COLUMNA DE WINOGRADSKY: DIVERSIDAD MICROBIANA DENTRO DE UN

MICROCOSMO

WINOGRADSKY'S COLUMN: MICROBIAL DIVERSITY WITHIN A MICROCOSM

*Aguilar Elaine, Bautista Tatiana, Bayona Katiuska, Flórez Yusneiryth,

González Leyde, Molina Marysabel, Molina Santiago & Pico Pedro.

*Estudiantes de Microbiología Ambiental, Universidad Popular del Cesar.

emaguilar@unicesar.edu.co

Resumen.

La columna de Winogradsky consiste en un método relativamente simple que

permite llevar a cabo el estudio de una variedad de procesos microbianos a escala
de laboratorio. Para la aplicación del método, se requirió básicamente de una
columna de vidrio o plástico en su defecto, la cual, contiene un ambiente acuático
suplementado con unos pocos compuestos químicos, sin embargo, esta
composición y suplementación puede variar en su preparación según el estudio en
particular que se desee realizar. La columna de Winogradsky es una demostración
clásica de como los microorganismos ocupan “microespacios”, los cuales, se
caracterizan por ser altamente específicos de acuerdo con sus tolerancias
medioambientales y lo que a sus necesidades vitales se refiere. La metodología
de la realización de la columna consiste en incubarla durante un largo periodo de
tiempo bajo luz solar, es común la formación de un gradiente de oxígeno y otro de
sulfuros, lo cual, determina específicamente una amplia variedad de ambientes en
los que se disponen diversas especies de microrganismos con base en sus
requerimientos específicos, tales como: algas, cianobacterias, Clostridium,
Desulfovibrio, Chlorobium, etc. Es por esto, que el objetivo de la práctica de
laboratorio, consistió en realizar la columna de Winogradsky con el fin de observar
los cambios presentes en la misma, dados por la diversidad de microrganismos
presentes.

Palabras Claves: Columna, variedad, componentes químicos, composición,

microespacios.
Abstrac.

The Winogradsky column is a relatively simple method that allows the study of a
variety of microbial processes on a laboratory scale. For the application of the
method, basically a glass or plastic column was required, failing that, which
contains an aquatic environment supplemented with a few chemical compounds,
however, this composition and supplementation may vary in its preparation
according to the study in particular that you want to do. The Winogradsky column is
a classic demonstration of how microorganisms occupy "microspaces", which are
characterized by being highly specific according to their environmental tolerances
and what their vital needs are concerned with. The methodology of the realization
of the column consists of incubating it for a long period of time under sunlight, the
formation of an oxygen gradient and another of sulfides is common, which
specifically determines a wide variety of environments in which they are arranged.
various species of microorganisms based on their specific requirements, such as:
algae, cyanobacteria, Clostridium, Desulfovibrio, Chlorobium, etc. This is why the
objective of the laboratory practice consisted in making the Winogradsky column in
order to observe the changes present in it, given by the diversity of microorganisms
present.

Key Words: Column, variety, chemical components, composition, microspaces.

OBJETIVOS.

OBJETIVO GENERAL

Elaborar una columna de winogradsky e identificar los grupos microbianos de cada

zona de la columna.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Realizar la columna de winogradsky con materiales orgánicos e inorgánicos

que tenemos en nuestros hogares.
 Observar e interpretar cuál es el desarrollo que tiene el ecosistema de la
columna.
  Reconocer cuál es la importancia de las condiciones ambientales para el
desarrollo de los microorganismos en la columna de winogradsky.

INTRODUCCIÓN

Sergei Winogradsky (1856-1953), invento un método el cual permite estudiar una

diversidad de procesos microbianos a escala de laboratorio, este microbiólogo
Ruso usó la columna por primera vez para estudiar los microorganismos del suelo.
El método requiere una columna de vidrio u otro material adecuado que contenga
un ambiente acuático, el cual es suplementado con unos compuestos químicos
específicos para el crecimiento de los microorganismos según sus necesidades
(Sagardoy, 2004 – citado por Salazar 2017).

