PRUEBA DE CATALASA Fundamento La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno bajo la Fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2.

De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares en oxígeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. La taxonomía de los cocos Gram positivos. Estos se pueden clasificar, en primera instancia, en cuanto a sus requerimientos atmosféricos. Así tenemos los cocos Gram positivos anaerobios estrictos constituidos por los géneros Peptococcus y Peptoestreptococcus. Por otro lado tenemos los cocos Gram positivos aerobios y anaerobios facultativos que están constituidos por la familia Micrococacceae (géneros Staphylococcus, Micrococcus, Planococcus Stomacoccus) y los

géneros Streptococcus Enterococcus.

y

Bacillus (+) de Clostridium (-). Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+), con las excepciones de C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos (-) de Erysipelothrix (-)

El género Staphylococcus es aerobio-anaerobio facultativo, por tanto su crecimiento en tioglicolato será en toda la extensión del tubo. Requerimientos nutricionales El género Staphylococcus es no exigente en cuanto a sus requerimientos nutricionales, por lo tanto crece en medios de cultivo pobres. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa. Esta prueba Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepción es Streptococcus. Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes géneros: Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).

Procedimiento de la prueba Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos técnicas: Método del (recomendado): portaobjetos

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24

horas y colocar sobre portaobjetos limpio de vidrio.

un

contienen catalasa y su presencia dará un falso resultado positivo.

Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H2O2 al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo. Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo). Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante. Si se invierte el orden del método (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos.  Método del tubo de ensayo:

Prueba de la Coagulasa se usa para diferenciar el Staphylococcus aureus produce 2 formas de coagualasa (por ejemplo, coagulasa ligada y coagulasa libre). La coagulasa ligada también conocida como "factor de Clumping " "factor de Clumping " se puede detectar mediante la realización de una prueba de portaobjetos y la coagulasa libre con una prueba de coagulasa de tubo. Prueba de portaobjetos Prueba del portaobjetos se hace conjuntamente con un control negativo para descartar auto aglutinación. Se ponen 2 gotas de solución salina en el portaobjetos microscópico rotulado con un número de muestra, Test (T) y control (C). Las 2 gotas son emulsionadas con la prueba de organismo mediante el uso de un cable de lazo, cable recto, o un palo de madera. Se pone una gota de plasma (plasma de conejo con anticoagulante (EDTA)1 ) en la gota de solución salina inoculada correspondiente a la prueba y se mezcla bien con un una varilla de

LA COAGULASA La coagulasa es una proteína producida por varios microorganismos que permite la conversión del fibrinógeno en fibrina. En el laboratorio, se usa para distinguir entre diferentes tipos de Staphylococcus. Un resultado de coagulasa positivo indica que la muestra contiene S.aureus Esta proteína también es producida por Yersinia pestis.La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama staphylothrombina, y permite que la enzima proteasa convierta el fibrinógeno en fibrina. Esto hace que se coagule la sangre.

Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente inoculado. Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo). Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la precaución de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio

madera. Agitar el portaobjeto con cuidado unos 10 segundos. Si es positivo: Se podrá observar aglutinación macroscópica en el plasma en los 10 segundos mientras que no se observara aglutinamiento en la gota de solución salina. Si es negativo: aglutinamiento. No se observara

en 1½ horas. Si es negativo entonces continuamos la incubación por unas 18 horas.

subsp. anaerobius, Staphylococcus aureus subsp. Aureus, Staphylococc us delphini, Staphylococcus hyicus, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus lutrae, Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans. Lista de' 'staphylococci coagulasa negativo de relevancia clinica: S.saprophyticus, S.cohnii subsp. cohnii, S.cohnii subs p. urealyticum, S.captitus subsp. cap titus,S.warneri, S.hominis, S.epiderm idis, S.caprae.

NOTA: Si la prueba de la coagulasa de portaobjetos fuera negativa, debería hacerse una prueba de tubo como confirmación. El aglutinamiento en las dos gotas es un indicativo de auto aglutinación y por lo tanto debemos descartar la prueba de tubo. Prueba del tubo de ensayo Coágulos formados por la reacción de la coagulasa en un tubo de ensayo La prueba se utiliza plasma que ha sido inoculado con una colonia de staphylococcal (por ejemplo, con un coco gram positivo catalasa positivo). Luego el tubo se incuba a 37 grados Celsius

Si sale positivo (por ejemplo, la colonia problema es S. aureus), el suero coagulará, dando como resultado un coágulo (a veces el coágulo esta tan desarrollado que el liquido se solidifica completamente). Si sale negativo, el plasma permanece liquido. Un resultado negativo podría indicar que se podría tratar de S. epidermidis pero solo con unas pruebas más precisas se puede confirmar este hecho, como por Ejemplo el API o métodos de BBL CRYSTAL. Lista de staphylococci coagulasa positivo: Staphylococcus aureus

PRUEBA ESPORAS

DE

TINCIÓN

DE

su estudio y observación son de enorme interés.

Objetivos 1. Estudiar las ensoparas y su disposición en las las formas distintas vegetativas. 2. Comprobar morfologías. Material necesario -porta objetos bacterianos preparados. -colorantes: a) solución de verde malaquita (5%) b) solución de safranina (0,5%) -pinzas de madera -mechero bunsen o alcohol -microscopio o aceite de inmersión. REALIZACIÓN Se emplearán cultivos con frotis previamente

Fundamento Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de difícil tinción. La tinción específica de esporas requiere dos colorantes: 1.- Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente. 2.- Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas vegetativas. Las ensoparas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante

Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) formándose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar perdura durante años. Algunas de las bacterias productoras de endosporas son patógenas para el hombre, por lo que

en

fase

estacionaria para dar lugar a que las bacterias produzcan las esporas. Esta tinción es delicada en su realización y para poder obtener unos resultados satisfactorios hay

que

seguir

cuidadosamente

las

1.

Preparar los frotis bacterianos con verde malaquita.

Interpretación de los resultados La posición y la morfología de la endospora en el interior de la bacteria constituyen un carácter taxonómico útil para diferenciar especies dentro de un mismo género.

instrucciones.

indicados. 2. Teñir

Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma que el colorante humee durante 5 min. Nota: evitar que la muestra hierva. Añadir más colorante si éste evapora; es importante que muestra no se seque. 3. Lavar con abundante agua exceso de colorante. 4. Teñir con safranina 1 min. 5. Lavar con abundante agua exceso de colorante. 6. Secar la preparación. 7. Observar la preparación al microscopio. Anotar la disposición y la morfología de las tres especies del género Bacillus. se la el

el

Las tres bacterias empleadas en esta práctica difieren en la disposición y morfología de las endosporas. B. sphaericusposee una endospora esférica con localización terminal y deformante de la célula vegetativa, por lo que suele ser denominada "en palillo de tambor". B. thuringiensis tiene localizada la endospora elipsoidal en el centro de la célula vegetativa, lo que provoca un abombamiento característico denominado "en huso". B. subtilis forma una espora cilíndrica subterminal no deformante. PRUEBA OXIDASA

Fundamento Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del cito cromo que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido de hidrógeno según la especie bacteriana. El oxígeno actúa por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa sólo se encuentra en los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún microaerófilo (Vibrio fetus), pero los

Producción de catalasa, ya que ésta degrada el peróxido de hidrógeno que se produce como consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya acumulación es tóxica. Procedimiento Hacer una suspensión del microorganismo con solución fisiológica (inóculo) en un tubo de vidrio, agregar un disco (disco comercial de papel impregnado de tetrametil-para-difenilamina) se agita y antes de los 2 minutos se debe leer.

Un cambio de color del disco a rosado o violeta = prueba (+). Si no hay cambio de color el microorganismo es oxidasa negativo.

Consideraciones Esta prueba no puede realizarse con colonias que provengan de medios de cultivo que contenga hidratos de carbono ni indicadores, por lo que si se la va a realizar se debe incubar los microorganismos en un placa de AS o bien un TSA (tripteina-soya-agar)

anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa. Asímismo, la presencia de oxidasa va ligada a la

Interpretación

CRECIMIENTO EN ANAEROBIOS

La búsqueda de bacterias anaerobias sólo se debe hacer cuando se pueda discernir su papel y tenga interés etiológico y terapéutico. Estos microorganismos son resistentes a aminoglicósidos (carecen de los sistemas necesarios para su penetración) y monobactámicos y pueden desarrollar resistencia a otros antimicrobianos habitualmente eficaces, particularmente el grupo de Bacteroides fragilis. Suelen presentar alta actividad las asociaciones de beta lactámico/inhibidor de betalactamasa (amoxicilina/ácido clavulánico y piperacilina/tazobactam), las carbapenemas (imipenema, meropenema y ertapenema), el metronidazol y el cloranfenicol. La resistencia del grupo de Bacteroides fragilis a la cefoxitina y a la clindamicina es elevada, como lo es de Bacteroides fragilis a la cefoxitina y a la clindamicina es elevada, como lo es aún más a la penicilina, situación compartida por otros bacilos gramnegativos.

asociada a antimicrobianos toxiinfección por C. perfringens.

y

Toma de muestras

Como las especies encontradas en las diferentes infecciones son, con la excepción de algunos clostridios, las mismas que se hallan en la micro flora habitual, para que los estudios microbiológicos tengan valor es necesario que las muestras sean tomadas de forma que la flora normal no las contamine. Por ello que no se deben estudiar muestras nasales, orales, de vías respiratorias bajas recogidas por procedimientos que no impidan su contacto con bacterias de otras localizaciones, cutáneas, vaginales, urinarias tomadas por micción o sondaje o digestivas, salvo para procesos muy concretos, como botulismo, diarrea

