Benemérita Universidad

Autónoma de Puebla
Facultad de Ciencias Químicas

Departamento de Microbiología

Materia: Laboratorio de Bacteriología I

NRC: 56778

Profesor:
Ana Bertha Escobedo López

Pruebas Bioquímicas

Alumna:
Araziel Rojas García

Primavera 2024

Sexto semestre

Fecha de entrega:
22/Febrero/2024
 PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Realizar la lectura de las pruebas bioquímicas y dar la identificación de la bacteria correspondiente junto con
la interpretación de los resultados (lectura) de las pruebas.

Prueba: MIO
Resultados:
Movilidad (-); El desarrollo
microbiano esta solo en el
trayecto de la inoculación
Indol (-); Reactivo de Kovacs,
formando halo amarillo,
presencia de la enzima
triptofanasa haciendo
desaminación reductiva del
triptófano.

Prueba: O/F Metabolismo

Resultados: Fermentativo
indicando que el aceptor final de
electrones es un compuesto orgánico
y el proceso es anaerobio, originando
mucha acidez por ello su respectivo
color amarillo.

Prueba: TSI
Resultados: K/A+Gas+H2S
Debido a la producción de Ácido
Sulfúrico viraje oscuro, además de
una producción de Gas que da lugar
a la formación de bióxido de
carbono.
 Prueba: Citrato
Resultados: (+) Reacción alcalina, el
agar se torna color azul Prusia
indicando que la bacteria es capaz de
utilizar el citrato como única fuente
de carbono

Prueba: LIA
Resultados: K/A+H2S
Debido a la producción de Ácido
Sulfúrico viraje oscuro, y la
descarboxilación de lisina negativa,

Identificación: Después de hacer un análisis sobre las interpretaciones y resultados de las

pruebas bioquímicas, basándonos en referencias bibliográficas pudimos llegar a la conclusión
de que la bacteria trabajada en esta práctica fue una Enterobacteria.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS DE IDENTIFICACIÓN PARA ENTEROCOCCUS

Investigar las pruebas que se realizan al género Enterococcus junto con los fundamentos y técnica de dichas
pruebas
Para la identificación y caracterización del género Enterococcus, se pueden realizar diversas
pruebas de laboratorio que ayudan a determinar sus propiedades bioquímicas y fisiológicas, así
como el diagnóstico de género son:

Catalasa (negativa): La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias
aerobias, protege a las células frente al peróxido de hidrógeno (H2O2 ) producido en el
metabolismo del oxígeno. Cataliza la formación de agua y oxígeno a partir del peróxido de
hidrógeno, es decir, se comprueba la presencia de dicha enzima. El desprendimiento de
burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.
El procedimiento se lleva acabo tomando una pequeña cantidad del medio de cultivo de la
bacteria de nuestro interés, procurar tomar de un cultivo joven, posteriormente se colocará el
inoculo en un portaobjetos y se le añade una gota de peróxido de hidrogeno (H2O2), de manera
inmediata comenzará la reacción, si la bacteria contiene la enzima catalasa esta va a hidrolizar
al peróxido convirtiéndola en agua y oxigeno gas, por lo tanto se producirá una serie de
burbujas, esto para el resultado de catalasa (+) y en catalasa (-) no ocurrirá ninguna reacción.

Agar Sangre, Hemólisis (γ): La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al

medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene
el balance osmótico y el agar es el agente solidificante. El agregado de 5-10 % sangre ovina
desfibrinada estéril (Britasheep) promueve el desarrollo de bacterias exigentes en sus
requerimientos nutricionales y la adecuada observación de las reacciones de hemólisis. Su
método de realización es aislar la bacteria sembrándola en el medio AS para visualizar su
hemólisis mediante una estría cruzada en la placa.

