UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA PROFECIONAL DE BIOLOGÍA

PRUEBA DE LA OXIDASA
PRUEBA DE LA CATALASA

ASIGNATURA : BACTERIOLOGÍA (BM-442)

DOCENTE : Dr. CÁRDENAS LÓPEZ, Víctor Luis

ALUMNA : VELIZ LÓPEZ, Isabel Diana

GRUPO DE PRÁCTICA : Lunes 2-5 pm

AYACUCHO – PERÚ
2022
INTRODUCCIÓN
El presente trabajo de exposición trata sobre la prueba de oxidasa que busca determina la
presencia del citocromo C, cuya oxidación se detecta como color azul cuando es positiva. La
prueba de la catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias.
Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de burbujas
procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva, también hablaremos de los
materiales a emplear en estos métodos, así como los procedimientos y las interpretaciones de
los resultados obtenidos.

OBJETIVOS
 Determinar la presencia de las enzimas oxidasas
 Diferenciar a las bacterias aerobias de las anaerobias
 PRUEBA DE LA OXIDASA

Por lo general, el
Esta prueba que es reducido por sistema
sirve para el oxígeno citocromooxidasa
determinar la molecular que sólo se encuentra en
presencia de produce agua o los organismos
enzimas peróxido de aerobios, algunos
oxidasas. hidrógeno según la anaerobios
especie bacteriana facultativos

La reacción de la El oxígeno actúa

oxidasa se debe a la y,
por tanto como excepcionalmente,
presencia de un aceptor final de
sistema en algún
electrones en la microaerófilo, pero
citocromooxidasa cadena
que activa la los anaerobios
transportadora de estrictos carecen de
oxidación del electrones.
citocromo actividad oxidasa.
 MATERIALES
 Reactivo de Kovacs al 1 % - 2 %
 de 6 cm2 en una placa Petri.
Papel filtro
 Aguja de inoculación de platino
 Una cepa bacteriana
 Placa Petri
PROCEDIMIENTO
 Colocar un trozo de papel filtro Whatman N°1
 Agregar 2-3 gotas de reactivo de Kovacs en
el centro del papel.
 Con una aguja de inoculación de platino,
colocar una asada de una colonia sospechosa
sobre el papel impregnado con el reactivo en
una línea de 3-6 cm de longitud
 Una reacción de color positiva ocurre dentro
de 5-10 segundo.
 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Con el reactivo de Kovacs, un

resultado positivo se manifiesta
por un color purpureo que se
desarrolla dentro de los 10
segundo, una reacción positiva
en 10-60 segundo. Se considera
un resultado tardío
Steel estableció que el
desarrollo de color después de
60 segundo. Denota un
resultado negativo.
 Prueba de catalasa

La catalasa es una anaerobias

enzima que cataliza facultativas que
la descomposición contienen el
del peróxido de citocromo
hidrógeno en agua y oxidasa.
oxígeno

La prueba se utiliza
para comprobar la La principal
presencia de la excepción son los
enzima catalasa que estreptococos
se encuentra en la (Streptococcus).
mayoría de las
bacterias aerobias

MATERIALES
 Peróxido de hidrógeno 3 %
 Aguja de inoculación
 Cepa de colonia pura
 Portaobjeto
 Gotero
 Observar la producción inmediata de burbujeo (liberación de gas) y
Agar dispersado en pico de flauta
PROCEDIMIENTOS
METODO EN PORTAOBJETO, PROCEDIMIENTO
RECOMENDADO
Con una aguja de inoculación, recoger el centro de una colonia pura de un
cultivo de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjeto limpio.
Colocar una gota de H2O2 al 3 % sobre los microorganismos colocados en
el portaobjeto con un gotero o pipeta pasteur.
registrar el resultado.
Descartar el portaobjeto en un desinfectante
La prueba no puede aplicarse si el agar sangre contamina la colonia o el
H2O2
(1) No invertir el orden del procedimiento ya que pueden ocurrir
resultados falsos positivos.
(2) No mezclar con la aguja de inoculación o el ansa. No es necesario
mezclar el H2O2 y el inoculo.
 MÉTODO EN TUBO
Agregar 1 ml de H2O2 al 3 % directamente
sobre un cultivo puro y denso de 18 a 24 horas
en agar dispensado en pico de flauta
No usar como medio de cultivo agar sangre
Observar el burbujeo inmediato (liberación de
gas) y registrar el resultado
La prueba puede realizarse también añadiendo el
agua oxigenada directamente sobre una placa que
contiene un cultivo puro. Si
la colonia procede de una placa de agar sangre
puede dar falsos positivos debido a la presencia
de eritrocitos, que también poseen catalasa. Se
considera la prueba positiva cuando se observa
desprendimiento de burbujas de gas (O 2).
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1. POSITIVO (+):
Burbujeo inmediato,
2. NEGATIVO (-):
observación con
Ausencia de burbujas,
facilidad, formación de
ausencia de O2
O2.
 BIBLOGRAFIA
 https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35729/pruebas_bioquimicas_de_identif
icacion_de_bacterias.pdf
 Emilia Cercenado et al. 2010. Métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de
microbiología. Seimc. Disponible:
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiologia/sei
mc-procedimientomicrobiologia37.pdf
 MacFaddin. 2003. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de
importancia clínica.Tercera Edición. Buenos Aires. Médica Panamericana.

http://winklerltda.cl/quimicav2/wp-content/uploads/2017/04/catalasa.pdf
 https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/identificacion-
bacteriana/catalasa