En las infecciones abiertas es necesario recurrir a muestras representativas, que deben ser de la parte profunda, tomadas quirúrgicamente por aspiración percutánea o tras la eliminación de los tejidos necróticos superficiales por curetaje o por aspiración. En su defecto, se puede tomar la muestra con un hisopo de la base de la lesión. El uso del broncofibroscopio ha mejorado la toma en neumonías (catéter telescopado protegido o lavado broncoalveolar) y la punción transtraqueal ha caído en desuso. Otras muestras respiratorias válidas son la punción pulmonar directa y la toracocentesis

Transporte al laboratorio

En el transporte de una muestra para la búsqueda de bacterias anaerobias se debe evitar la presencia de oxígeno, aunque estas pueden sobrevivir varias horas, incluso días, en un medio de transporte adecuado, dependiendo de su naturaleza. En general, en las muestras purulentas pueden Sobrevivir más tiempo que en los líquidos claros. Para el transporte en anaerobiosis se encuentran disponibles en el mercado tubos, frascos y viales con una atmósfera anaerobia que contienen un medio de transporte reducido y resarzurina como indicador de la presencia de oxígeno (Port-A-Cul®, Becton Dickinson). Las jeringas utilizadas en la aspiración de pus no deben utilizarse como transporte debido al riesgo de pinchazos y la posible expulsión accidental de su contenido; además, el oxígeno difunde a través de la estructura de plástico de sus

paredes. Una vez realizada la aspiración se debe expulsar el posible contenido gaseoso, tapando la aguja con una gasa estéril impregnada en alcohol para eliminar el riesgo de aerosoles. A continuación, se cambia la aguja por otra estéril y se inocula el contenido, previa desinfección del tapón de goma, en la superficie del agar de un vial de transporte para anaerobios.

Recepción y procesamiento de las muestras  Recepción.

Las muestras de tejidos y biopsias quirúrgicas se remitirán en un frasco estéril que se puede introducir en una bolsa de anaerobiosis de plástico transparente y flexible (ver más adelante sistemas de anaerobiosis). Además, existen frascos de transporte para muestras de tejido y biopsias que contienen una base de agar y un indicador de anaerobiosis. El tejido se introduce aproximadamente a 5 mm de la base e inmediatamente después se enrosca el tapón.

Una vez recibida la muestra en el laboratorio se anota la fecha y hora de recepción y se comprueba que cumple los requisitos para su aceptación (correcta identificación, muestra adecuada, condiciones de transporte, etc.). Una información más detallada sobre la recepción aparece en el Procedimiento 1a de la SEIMC (Recogida, transporte y procesamiento general de las muestras en el laboratorio de microbiología).  Procesamiento.

El procesamiento inicial incluye su preparación, examen directo e

inoculación en los medios de cultivo apropiados.  Preparación.

tratando la muestra con calor o alcohol (ver más adelante en el apartado 11.2).  Inoculación de la muestra

Tras el examen inicial, la muestra se procesa con las máximas precauciones y lo antes posible, siendo aconsejable que no transcurran más de 15 minutos desde su recepción. Si es posible, la preparación se deberá hacer en una cámara de anaerobiosis para minimizar su oxigenación. El material purulento se mezcla bien con la ayuda del agitador Vortex. Las muestras de tejido o de biopsia se homogeneizan, ya sea con un bisturí, cortando trozos muy finos hasta obtener una consistencia homogénea, o en un mortero estéril añadiendo 1 mililitro de caldo. En el caso de que la muestra se haya obtenido con torunda, se exprime en un pequeño volumen de caldo mediante movimientos rotatorios sobre las paredes del tubo y este caldo se procesa como una muestra líquida. Cuando se investiga la presencia de Clostridium se puede realizar un enriquecimiento, que consiste en eliminar todas las formas vegetativas y conservar las esporas

Una vez homogeneizada con la ayuda de una pipeta Pasteur se deposita una gota, si la muestra es purulenta, o 2-3 gotas, si no lo es, en cada uno de los medios de cultivo utilizados, una gota en un portaobjetos para la tinción de Gram y el resto en un medio líquido de enriquecimiento.

Medios de cultivo Para conseguir una recuperación óptima de bacterias anaerobias es fundamental elegir correctamente los medios de cultivo primarios. La mayoría de estas bacterias requieren para su crecimiento vitamina K1 y hemina. Para su aislamiento e identificación presuntiva se aconseja utilizar una combinación de medios enriquecidos no selectivos, selectivos y diferénciale entre los que se incluyen:

Examen directo Proporciona de forma inmediata información semicuantitativa acerca de los microorganismos presentes y un diagnóstico presuntivo de la existencia de bacterias anaerobias, lo cual es importante para establecer una terapia inicial, ya que el proceso de aislamiento e identificación puede demorarse varios días.

- Un medio de agar sangre para anaerobios como agar Brucella o agar Schaedler con un 5% de sangre de carnero, a los que se añaden vitamina K1 (1 µg/ml) y hemina (5 µg/ml). En estos medios crecen tanto las bacterias anaerobias facultativas como las anaerobias obligadas. - Agar Bacteroides bilis esculina con amicacina (BBE). Es un medio selectivo para Bacteroides del grupo fragilis y Bilophilia spp. Contiene amicacina (100 µg/ml) que inhibe la mayoría de facultativos, bilis (20%) que con casi exclusividad sólo permite el crecimiento de las especies citadas y esculina que al ser hidrolizada en presencia de un indicador (citrato férrico) vira el medio a color negro. Permite una fácil detección de las especies de Bacteroides del grupo fragilis al ser esculina positiva. A veces, pueden crecer otras especies, como Fusobacterium mortiferum, Fusobacterium varium, algunas entero bacterias, Pseudónimas aeruginosa, entero cocos, levaduras, etc., aunque se distinguen de los Bacteroides del grupo fragilis por el

tamaño de sus colonias, que normalmente es inferior a 1 mm de diámetro. - Agar con alcohol fenil-etílico (PEA) con un 5% de sangre de carnero. El alcohol inhibe el crecimiento de bacilos gramnegativos facultativos, principalmente el crecimiento en velo de las especies de Proteus. También evita el crecimiento en velo de algunas especies de Clostridium comoClostridium septicum, facilitando de este modo su aislamiento. Se aconseja sembrar en este medio las muestras purulentas o cuando sea previsible una infección mixta.

- Un agar sangre selectivo, como agar Schaedler con neomicina (75 µg/ml) y vancomicina (7,5 µg/ml) (SNV) o con kanamicina (75 µg/ml) y vancomicina (7,5 µg/ml) (SKV) o el Clásico agar Brucella con kanamicina, vancomicina y en este caso sangre lacada (ASLKV). Son medios selectivos para bacilos gramnegativos como el grupo de Bacteroides fragilis y especies de Prevotella. La presencia de neomicina o de kanamicina inhibe a la mayor parte de los aerobios facultativos y la presencia de vancomicina inhibe la mayoría de los grampositivos y especies de Porphyromonas. A veces pueden crecer en estos medios levaduras y anaerobios facultativos resistentes a estos aminoglicósidos por lo que siempre debe realizarse una tinción de Gram y un ensayo de aerotolerancia a todos los aislados. - Agar con yema de huevo (AYE). Cuando se sospecha la presencia de clostridios, para detectar la producción de lipasa y/o lecitinasa.

Un agar selectivo para Clostridium difficile, cuando se investigue la presencia de esta especie, como agar fructosacicloserina-cefoxitina (CCFA) o agar yema de huevo-cicloserina-cefoxitina (CCEY).

antibióticos o a otros factores, o bien cuando las bacterias se encuentran en cantidades muy pequeñas.

Sistemas de anaerobiosis.

incubación

en

Como medio líquido de enriquecimiento o de mantenimiento se recomienda usar caldo de tioglicolato sin indicador, suplementado con vitamina K1(200 µl) y hemina (20 µl). Este medio se utiliza para recuperar las bacterias anaerobias en caso de que falle la anaerobiosis en la incubación de los cultivos primarios, haya una inhibición del crecimiento debido a

Su elección viene determinada por el coste, número de cultivos y limitaciones de espacio. Los más comunes son las cámaras, jarras o cajas y bolsas de anaerobiosis. Con independencia del sistema utilizado es importante monitorizar el ambiente anaerobio con una tira indicadora de azul de metileno o de resarzurina, y la temperatura de incubación.

Existen diferentes modelos de cámaras para anaerobios, en las que se consigue una atmósfera anaerobia mediante una mezcla de gases que contiene 5% de H2, 5-10% de CO2 y 85-90% de N2. Poseen un sistema de intercambio que consiste en un compartimento rígido con una puerta interior y otra exterior. Las jarras son recipientes cilíndricos, de metal o de plástico rígido, que deben cerrarse herméticamente y en los que la atmósfera anaerobia se obtiene entre 1 y 2 horas después de introducir unos sobres (GasPak®, Becton Dickinson) en los que, al añadir H2O se libera H2 y CO2El H2 se combina con el oxígeno existente formando agua gracias a la presencia de un catalizador. Actualmente existen sistemas en los que no hace falta añadir H2O o introducir el catalizador ® (Anaerogen , Oxoid). Mediante una técnica automatizada, Anoxomat®, también se puede lograr una atmósfera anaerobia en las jarras. Como ya se ha señalado debe introducirse un indicador de oxígeno, que suelen ser tiras de papel con azul de metileno, que se

decoloran al desaparecer presencia del oxígeno.

la

microorganismos de crecimiento rápido y se empleen medios selectivos como el BBE para el grupo de Bacteroides fragilis o el EYA para clostridios, en cuyo caso se pueden examinar a las 24 h. Si en las placas no se observa ningún crecimiento se deben reincubar hasta completar 7 días, al menos las de agar sangre no selectivo, ya que algunos anaerobios requieren este tiempo para formar colonias visibles (Actinomyces, Porphyromonas, Propionibacterium, Bilophila,...). Se aconseja mantener la incubación del medio líquido de enriquecimiento entre 7 y 10 días y se deben realizar subcultivos, si se aprecia turbidez u otro signo de crecimiento, en agar sangre y agar chocolate que se incubarán en una atmósfera con 10% de CO2, y en agar sangre para anaerobios incubado en anaerobiosis. Este mismo proceder se realiza al final del periodo de incubación si no se ha detectado crecimiento para considerarlo definitivamente estéril.

