DETERMINACION DE LA DBO5

1. Aspectos Teóricos

Las pruebas de DBO constituyen una estimación semicuantitativa de la cantidad de materia

orgánica biodegradable que contiene una muestra. Puesto que no existen formas directas para
medir dicha cantidad de materia orgánica, la medición se realiza de forma indirecta, a través de
"la cantidad de oxígeno disuelto consumido por la oxidación biológica de la materia orgánica
presente"; dicho en otras palabras, la medición se fundamenta en el supuesto de que la cantidad
de materia orgánica contenida en la muestra, es directamente proporcional a la cantidad de
oxígeno que requiere una población bacteriana para digerirla.

La prueba se basa en la comparación del oxígeno disuelto en la muestra, con el existente en una
muestra similar, después de haber sido incubada durante cinco días. Estos cinco días, son el
tiempo estándar destinado para que una población bacteriana digiera, si es que existe, la materia
orgánica presente en la muestra.

Como la medición involucra la participación de organismos vivos, se requiere especial cuidado

tanto en su realización como en su interpretación. Es necesario hacer las pruebas por triplicado,
correr blancos paralelos, muestras control y asegurarse de:

 Que se disponga de una población microbiana capaz de oxidar a la materia orgánica.

 Que dicha población bacteriana esté exenta de algas.
Que la incubación se efectúe a una temperatura determinada y constante, 20 ± 1 °C.
 Que exista un tiempo de incubación definido, 5 días para DBO5 y 7 días para DBO7.
 Que el oxígeno consumido al finalizar el tiempo de incubación esté comprendido entre el
rango 20 -80% con respecto al oxígeno inicial.

Las pruebas de DBO constituyen un índice general cualitativo o semicuantitativo de la

materia orgánica presente en la muestra, "que es susceptible de sufrir oxidación biológica"
en un corto período de tiempo; no es una medida de la cantidad total de materia orgánica
existente en la muestra, ya que esta puede contener también, compuestos orgánicos que
no son fácilmente biodegradables, tales como polímeros sintéticos, detergentes, ligninas,
etc.

La importancia de las pruebas de DBO, radica en que permiten calcular o predecir, cuando menos
aproximadamente, el efecto que causaría una determinada descarga de aguas residuales, sobre
la concentración de oxígeno disuelto de un cuerpo de aguas receptor; expresado en otra forma,
las pruebas de DBO, permiten evaluar la capacidad de un cuerpo de aguas receptor para asimilar
descargas.

2. Preservación y Almacenamiento

Las muestras estériles de alto DBO, (muestras con pHs extremos o provenientes de altas
temperaturas), pueden almacenarse durante 8 días. Sin embargo, las muestras no estériles,
provenientes de industrias papeleras, de alimentos, vinícolas o cerveceras, así como los afluentes
domésticos, deben ser analizadas inmediatamente o dentro de las siguientes 24 horas después
del muestreo, siempre que hayan sido preservadas por refrigeración.

Cuando no es posible analizar las muestras dentro de las siguientes 24 horas después del
muestreo, se conservan bajo refrigeración, se analizan dentro de las 48 horas siguientes al
muestreo y se reporta junto con el valor obtenido de la incubación.
Puesto que es necesario realizar duplicados y en algunos casos, realizar diluciones, se
recomienda tomar por lo menos 1,0 L para muestras puntuales y 0,5 L cuando se desea hacer
composición de muestras.

3. Interferencias y Limitaciones

Son muchos los inconvenientes que presentan las pruebas de DBO; sin embargo, se mencionan
principalmente aquellos que, por su naturaleza aleatoria, escapan del control del operario, o bien
porque están intrínsecamente ligados al método.

 Obtención de un Inóculo Apropiado: Para obtener datos reproducibles se hace necesario

sembrar en cada muestra una misma cantidad y clase de microorganismos. Cabe destacar
que, aunque la bibliografía recomienda obtener el inóculo a partir de muestras de aguas
residuales o de desechos domésticos, en la División de Química Ambiental de
INGEOMINAS, se han obtenido mejores resultados con inóculos producidos a partir de
cultivos puros de Escherichia coli.