La columna de Winogradsky es un sistema acuático en el que se ayuda a los

microorganismos a establecerse en regiones diferentes según su metabolismo y
constituye un modelo de ecosistema, es decir, el proceso de adaptación a los
diferentes ambientes empleando diferentes estrategias para la obtención de
energía (Curtis, 2008).

Una vez que se prepara la columna, esta se expone a luz solar, tras esto se
desarrolla una sucesión de comunidades bacterianas interrelacionadas
metabólicamente, por otra parte, esta columna es un sistema anóxico en miniatura
que puede usarse como suministro a largo plazo de bacterias para cultivos de
enriquecimiento (Microinmuno, s.f.).

Cuando la columna se encuentra en óptimas condiciones se pueden diferenciar

tres zonas características en base a su concentración relativa de oxígeno:

1- Zona aerobia: es la más superficial, dispone de una alta concentración de

oxígeno.

2- Zona microaerófila: con una menor concentración de oxígeno.

3- Zona anaeróbica: constituye el lecho de lodo

 MATERIALES Y MÉTODOS

 Frasco de vidrio
 Regla de madera
 1 cuchara
 Lodo de la superficie de un lago, río o humedal
 Agua procedente de un lago (3-5 Litros)
 Restos Orgánicos de diferentes tipos (tiras de papel, aserrín, restos de
raíces de plantas, carne molida, huevo y cascaras de frutas y verduras)
 5 gramos CaCO3
 Cascaras de huevo trituradas
 1 yema de huevo cocida (CaSO4)

Flujograma de procesos

Fuente de Fuente de sulfato

microrganismos

Fuente de Agregar agua de

microorganismos charco y una capa de
lodo y homogenizar
Adicionar una capa Cascaras de huevo
de 4cm de lodo en el Adicionar la yema cocida y el huevo
como fuente de
recipiente de vidrio calcio
Homogenizar y cubrir Adicionar fuentes de
Adicionar el carbonato materia orgánica y
completamente la de calcio como tampón
preparación con agua carbono
de pH
estancada

Tapar el recipiente, poner al sol y

tomar evaluar los cambios día tras
día hasta que se evidencie la
diferenciación de las zonas Fuente de celulosa
RESULTADOS

Algas
Diatomeas
Cianobacterias
ZONA
AEROBIA
Sulfo-Oxidadores aerobios
Beggiatoa
Thiobacillus
Thiothrix

Bacterias Púrpuras NO del Azufre

ZONA Rhodospirillum
MICROAEROFILA Rhodopseudomonas

Bacterias Púrpuras del Azufre

Chlorobium

Bacterias Verdes del Azufre

ZONA Sulfato-Reductores
ANAEROBIA
Fermentadores de Celulosa
Clostridium
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Según Moreno, J. R. et al., (2012), en su estudio sobre la “Microbiología ambiental

y ecología microbiana en el estudio de microorganismos en ambientes extremos”
menciona que entre cuatro y seis semanas después de su instalación, la columna
debe estabilizarse en tres ambientes básicos distintos en los que se desarrollarán
comunidades microbianas específicas en función de sus requisitos
medioambientales, las cuales pueden identificarse macroscópicamente
visualizando una seria de parámetros, tales como, producción de gases (en la
zona aerobia será oxígeno producto de la fotosíntesis y en la zona anaerobia será
metano producto de la metanogénesis o ácido sulfhídrico. Por lo contrario, en
nuestra práctica de laboratorio realizada no cumplimos con la totalidad del tiempo
dado, no obstante, si logramos observar la formación de gases.