En el diagnóstico de la actinomicosis el tiempo de incubación debe ser mayor, generalmente entre 2 y 4 semanas.

BACILOS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES

Tiempo de incubación. Inmediatamente después de su siembra las placas de cultivo se incuban a 35-37ºC en el sistema de anaerobiosis disponible. Si se utiliza una cámara se pueden examinar a las 24 h, puesto que no es necesario sacarlas, mientras que si se emplean jarras o bolsas hay que esperar 48 h, a no ser que se busquen

Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium se caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las restantes eubacterias. La pared

de las Mycobacterias posee un alto contenido de lípidos que la hace impermeable a los agentes hidrofílicos, por lo tanto estos microorganismos no se tiñen adecuadamente con los reactivos utilizados en la coloración de Gram y no pueden ser clasificados como Gram positivos o negativos. Las Mycobacterias son teñidas adecuadamente por el método de Ziehl-Neelsen (Tinción Acido-

Rápida o Acid-Fast Stain) que utiliza como solución decolorante una mezcla de etanol y ácido clorhídrico. Estos microorganismos una vez coloreados son resistentes a la decoloración ácido-alcohólica y por eso se denominan Bacilos Acido Alcohol Resistentes (BAAR).

Los microorganismos del género Mycobacterium contienen una membrana citoplasmática formada por una bicapa lipídica similar a las restantes eubacterias. Por encima de esta membrana se encuentra el rígido peptidoglicano que contiene N-glucolilmurámico en lugar de Nacetilglucosamina. Por medio de una unión fosfodiéster, el peptidoglicano se halla unido covalentemente al arabinogalactano, un polímero de arabinosa y galactosa. En la porción más distal y externa de los arabinogalactanos se hallan fijados los ácidos micólicos que tienen cadenas carbonadas largas (C60 a C90). Los glucolípidos son un grupo de compuestos (micolatos de trealosa, sulfolípidos, micósidos, etc.) que se encuentran asociados no covalentemente a los ácidos micólicos y se ubican periféricamente en la pared. Los micolatos de trealosa (llamados factores de cordón porque su presencia produce cultivos que tienen forma de cordones serpenteantes) y sulfolípidos se encuentran principalmente en las cepas de Mycobacterias más virulentas. El lipoarabinomanano (LAM) es un compuesto que se halla

anclado en la membrana citoplasmática. El LAM es considerado como el equivalente mycobacteriano del lipopolisacárido de las Gram negativas debido a que provoca una importante respuesta antimicrobiana en macrófagos. En las cepas de Mycobacterias más virulentas la arabinosa terminal del LAM está recubierta con residuos de manosa (manLAM) a diferencia de las cepas no virulentas no están recubiertas (AraLAM). Además, el LAM también podría servir como poro para el paso de los nutrientes a través de la pared celular. En la pared celular también se encuentran proteínas inmunoreactivas que son utilizadas con fines diagnósticos (PPD). El Mycobacterium tuberculosis es el agente etiológico de la tuberculosis, una enfermedad que primariamente produce lesiones en los pulmones y que puede causar la muerte si nos es tratada en forma adecuada. Existen otras Mycobacterias capaces de producir infecciones en el hombre. El M. bovis también causa tuberculosis, mientras que las infecciones producidas por M. avium, M. kansakii,M.

fortuitum y M.

consideradas oportunistas y no tuberculosas. La lepra es una infección causada por el Mycobacterium leprae que es un parásito intracelular obligado que se multiplica lentamente en células fagocitarias mono nucleares como los histiocitos de la piel y en las células de Shwan de los nervios. La tuberculosis es una enfermedad de distribución mundial pero con consecuencias devastadoras en los países en desarrollo. En el año 1993 la Organización Mundial de la Salud (OMS-WHO World Health Organization) declaró a la tuberculosis una "Emergencia Global". Se estima que un tercio de la población mundial está infectada con el M. tuberculosis, y que en la próxima década serán infectadas más de 300 millones de personas de las cuales 90 millones desarrollarán la enfermedad y 30 millones morirán por ella.

chelonei son

Esquema de las envolturas de una eubacterias Acido-Alcohol Resistente Fundamentos y técnicas de análisis microbiológicos Micobacterias Micobacterias

Taxonomía Las Micobacterias son microorganismos distribuidos ampliamente en la naturaleza. Se conocen más de 50 especies, de las cuales casi la mitad se han aislado en procesos infecciosos humanos. Tienen interés especial debido a su alto contenido en lípidos (hasta un 40% del peso seco de la célula) Desde el punto de vista clínico, las Micobacterias pueden agruparse en tres grupos: - Especies que nunca son patógenas. - Especies saprófitas que pueden convertirse en patógenas (Micobacterias atípicas). - Especies que siempre son patógenas y producen tuberculosis humana y lepra. Las que vamos a ver son las de este último grupo, destacando por su importancia las siguientes: - Mycobacterium tuberculosis o bacilo de Koch Mycobacterium bovis - Mycobacterium leprae (será vista aparte)

Recogida de muestras

Para el diagnóstico de tuberculosis pulmonar la muestra idónea es el esputo obtenido por la mañana, en ayunas, antes de la utilización de ningún medicamento. Para la tuberculosis renal la muestra más adecuada es la primera orina de la mañana, recogida en ayunas, previo lavado de genitales externos y despreciando la primera parte de la micción. Las muestras de orina de 24 horas son menos rentables y proporcionan una mayor tasa de contaminaciones. La tuberculosis genital se puede determinar investigando la presencia de micobacterias en la sangre menstrual, aunque la muestra más adecuada es la obtenida mediante legrado de endometrio. En el hombre se pueden recoger muestras de semen, biopsia de epidídimo o exudados de fístulas escrotales.

La meningitis tuberculosa utiliza L.C.R., que puede mantenerse a temperatura ambiente de 24 a 48 h. a la espera de formación de un retículo para observación de BAAR. Para el diagnóstico de tuberculosis intestinal se pueden utilizar heces, aunque es preferible la biopsia mediante endoscopia. Otros tipos de muestras pueden ser estudiadas mediante el machacado previo en mortero con arena estéril o en aparatos mecánicos si las muestras son sólidas. Si son líquidas las muestras se centrifugan a 3000 rpm durante 30' y se trabaja con el sedimento obtenido.

Procesamiento de las muestras para estudio de micobacterias En el procesamiento analítico microbiológico de una muestra para cultivo, aislamiento e identificación de micobacterias, (sobre todo esputo y orina) hay un dato muy importante a tener en cuenta: las micobacterias clínicamente importantes son microorganismos de crecimiento muy lento, dando por lo general colonias visibles en medios de cultivo apropiados no antes de siete días; lo cual permite que el

crecimiento de otros microorganismos de crecimiento normal enmascare e inhiba el crecimiento de las micobacterias. Para evitar esto, todo proceso de cultivo de micobacterias lleva asociado un procedimiento previo de descontaminación en el que eliminamos microorganismos no deseados. La descontaminación puede llevarse a cabo con un ácido, un álcali o cualquier compuesto descontaminante. La sosa, a concentraciones del l al 4% es uno de los más utilizados. A pesar de que las micobacterias son muy resistentes a estos agentes, tras un proceso de descontaminación solo quedan viables de un 10 a un 20% de la población inicial de micobacterias. De la misma forma, al ser las micobacterias microorganismos de crecimiento intracelular y quedar en muchas ocasiones englobadas en el espesor de la secreción mucosa a que dan lugar (sobre todo la bronquial), es necesario un procedimiento de fluidificación y homogeneización del producto estudiado para garantizar una óptima recuperación de dichos microorganismos en caso de que se encuentren presentes. Para esto se

utilizan sustancias mucolíticas como la N-acetil cisteína o detergentes como el lauril sulfato sódico. Los líquidos normalmente estériles (LCR, líquidos articulares, pleurales, etc.) no necesitan proceso de homogeneización ni descontaminación. Únicamente sería necesario un proceso de concentración previo a la siembra. En ocasiones puede utilizarse una técnica conjunta que combine homogeneización con descontaminación en un solo paso. Una de las técnicas más utilizadas es la de Tacquet-Tison o método del lauril sulfato de sosa. Vamos a verla a continuación.

agitación, tras lo cual se deja reposar a temperatura ambiente durante media hora. Pasado ese tiempo se neutraliza la alcalinidad con un reactivo B (compuesto por un ácido y un indicador) hasta el cambio de color a amarillo pálido persistente. Después de una centrifugación intensa (3000 rpm durante 20 minutos) se decanta y se siembra el sedimento.

