Centro de Bachillerato Tecnológico industrial y de

Servicios
No. 56
“Gral. Ignacio Maya Herrera”

odulo II: analiza fluidos corporales de Integrantes:

Yoselin Samaniego Rodríguez
interés clínico Arlet Selene Villasana Torres
Diana Laura Jiménez Fernández
Leilani Nájera Román
submódulo II: realiza análisis
inmunológicos 4° BVL

Q. F. B Melissa Pineda Batalla

 Tecnica de
fluorescencia
(citometria de flujo)
 ¿Qué es la inmunofluorescencia?

Es un conjunto de técnicas diagnósticas que

recurren al uso de sustancias fluorescentes,
fluorocromos, que permiten detectar la
presencia de un antígeno o anticuerpo en
células o tejidos. Se recurre a esta técnica,
sobre todo, para el diagnóstico de
enfermedades autoinmunes.
 contenido
Usos y
01 Definición
04 aplicaciones

02 Fundamento y
técnica 05 Glosario

03 Procedimiento
 ¿Qué es la citometría de flujo?

● Es un metodo de laboratorio para dterminar el numero de celulas, porcentaje de

cuales permanecen con vida y caracteristicas como forma y tamaño en una
muestra de sangre, medula osea o tejido.

● También sirve para identificar marcadores tumorales como antígenos, en la

superficie celular.

● La citometría de flujo se usa en investigación básica y para el diagnóstico y

tratamiento de enfermedades, como el cáncer .
Fundamento y
técnica
La citometría de flujo se basa en la detección de la luz dispersada y absorbida por
las células mientras fluyen a través de un láser.
Los láseres emiten luz monocromática de alta intensidad que se enfoca en la
muestra.
La luz dispersada y absorbida por las células se recoge mediante lentes y se dirige
hacia detectores fotomultiplicadores.
Los parámetros que se analizan simultáneamente en
la célula son:

 Dispersión frontal de la luz, valor proporcional al tamaño celular.

 Dispersión de la luz ortogonal, proporcional a la cantidad de

estructuras granulares o complejidad de la célula.

 Intensidades de fluorescencia a diferentes longitudes de onda

Los citómetros de flujo están formados por complejos
sistemas fluídicos, ópticos, detectores electrónicos,
convertidores analógico-digitales y ordenadores.
El sistema fluídico permite un enfoque hidrodinámico
del flujo celular hasta conseguir el alineamiento de las
partículas o células con el láser.

Los sistemas ópticos permiten el enfoque del láser en un

haz con un diámetro reducido para impactar sobre el
menor número de partículas posibles simultáneamente
y un sistema de espejos y filtros dirigen las señales
producidas por ese impacto del láser sobre una célula
para conducirlas hacía unos detectores o
fotomultiplicadores.
El sistema electrónico se encarga de la
cuantificación de los destellos de
fluorescencia y de la luz dispersada
transformándo esas señales de
fluoresciencia en datos electrónicos.

El ordenador permite almacenar datos

de miles de células por cada muestra y
representar los resultados
gráficamente. 
Procedimiento
 Optimizar los
Consiste en tener preparados los
ajustes
controles necesarios, se debe saber lo
que se esta haciendo y para que sirve.

saber utilizar un citómetro de flujo consiste,

básicamente, en hacer bien cinco cosas: preparar las
muestras, optimizar los ajustes del citómetro, adquirir las
muestras, interpretar los resultados y presentarlos.
 Preparación de las muestras

Antes de funcionar en los citómetros de flujo, las células bajo análisis deben estar en
suspensión unicelular.

• Las células en cultivo agrupadas o las células presentes en órganos sólidos deben convertirse
primero en una suspensión de una sola célula antes del análisis mediante digestión enzimática o
disociación mecánica del tejido, respectivamente.

• Luego le sigue una filtración mecánica para evitar obstrucciones no deseadas del instrumento y
obtener datos de flujo de mayor calidad.