 Presencia de Algas en la Muestra o en el inóculo: Cuando existe un considerable número

de algas bien sea en la muestra o en el inóculo, se producen cambios significativos en los
resultados de la DBO. Esto se debe a que las algas bajo la influencia de la luz, liberan
oxígeno merced a la fotosíntesis que realizan, (mientras que en la oscuridad lo utilizan en
su respiración). Por esta razón, se recomienda tomar las muestras e incubarlas en frascos
o sitios oscuros.

 Presencia de Tóxicos en la Muestra: Las muestras que contienen sustancias altamente

tóxicas tales como pesticidas, herbicidas, metales pesados, etc., presentan dificultades
para las pruebas de DBO, debido a que estas inhiben el crecimiento bacteriano del inóculo
y dificultan por tanto el consumo de la materia orgánica. En este punto resulta conveniente
recordar que "las pruebas de DBO representan una medida de la cantidad de materia
orgánica biodegradable y no del grado de contaminación de la muestra", entendiendo por
"contaminación", la presencia de substancias altamente tóxicas en la muestra.

4. Necesidad de Realizar Diluciones

Dadas las condiciones geográficas de Bogotá, (2.600 metros sobre el nivel del mar y una
temperatura media de 16 °C), la concentración de oxígeno disuelto en el agua en condiciones de
saturación es de aproximadamente 7,0 mg 02/l. Por otra parte, la DBO está definida como la
diferencia de dos medidas de concentración de oxígeno, en donde la medida final no puede ser
inferior de a 2,0 mg/l. Esto significa que la máxima cantidad de materia orgánica biodegradable
que puede ser medida sin necesidad de diluir la muestra son 5,0 mg O2/l o 0,62 milieq/L.

El anterior razonamiento ilustra claramente por qué se hace necesario diluir la mayoría de las
muestras antes de medir su DBO5. Ya que las pruebas de DBO5 y DQO están relacionadas, se
recomienda medir primero la DQO, antes de medir la DBO5, con el propósito de utilizar este valor
para estimar la dilución más apropiada en las pruebas de DBO5. Como guía para orientar tales
diluciones, se presenta a continuación la (s) dilución (es) sugerida en términos de porcentaje, para
unos determinados valores de DQO.
Diluciones sugeridas con base en los valores de DQO

DQO, mg/L Diluciones sugeridas para la

DBO5
1-5 Directa
5 - 10 Directa y al 50%
 10 - 15 50% y 30%
15 - 25 30% y 15%
25 - 50 15% y 10%
50 - 100 10% y 5%
100 - 200 5% y 2%
200 -400 2% y 1%
400 - 800 1% y 0,5%

4. Materiales y Equipos
 Incubadora o baño de agua capaz de termostatar internamente a 20°C + 1°C.
 Sistema de aireación para oxigenar el agua de dilución. Normalmente, un sistema simple
de burbujeo, suele ser suficiente.
 Botellas de vidrio o plástico de un litro de capacidad, para realizar los muestreos.
 Botellas Winkler para DBO, preferiblemente de color ámbar.
 Balones aforados de un litro
 Pipetas aforadas de 1, 2, 5, 10, 20, 50 y 100 mL.
 Erlenmeyers de 300 ml.
 Buretas graduadas en centésimas de ml.
 Agitador magnético
 Aza de platino para inocular las muestras.
 Algodón, vidriogrphs, cinta de enmascarar y papel de polietileno.

6. Reactivos

a. Fuente de Microorganismos: "Pesar 50 mg de un cultivo puro de Escherichia coli en agar-agar,

adicionar 100 mL de agua destilada, agitar magnéticamente durante 4 horas y filtrar sobre
algodón. Este filtrado se emplea como fuente de microorganismos libre de algas, o inóculo, en
aplicaciones de 1,0 mL por cada litro de muestra o agua de dilución.
b. Buffer de Fosfatos, pH 7,2: Pese 8,50 g. KH2PO4, 21,75 g. K2HPO4, 33,40 g. Na2HPO4.7H20
y 1,7 g. NH4Cl. Lleve a un litro de agua destilada.

c. Solución de sulfato de magnesio: Pese 22,5 g. Mg SO4 y lleve a un litro de agua destilada.