A lo largo de la Columna de Winogradsky, se presentan zonas de estratificación

con diversos organismos. En la zona inferior (zona anaerobia) se desarrollan
organismos que desempeñan procesos fermentativos produciendo alcohol y
ácidos grasos como subproductos de su metabolismo. Estos productos
metabólicos son a su vez, el sustrato para el desarrollo de bacterias reductoras de
sulfato. Como resultado se liberan productos sulfurados que difunden a la zona
superior creando un gradiente de sulfuro de hidrógeno ascendente, donde
bacterias púrpuras y verdes se estratifican según su tolerancia al sulfuro de
hidrogeno. En la zona media (zona microaerófila) se disponen bacterias Sulfo-
Oxidadores aerobias y bacterias fotosintéticas que utilizan el azufre. Por encima
de esta zona pueden desarrollarse aquellas bacterias púrpuras que no utilizan el
azufre. En la zona superior (zona aerobia) crecen algas eucariotas y
cianobacterias que liberan oxígeno manteniendo aerobia esta zona (Moreno, J. R.
et al., 2012).

Las algas y las cianobacterias forman una capa superficial de color verde brillante
y al producir oxigeno ayudan a mantener la aerobiosis en la zona superior de la
columna. Mientras que en el fondo de la columna las bacterias reductoras del
sulfato producen sulfuro, que provoca el crecimiento de bacterias rojas y verdes
del azufre, de modo que se establecen dos gradientes en la columna, uno de
oxígeno y otro de sulfuro de hidrogeno (H2S) (Jiménez, M. et al., 2017).

Las bacterias quimiorganotrofas crecen a lo largo de toda la columna, los

microorganismos aerobios y microaerófilos en la parte superior, los anaerobios en
las zonas donde hay sulfuro de hidrógeno. Es por ello, que, en la zona aeróbica,
(parte superior) de la columna de agua puede contener abundantes poblaciones
de bacterias de diferentes tipos. Son organismos aerobios que se encuentran
habitualmente en los hábitats acuáticos ricos en materia orgánica. Suelen ser
flagelados, lo que les permite moverse y establecerse en nuevas áreas. Puede
desarrollarse también microorganismos fotótrofos variados procedentes
directamente del agua o del barro utilizado originalmente en el montaje de la
columna. La superficie del barro puede presentar en esta zona un ligero color
castaño, esta es la parte de la columna más rica en oxígeno y más pobre en
azufre (Jiménez, M. et al., 2017).

Sin embargo, también allí llegan por difusión procedentes del barro de zonas
inferiores, ciertas cantidades de SH2 que será oxidado a sulfato por bacterias que
oxidan azufre (como Beggiatoa y Thiobacillus). No obstante, estas bacterias
obtienen energía oxidando el SH2 a azufre elemental (Jiménez, M. et al., 2017).

PRODUCCIÓN DE GAS Y H2S EN LA SUPERFICIE (FRANJA NEGRA)

Según Pérez, J. P. L. (2008), en su investigación sobre la columna de

Winogradsky, menciona que la zona cercana a la superficie o zona aeróbica
dispone de una alta concentración de gas sulfuro, producto final del metabolismo
de ciertas bacterias. Las zonas negras son producidas por bacterias
sulforeductoras, estas bacterias quimioheterótrofas oxidan la materia orgánica al
reducir el sulfato, dando como resultado sulfuro de hidrogeno, que en presencia
con metales pesados como el hierro forman precipitados con el color negro. Esta
reacción se da en un sistema anoxico y generalmente existe en estas situaciones
Clostridium, que es una bacteria fermentadora y produce gas. En la parte superior
de la columna, cuando la producción de sulfuro de hidrógeno no es muy
abundante, se desarrolla toda una variada comunidad microbiana caracterizada
por cianobacterias y microalgas, que determinan la producción de oxígeno en su
entorno más inmediato; por contraparte, en nuestro experimento presenciamos la
formación de esta franja negra en la zona aerobia, dado por las bacterias
sulforeductoras.

RECOMENDACIONES

 Colocar la mezcla en un recipiente adecuado hasta ocupar 1/3 del volumen

total.

 Compactar el suelo con la ayuda de una espátula a fin de eliminar las

burbujas de aire.

 Incubar a temperatura ambiente (25 a 30°C) cerca de una ventana para que
reciba la luz solar.