Prueba de MIO: Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de

levadura, peptona y tripteína. La tripteína aporta gran cantidad de triptofano, sustrato de la
enzima triptofanasa a partir del cual se forma indol que puede ser revelado con el reactivo de
Ehrlich o de Kovac´s por la formación de un compuesto de color rojo. La glucosa es el
hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima
ornitina decarboxilasa, el púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio
alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo. El agar es el agente solidificante
que da la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se
evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea
de inoculación del microorganismo en estudio. Los microorganismos fermentadores de
glucosa acidifican el medio de cultivo y producen viraje del color púrpura al amarillo. Las
condiciones de acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina decarboxilasa,
que actua sobre la ornitina generando putrescina, con la consecuente alcalinización del
medio de cultivo y viraje al color púrpura. El procedimiento de esta prueba es a partir de un
cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar por punción profunda utilizando aguja
de inoculación de acuerdo a los procedimientos establecidos, incubar en aerobiosis, a 33-37
°C. Examinar los tubos de 18 a 24 h observando la movilidad y el color del medio de cultivo.
Luego realizar la prueba de indo con unas gotas de reactivo para el cambio de color.

Prueba de la pirrolidinil arilamidasa (PYR): La prueba del “PYR” permite la identificación

presuntiva de ciertas bacterias en base a la actividad enzimática l-pirrolidonilarilamidasa
(PYRasa). Los microorganismos que contienen esta enzima hidrolizan en forma rápida el
sustrato presente en los discos y liberan un grupo pirrólico que reacciona con el reactivo
cinamaldehído originándose un compuesto de color rosado-rojizo. Constituye una prueba
altamente sensible y de utilidad como los discos de Bacitracina y la prueba de tolerancia a la
sal (REF Enterococos Medio Hipertónico). También se la utiliza junto con la prueba de
leucinoaminopeptidasa y los discos de Vancomicina 30 µg para la identificación de cocos
Gram positivos catalasa negativa no productores de beta hemólisis. Debe tenerse en cuenta
que algunas especies de estafilococos (Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus
scheleiferi, Staphylococcus haemolyticus y Staphylococcus intermedius) son generalmente
PYRasa positivo, por lo que se puede utilizar esta prueba en su identificación. La muestra
biológica se deberá sembrar por diseminación, en agar Tripto Soya con el agregado de 5%
de sangre desfibrinada, incubar 18-24 horas a 37ºC. Una vez obtenido el cultivo puro realizar
la prueba antes de las 48 horas, manteniendo la placa refrigerada entre 2-10ºC.
 REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS.

Sangre Agar Base. (2019). Laboratorios Britania. Recuperado 22 de febrero de 2024, de

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070906bed89d.pdf
González-Fuentes, Mario, Latif, Fadua, Fernández, Fabiola, Villanueva, María P, Ulloa, Jorge, & Fernández, Heriberto.
(2010). Especies de la familia Enterobacteriaceae en heces de lobo marino común, Otaria flavescens establecido en el
río Valdivia. Revista de biología marina y oceanografía, 45(2), 331-334. https://dx.doi.org/10.4067/S0718-
19572010000200015
MIO Medio. (2017). Laboratorios Britania. Recuperado 22 de febrero de 2024, de
https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_6070743f4ed75.pdf
Vaya, C. (2021). MANUAL DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA DE LA ASOCIACIÓN ARGENTINA DE MICROBIOLOGÍA.
Bacterias de Importancia Clínica. Recuperado 5 de febrero de 2024, de https://www.aam.org.ar/descarga-
archivos/BNFFINALAlmuzaraVay.pdf
Metodos para identificar bacilos gramnegativos no fermentadores (BGNnF). (1987). WorldCa. Recuperado 5 de febrero
de 2024, de https://search.worldcat.org/es/title/metodos-para-identificar-bacilos-gramnegativos-no-fermentadores-
bgnnf/oclc/69692460
Flores, Ivan, Núñez, Haydemar, Ramos, Esmeralda, Vitelli-Flores, Juana, & Rodríguez Lemoine, Vidal. (2007). Uso de
un sistema experto en ambiente web para facilitar la identificación de géneros. Revista de la Sociedad Venezolana de
Microbiología, 27(2), 90-94. Recuperado en 05 de febrero de 2024, de http://ve.scielo.org/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1315-25562007000200007&lng=es&tlng=es