"AÑO DEL BICENTENARIO DEL PERÚ: 200 AÑOS DE INDEPENDENCIA"

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE TAYACAJA

“DANIEL HERNANDEZ MORILLO”
FACULTAD DE INGENIERÍA

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

E.A.P. DE INGENIERÍA FORESTAL Y AMBIENTAL

ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA

TEMA: ECOLOGÍA CUANTITATIVA: NÚMERO, BIOMASA Y ACTIVIDAD

DOCENTE: Mg. Sc. ORTECHO LLANOS, Ronald

INTEGRANTE:

1. DE LA TORRE BENDEZU, Cristian

CICLO: V

SEMESTRE ACADEMICO: 2021 – I

PAMPAS, 2021.
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 PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

I. INTRODUCCIÓN

Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características metabólicas de las bacterias
objeto de identificación, ya que evalúan la presencia de una enzima preformada y su lectura
varía entre unos segundos hasta unas pocas horas, este grupo pertenecen la mayoría de las
pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan la sensibilidad de
un microorganismo a una sustancia dada de identificación que contienen el sustrato a
metabolizar. (Bou, 2011, p. 601- 608).

Existen varias pruebas bioquímicas como prueba de las catalasa, oxidasa, ureasa, indol y
entre otras, para la identificación de manera fácil y rápida sobre las bacterias a partir de
medios de cultivo que permiten la diferenciación presuntiva rápida entre grupos de
microorganismos o entre especies bacterianas, estas pruebas pueden orientar sobre las
técnicas adicionales necesarias para hacer una identificación definitiva. (Romero, Melendres
& Polo).

II. DESARROLLO DEL TEMA

PRUEBA DE LA CATALASA:

(Arreguín, Nieto, Muñoz, Medina & Hernández) La catalasa es un enzima presente en la

mayoría de los microorganismos que poseen citocromos, donde las bacterias que sintetizan
catalasa hidrolizan el peróxido de hidrógeno en agua y oxigeno gaseoso que se libera en
forma de burbujas, su principal objetivo de esta prueba es separar Micrococacceae (Positiva)
de Streptococcus spp. y Enterococcus spp. (Negativa). (Bou, 2011, p. 601- 608).

En un portaobjeto se depositó una gota de agua oxigenada y

con un asa de siembra se puso en contacto con la colonia
Procedimiento:
bacteriana, esta prueba se considera positiva si se produce
una efervescencia con burbujas.

Cuadro 1. Procedimiento de la prueba de la Catalasa.

Fuente: (Romero, Melendres & Polo).

PRUEBA DE LA OXIDASA:

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas, donde la reacción de la

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oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidación del
citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular produciéndose agua o peróxido de
hidrógeno según la especie bacteriana, su principal objetivo de estas prueba es identificar
todas las especies de Neisseria (Positiva), y diferenciar Pseudomonas de los miembros
oxidasa (Negativos) de las enterobacterias. (Bou, 2011, p. 601- 608).

Procedimientos:
Método en placa directa. Método indirecto sobre papel
 Agregar directamente 2-3 gotas de  Colocar un trozo de papel de filtro de
reactivo Kovacs a algunas colonias. 3x3cm aproximadamente en una placa
 No inundar toda la placa y no invertirla. de Petri.
 Observar los cambios de color.  Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs
en el centro del papel.
 Extender con el asa de siembra una
colonia sobre el papel impregnado.
Cuadro 2: Procedimientos de la prueba de la Oxidasa
Fuente: (Rodríguez, 2007, P. 6-8.). (Carpenter, 1940).

PRUEBA DE LA UREASA:

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando una molécula de

dióxido de carbono y dos moléculas de amoniaco por acción del enzima ureasa, esta actividad
enzimática es característica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo para
diferenciar este género de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado, esta
prueba también se utiliza para diferenciar Physobacter phenylpyruvicus de Moraxella spp.
Helicobacter pylori y Brucella spp. y ayuda en la identificación de Cryptococcus spp. que
produce un resultado positivo. (Urrestarazu, 1989, p. 169-72).

Procedimiento:
DESCRIPCION

Se inoculo la muestra en el Resultados:

medio de cultivo agar urea Positivo: de color rosa
de Christensen, se llevó a contiene la enzima ureasa.
incubar a 37°c por 24hr.si Negativo: de color amarillo
cambia de color de rosado no contienen la enzima
a fucsia es prueba positiva. ureasa.

Fig. 1: Resultado de procedimiento de la prueba Ureasa.

