UNIVERSIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

MEDICINA
BIOQUÍMICA MÉDICA
CINÉTICA ENZIMÁTICA
SEBASTIAN PEÑAFIEL
AYUDANTE DE CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA MÉDICA
LOGROS DE APRENDIZAJE

 Se puede explicar la cinética de las enzimas.

 Se puede diferenciar los modelos de cinética enzimática.
 Identifica factores e influencia sobre la actividad enzimática.
 Se aplican principios bioquímicos en la actividad enzimática en
diversos procesos tanto fisiológicos como fisiopatológicos.
JUSTIFICACIÓN

 Las enzimas corporales son indispensables para procesos fisiológicos

del organismo humano, por ello es crucial la identificación de todos
aquellos factores que influyen sobre la actividad de nuestras enzimas.
Estos sutiles cambios bioquímicos pueden explicar diversos estados
patológicos en el cuerpo y las consecuentes alteraciones en el
metabolismo celular y las consecuencias que podrían desencadenarse.
MARCO TEÓRICO
 ¿QUÉ ES UNA ENZIMA?

 PROTEÍNA
 CATALIZADOR BIOLÓGICO
 NO SE DESTRUYE EN LA REACCIÓN
 LAS EXCEPCIONES NOTABLES SON LOS RNA
RIBOSOMALES Y UN PUÑADO DE MOLÉCULAS DE RNA
CON ACTIVIDAD DE ENDONUCLEASA O DE NUCLEÓTIDO
LIGASA CONOCIDAS EN CONJUNTO COMO RIBOZIMAS.
 ESPECIFICIDAD: SOLO CATALIZAN UN
FUNCIONES TIPO DE REACCIÓN

DEGRADACIÓN DE SÍNTESIS DE SÍNTESIS DE

AZÚCARES GRASAS AMINOÁCIDOS

RECONOCIMIENTO DEGRADACIÓN DE
Y TRANSMISIÓN DE SUBPRODUCTOS
SEÑALES TÓXICOS
CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

• Procesos de oxidación
OXIDORREDUCTASAS • Emplean como aceptores de H a NAD, NADPH y FAD. O al O2.

• Catalizan la transferencia de grupos químicos

TRANSFERASAS • Un ejemplo son las transaminasas

• Reacciones hidrolíticas
HIDROLASAS • Enzimas digestivas: amilasa, lipasa, sacarasa o proteasa
CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

• Rompen enlaces entre el carbono y otros elementos, distinto a hidrólisis y

LIASAS oxidación.
• Necesidad de coenzimas.

ISOMERASAS • Conversión de isómeros.

• Catalizan la unión de dos moléculas.

LIGASAS • Usan ATP.
NOMENCLATURA
CLASIFICACIÓN DESDE EL PUNTO DE
VISTA ESTRUCTURAL

 PROTEÍNAS PURAS
 ENZIMA PROPIAMENTE DICHA: APOENZIMA
 REQUIERE COFACTOR (GRUPO PROSTÉTICO,
COENZIMA. ACTIVADORES METÁLICOS)
CARACTERÍSTICAS COMUNES

 CATALIZAN REACCIONES TERMODINÁMICAMENTE POSIBLES A GRAN VELOCIDAD.

 NO SE VEN AFECTADAS POR LA REACCIÓN, PUEDEN CATALIZARLA INCONTABLES VECES.
 LA ENZIMA PUEDE REALIZAR LA REACCIÓN INVERSA.
 SON ALTAMENTE ESPECÍFICAS Y ACTÚAN ÚNICAMENTE SOBRE UN SUSTRATO.
¿QUÉ ES LA CINÉTICA ENZIMÁTICA?

