Manual de Nivelación

de bioquímica

facultad de Agronomía
Universidad de la república

Jorge monza y santiago signorelli

coordinadores

Montevideo, 2018
Esta publicación cuenta con el apoyo de la Comisión Sectorial de Enseñanza (CSE) de la Universidad de la
República (Udelar). Forma parte de la serie “Manuales de aprendizaje” de la CSE, que tiene como objetivo
mejorar las condiciones de aprendizaje de los estudiantes y, al mismo tiempo, propiciar la autoformación docente
mediante la reflexión sobre sus prácticas y sobre el estado del arte de su disciplina. Secundariamente, esta
publicación pretende colaborar en la constitución de tradiciones disciplinares y culturas educativas nacionales.

Diagramadora Alicia Razzetti, Departamento de Publicaciones de la Facultad de Agronomía.

Avda. Garzón 780, 12900 Montevideo.
Universidad de la República Oriental del Uruguay.
 índice

Manual Didáctico de Bioquímica Prólogo

1. Aminoácidos............................................................................................................... 1

2. Proteínas..................................................................................................................... 5

3. Enzimas...................................................................................................................... 11

4. Lípidos........................................................................................................................ 21

5. Glúcidos...................................................................................................................... 27

6. ácidos Nucleicos......................................................................................................... 35

7. Membranas Biológicas.............................................................................................. 45

8. Cadena Respiratoria.................................................................................................. 51

9. Glucólisis.................................................................................................................... 61

10. Ciclo de Krebs........................................................................................................... 71

11. fotosíntesis................................................................................................................ 79

12. Metabolismo de Lípidos........................................................................................... 91

13. Metabolismo de Nitrógeno....................................................................................... 99

14. Duplicación del ADN................................................................................................ 105

15. Transcripción . ......................................................................................................... 109

16. Traducción ............................................................................................................... 117

17. Mutaciones................................................................................................................ 125

 Manual Didáctico de Bioquímica
Prólogo

Este Manual Didáctico de Bioquímica es el producto de la labor de un conjunto de jóvenes docentes,

con la conducción del Profesor Jorge Monza.
Se me solicitó redactar este prólogo, tal vez porque vi nacer este grupo docente, acertada combinación
de biólogos y bioquímicos “agronomizados” en su fecundo tránsito por la Facultad de Agronomía y
de ingenieros agrónomos capturados por la aventura de la vocación científica de alta calidad.
Hoy, todos ellos posgraduados o en camino de serlo, investigan en un equipo armónico y publican
en revistas científicas del mayor nivel internacional.
Sin embargo, la confección del presente Manual demuestra que, felizmente, no han olvidado que
su mayor responsabilidad, como docentes universitarios, reside en la enseñanza para formación
y capacitación de las nuevas generaciones. Enseñanza realizada en condiciones difíciles de grupos
numerosos de estudiantes, con serias lagunas en su formación en “ciencias duras”, química, física
y matemática, pero también, más en general, con frecuentes dificultades en la mera comprensión
lectora.
El Manual requiere pues retomar conceptos básicos e imprescindibles para comprender la
bioquímica, y enfatizar aspectos programáticos centrales para la carrera agronómica. Pero
también intenta encender en cada estudiante la satisfacción de internarse y descubrir un mundo
nuevo, pleno de secretos e interrogantes, y una capacidad que deberá acompañarlo toda la vida, la
de “aprender a aprender”.
Creo que para lograrlo, la enseñanza debe apoyarse en algunas condiciones esenciales:
• Desterrar el “enciclopedismo” y apostar a una enseñanza muy activa y participativa, donde
siempre es mejor enseñar poco y bien que mucho y mal.

• Entender que “las prácticas” no son algo adicional a la teoría, sino que forman parte de un todo
integrado y simultáneo de la buena enseñanza, donde existe “una fecundación cruzada” entre
ambas, pues se retroalimentan recíprocamente, dentro de un conjunto indivisible.

• Intentar siempre un trabajo activo y directo de grupos de estudiantes, donde tengan la

oportunidad de meter las manos, pensar por su cabeza y discutir entre sí y con el profesor sobre
problemas concretos que se les presentan.