 Colocar los 8 portaobjetos en una posición vertical a diferentes niveles,

cuatro sobre el sustrato inclinados contra la pared del recipiente dejando
que el extremo de hilo suelto quede suspendido fuera de la botella y cuatro
en los primeros 10 cm de la superficie

 Se recomienda que las observaciones físicas de la columna (apariencia) se

realicen con luz natural, y a la misma hora del día

 Desechar la columna de Winogradsky. Reunir en una cubeta el lodo y agua

y posteriormente colocar en una jardinera.

CONCLUSIÓN

Finalmente, la columna de Winogradsky demuestra como los microorganismos

ocupan lugares altamente específicos según sus necesidades de carbono, energía
y sus tolerancias medioambientales, además enseña cómo diferentes
microorganismos desarrollan sus ciclos y la interdependencia que llega a existir
entre ellos. Esta columna es un sistema completo y autónomo de reciclamiento,
mantenido sólo por la energía de la luz. Se pueden diferenciar tres zonas
características en base a su concentración relativa de oxígeno: zona aeróbica,
zona microaerófila y zona anaeróbica. Tras realizar las observaciones
macroscópicas no fue posible evidenciar por falta de tiempo en la capa anaeróbica
la presencia de bacterias reductoras que dan el aspecto negro en la columna, en
las capas microaerofilicas y aeróbicas se observan una mayor cantidad de
bacterias; a pesar de que las coloraciones no son lo suficientemente claras, se
puede especular que hay presencia de algas, cianobacterias y bacterias Sulfo-
Oxidadores. Todo esto se asocia al hecho de que dichos medios contienen
diversidad de nutrientes que pueden favorecer el crecimiento de diferentes
organismos respectivamente. La realización de la columna permitió identificar
como los microorganismos ocupan microespacios que son altamente específicos y
van en concordancia con sus necesidades que se caracterizan por ser diversas.
ANEXOS

CONCEPTOS

ALGAS: Las algas son plantas que suelen vivir en el medio acuático y que pueden

ser pluricelulares o unicelulares. Mientras que algunos expertos ubican las algas
en el grupo de las plantas inferiores, otros sitúan estos organismos entre
los protistas (es decir, no los consideran plantas, animales ni hongos).

DIATOMEAS: Es un grupo de algas unicelulares que constituye uno de los tipos

más comunes de fitoplancton. Contiene actualmente unas 20.000 especies vivas
que son importantes productores dentro de la cadena alimenticia.3 45 Muchas
diatomeas son unicelulares, aunque algunas de ellas coexisten en forma de
filamentos o cadenas celulares (e.g. Fragillaria), abanicos (e.g. Meridion), zigzags
(e.g. Tabellaria), estrelladas (e.g. Asterionella).

CIANOBACTERIAS: Antiguamente llamadas algas verdeazuladas, son un filo del

dominio Bacteria que comprende las bacterias capaces de realizar fotosíntesis
oxigénica. Son los únicos procariontes que llevan a cabo ese tipo de fotosíntesis,
por ello también se les llamó oxifotobacterias.

SULFO-OXIDADORES AEROBIOS: Las bacterias reductoras de sulfato o

bacterias sulfato reductoras (BSR) comprenden varios grupos de bacterias que
utilizan el sulfato como agente oxidante, reduciéndolo a sulfuro. La mayoría
pueden utilizar también compuestos de azufre oxidados como, por ejemplo, sulfito
y tiosulfato o azufre elemental. El olor a huevos podridos del sulfuro de hidrógeno
es a menudo un marcador para la presencia de bacterias reductoras de sulfato en
la naturaleza.

Muchos organismos reducen pequeñas cantidades de sulfatos para sintetizar

componentes celulares que contienen azufre; Esto se conoce como reducción
asimilatoria de sulfato. Por el contrario, los microorganismos reductores de sulfato
considerados aquí reducen el sulfato en grandes cantidades para obtener energía
y expulsar el sulfuro resultante como desecho; esto se conoce como reducción de
sulfato disimilatorio.