• A continuación, las células resultantes se incuban en tubos de ensayo o placas de microtitulación con
anticuerpos no marcados o conjugados con fluorescencia y se analizan a través de la máquina de
citómetro de flujo.
 Interpretación de
resultados

Si los procesos anteriores -preparar, ajustar y adquirir- se han realizado

correctamente, interpretar los resultados solo depende del investigador que lo
haga y como los relacione, ya que estos son precisos y reproducibles. Con el
archivo FCS (Flow Cytometry Standar) generado y mediante cualquier
programa apropiado, se puede analizar los datos sin miedo, en las formas que
mejor nos convenga para su análisis. Pero nunca hay que olvidar los controles,
los resultados lo son respecto a ellos.
presentación de los resultados

ejemplo de leucocitos de sangre periférica humana

en el que se diferencian las
regiones correspondientes a los neutrófilos,
monocitos y linfocitos

1) Gráfico “dot plot” de tamaño versus

granularidad:
presentación de los resultados

2) Histograma de fluorescencia

ejemplo de células de estirpe monocítica marcadas con

un anticuerpo monoclonal dirigido contra el antígeno
CD18. El anticuerpo está marcado con isocianato de
fluoresceína (FITC) (fluorescencia verde) y es de isotipo
IgG1 murino. Como control de pegado inespecífico, las
células se incuban, por otro lado, con IgG1 murina
marcada con FITC pero que no está dirigida contra
ningún antígeno celular (control de isotipo).
presentación de los resultados
3) Gráfico “dot plot” de fluorescencia verde (FL1) versus
fluorescencia roja (FL2):

ejemplo de leucocitos de sangre periférica de un paciente con

leucemia linfática crónica.

Se señalan 3 poblaciones: en el cuadrante superior

izquierdo se encuentran los linfocitos T CD8 positivos, en el
cuadrante inferior derecho, los T CD4 positivos y
en el cuadrante inferior izquierdo las células que no expresan ni
CD8 ni CD4 (linfocitos B, células NK). La
ausencia de puntos en el cuadrante superior derecho indica que no
hay células que expresen
simultáneamente CD4 y CD8.
 Parámetros que se pueden analizar

 Parámetros
nucleares

Parámetros
citoplásmicos

Parámetros de
superficie

Parámetros
extracelulares
 Usos y aplicaciones en biomedicina
 hematología: contaje celular, fórmula leucocitaria, contaje reticulocitario,
análisis de médula ósea.
 farmacología: estudios de cinética celular.
 inmunología: Determinación de subpoblaciones linfocitarias,
inmunofenotipificación de leucemias y linfomas.
 oncología: diagnóstico/pronóstico, monitorizar tratamiento.
 microbiología: diagnóstico bacteriano y vírico, sensibilidad a antibióticos.
 genética: cariotipo, diagnóstico de portador, diagnóstico prenatal.
 Glosario

● Fluorocromo: Sustancia que se emplea para marcar anticuerpos u otras

moléculas, por su propiedad de emitir luz de una determinada longitud de
onda, cuando se le estimula con un láser o con luz ultravioleta.
● Ortogonal: que forma un ángulo recto.
● Hidrodinámico: que disminuye la resistencia al agua.
● Fluorescencia: es la propiedad de algunos átomos y moléculas de absorber
luz a una longitud de onda determinada (la excitación: Ex) seguido por la
emisión (Em) de luz de corta duración a una longitud de onda más larga .
 Bibliografías
● onscience.es. (2021, 9 marzo). Citometría de flujo explicada en 5 procesos. On Science.

https://onscience.es/citometria-flujo-explicada-5-procesos/

● Mira, P. J. (2021, 4 septiembre). Citometría de flujo: Definición, principios, partes, pasos, tipos y usos . El Gen

Curioso. https://www.elgencurioso.com/diccionario/citometria-de-flujo/

● Universidad Autònoma de Madrid. (s. f.). Laboratorio de Citometría de Flujo | UAM. Universidad Autònoma de

Madrid. https://www.uam.es/uam/sidi/unidades-de-analisis/unidad-citometria-de-flujo/citometria-de-flujo

● BARRERA RAMÍREZ, LOURDES MARÍA, DRAGO SERRANO, MA. ELISA, PÉREZ RAMOS, JULIA, SAINZ ESPUÑES, TERESITA DEL ROSARIO,

ZAMORA, ANA CECILIA, GÓMEZ ARROYO, FABIOLA, & MENDOZA PÉREZ, FELIPE. (2004). CITOMETRÍA DE FLUJO: VÍNCULO ENTRE LA

INVESTIGACIÓN BÁSICA Y LA APLICACIÓN CLÍNICA.

http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-75852004000100007&lng=es&tlng=es.