• Finalmente, logrado lo anterior, desmitificar la arraigada creencia que las llamadas ciencias
duras son de por sí difíciles y su comprensión inalcanzable para el común de los seres humanos.

Si este Manual contribuye para el cumplimiento de alguna de estas condiciones, y ayuda a que un
cierto porcentaje de estudiantes se “enamore” de la bioquímica, habrá justificado plenamente su
publicación.

Prof. Álvaro Díaz Maynard, octubre 2013


1. AMINOÁCIDOS
Revisado por los Dres. Antonio Márquez y Marco Betti,
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular de Plantas,
1. Características de los aminoácidos
Las proteínas de bacterias, hongos, plantas y
animales están formadas por los mismos 20 α
aminoácidos.
Los α aminoácidos tienen un grupo carboxilo
(-COOH), un grupo amino (-NH2) y un grupo
radical (-R), unidos al C α (fig. 1). Observe que
el -R es lo que hace diferentes entre sí a los α
aminoácidos, porque tiene distinto tamaño,
reactividad química y polaridad (figs. 3, 4 y 5).
• Además de los 20 α aminoácidos que forman
proteínas, hay más de 200 β, γ, o δ aminoácidos,
que no forman proteínas: son los aminoácidos
no proteicos.
• Según el -NH2 se encuentre a la derecha o a
la izquierda del Cα los aminoácidos son D o L
respectivamente: las proteínas están formadas
por L-aminoácidos (fig. 1).
Figura 1. Fórmula general de un α L - aminoácido. El
-NH2, -COOH, -H y el -R están unidos al Cα. El Cα es
un C quiral, porque tiene cuatro grupos sustituyentes
diferentes. Todos los aminoácidos tienen un C quiral,
excepto la glicina (gly).
• Para denominar a los aminoácidos se usan
como abreviaturas tres letras de su nombre
común: val (valina), ala (alanina), glu
(glutámico), etc.
• Los animales no son capaces de producir todos
los aminoácidos necesarios para su crecimiento
y desarrollo, o a algunos los producen en
cantidad insuficiente. Esos aminoácidos
denominados esenciales deben ser aportados
1
S. Signorelli, E. Casaretto y J. Monza
Facultad de Química, Universidad de Sevilla, España.
por la dieta, difieren según la especie y la edad.
Por ejemplo, los vacunos no pueden sintetizar
lys ni thr y sintetizan insuficiente cantidad
de arg, phe, his, iso, leu, met, trp y val. Estos
aminoácidos son esenciales para esa especie
y los que el organismo puede sintetizar se
denominan no esenciales.
2. La polaridad del -R
La polaridad se debe a la diferencia de
electronegatividad entre los átomos que
participan en un enlace.
• Las moléculas polares tienen mayor densidad
electrónica en una zona respecto a otra, por lo
que se generan cargas parciales. Un ejemplo
de este tipo de molécula es el agua, porque
tiene mayor densidad electrónica alrededor del
oxígeno y menor alrededor de los hidrógenos
(fig. 2 A).
• En la figura 2 B se representa la distorsión
de la nube electrónica entre el oxígeno y el
hidrógeno del agua, dos átomos con diferente
electronegatividad. Esta diferencia genera un
momento dipolar que le confiere la polaridad.
• Las moléculas apolares presentan similar
densidad electrónica entre sus átomos. Un
ejemplo son los alcanos, formados por C e H.
Como la diferencia de electronegatividad entre
el C y el H es poca (C 2.5 y H 2.1), la densidad
electrónica es homogénea en toda la molécula
y no se generan cargas parciales: son apolares
(fig. 2 C).
• Otras moléculas apolares tienen diferente
electronegatividad entre sus átomos, pero
generan momentos dipolares que se anulan
entre sí, lo que hace que la molécula no tenga
polaridad. Un ejemplo es el CO2 (fig. 2 D).
como dipolos
2

Figura 2. Disposición de la nube electrónica en moléculas polares y apolares. A. Molécula de agua. La mayor
afinidad del O por los electrones genera diferente densidad electrónica entre el O y el H: la molécula es polar.
B. Nube electrónica en un enlace O-H de la molécula de agua. La zona hacia donde está desplazada la nube
de electrones es más electronegativa. Cualquier molécula con esta asimetría es polar sin carga. C. Molécula de
alcano. La densidad de electrones entre los C y los H es homogénea, por lo que no se generan zonas con diferente
polaridad: la molécula es apolar. D. Disposición de la nube electrónica en una molécula de CO2. Si bien los
electrones se desplazan hacia los O, la molécula es simétrica, por lo que no tiene momento dipolar neto, es apolar.