Características microscópicas y de tinción

Método del Lauril sulfato de sosa Es uno de los menos nocivos para las Micobacterias, porque se utiliza menor concentración de sosa que en otros. Son necesarios 2 reactivos, que denominaremos A y B. El reactivo A es una solución de lauril sulfato de sodio e hidróxido sódico que hará las funciones de descontaminante y fluidificante. Tras mezclar la muestra con el reactivo A, se homogeiniza por

de Gram no se tiñen o se comportan como Gram positivos débiles. La presencia de ácido micólico en su pared les confiere una resistencia a la solución de alcohol ácido que los diferencia del resto de las bacterias. Aprovechando esta propiedad se desarrolló una tinción específica para bacterias ácido alcohol resistente. Con la tinción de Ziehl-Neelsen las micobacterias se observan como bacilos de color rojo. Aparecen individualmente o formando pequeños grupos. Otras tinciones utilizadas para poner de manifiesto estos microorganismos son la tinción de Kinyoun, la de Tan-Thiam-Hok o la tinción fluorescente de auramina-rodamina. Baciloscopias Todas las muestras deben ser examinadas mediante tinción de Ziehl-Neelsen antes de proceder a su descontaminación. Aunque el hallazgo de BAAR en un frotis no es un diagnóstico definitivo de infección micobacteriana, permite un diagnóstico presuntivo muy precoz de tuberculosis, un

Las micobacterias son bacilos rectos o ligeramente curvados. Son inmóviles y no esporulados. Con la tinción

seguimiento de los pacientes en tratamiento y una confirmación de que los aislamientos obtenidos son BAAR. Una buena baciloscopia comienza con la realización de un buen frotis. Debe realizarse a partir de la parte más purulenta del esputo, efectuándose una extensión de grosor adecuado. La fijación debe hacerse durante 30 minutos al calor seguido de alcohol metílico. La observación debe hacerse siempre con objetivo de inmersión, recomendándose hacer una valoración cuantitativa de los bacilos presentes en la muestra. Se observará todo un largo de la extensión finalizando el recuento si hay más de 10 bacilos por línea. Si hay menos de 10 bacilos por línea se efectuará el recuento en dos líneas más y se expresará el resultado como bacilos x 3L Si en la primera línea realizamos un recuento de más de 50 bacilos, no se continua el recuento y se informa como más de 50 BAAR / 1 L Otra forma de informar los recuentos cuantitativos de BAAR es la siguiente:

Ausencia de BAAR 0 De 1 a 9 BAAR / 1L Nº de bacilos De 10 a 99 BAAR /1L + De 1 a 10 BAAR / campo ++ Más de 10 BAAR / campo +++

Características de cultivo

Las Micobacterias son muy exigentes desde el punto de vista nutritivo y se cultivan con relativa lentitud y dificultad en el laboratorio. Los bacilos de la tuberculosis son aerobios estrictos, aunque M. bovis puede ser microaerófilo en aislamientos primarios. Crece mejor a 37ºC, y el crecimiento es nulo por debajo de 30ºC o a temperaturas superiores a 42ºC. La presencia de ácidos micólicos en la pared celular les confiere una

resistencia a la acción de determinados colorantes (como verde de malaquita) o antimicrobianos (penicilina), cualidades que se utilizan para evitar contaminaciones de los medios de cultivo por microorganismos sensibles a dichos agentes. Los medios pueden ser líquidos o sólidos; los medios líquidos tienen poco interés para especímenes muy contaminados como esputos y orinas. Se podrían utilizar, siempre junto con los medios de base de huevo, en muestras poco contaminadas tales como líquido pleural, sinovial, L.C.R. o en determinados especímenes como médula ósea o biopsias. Otra utilidad de este tipo de medios es el mantenimiento de cepas o estudios de CMI de drogas.

Para el cultivo y aislamiento de Micobacterias pueden utilizarse diferentes tipos de medios: - Medios enriquecidos: (LowensteinJensen, Coletsos, Middlebrock, Caldo 7H9...) Medios selectivos: 7H11 - Medios diferenciales, que permiten

la diferenciación entre Micobacterias atípicas y Mycobacterium tuberculosis (PNB, Sauton)

Los medios más utilizados son los enriquecidos, que pueden tener base de huevo como el LowensteinJensen o base de agar como el Middlebrock. La ventaja de los medios con agar es que permiten una detección precoz de las Micobacterias; la de los medios con huevo es que ofrecen un mayor número de resultados positivos. Es conveniente usar siempre un medio enriquecido no selectivo, ya que algunas Micobacterias pueden resultar inhibidas por los antimicrobianos presentes en el medio. Después del aislamiento primario, las Micobacterias son menos exigentes en los subcultivos y crece con mucha más rapidez y en medios más simples, haciéndolo incluso en agar nutritivo. Actualmente existen sistemas automatizados que detectan el crecimiento de Micobacterias de una forma mucho más precoz, utilizando sustratos marcados

radiactivamente (BACTEC). El cultivo de Micobacterias en medio sólido debe hacerse en tubo para evitar la desecación del medio durante el largo período de incubación. Los tubos se incuban casi en horizontal, a 35º C, en oscuridad y en atmósfera húmeda con un 5 - 10% de CO2 durante la primera semana, para luego pasar a una atmósfera normal. Es conveniente que los tapones estén desenroscados hasta que se evapore el agua que contienen los tubos, ya que ésta puede impedir la aparición de la morfología colonial típica de las Micobacterias. Mycobacterium tuberculosis crece en medio de L-J dando lugar a colonias rugosas, de aspecto cerebroide, excrecentes y de color marfil; M. bovis da lugar a colonias lisas.

No pigmentadas - Relación entre la luz y la producción de pigmento: Fotocromógenas: producen pigmento en presencia de luz. Escotocromógenas: producen pigmento en la oscuridad.

Pruebas para identificación especies de Mycobacterium

de

Las principales características que definen a las Micobacterias son las siguientes: - Velocidad de crecimiento: Rápido (menos de 7 días) Lento (más de una semana). - Pigmentación de las colonias: Pigmentadas

tabla Las características más importantes de las Micobacterias tuberculosas son:

siguiente:

Tabla I: Características diferenciales de las Micobacterias tuberculosas

Sensi Red. bilida Niaci de d a na nitra Piraz to inami da

Sensibilid ad a Hidracin a

M. Tub + ercu losis M. Bovi s

+

+

-

-

-

+

Gran poder patógeno - Crecimiento lento de las colonias (más de siete días) No producen pigmento - No dan positiva la prueba de la catalasa a 68º C

Además de las pruebas convencionales para identificación de Micobacterias, se han desarrollado nuevas técnicas que permiten la identificación de la especie en pocas horas, acortando así el tiempo de diagnóstico. Ejemplos de estas técnicas son la utilización de sondas genéticas marcadas, con o sin reacción en cadena de la polimerasa y el análisis cromatográfico de los lípidos de la pared celular.

le introduce subcutáneamente un extracto tuberculoso inactivado (tuberculina). Existen dos tipos de tuberculina: la clásica (OT), que no se utiliza actualmente debido al alto grado de impurezas que contiene y los derivados proteínicos purificados (PPD) que son utilizados hoy para la inoculación intradérmica. La reacción de Mantoux se hace mediante inyección subcutánea de 25 unidades de PPD en la cara anterior del antebrazo, produciendo una pápula sobre elevada. Tras marcar la zona de inyección con marcador graso se espera de 48 a 72 horas para valorar el diámetro del área de induración producida, considerándose positiva la prueba si ésta es mayor de 5 mm.

Intradermorreacción de Mantoux o prueba de la tuberculina.

Las pruebas bioquímicas que nos permiten diferenciar estas dos especies quedan resumidas en la

La prueba de la tuberculina consiste en la comprobación de una reacción cutánea como consecuencia de una activación de la inmunidad celular cuando a un individuo infectado se

Vacunación Calmette atenuó la virulencia de una cepa de M. bovis subcultivándola repetidamente durante un período de 13 años. A esta cepa se le llamó bacilo de Calmette-Guerin (BCG) y tiene especial interés en relación con la inmunización activa contra la tuberculosis, puesto que establece

la infección en el huésped humano o animal, pero no da lugar a una enfermedad clínicamente aparente.

Sensibilidad antituberculosos.

a

agentes

Epidermiología. Cien años después de su descubrimiento por Roberto Koch, la tuberculosis sigue siendo la enfermedad contagiosa más importante del mundo. Cada año aparecen 10 millones de nuevos casos y mueren más de 3 millones de personas debido a esta enfermedad. En los países desarrollados, la tuberculosis es debida fundamentalmente a M. tuberculosis mientras que M. bovis ha desaparecido prácticamente como consecuencia de las medidas de control dirigidas contra las infecciones en el ganado vacuno. La tuberculosis es una enfermedad de declaración obligatoria en España. La incidencia de tuberculosis en España no es muy fiable, debido a una endémica infradeclaración, pero las cifras que se manejan oscilan entre 26 y 50 nuevos casos por cada 100.000 habitantes.

La terapia antituberculosa exige un tiempo muy largo de tratamiento (de 6 a 18 meses). Desde el comienzo del tratamiento el paciente deja de ser contagioso y el aislamiento prolongado se vuelve innecesario. Sin embargo, un factor muy importante a tener en cuenta es el alto grado de mutagenicidad y resistencia que presentan los bacilos durante el tratamiento, lo que hace necesaria la poli terapia para disminuir la frecuencia de recidivas. Atendiendo a esta forma de comportamiento de las Micobacterias, se establece que el adecuado tratamiento debe constar de dos fases: A) una fase inicial en la que se persigue eliminar lo más rápidamente el mayor número de bacilos de

multiplicación rápida (acción bactericida), para lo cual deben emplearse al menos tres fármacos para evitar la selección de mutantes. B) una fase de consolidación que permitirá eliminar los microorganismos de crecimiento lento e intermitente. Clásicamente, los fármacos utilizados para el tratamiento han sido divididos en agentes de primera y de segunda línea. Los fármacos antituberculosos de primera línea que se usan habitualmente son:

ISONIACIDA: Es el fármaco clave en el tratamiento antituberculoso. Es bactericida a nivel intra y extracelular y se utiliza también como terapia preventiva. RIFAMPICINA: Tiene efecto bactericida sobre microorganismos intra y extracelulares. Es más eficaz que Isoniacida frente a microorganismos de crecimiento lento. PIRAZINAMIDA: Efecto bactericida sobre microorganismos intracelulares. Altamente eficaz en la fase inicial del tratamiento. ETAMBUTOL: Efecto

bacteriostático intra y extracelular. Pude ser bactericida intracelularmente a concentraciones elevadas. ESTREPTOMICINA: Es un agente bactericida sobre bacilos extracelulares, aunque elevando la dosis puede ser bacteriostático a nivel intracelular.