 ES LA PARTE DE LA
BIOQUÍMICA QUE ESTUDIA LA
MEDICIÓN CUANTITATIVA DE
LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
CATALIZADA POR ENZIMAS,
ASÍ COMO DE LOS FACTORES
QUE INFLUYEN EN ESTA
MAGNITUD.
CINÉTICA ENZIMÁTICA

 La energía de activación suele utilizarse para

denominar la energía mínima necesaria para que se
produzca una reacción química dada. Para que
ocurra una reacción entre dos moléculas, éstas
deben colisionar en la orientación correcta y poseer
una cantidad de energía mínima.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

 UNIDAD INTERNACIONAL (UI)

 ES LA CANTIDAD DE ENZIMA QUE CATALIZA LA
CONVERSIÓN DE UN MICROMOL DE SUSTRATO
EN PRODUCTO
 1 UI = 1 MOL/MIN
FACTORES QUE ALTERAN SU FUNCIÓN

DISOLVENTES
CALOR PH
ORGÁNICOS

CANTIDAD DE CONCENTRACIÓN
INHIBIDORES
SUSTRATO DE LA ENZIMA
Ruptura de
enlaces
covalentes
pH

 La desnaturalización de la enzima es otro factor que

influye en la pérdida de actividad a pH bajo o alto. Con
frecuencia, la pérdida es de carácter irreversible, por lo
que la actividad no se recupera del todo cuando la enzima
se transfiere a un medio con pH óptimo. Este último
efecto del pH está más relacionado con la estabilidad de
la proteína que con los grupos funcionales que participan
de manera directa en la catálisis.
 pH óptimo de 6 – 8 pero depende mucho del tipo de
enzima.
CONCENTRACIÓN DE SALES

 La fuerza iónica de las soluciones salinas afecta la

actividad de las enzimas.
 Una elevada concentración de sales altera la carga de la
enzima, disminuyendo la actividad catalítica.
INHIBIDOR ALOSTÉRICO
INHIBIDOR ALOSTÉRICO

 SUSTANCIA, PRODUCE CAMBIOS EN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA,

ACTIVA O INHIBE.
 SITIO DE UNIÓN DIFERENTE AL SITO ACTIVO.
 INHIBICIÓN POR RETROALIMENTACIÓN SE REFIERE AL PROCESO
MEDIANTE EL CUAL EL PRODUCTO TERMINAL DE UNA VÍA
BIOSINTÉTICA DE MÚLTIPLES PASOS SE UNE A, E INHIBE, UNA ENZIMA
QUE CATALIZA UNO DE LOS PRIMEROS PASOS EN ESA VÍA.
FOSFATASA ALCALINA
ALP

Aumenta en: Enfermedad ósea de

 La fosfatasa alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el
Paget, obstrucciones
organismo. hepáticas, hepatitis, mononucleosis,
 VÍAS BILIARES hepatoxicidad por medicamentos y
 HUESO osteomalacia
 GLÓBULOS BLANCOS
 PLACENTA
 MUCOSA INTESTINAL Disminuye en: Cretinismo y déficit
de vitamina C
 RIÑÓN

 Hidroliza el enlace éster fosfórico entre un grupo fosfato y un radical

orgánico a un pH óptimo de 9 a 10
 En presencia de iones Zn+2 y Mg+2
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
REACTIVOS

 Kit para determinación de Fosfatasa Alcalina

 Reactivo A: 4 – aminoantipirina 29mmol/l en solución de aminometil propanol 3 mol/l.
 Reactivo B: fenilfosfato de sodio 1,4 mmoles.
 Reactivo C: ferricianuro de potasio 10 mmol/l.
 Una muestra de suero desconocido
 Ácido Sulfúrico concentrado
EQUIPOS

 Baño María
 Espectrofotómetro
 Baño hirviente
MATERIALES

 5 Tubos de ensayo
 5 cubetas para espectrofotómetro
 1 Pipeta automática graduable
 1 Pipeta automática de 50 µl
 Pinzas de madera
 Gradilla
FUNDAMENTO QUÍMICO

 La fosfatasa alcalina catalizan la hidrólisis del 4-nitrofenilfosfato formando 4-nitrofenol y fosfato inorgánico.
 Se desarrolla un complejo coloreado, proporcional a la actividad enzimática.
PROCEDIMIENTO

 Preparar el reactivo de trabajo con 2 ml del sustrato y 8 ml del buffer.

