfomas, entre ellas la leucemia linfoblástica aguda, la causa más frecuente de cáncer en niños.
Esta técnica permite el empleo de una batería de anticuerpos que son capaces de reconocer otros
tantos marcadores celulares para diferenciar el estado madurativo de las células. De esta manera,
podemos identificar el linaje de la leucemia, que tiene valor en el pronóstico y en el tratamiento
de la enfermedad.
A su vez, nos permitirá reconocer estos marcadores en las células una vez iniciado el tratamiento,
de modo que, si los niveles de esta EMR son superiores a lo establecido, habrá que aplicar un
tratamiento más intenso o plantear la posibilidad de un trasplante alogénico.
También ha demostrado su utilidad en el diagnóstico y la clasificación de las
inmunodeficiencias primarias y en la monitorización de enfermedades autoinmunes como
la esclerosis múltiple, el lupus eritematoso sistémico y la artritis reumatoide.
Otra aplicación es la cuantificación en sangre periférica de los linfocitos CD4+ y CD8+, que
aporta un valor diagnóstico y pronóstico en el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (sida).
Se realiza como una técnica de rutina en muchos laboratorios, ante la necesidad de establecer
controles periódicos del número de células CD4+ en estos pacientes.
Existen diferentes fluorocromos capaces de unirse al ADN celular, por lo que nos permiten
cuantificar ese ADN y ver si existen o no anomalías clonales. Mediante el empleo de los
fluorocromos adecuados podemos cuantificar el ARN celular.

Esto se emplea tanto para el recuento de reticulocitos como para conocer su estado madurativo
en función del contenido de ARN. Con el citómetro podemos realizar un cariotipo de flujo, que
representa un complemento y una alternativa a los métodos clásicos de estudio de los
8 Colegio ZABALBURU Ikastetxea
 Colegio
CURSO / CICLO: 2º LKB
ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea
cromosomas en la metafase. Los cromosomas se aíslan a partir de preparaciones en metafase y
se tiñen con fluorocromos para ver la presencia de anomalías. Estas son solo algunas de las
aplicaciones de la citometría de flujo, lo que hace ver la importancia de esta técnica y su
conocimiento.

A continuación, se explica un ejemplo de una de las aplicaciones más importantes que tiene en
la práctica clínica dentro del campo de la inmunología: el recuento absoluto de CD4+ y cociente
CD4/CD8 en pacientes con virus de inmunodeficiencia humana (VIH).

El VIH infecta a las células que tengan en su superficie la molécula CD4 (una proteína que
pertenece a algunas células del sistema inmunológico y que el VIH utiliza como receptor). La
replicación del VIH puede producir la muerte de los linfocitos T CD4 (uno de los distintos tipos
de glóbulos blancos). La destrucción de los linfocitos T CD4 altera el sistema inmunológico, y
este es el mecanismo por el que la infección por VIH produce sida.
A continuación, se describirá una forma de análisis para obtener el recuento total de linfocitos
CD4 positivos.
A partir de un histograma bidimensional en el que se enfrenten el tamaño de las células frente a
la complejidad celular, ambos en escala lineal, se realiza mediante una ventana una selección de
aquellas células que presentan un pequeño tamaño y poca complejidad, población celular que
corresponde con los linfocitos (1).
Además, en un histograma en el que se enfrenten el tamaño en escala lineal frente a CD45 en
escala logarítmica, se realizará una ventana sobre aquellas células que tengan un pequeño tamaño
y sean muy positivos para el marcador CD45 (2).
Sobre un tercer histograma en el que solo se tendrán en cuenta aquellas poblaciones que estén
dentro de la primera ventana como de la segunda ventana realizada anteriormente, se van a
enfrentar CD3 con CD4 (3) y en otro utilizando las mismas condiciones que el anterior, CD3 con
CD8 (4). En los dos casos, ambos parámetros con escala logarítmica. En estos dos últimos,
histogramas el cuadrante superior derecho corresponde con aquellas moléculas que en el primer
caso son CD4 altamente positivas y CD3 altamente positivas, y en el segundo caso, CD8
altamente positivas y CD3 altamente positivas.

Colegio ZABALBURU Ikastetxea 9

 Para este procedimiento se utilizan anticuerpos monoclonales que reconocen las distintas
poblaciones leucocitarias y conjugadas cada una de ellas con un fluorocromo distinto. Con el
porcentaje de linfocitos obtenidos en los cuadrantes superiores derechos de cada uno de los
anteriores histogramas se puede obtener el cociente CD4/CD8.

CUESTIONES

0. Busca información de en qué consiste el análisis de la enfermedad mínima residual.

¿Qué utilidad tendría en el seguimiento de nuestro paciente?

1. ¿Cuál de las siguientes muestras se puede estudiar por citometría de flujo?:

a) Líquido cefalorraquídeo.

b) Lavados bronqueoalveolares y exudados.

c) Sangre total.

d) Todas las respuestas anteriores son correctas.

2. ¿Cuál de las siguientes definiciones se refiere a un fluorocromo?:

10 Colegio ZABALBURU Ikastetxea

 Colegio
CURSO / CICLO: 2º LKB
ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea

a) Son moléculas químicas que absorben luz a una determinada longitud de onda y emiten a una
longitud de onda superior de menor energía.

b) Son moléculas que emiten luz de forma espontánea.

c) Son moléculas que se producen a partir de la fusión de un linfocito B con una célula de un
mieloma.

d) Son moléculas que después de conjugarse con un anticuerpo son capaces de emitir
fluorescencia.