Entre los tuberculostáticos de segunda línea tenemos: PAS, cicloserina, kanamicina, viomicina, amikacina, capreomicina, tiacetazona, rifabutina, ofloxacino y clofazimina.

Antibiograma

El procedimiento para la realización del antibiograma de M. tuberculosis más utilizado en todo el mundo es el de Canetti, Rist y Grosset. Consiste en determinar la proporción de bacilos resistentes a una determinada droga que existe en la población bacteriana inicial (cepa). Para ello, se dispone de una serie de tubos con medios de Löwenstein y las diversas drogas, incorporadas a unas concentraciones previamente establecidas. Se inoculan dos series de tubos, con dos diluciones de una suspensión bacilar, así como unos tubos testigo sin drogas incorporadas. En los tubos testigo se obtiene el crecimiento correspondiente al total de la población bacteriana inoculada. Las colonias crecidas en los tubos que contienen droga indicarán el número de bacilos resistentes a dicha droga en la población analizada. La suspensión bacteriana se prepara tomando unas colonias representativas de la mayor parte de la cepa a estudiar, se depositan en un tubo conteniendo perlas de vidrio, y se añade agua destilada hasta obtener una turbidez

equivalente a la proporcionada por una suspensión de BCG de 1 mg/ml. A partir de aquí se preparan dos diluciones en agua destilada estéril al 1/1000 y al 1/100000. Se inoculan en los tubos correspondientes 0,2 ml de las diluciones así preparadas. Los tubos se depositan en posición horizontal en la estufa a 37ºC y se leen a los 21 y los 28 días. Se cuentan las colonias aparecidas en los tubos testigo y, si existen, en los tubos conteniendo las drogas. Si el crecimiento en los tubos con drogas es superior a la proporción crítica en relación con el crecimiento en los testigos, la cepa se considera resistente, y si es inferior, sensible. Patogenicidad

Los bacilos de la tuberculosis son relativamente resistentes a la desecación y los factores ambientales, probablemente como consecuencia de su alto contenido en lípidos. Los bacilos pueden permanecer viables en el esputo durante semanas o meses. Si se desecan completamente, de manera que los bacilos puedan permanecer

suspendidos en el aire, pueden ser infecciosos durante más de una semana. Mycobacterium tuberculosis accede a los alvéolos pulmonares por inhalación de los microorganismos. Es posible que se desarrolle infección en una persona tras inhalar únicamente 1 o 2 bacilos viables, aunque el riesgo de desarrollar infección tras una única exposición es muy bajo (3-5%). Son necesarias exposiciones repetidas a los bacilos, junto a una inmunidad deteriorada del huésped para que aumente esa probabilidad. La patología ocasionada por el género Mycobacterium puede estar bacilios de koch infecciones tuberculosa limitada a determinados órganos o sistemas: formas pulmones renales, osteoarticulares, meníngeas, cutáneas, ganglionares, o bien pueden originarse diseminaciones dando lugar a formas generalizadas. Por todo ello comprenderéis la razón

de no trabajar en este Instituto con cepas de Micobacterias.

Micobacterias atípicas

La presencia de Micobacterias diferentes a las tradicionalmente productoras de tuberculosis fue considerada durante mucho tiempo como una contaminación accidental,

Sin darle nunca un verdadero valor patógeno. Sin embargo, en estos últimos años se han aislado con mayor frecuencia y se ha llegado a establecer su relación causal con los procesos tuberculosos que producían. Al no ser típica la etiología de estas tuberculosis, empezó a denominárselas con el apelativo de atípica, término que aunque no es el más idóneo, ha alcanzado un uso tan general que es el que actualmente se aplica a todo este grupo de micobacterias.

Las micobacterias atípicas se encuentran en el hombre en ausencia de enfermedad, aunque también se aíslan me

En la mayoría de las ocasiones son causantes de patología solo si hay una lesión previa de los tejidos o la inmunidad celular está muy alterada. Las Micobacterias atípicas difieren de los bacilos de la tuberculosis en que no son patógenas para el cobaya, generalmente son resistentes a los agentes quimioterápicos antituberculosos habituales, crecen con más rapidez y con frecuencia están pigmentados. Runyon clasificó las Micobacterias atípicas en cuatro grupos, basándose fundamentalmente en la producción de pigmentos y en la velocidad de crecimiento, según se muestra en la siguiente tabla:

Grupo

Características

Especies de Mycobacterium

I

Fotocromógenos M. Pigmento amarillo-claro M. Colonias rugosas M. Crecimiento lento (14-21 días)

kansasii marinum simiae

II

III

Escotocromógenas Pigmento naranja-rojizo Colonias lisas Crecimiento lento (10-14 días) No pigmentados Crecimiento lento (14-21 días)

M. M- szulgai

scrofulaceum

M. M. M.

xenopi

avium intracelulare

IV

Pigmentación variable M. Crecimiento rápido (5-7 días) M. M.

ulcerans

fortuitum chelonei

PRUEBA DE ESPIROQUETAS Y VIBRIOS Preparación húmeda: es la forma más simple de examinar las bacterias y otros microorganismos vivos, y consiste en la suspensión de un inoculo de cultivo en agua u otro líquido, colocando una gota de ésta suspensión en un portaobjeto común y cubrirlo con un cubreobjetos. Este procedimiento requiere utilizar microscopía de contraste de fase.

Esta prueba se realiza en medios semisólidos o con bajas concentraciones de agar (0.4% o menos) para permitir que los microorganismos móviles se dispersen libremente. La motilidad bacteriana es otros determinantes de importancia en una identificación final de especie. La motilidad bacteriana puede observarse directamente en un microscopio colocando una gota de caldo de cultivo en un portaobjetos de gota pendiente para bacterias que no crecen bien en medios semisólidos. Sin embargo, para las entero bacterias es más común emplear medios de cultivo semisólidos. Los medios combinados más empleados son el SIM y el MIO ya que permiten evaluar más de una característica a la vez, por ejemplo en SIM podemos evaluar motilidad, producción de H2S o indol. Dado que este

medio tiene un fondo levemente turbio, la interpretación de resultados de motilidad se hace un poco complicada, sobre todo si el analista no está suficientemente entrenado y más aun cuando hay producción de H2S en el medio o se revela la prueba de indol primero lo cual puede afectar el color del medio. En estos casos se recomienda el uso de medios de motilidad específicos ya que permiten el crecimiento de bacterias muy exigentes y tiene aspecto cristalino. La prueba de motilidad se interpreta por medio de un examen microscópico del medio en busca de zonas de difusión del crecimiento sobre la línea de punción. Se h a aconsejado el uso de sales de tetrazolio en estos medios ya que estas sales incoloras se toman rosadas por la conversión a complejos de

formarán rojos e insolubles por las propiedades reductoras de las bacterias en crecimiento sin embargo, presentan una desventaja para las bacterias exigentes ya que pueden inhibir su crecimiento. Fundamento 1. Propósito: Usadas para determinar la motilidad de aislamientos o cultivos sospechosos; B. anthracis no presenta motilidad. Se proporcionan dos métodos para la determinación de la motilidad: el montaje en húmedo y el cultivo en medio para prueba de motilidad. 2. Procedimiento de montaje húmedo a. Coloque 2 gotas (aproximadamente 0.1 ml) de TSB o medio de cultivo equivalente, en un tubo de vidrio estéril. Usando un asa de inoculación, transfiera una

porción sospechosa 20 horas suspéndase (Caldo).

de la colonia de un cultivo de 12de incubación y en un medio líquido

Laboratorio, tal como el tratamiento en una solución al 0.5% de hipoclorito de sodio. 3. Procedimiento para la prueba de motilidad en medio de cultivo

b. Alternativamente se puede tomar un asa (asa con punta de anillo) de un cultivo fresco en caldo. c. Transfiera 10 µl de la suspensión a un portaobjetos y cubra con un cubreobjetos. d. Observe el frotis bajo el microscopio usando el objetivo de 40X (para producir un aumento total de 400X considerando el aumento del ocular; se puede utilizar también el objetivo de inmersión de 1000X). e. Deseche las preparaciones en portaobjetos siguiendo los procedimientos estándares de

a. Utilizando una aguja de inoculación estéril, tome una porción de material bacteriano perteneciente a una colonia sospechosa de un cultivo aislado, después de 18-24 horas de incubación. b. Inocule el medio de motilidad, insertando cuidadosamente la aguja a 3-4 cm dentro del medio y

retirando la aguja directamente hacia afuera, de tal manera que una sola línea de inóculo se pueda observar. c. Incube el tubo de 35-37 °C en atmósfera ambiental por 18-24 horas.

PRUEBA DE FORMAS PLEOMORFICAS. Fundamento teórico

“L”

4. Interpretación del resultado de motilidad: La falta de motilidad es inusual entre las especies de Bacillus y por lo tanto esta característica es útil en la identificación preliminar de cultivos aislados de B. anthracis.

(1) Resultado positivo: Los organismos motiles se observarán desplazándose a través de la suspensión. Observe que el movimiento puede ser más lento que el que se observa en los controles positivos.