3. Los aminoácidos se pueden clasificar 3.2 Aminoácidos polares sin carga

según la polaridad del -R
En este tipo de aminoácidos hay una distribución
Según la polaridad del -R los aminoácidos electrónica asimétrica entre alguno de los átomos
pueden ser apolares, polares sin carga y polares del -R, por ejemplo en los grupos -OH (fig. 4).
con carga (positiva o negativa). Como consecuencia de esa distribución se genera
3.1 Aminoácidos apolares una región electronegativa alrededor del O. Esto
permitirá que esos -R interaccionen con otros -R
Los aminoácidos apolares tienen -R alifático polares, o con moléculas polares como el agua.
(lineal o ramificado) o aromático(fig. 3).
En las proteínas esos -R apolares interaccionan
entre sí en zonas internas de la molécula, e interactúan
poco con el medio acuoso polar que la rodea.

Figura 4. Aminoácidos polares sin carga. Los -R

Figura 3. Aminoácidos apolares. Los -R alifáticos
(lineales o ramificados) y aromáticos tienen en común
que entre sus átomos no se generan cargas parciales.
presentan grupos con disposición desigual de la
nube electrónica entre dos átomos con diferente
electronegatividad. en el grupo -OH la nube de
electrones está desplazada hacia el O, y genera una
región más electronegativa respecto al H.
 3

3.3 Aminoácidos polares con carga (fig. 6). Esto se debe a que el grupo -COOH se
comporta como un ácido (cede un H+) mientras
Estos aminoácidos presentan en el -R un
que el grupo -NH2 se comporta como una base
segundo grupo ácido o base (fig. 5). De esta
(capta un H+). La consecuencia es la formación
forma, a pH 7.0, los aminoácidos ácidos tienen
de un dipolo (fig. 6).
el -R cargado negativamente porque el -COOH
se encuentra desprotonado (-COO-), mientras
que los aminoácidos básicos tienen el -R cargado
positivamente, porque tienen un grupo -NH2
protonado (-NH3+).

Figura 6. Forma no disociada y dipolo de un

aminoácido. El grupo -COOH se desprotona y el
grupo -NH2 capta el H+. El producto es un dipolo
eléctricamente neutro.

• En el dipolo el grupo -COO- puede captar H+

(se comporta como una base) y el grupo -NH3+
puede desprotonarse (se comporta como un
ácido): los aminoácidos son anfóteros (fig. 7).
• Debido al carácter anfótero, cuando a una
solución de amionoácidos se le agrega un ácido
Figura 5. Aminoácidos polares con carga. Los -R o una base el pH no varía bruscamente en los
presentan grupos -COOH o -NH2, que según el pH se valores próximos a los pK: son amortiguadores
desprotonan o protonan y adquieren carga neta.
a pH no fisiológico.

4. A pH fisiológico los aminoácidos están 5. El pH del medio determina que un

como dipolos aminoácido tenga o no carga neta

A pH celular, que se encuentra en el entorno Según el pH en el que se encuentre el medio

de la neutralidad, los aminoácidos están los aminoácidos adquieren diferente carga
predominantemente bajo la forma de dipolo (fig. 7).