BACTERIAS PÚRPURAS NO DEL AZUFRE: También llamadas bacterias

púrpuras fotosintéticas o bacterias rojas, son proteobacterias del clado
Rhodobacteria, y son fotótrofas, esto es, capaces de producir energía a través de
la fotosíntesis. Poseen pigmentos de bacterioclorofila a o b, junto con varios
carotenoides. Estos les proporcionan unos colores que incluyen el rojo púrpura,
rojo vino, rojo, coloraciones amarronadas, color durazno, beige, oliva y rosado. La
fotosíntesis tiene lugar en centros reactivos sobre la membrana celular, la cual, se
dobla dentro de la célula para formar sacos, tubos u hojas, incrementando la
superficie disponible; para ello, utiliza energía solar, pero a diferencia de algas y
plantas que usan luz solar, las bacterias púrpuras usan radiación infrarroja; asi
mismo, las bacterias púrpuras son principalmente fotoautótrofas, pero también, se
sabe que pueden ser quimioautótrofas o fotoheterótrofas, además, pueden ser
mixótrofas, capaces de respiración aerobia y fermentación.

BACTERIAS VERDES DEL AZUFRE: Las bacterias verdes sulfurosas son un

pequeño grupo fotolitoautrofos obligados que usan H2S, como donantes de
electrones. Las estructuras donde se almacenan los pigmentos fotosintéticos se
conocen como clorosomas o vesículas clorobiales. Estos clorosomas contienen
pigmentos bacterioclorófilos.

Estas bacterias se encuentran en las partes ricas de azufre y anaerobias de los

lagos. Algunas de estas bacterias contienen vesículas para ajustar su profundidad
para conseguir un óptimo de luz y H2S ya que estas bacterias no son móviles. Asi
mismo, las otras formas sin vesículas se encuentran en el fango rico en azufre en
el fondo de los lagos y lagunas. Estas bacterias son bien diversas
morfológicamente se encuentran como: bacilos, Cocos, Vibrios. Algunas crecen
solas, en cadenas y pueden ser de colores verde grama o marrón chocolate.

SULFATO-REDUCTORES: (BSR) son microorganismos anaerobios obligados,

metabólicamente versátiles provenientes de varias familias y diferentes géneros.
Utilizan sulfato u otros compuestos oxidados de azufre como aceptor final de
electrones (agente oxidante) para la producción de H2S. Pueden crecer de forma
heterotrófica usando moléculas orgánicas de bajo peso molecular y de manera
autotrófica usando hidrógeno y dióxido de carbono.

FOTOGRAFIAS DE LA PRÁCTICA

Se realizaron el montaje de dos columnas de Winogradsky, para comparar

resultados:

DÍA 1 (MONTAJE – 28/11/2020)

DÍA 1 (MONTAJE – 28/11/2020)

DÍA 3 (01/12/2020) DÍA 3 (01/12/2020)

DÍA 5 (03/12/2020) DÍA 5 (03/12/2020)

DÍA 8 (06/12/2020) DÍA 8 (06/12/2020)

DÍA 12 (10/12/2020) DÍA 12 (10/12/2020)

 DÍA 15 (13/12/2020) DÍA 15 (13/12/2020)

DÍA 21 REVELACIÓN (19/12/2020) DÍA 21 REVELACIÓN (19/12/2020)

Experimento realizado por los Experimento realizado por la
estudiantes Santiago Molina, Leyde compañera Tatiana Bautista en el
González, Pedro Pico, Katiuska Municipio de Agustín Codazzi, ubicada
Bayona, Yusneiryth Flórez & Elaine exactamente en el Serranía del Perijá.
Aguilar en el Municipio de Valledupar –
Cesar.
NOTA: En el presente cuadro pueden observar y/0 apreciar las mínimas
diferencias entre los dos montajes realizados, teniendo en cuenta la variable
temperatura, ya que, en el municipio de Valledupar el clima es caliente, a
diferencia del municipio de Agustín Codazzi (Serranía del Perijá) es más de
climas bajos (Fríos).
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