 Rotular los tubos de ensayo:
 B = blanco
 S = estándar
 D = desconocido
 T ( temperatura)
 A (pH).
PROCEDIMIENTO

 Colocar 1 mL de reactivo en cada tubo de ensayo

 Incubar a baño María a 25 °C por 3 minutos.
 Tomar 20 µL de estándar con una pipeta automática y colocarlos en el tubo S.
 Tomar 20 µL de suero con una pipeta automática y colocarlos en el tubo D.
 Tomar 20 µL de suero con una pipeta automática y colocarlos en el tubo T.
 Tomar 20 µL de suero con una pipeta automática y colocarlos en el tubo A. Agregar 1 gotas de ácido
sulfúrico concentrado.
PROCEDIMIENTO

 Colocar el tubo de ensayo T en baño maría por 10.

 Trasvasar el contenido de los tubos de ensayo en cubetas para espectrofotómetro rotuladas de la misma
manera que los tubos de ensayo.
 Calibrar el espectrofotómetro, llevándolo a 0 con el blanco.
 Leer en el espectrofotómetro a 405 nanómetros al minuto 1, 3 y 5 min.
CÁLCULO
VALORES DE REFERENCIA

En la niñez y la adolescencia los valores

 Adultos: 68 - 240 UI/L
normales son mayores que en los
adultos, debido a la intensa actividad
 Niños: 100 - 400 UI/L
osteoblástica, al final del primer
trimestre de gestación se produce un
incremento de la ALP a expensas de la
Isoenzima placentaria.
IMPORTANCIA CLÍNICA
IMPORTANCIA CLÍNICA

 Valores altos
 Anemia
 Obstrucción biliar
 Enfermedad ósea
 Consolidación de una fractura
 Hepatitis
 Hiperparatiroidismo
 Leucemia
 Enfermedad hepática
 Cánceres óseos osteoblásticos
 Osteomalacia
 Enfermedad de Paget
 Raquitismo
IMPORTANCIA CLÍNICA

 VALORES BAJOS
 Desnutrición
 Deficiencia de proteínas
 Enfermedad hepática alcohólica
 Estenosis biliar
 Arteritis de células gigantes
 Neoplasia endócrina múltiple
 Carcinoma de células renales
TEMPERATURA SOBRE ENZIMAS
CORPORALES

 Las enzimas presentan una actividad ideal a la temperatura corporal.

 La fiebre especialmente alta y prolongada sobre las enzimas producen disminución de la
actividad enzimática por medio de la desnaturalización proteica.
 En casos extremos como en la hipertermia maligna, se produce un círculo vicioso de
hipermetabolismo y elevación extrema de la temperatura a más de 41 °C, con el consiguiente
consumo excesivo de sustratos, acumulación de desechos, acidosis, y desnaturalización proteica
lo que provoca una menor actividad enzimática progresiva.
PH SOBRE ENZIMAS CORPORALES

 Las enzimas humanas poseen un pH ideal cercano a la neutralidad, al cual presentan su máxima
actividad.
 Un aumento o descenso de la concentración de iones hidrógeno alteran la actividad catalítica de
la enzima y su estructura proteica, llegando finalmente a la desnaturalización.
 Entre las patologías que afecta la actividad sérica de la ALP, están problemas hepáticos, como
obstrucción biliar extra o intrahepática y neoplasias, tanto primarias como metastásicas;
enfermedades óseas que incrementan la actividad osteoblástica como la enfermedad de Paget,
Raquitismo y Osteomalacia.
 Se observan también elevaciones importantes en el hiperparatiroidismo, tanto primario como
secundario.