La teoría que estoy compartiendo es lo que actualmente se conoce como la teoría pleomórfica, desarrollada desde fines del 1800 a comienzos del año 1900 por varias personas que han influido en mi comprensión de

la salud holística. La primera es Antoine Béchamp (1816-1908), quien era máster en farmacia, doctor de ciencias, doctor en medicina, profesor de farmacia química médica, profesor de física y toxicología, y profesor de química biológica. Lo que descubrió fue el proceso de fermentación, lo cual describió el proceso de la digestión por fermentos o formas de vida microscópicas. Como un genio en su campo, vio que la sangre no es un líquido que un tejido fluyendo. En su trabajo, descubrió lo que llamó "microzimas" o fermentos en la sangre. El microzimas son elementos vivos microscópicos y coloidales capaces de fermentar el azúcar en nuestro sistema. La microzima es la unidad viviente más pequeña que vive en la naturaleza y en nuestros cuerpos, de mucho menor tamaño que las células.

La piedra angular de la teoría de Béchamp fue que el mantenimiento de un terreno sano y de una fisiología biológica es la clave para la salud. Cuando el terreno biológico es interrumpido, cuando la gente tiene demasiado ácido, entonces el proceso de fermentación natural en el cuerpo se acelera, y una evolución patológica de estas microzimas se lleva a cabo. Ellas se coagulan y polimórficamente se transforman en el tiempo en bacterias, levaduras, hongos, y moho. A medida que estas formas mórbidas pleomórficas de la microzimas van en desarrollo, se alimentan de nuestras sustancias vitales del cuerpo y producen más toxinas, a lo que llamamos las micotoxinas. Este proceso tóxico dio lugar a una sintomatología de la enfermedad degenerativa.

La familia Mycoplasmataceae contiene dos géneros que infectan a humanos: Mycoplasma y Urea plasma, a los que usualmente se les menciona simplemente como mycoplasmas. Aunque hay muchas especies de mycoplasmas, sólo cuatro se reconocen como patógenos de humanos: Mycoplasma

Mycoplasma y Ureaplasma

pneumoniae, Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, y Urea plasma urealyticum. Aunque hay
muchas otras espécies que han sido aisladas a partir de humanos, su papel en la enfermedad no está bien establecido. Mycoplasmas.

El factor diferenciador es la composición de la pared bacteriana. Los mycoplasmas carecen de pared bacteriana. Recordemos que las formas L son bacterias que han perdido

la pared bacteriana. La diferencia entre las formas L y las mycoplasmas radica en que la forma L es un accidente, algo esporádico: la bacteria, al volver a unas condiciones normales, puede desarrollar de nuevo una pared. Los mycoplasmas son así. En el grupo 30 encontramos 6 géneros, de los cuales veremos el mycoplasma y el urea plasma. Brucella Abortus: Es una bacteria Gram negativa con un lipopolisacárido (LPS) fuertemente inmunodominante, el que junto con la capacidad de sobrevivir en el interior de células fagocíticas constituyen sus principales factores de virulencia

Características generales.

Gran necesidad nutritiva de esteroles. Si no encuentran esteroles no son capaces de desarrollarse ni de reproducirse. Cierto grado de anaerobiosis (no mucho). Carecen de pared, pero tienen como sustituto de ella una membrana triestratificada (con 3 capas). Reproducción bastante compleja. La duplicación del material nuclear no es paralela a la duplicación del resto del material celular. Tamaño: están en el límite del microscopio óptico. Se ven bastante mejor con el electrónico. Son inmóviles y jamás forman esporas. La ausencia de bacteriana determina: pared

Desincronización en la duplicación genética y celular. Tinciones de Romanoswky, Castañeda. Giemsa, Dienes,

Comportamiento a los antibióticos: resistentes a las penicilinas. Hábitat, cultivo, bioquímica. Suelen poblar las mucosas del sistema respiratorio, glándulas mamarias, órganos urogenitales y articulaciones. En el sistema respiratorio están de continuo, de forma normal. Al resto de tejidos llegan en calidad de agentes patógenos. Son capaces de desencadenar infecciones primarias, pero suelen ser agentes secundarios: microorganismos oportunistas. Pueden producir infecciones agudas. Forman colonias cuando son cultivadas en medios semisólidos. Son colonias

diminutas, observables al microscopio óptico, que tienden a meterse en el ágar haciendo formas abombadas, que reciben el nombre de colonias en huevo frito. Son un cultivo difícil: necesitan en el medio de cultivo proteínas animales, NaCl, peptona, esteroles y ácidos grasos. Al ser un medio tan rico corre gran riesgo de contaminantes, por lo que requieren de sustancias inhibidoras que a ellos no les afecten, como la penicilina, el cristal violeta, etc. Como son parcialmente anaerobias hay que bajar la presión de oxígeno. También necesitan de un 5 -10 % de CO2 y un cierto grado de humedad. Son bacterias de crecimiento muy lento, entre 1 semana y 10 días. Soportan muy bien la presión osmótica. Son sensibles a los agentes tenso activos (jabón,

detergente), por el contenido en esteroles de los mismos. Antibióticos a los que son sensibles: tetraciclinas, eritromicinas, estreptomicinas. Resistentes a las penicilinas. Poder patógeno Son bacterias con un equipo enzimático muy potente y variado (p. ej. proteasas). Producen hemólisis (lisis de hematíes), endonucleasas (destruyen los ácidos nucleicos) y gran cantidad de sustancias tóxicas celulares: NH3 y H2O2, que destruyen la célula a la que se adhiere. (La bacteria es totalmente extracelular). Diagnóstico.

patológicas tienen un periodo de fiabilidad muy corto (24 h.), por lo que muy pocas veces se hará un diagnóstico directo.

El sistema inmunitario del individuo tendrá anticuerpos de mycoplasmosis, así que se detecta más fácilmente por aglutinación, precipitación, técnica ELISA.

Casi nunca se usa en laboratorio el diagnóstico directo (observación al microscopio), sino métodos indirectos. A lo lento que es el aislamiento se añade el hecho de que las muestras

Aves
 

My. gallisepticum. My. Meleagridis. responsables de (enfermedad Ambos CRD crónica

respiratoria), que afecta a los sacos aéreos.

Lechones. Inmunidad.

entre granjas, se usan vacunas con virus vivos atenuados.

My. synovial. Afecta articulaciones y tendones. Bóvidos

a

La la

principal uterina.

vía En

de aves

 

My. mycoides. Fue el primero en ser aislado. Es el agente caudal de la perineu-monía bovina (pleuroneomonía bovina), mortal. My. bovygenitalium. Tanto en machos como en hembras. Tropismo del tracto urogenital. My. bovis. articulaciones. Óvidos My. agalactiae. En ovejas lecheras. Responsable de la agalaxia contagiosa ovina (falta de secreción de leche). Porcino My. hyoneumonae. Neumonía enzoótica del cerdo. My. hyorginis. Septicemia de Típico de

CRD (My. gallisepticum, meleagridis). Se usan vacunas inactivadas muy efectivas. Agalaxia contagiosa ovina (My. agalactiae). Vacunas inactivadas. Neumonía enzoótica porcina (My. hyoneumonae). Vacunas inactivadas. Perineumonía bovina (My. mycoides). También usan vacunas, pero no en Europa. En Europa están prohibidas porque al vacunar después no se puede diferenciar los individuos vacunados (sanos) de los portadores de la bacteria (enfermos), porque todos tienen anticuerpos. Simplemente, cuando hay animales enfermos se sacrifican. En Australia, donde hay una gran distancia

transmisión es la aérea y también se transmite a través del huevo. No hay transmisión de mycoplasmas humanos a los animales, ni viceversa. Urea plasma. Hay una especie diversum, de y de interesante: la ureoplasma responsable en terneros

 

infecciones respiratorias infecciones en vacas. urogenitales

 

pneumoniae,

el cual es un aerobio estricto. Una característica típica que distingue al mycoplasma de otras bacterias, es la falta de la pared celular. Así, ellos pueden asumir múltiples formas incluyendo formas redondas, en forma de pera e incluso la forma filamentosa. Morfología y Fisiología Los mycoplasmas son las bacterias más pequeñas de vida libre. Su tamaño va de 0.2 – 0.8 micrómetros, por lo cual pueden atravesar algunos filtros utilizados para la eliminación de bacterias. Además poseen el genoma con el tamaño más pequeño y como un resultado, han sufrido la pérdida de algunas rutas metabólicas, por lo que se requiere de un medio complejo para su aislamiento. El mycoplasma es un anaerobio facultativo, excepto M. El mycoplasma crece lentamente por fisión binaria y produce colonias en forma de “huevo frito” en las placas de agar; las colonias de M. pneumoniae tienen una apariencia granular. Debido al lento crecimiento de mycoplasma, las colonias pueden tomar hasta tres semanas para desarrollarse y ser generalmente muy pequeñas. Las colonias de Urea plasma son extremadamente pequeñas, por lo cual al Urea plasma se les llama también tiny strains o cepas-T (T-strains).

Patogénesis A. Factores de adherencia - Los mycoplasmas son patógenos extracelulares que se adhieren a superficies epiteliales celulares. Así, las proteínas de adherencia son uno de los factores de mayor virulencia. La proteína de adherencia en M. pneumoniae se ha identificado como una proteína de 168 kD llamada P1. La adhesina P1 se localiza en la punta de las células bacterianas y se une con los residuos de ácido siálico localizados en las células epiteliales del hospedero.

La naturaleza de la adhesinas en las otras especies no ha sido establecida. La colonización del tracto respiratorio por M. pneumoniaedá como resultado el cese del movimiento ciliar. Los mecanismos normales de despeje del tracto respiratorio no funcionan, lo cual resulta en una contaminación del mismo y el desarrollo de una tos seca.

tejidos infectados se han encontrado lípidos oxidados del huésped. Además, se ha demostrado que el mycoplasma inhibe la actividad de la catalasa de la célula huésped, con lo que se aumentan las concentraciones del peróxido. C. Inmunopatogénesis – Los mycoplasmas pueden activar a los macrófagos y estimular la producción de citocinas y la activación de linfocitos (M. pneumoniae es un superantígeno). Así, se ha sugerido que los factores del huésped pueden contribuir a la patogénesis, la evidencia experimental en animales sostiene esta sugerencia. La ablación de la función del timo antes de la infección con M. pneumoniae previene el desarrollo de pneumonía y en animales en los cuales se restaura la función del timo, la neumonía se desarrolla en una tasa exacerbada. Datos

epidemiológicos en humanos sugieren que es necesario que se presenten repetidas infecciones antes de que se observe la enfermedad, de nuevo, sugiriendo que los factores del huésped tienen un papel relacionado con la patogénesis; la mayoría de los niños se infecta entre los 2-5 años de edad, pero la enfermedad es más común en niños de 5-15 años de edad.