d. Soluciones de cloruro de calcio: Pese 27,5 g. CaC12 y lleve a un litro con agua destilada.

e. Solución de cloruro férrico: Pese 0,25 g. FeC13.6H2O y lleve a un litro con agua destilada.

f. Solución Control de Glucosa & Acido Glutámico: Pese 150 mg Glucosa, 150 mg de ácido
glutámico o 187,2 mg. de clorhídrato de ácido glutámico. Estos reactivos deben ser secados
previamente a 110 °C. durante dos horas. Disolver y llevar a un litro con agua destilada y preparar
esta solución fresca, cada vez que vaya a usarse.

g. Alcohol antiséptico.

h. Agua de dilución: Se prepara de la siguiente forma: En un frasco de Agua Cristal Postobón,

previamente esterilizado, colocar 20,0 l. de agua destilada y adicionar 20 ml. de cada una de las
soluciones de fosfatos, sulfato de magnesio, cloruro de calcio y cloruro férrico. Airear la mezcla
hasta saturación y dejar en reposo durante 30 minutos antes de su uso, para permitir que se
establezca el equilibrio entre el oxígeno del agua y su medio ambiente.
7. Procedimiento sin Dilución de la Muestra
Preparación de la Muestra:

Las muestras de agua, cuyos valores de DBO5 son previsiblemente bajos, tales como los
provenientes de aguas superficiales, pueden incubarse sin dilución, si previamente se enriquecen
en oxígeno bien por agitación en una botella parcialmente llena o bien mediante aire filtrado
proveniente de un compresor. En cualquier caso, debe lograrse que la muestra sea incubada con
una concentración de oxígeno equivalente a la concentración de saturación del lugar geográfico
donde se realiza el análisis.
Cuando las muestras contienen material particulado grueso, se filtran sobre algodón. Si se
observa que el filtrado contiene sólidos suspendidos, se debe decidir si éstos se incluyen o no en
la prueba. En caso negativo se filtra la muestra en papel de 0.45 μm, antes de la oxigenación. A
las muestras que se siembran directamente se les ajusta el pH a 7 y se les adiciona 1,0 ml/l de
cada una de las soluciones a, b, c, d, y e.

Las muestras se colocan en botellas Winkler, (por triplicado), evitando al máximo la formación de
burbujas de aire en su interior. Se tapan herméticamente conservando un sello de agua y se
incuban en un sitio oscuro a 20o ± 1o C. Luego de un periodo de 5dias de incubación, (± 4 horas),
se les determina el oxígeno disuelto final, ODF.

Paralelamente con las muestras se debe sembrar también un "blanco de reactivos," Bk y una
"Solución control", K, cada una de ellas también por triplicado. Estas soluciones se presentan así:

1,0 ml. de inóculo

BK Llevar a 1,0 l. 3 Replicas 3 réplicas
con agua de dilución

1.0 ml. de inóculo

K 20,0 ml. de solución control
llevar a 1,0 l. con agua de dilución. 3 réplicas
Ajustar al pH a 7.0

1.0 ml. de c/u de las soluciones

S* 1.0 ml. de c/u. de las soluciones 3 réplicas
que componen el agua de dilución
y llevar a 1,0 L con muestra oxigenada
* Muestra

8. Procedimiento con Dilución de las Muestras

Como ya se ha expuesto antes, la mayoría de las muestras exigen la realización de diluciones

previas para la determinación de su DBO. Estas diluciones pueden orientarse adecuadamente
determinando primero el DQO de la muestra a investigar y correlacionando este valor con las
diluciones sugeridas en la tabla 1.

Una vez conocidas las diluciones apropiadas, se toman las alícuotas necesarias para reparar 1,0 l
de solución, se adiciona 1,0 ml de inóculo y se lleva a volumen con agua de dilución. Cada una de
las diluciones sugeridas se incuba por triplicado e igual que en el caso anterior, se corren
paralelamente un blanco y un control por triplicado.

NOTA: A menos que las diluciones sugeridas sean superiores al 5%, las muestras diluidas
deberán ser aireadas nuevamente para asegurar su completa saturación en oxígeno. Diez
minutos de burbujeo y cinco de reposo suelen ser suficientes en estos casos.