3. Respecto a un fluorocromo, ¿qué afirmación es falsa?:

a) Deben ser fotoestables.

b) Deben poseer un corto estado de excitación.

c) Su espectro de absorción debe ser lo más cercano posible al espectro de emisión del láser
utilizado.

d) Su espectro de absorción debe ser lo más lejano posible al espectro de emisión del láser
utilizado.

4. ¿Qué es un anticuerpo monoclonal?:

a) Aquel que reconoce más de 10 antígenos.

b) Aquel que es capaz, sin estar unido a un fluorocromo, de emitir fluorescencia de forma
espontánea.

c) Aquel que reconoce un solo determinante antigénico.

d) Aquel que solo se une al antígeno si está unido a un fluorocromo.

5. Las señales producidas por la interacción de las células con el haz de luz son:

a) Señales de dispersión.

b) Señales de fluorescencia.

c) Señales de radiación.

d) Las respuestas a y b son correctas.

6. ¿Cuál de los siguientes componentes no forma parte de un citómetro de flujo?:

a) Sistema de inyección de la muestra.

Colegio ZABALBURU Ikastetxea 11
 b) Cámara de gas.

c) Cámara de flujo.

d) Láser.

7. ¿Cuál de las siguientes relaciones es correcta?:

a) Dispersión frontal y granularidad y complejidad de la superficie.

b) Dispersión frontal y tamaño de las células.

c) Dispersión lateral y granularidad y complejidad de la superficie.

d) Las respuestas c y b son correctas.

8. ¿Cuál de las siguientes es una aplicación de la citometría de flujo?:

a) Diagnóstico y pronóstico de leucemias, linfomas y síndromes linfoproliferativos.

b) Cuantificación de linfocitos CD4+ y CD8+.

c) Diagnóstico y clasificación de las inmunodeficiencias primarias.

d) Todas las respuestas anteriores son correctas.

9. ¿Cuál de las siguientes moléculas no se utiliza para el análisis de ácidos

nucleicos?:

a) Hoechst 33342.

b) Bromuro de etidio.

c) Naranja de acridina.

d) Anti-CD25

10. Sobre la citometría de flujo, ¿qué afirmación es cierta?:

a) Conserva la arquitectura de los tejidos que componen las células.

b) Conserva la interacción de las células entre ellas y el medio que las rodea.

c) No permite analizar poblaciones y epítopos celulares.

d) Permite la posibilidad de cuantificar moléculas antigénicas presentes en un grupo celular.

12 Colegio ZABALBURU Ikastetxea

 Colegio
CURSO / CICLO: 2º LKB
ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea
11. Las áreas actuales de aplicación de la citometría de flujo son:

a) Inmunología.

b) Rutina clínica.

c) Investigación básica.

d) Todas las respuestas anteriores son correctas.

12. Une cada uno de los anticuerpos monoclonales con las células que reconocen:

Anti-CD21
Linfocitos T helper
Anti-CD56
Células plasmáticas
Anti-CD4
Linfocitos T citotóxicos
Anti-CD138
Linfocitos B
Anti-CD8
Linfocitos NK

13.

¿Con que células se corresponde cada una de esas poblaciones según los marcadores utilizados?

14. ¿Cuál es la fuente de luz en un citómetro de flujo?

Colegio ZABALBURU Ikastetxea 13

 a) Un láser.
b) Una bombilla de luz blanca.
c) Una bombilla de hidrógeno.
d) Todas las respuestas anteriores son correctas.

15. La luz dispersada en ángulo recto (SSC) es proporcional a:

a) El tamaño de la célula.
b) La complejidad del interior celular.
c) Las características antigénicas de la célula.
d) Ninguna de las respuestas anteriores es
correcta.

16. ¿A qué llamamos stokes shiff?

a) A la longitud de onda de emisión del fluorocromo.
b) A la longitud de onda de excitación del fluorocromo.
c) A la diferencia entre la longitud de onda de excitación y la de emisión.
d) No existe ese término.

17. ¿Cuál es el color de la luz emitida por la ficoeritrina (PE)?

a) El rojo.
b) El amarillo.
c) El verde.
d) El azul.

18. ¿Cuál de estas afirmaciones es correcta para considerar que una suspensión celular es
adecuada como muestra?
a) Debe ser representativa del tejido estudiado.
b) No debe tener agregados.
c) Debe preservar convenientemente las características celulares.
d) Todas las respuestas anteriores son correctas

19. ¿Qué función tienen los filtros dicroicos?

a) Absorben luz de determinadas longitudes de onda.
14 Colegio ZABALBURU Ikastetxea
 Colegio
CURSO / CICLO: 2º LKB
ZABALBURU
ASIGNATURA / MÓDULO: ITK
Ikastetxea
b) Reflejan la luz de determinadas longitudes de onda.
c) Impiden el paso de determinadas longitudes de onda.
d) Dispersan la luz de determinadas longitudes de onda.

20. Los subgrupos celulares que se dibujan en un dispersograma se llaman:

a) Grupos.
b) Gates.
c) Sorters.
d) Ninguna de las respuestas anteriores es correcta.

21. Explica los diferentes tipos de representaciones dependiendo del número de

parámetros que aparecen en el vídeo Citometría de flujo 1.

22. ¿Qué tipo de muestra y que diferentes reactivos se utilizan en la práctica de

subpoblaciones linfocitarias que aparecen en el vídeo Citometría de flujo 2?

23. ¿A qué tipo de células identifica cada uno de los marcadores utilizados en esta
práctica? Según esto, ¿Qué marcadores serían positivos para un linfocito B? ¿y para un
linfocito T helper?

24. ¿Para qué se utiliza la solución de lisis durante el procedimiento?

Colegio ZABALBURU Ikastetxea 15