Fuente: (Romero, Melendres & Polo).
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PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS:

(González, Sánchez & Murcia.), Sirve para determinar la capacidad de un organismo de

reducir el nitrato en nitritos, se utiliza para asignar bacterias a la familia Enterobacteriaceae
son generalmente nitratos (Positivo), en la diferenciación de Moraxella catarrhalis del género
Neisseria y en la identificación de bacilos Gram positivos aerobios. (Romeo, Catalano,
Lovadina, 1988, P. 171-82).

PRUEBA DE LA LACTOSA:

Esta prueba se usa para diferenciar entre las enterobacterias en general y el grupo de los
coliformes, se trata por tanto de una prueba de gran importancia debido a que los coliformes
se utilizan como organismos indicadores de contaminación fecal en análisis, sobre todo, de
aguas, en bacteriología se define el grupo de organismos coliformes como los bacilos Gram
negativos, aerobios y anaerobios facultativos, no formadores de esporas y que fermentan la
lactosa. (Bou, 2011, p. 601- 608).

PRUEBA DEL INDOL:

(Verde, calipuy, et al.), Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol en un cultivo
bacteriano, dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante el
enzima triptofanasa, esto provoca la hidrólisis del aminoácido y su desaminación, produciendo
indol, ácido pirúvico y amoníaco. (Bou, 2011, p. 601- 608).

Procedimiento: DESCRIPCION

Si la bacteria posee la
Inocular el caldo con el enzima triptofanasa, al
microorganismo e incubar a 37 ºC añadir al medio las gotas
del reactivo de Kovacs,
durante 24- 48 horas. se producirá un anillo de
Transcurrido ese tiempo añadir 4 color rojo cereza en la
superficie del caldo y la
o 5 gotas de reactivo Kovacs, prueba será considerada
resbalando por la pared del tubo positiva.

sin agitar.
Fig. 2: Resultado del procedimiento de la prueba de Indol.
Fuente: (Bou, 2011, p. 601- 608).

PRUEBA DE LA FENILALANINA DESAMINASA:

(Faddin M., 1990). Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el
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 aminoácido fenilalanina en ácido fenilpirúvico por la actividad de la enzima fenilalanina
desaminasa, con la consiguiente acidez resultante, esta actividad enzimática es característica
de todas las especies del género Proteus y del grupo Providencia por lo que se usa para
separar ambos géneros de otras enterobacterias. (Macfaddin, 2003).

PRUEBA DE MOVILIDAD (Medio Agar Sim):

(Verde, calipuy, et al.), Sirve para determinar si un organismo es móvil o inmóvil, las bacterias
tienen movilidad por medio de sus flagelos que se encuentran principalmente entre los bacilos
aunque existen algunas formas de cocos móviles, entre las enterobacterias, la movilidad nos
permite diferenciar el género Klebsiella (Negativo) de las restantes que suelen ser movilidad
(Positivo), dentro del género Bacillus, nos permite diferenciar B. anthracis (Negativo) de otras
especies generalmente (Positivo). (Romero, Melendres & Polo).

III. CONCLUSIONES

 Las pruebas bioquímicas tienen como fundamento la presencia o ausencia de determinadas

enzimas que son comunes en las bacterias, logrando una identificación casi segura del tipo de
bacteria presente en las muestras a evaluar.

 Se logró identificar las diferentes pruebas bioquímicas que nos permiten determinar las
características metabólicas de las bacterias con objeto de identificación.

IV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 BOU, Germán, et al. Métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de

microbiología. Enfermedades infecciosas y microbiología clínica, 2011, vol. 29, no 8, p.
601-608.

 ROMERO, Elianeth; MELENDRES, Ketty Pérez; POLO, Luis Ángel Tamara. PRUEBAS
BIOQUÍMICAS.

 URRESTARAZU DE GARCÍA, María I., et al. Prueba de la ureasa para el diagnóstico de

infección por Campylobacter pylori. Gen, 1989, p. 169-72.

 ROMEO, Ana M.; CATALANO, Mariana; LOVADINA, Laura. Pruebas bioquímicas mínimas
para la identificación interespecie en el género Staphylococcus. Rev. argent. microbiol,
1988, p. 171-82.

 MACFADDIN, Jean F. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de

importancia clínica. Ed. Médica Panamericana, 2003.

 OSORIO JAMANCA, Miguel Ángel. Comparación de un agar sangre modificado y pruebas

rápidas spot con un medio cromogénico para la identificación presuntiva de uropatógenos-
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Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”. 2020.

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