B. Productos metabólicos tóxicos - La íntima asociación del mycoplasma con las células huésped proporciona un ambiente en el cual los productos metabólicos tóxicos se acumulan, dañando a los tejidos del huésped (Figura 1). Ambos, el peróxido de hidrógeno y el anión superóxido, son productos del metabolismo de micoplasma que han sido implicados en la patogénesis de los tejidos infectados, ya que en los

Urealyticum
A. Síndromes clínicos - M. hominis se ha asociado con píelonefritis, enfermedad inflamatoria pélvica y fiebre post-parto (fiebre puerperal). El U. urealyticum se asocia con uretritis no gonocócica. B. Epidemiología La colonización con M. hominis y U. urealyticum puede ocurrir durante el nacimiento pero en la mayoría de los casos la

infección se autolimita. Sólo en un pequeño número de casos la colonización persiste. Sin embargo, las tasas de colonización se incrementan cuándo los individuos comienzan a ser sexualmente activos. Aproximadamente el 15% se colonizan con M. hominis y entre un 45% - 75% con U. urealyticum. Se trata de portadores asintomáticos aunque los microorganismos pueden ser patógenos oportunistas. C. Diagnóstico de laboratorio El diagnóstico de Laboratorio es a través de cultivo. D. Tratamiento y Prevención Tratamiento – debido a que los mycoplasma carece de pared celular, las penicilinas y cefalosporinas son ineficaces. Los antibióticos de elección son tetraciclina (solamente

adultos) y eritromicina . Como medidas de prevención son apropiadas bien la abstinencia o el uso de barreras físicas de protección. Forma L bacterias

conocidas como células de pared bacterias deficientes, son una fase de bacterias que son muy pequeñas y la falta paredes celulares. Aunque el tema de una gran cantidad de investigación en los últimos 100 años e implicado en una variedad de enfermedades, las formas L siguen en gran medida malentendida - o por lo menos apreciada, - por la comunidad de investigación médica. De acuerdo con la patogénesis de Marshall, las formas L son parte de una micro biota meta genómica responsable de la enfermedad crónica. Las especies capaces transformación forma L de

Como una parte de su ciclo de vida natural, las bacterias pueden transformarse en una variedad de formas. Una de estas fases es la forma L. Forma L-bacterias, también

Hasta ahora, los investigadores han identificado más de 50 especies diferentes de bacterias capaces de transformar en la forma L y es

probable que más especies se encuentran en los próximos años. "Probablemente especies más bacterianas se pueden convertir en las formas L si se tratan con los antibióticos que inhiben la síntesis de la pared celular", afirma investigador Josep Casadesus. Algunas de las especies de bacterias de forma de L que han sido implicados en la enfermedad crónica son el

micras de diámetro. Puesto que son más pequeños que los virus o partículas de hongos, que no puede ser visto con un microscopio óptico normal. Las formas pequeñas e individuales de bacterias forma L se refiere a menudo como cuerpos cocoides. Cuerpos cocoides veces grupo juntos, adoptando el aspecto de un collar de perlas De vez en cuando en forma L bacterias salir de las células. En el laboratorio que pueden crecer en filamentos largos y delgados biopelícula que pueden llegar a 60-70 micras de longitud. Los filamentos están compuestos biofilm de bacterias forma L y una vaina protectora de la proteína. Por razones todavía desconocidas, las formas L también pueden convertirse en grandes "gigante" de los cuerpos. Forma de L-bacterias carecen

Bacillus anthracis, Treponema pallidum, Mycobacterium tuberculosis, infección por Helicobacter pylori, Rickettsia prowazekii, y burgdorgeri Borrelia. No todos causan
enfermedades especies. Tamaño y forma Forma L es pleomórfica, es decir, que puede cambiar el tamaño y forma. Durante gran parte de su vida que son muy pequeñas, alrededor de 0.01

de flagelos, apéndices largos y delgados que permiten algunas formas de las bacterias para impulsarse hacia delante con un movimiento de látigo. En su lugar, se deslizan a sus destinos de forma de caracol. Grupos de bacterias en forma L a menudo son encerrados dentro de los túbulos. También se separa del medio ambiente dentro de la célula por una membrana o exoesqueleto que les impide ser digerido por la célula. La replicación reproducción y la

yema del cuerpo de la bacteria y dar lugar a pequeñas forma Lcolonias. Mecanismos de supervivencia Las formas clásicas de la mayoría de las especies bacterianas se pueden encontrar en el torrente sanguíneo. Sin embargo la forma L-bacterias han descubierto la manera de infectar con éxito y vivir dentro de las mismas células del sistema inmunológico, cuya función es matar las bacterias. Una vez dentro de estas células, ya no pueden ser detectados por el sistema inmune y son capaces de permanecer en el cuerpo durante largos períodos de tiempo. Forma de L-bacterias pueden infectar muchos tipos de células, sino que prefieren infectar a las células blancas de la sangre llamadas macrófagos.

Varios estudios muy recientes han confirmado el hecho de que las bacterias pueden vivir dentro de las células del sistema inmune. PRUEBA DE BACTERIAS INTRACELULARES

Forma de L-bacterias se replican en varias formas, incluyendo el crecimiento en ciernes, filamentosas y la fisión binaria. Algunas especies de las formas L como Proteus pueden formar grandes cuerpos que se reproducen por división. En otros casos, los gránulos de

En general, las bacterias intracelulares se caracterizan por producir con mayor frecuencia infecciones persistentes, ya sean crónicas, latentes o lentas, por intervenir de manera importante factores

de inmunidad celular y porque en esta situación los microorganismos se encuentran protegidos y son más resistentes a los anticuerpos y también a los antimicrobianos. Este tipo de bacterias tienen las siguientes características: Capacidad para sobrevivir y multiplicarse en el interior de los fagocitos. Son poco toxicas y las células infectadas sobreviven. Se pueden adquirir por aire, sangre, alimentos. Incubación larga y enfermedad persistente. Son inaccesibles a anticuerpos y buscan fagocitosis. los la

Fundamento El género Rickettsia pertenece a la familia Rickettsiaceae (también incluye Coxiella, Erlichia y Bartonella), dentro del orden de los Rickettsiales (5), está constituido por diferentes especies de bacterias gram negativas y todas tienen en común la necesidad de ser parásitos intracelulares obligados debido a su corta viabilidad fuera de sus reservorios y vectores (3). Las Rickettsias son bacterias intracelulares obligadas transmitidas por artrópodos que infectan, principalmente, las células endoteliales de los vasos sanguíneos. Estas bacterias tienen una distribución global (6, 7) y causan enfermedades agudas con compromiso sistémico que pueden ser letales si no reciben tratamiento antibiótico adecuado y oportuno. Tienen como características biológicas una gran estabilidad en el ambiente, pequeño tamaño, transmisión a través de aerosoles, persistencia en los hospederos infectados, baja dosis de infección y una alta asociación con morbilidad y mortalidad, estas características las hacen deseables especialmente R. prowazekii como armas para bioterrorismo (7). Causan enfermedades de severidad variable en humanos y son un buen ejemplo de enfermedades que no son apreciadas excepto para los

Afectan a especies específicas.

que as padecen y aun en muchos de los casos nunca son diagnosticados. Su ciclo vital se mantiene al infectar distintas especies de hospedadores (en general mamíferos) y vectores en donde desarrollan focos de endemicidad y brotes esporádicos o estacionales (7). Algunas especies de Rickettsia se ven involucradas en ciclos estables de mantenimiento a través de la infección transovárica en sus artrópodos hospederos (8). La transmisión horizontal es fundamental para el mantenimiento de estas especies, y explica la baja frecuencia de presentación en la naturaleza (Menos del 1%) (8).Las Rickettsias, al contactar con las células endoteliales, inducen su propia fagocitosis y, una vez dentro del citosol, escapan del fago soma y proliferan por fisión binaria simple, siendo finalmente

expulsadas por exocitosis para seguir infectando células contiguas (3). El deterioro a las células endoteliales causado por las Rickettsias se ve reflejado en las características clínicas, por ejemplo, en los pulmones y el cerebro causan las manifestaciones más graves de la Rickettsiosis: Inclusiones basófilas. citoplasmáticas

proteínas no plegadas. En mamíferos se han descrito numerosas infecciones virales asociadas a inclusiones intranucleares, citoplasmáticas, basó filas y acidó filas tales como Rabia, Viruela, herpes simplex virus y Varicela zoster virus.

Los cuerpos de inclusión citoplasmáticos y nucleares corresponden a cúmulos de sustancias, habitualmente proteínas. Estas pueden representar sitios de replicación viral y normalmente consisten en proteínas de la cápside, aunque también se ha descrito la presencia en condiciones no infecciosas. La composición de las inclusiones corresponde generalmente a

Las inclusiones intranucleares y citoplasmáticas son agregados de sustancias, normalmente proteína. Estas representan sitios de replicación viral o bacteriana, y en el primer caso corresponden generalmente a proteínas de la cápside. Adicionalmente las inclusiones pueden ser relacionadas con

patologías genéticas y desordenes metabólicos. Las Inclusiones pueden ser clasificadas en acidófilas o basófilas, de acuerdo a su afinidad tintorial. Los cuerpos de inclusión intranucleares se presentan en diversos órganos (hígado, riñón, bazo y corazón) y en mamíferos se han relacionado a infecciones virales. Ejemplos de infecciones virales inclusiones intranucleares acidófilas son inclusiones intranucleares acidofilas de Crowdy tipo A en infecciones por Herpes simplex virus y Varicella zoster virus e inclusiones de Crowdy tipo B en Polio. Inclusiones intranucleares acidófilas en Salmónidos La interpretación de la presencia de inclusiones intranucleares en el miocardio en salmónidos debe ser

realizada considerando análisis complementarios con el fin de considerar como diagnóstico diferencial cardiomiopatías primarias e infecciones virales y bacterianas. El historial clínico, uso de PCR específicos para virus y perfiles bioquímicos pueden contribuir a identificar la etiología particular de cada caso.

Forma de las citoplasmáticas

inclusiones

Algunas pueden tener una forma definida, y tener una membrana, pero otras no poseen ninguna de estas características, lo que si presenta todas son propiedades tintoriales y que se encuentran sin vida, “Las inclusiones son estructuras citoplasmáticas o nucleares con propiedades tintoriales características que se forman a partir de los productos metabólicos de la célula. Se las considera componentes celulares sin capacidad de movimiento y sin vida. Algunas de ellas, están rodeadas por una membrana plasmática, otras no lo están y se encuentran en la matriz citoplasmática o nuclear.

PROCEDIMIENTOS Toma demuestra

Taxonómicamente son complejas. Tienen 3 familias: Familia Rickettsiaceae. Familia Anaplasmataceae. Familia Bartonellaceae. Familia Rickettsiaceae. Características generales.

El momento ideal para la toma de la muestra papanicolau, es cuando la paciente termina de menstruar completamente, ya que el moco que cubre el cuello de la matriz es claro y trasparente, lo que permite visualizar mejor las estructuras, sin embargo puede ser tomado en cualquier dase del ciclo siempre que no haya sangrado debe evitarse tener relaciones sexuales la noche previa, a si como el uso de óvulos vaginales. COMO SE REALIZA Mediante un instrumento estéril, llamado especuloscopios (especulo) que es introdujo en la vagina y permite abrir delicadamente las paredes de esta, el médico o la enfermera puede observa el estado general del cuello uterino y tomar las muertas de sus células, el procedimiento no demora más de 1 minuto en el inodoro.

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No son ni cocos ni bacilos, ya que son demasiado largos para unos y cortos para otros. Son polimórficos. La mayoría son inmóviles (no tienen flagelos) y no forman esporas. Tienen una pared con estructura gram -. A pesar de ser gram - no se aconseja la tinción de Gram, sino tinciones de Giemsa, Stamp y Macchiavello. Dimensiones: son muy pequeños, ya que son parásitos intracelulares. Tienen menos

Su característica diferencial es que son de obligado parasitismo intracelular. Ambas están en el grupo 9. Rickettsias. Toman nombre de un biólogo estadounidense.

de 1 m. Por su pequeño tamaño se les tomó en un principio por virus. La característica que más les define es que son parásitos intracelulares. Parasitan células de los endotelios de los vasos, produciendo lesiones que provocan hemorragias, manchas cutáneas, etc. Las rickettsias utilizan la actividad metabólica de la célula y se multiplican en el citoplasma, hasta que provocan su lisis haciendo que estalle. No actúan para nada sobre el núcleo, y tampoco influyen en el metabolismo celular.

Se transmiten a través de un intermediario (artrópodos: garrapatas). Producen enfermedades febriles con tendencia a la cronicidad. Son muy difíciles de cultivar, ya que al ser parásitos intracelulares necesitan de cultivos celulares. Un factor esencial es el glutamato, que está presente en el ciclo de Krebs. Esta familia tiene 8 géneros. Algunos son:

resistencia a los agentes físicos externos (calor, congelación, desinfectantes, radiación).

Género Rickettsia. Tiene poco interés en animales. R. prowazekii. Causante del tifus exantemático. R. rickettsii. Causante de las fiebres de las montañas rocosas. R. conori. Causante de la fiebre botonosi. Género Coxiella. Se caracterizan por una alta

C. burnetti. Causante de la fiebre Q. Afecta sobre todo a los rumiantes, preferentemente hembras en gestación. Es un proceso neumónico. La bacteria parasita los monocitos. Es una zoonosis transmisible a los humanos, mediante consumo de leche, saliva, orina y heces. El diagnóstico puede ser directo, aunque se usa más el indirecto mediante técnicas serológicas. Son sensibles a las tetraciclinas y las sulfamidas. Todos los tratamientos a agentes parasitarios intracelulares son muy largos y de resultado incierto, por lo que en animales no sale rentable medicarlos. Para la prevención de la fiebre Q se han hecho ensayos con vacunas

atenuadas, pero los resultados no son claros.

Género Ehrlichia. Parasitan leucocitos. E. canis. En perros. E. phagocytophila. En rumiantes. E. equi. En équidos. Género Cowdria. C. ruminantium. Es un tropismo típico de los vasos sanguíneos, en especial de la zona cardiaca. Provocan un acumuló de líquido en el pericardio, por lo que recibe el nombre de “corazón acuoso”. Es una infección generalizada. Género Neorickettsia. N. helmilthoeca. Infecta peces del tipo de los salmones. Familia Anaplasmataceae. Tiene 4 géneros.

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Género Anaplasia. Comprende las especies más pequeñas de todas. Son parásitos típicos de los eritrocitos. Producen anaplasmosis (destrucción de parte de la población de célula de la serie roja, lo que provoca una anemia). A. marginales. En rumiantes. A. ovis. Familia Bartonellaceae.

Tiene 2 géneros. Al igual que los anteriores parasitan hematíes, pero tiene un mayor y variado equipo enzimático. Son las únicas que se han podido cultivar en laboratorio, con presencia de sangre. El diagnóstico se hace por métodos indirectos: fijación del complemento, aglutinación. Género Bartonella. Responsable de la bartonelosis humana. Género Grahamella. G. talpae. En topos Chlamydias. (Bedsonias) A diferencia de las rickettsias, las chlamydias son mucho más sencillas taxonómicamente. Sólo tienen una familia, Chlamydiaceae, con un género: chlamydia.

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Características generales.

Son bacterias parásitas obligadas. Al igual que las rickettsias fueron consideradas virus. Tienen un alto poder de multiplicación en el citoplasma de la célula hospedadora. Morfología: tienen aspecto cocoide. No tienen flagelos, ni forman esporas. Paredes gram -. Tinciones de Giemsa, Stamp y Macchiavello. Carecen de glucopéptido, pero tienen una pared poli estratificada.

Lo que tienen en común con las rickettsias es que ambas son parásitas. Lo que la diferencia es el mecanismo de lesión del organismo hospedador: las rickettsias producen toxinas y endotoxinas, mientras que las chlamydias nunca forman toxinas, sino que hacen daño por su capacidad de multiplicación, que termina por destruir la célula hospedadora. Provocan enfermedades latentes (el individuo es portador pero la enfermedad no se manifiesta hasta que no se cumplen unas determinadas condiciones, p. ej. aprovecha que esté bajo de defensas). Las manifestaciones de las enfermedades son reacciones inflamatorias y alérgicas, también pueden provocar abortos. Su cultivo sólo es posible en el interior de células. La actividad metabólica es muy limitada.

Resisten agentes físicos externos: calor, bajas temperaturas, radiaciones, desinfectantes. Son sensibles a las tetraciclinas y las sulfamidas, aunque su tratamiento en animales no es efectivo porque no resulta rentable. Las chlamydias de origen avícola son las más virulentas. Además, no sólo afectan a las aves.

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C. psittacii. Su hábitat natural es la familia de los sindáctilos: cacatúas, loros, papagayos. Producen unas conjuntivitis muy serias, y otros tropismos a los que son afines los órganos genitales, además de psittacosis en humanos. C. trachomatis. Producen ornitosis en las aves domésticas de granja. Lo que diferencia la psittacci de la trachomatis es que la psittacii afecta a aves tropicales,

mientras que la trachomatis afecta a aves domésticas. La principal vía de transmisión es a través de heces: en el intestino son excretadas en grandes cantidades, abandonándolo en forme de heces. Estas heces al perder el agua y desecarse hacen que los microorganismos pasen al ambiente. Como se ve, las chlamydias también tienen una marcada tendencia por el intestino. Esto hace que pueda haber portadores de chlamydia intestinal (no enfermos). La inmensa mayoría de los équidos son portadores de chlamydias. El hecho de que desarrollen clamidiasis o no depende del potencial de su sistema inmunitario. Las clamidiasis afectan sobre todo al ganado ovino y al equino.

inflamación que provocan las chlamydias afecta a la fisiología del saco embrionario y la placenta, de manera que el feto es expulsado.

Vacuno.- Responsables de mamitis. (No sólo en bóvidos). Équidos.- Desarrollan neumonías. Todas las especies son susceptibles de clamidiasis: enteritis, conjuntivitis, artritis, encefalitis; excepto carnívoros y felinos, que parecen ser resistentes a ellas. Producción de glucógeno

de almacenamiento de carbohid ratos tanto en animales como en las plantas. Cuando existe una disminución significativa de glucosa en sangre, el glucógeno es degradado por medio de una serie de enzimas para cubrir las necesidades energéticas de nuestro organismo. Las glucogénesis son enfermedades en donde existen deficiencias congénitas de la mayoría de las enzimas relacionadas con el metabolismo del glucógeno, en donde los órganos más afectados son: el hígado y el músculo esquelético

Ovino.- Son agente causal del aborto enzoótico ovino. La

El glucógeno principal

representa la forma

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