Figura 7. Aminoácido monoamino monocarboxilo a diferentes pH. Algunos aminoácidos (glu, asp, lys,
his, arg, cys, tyr) tienen otros grupos ácidos o bases en el -R, por lo que hay otros equilibrios adicionales no
representados en esta figura.
4

6. Curva de titulación de un aminoácido 7. Electroforesis: un método de separación

muy utilizado en bioquímica
La curva de titulación corresponde a la
representación gráfica de la variación del pH La electroforesis consiste en la migración de
de una solución, en relación con el agregado de moléculas con carga por acción de un campo
equivalentes de base o de ácido (fig. 8). eléctrico.
• A pH 1 se puede considerar que el 100 % de
• La carga de los aminoácidos está determinada
un aminoácido se encuentra como ión positivo,
por el pH de la solución en que se encuentren.
porque el grupo carboxilo y el amino están
protonados (fig. 8). • La carga determina hacia que polo se
• Al aumentar el pH habrá un valor para el cual desplazarán en una electroforesis.
el 50 % del aminoácido se encuentre con carga
En la figura 9 se muestra una cuba de
neta positiva y el otro 50 % como dipolo que
electroforesis y el soporte (papel o gel) donde se
tiene carga neta cero. El valor de pH en el cual
coloca la muestra. Después de transcurrido un
50 % del aminoácido está como ión positivo y
tiempo de encendida la fuente los aminoácidos
el 50 % como dipolo corresponde al pKa (fig. 8).
se visualizan con un reactivo apropiado. Observe
• El pH en el cual el 100 % del aminoácido que el aminoácido no migrará cuando el pH del
se encuentra como dipolo (carga neta cero) tampón sea igual al PI.
corresponde al punto isoeléctrico (PI).
• Por encima del PI hay un valor de pH en el
cual el aminoácido estará 50 % como dipolo
neutro (carga neta cero) y 50 % con carga neta
negativa. Ese valor de pH corresponde al pKb
(fig. 8).
• A pH>12 (fuetemente alcalino) se puede consi-
derar que el 100 % del aminoácido se encuentra
como ión negativo, porque el grupo carboxilo y
amino están desprotonados.
Figura 9. Electroforesis de un aminoácido. Sobre el
soporte se coloca el o los aminoácidos, que migrarán
hacia uno u otro polo según el pH del tampón. Los
electrodos se conectan a una fuente de poder que
genera el campo eléctrico.

Al finalizar la preparación del tema será

capaz de:

• Caracterizar químicamente un aminoácido.

• Diferenciar los -R según su polaridad.

• Comprender por qué las cargas de los R ácidos

Figura 8. Curva de titulación de un aminoácido. Una
curva de este tipo se obtiene con aminoácidos neutros,
es decir, que no tienen en el -R un segundo grupo
ácido o básico.
o básicos dependen del pH, y predecir la carga
de un aminoácido según el pH del medio.
• Explicar en qué se basa y para qué se usa la
electroforesis.
 5

2. PROTEÍNAS
J. Monza y S. Signorelli
Revisado por la Dra. Mónica Marín, Instituto de
Biología. Facultad de Ciencias, UdelaR.

1. Las proteínas están formadas por ami-
noácidos
La condensación de los aminoácidos ocurre por
la reacción entre el grupo carboxilo (-COOH) de
un aminoácido con el grupo amino (-NH2) de
otro, con la formación de un enlace peptídico y la
pérdida de H2O (fig. 1). En las células este enlace se
produce mayormente en los ribosomas, en la etapa
de traducción de la síntesis proteica. La hidrólisis
del enlace peptídico libera aminoácidos (fig.1)
• Tanto los polipéptidos como las proteínas
son cadenas aminoacídicas no ramificadas.
La principal diferencia entre ellos es la masa
molecular, relacionada con la cantidad y el
peso molecular de los aminoácidos que los
forman.
• Las proteínas son macromoléculas porque su
peso molecular supera los 10.000 Da. Si bien
la cantidad de aminoácidos que las integran
varía, un número frecuente es entre 200 y 300
aminoácidos.
• Algunas funciones de las proteínas se resumen
en el cuadro que aparece a continuación.

Función Ejemplos
Estructural Queratinas, que forman la lana, el pelo y las uñas, o el colágeno que es la mayo parte del cuero.

Enzimática Enzimas digestivas, catalizan la ruptura de enlaces y tienen especificidad por el sustrato sobre el
que actúan.

Movilidad Actina y miosina, responsables del acortamiento y extensión de los músculos.

Transporte Hemoglobina, transporta O2 a los tejidos.

Inmune Los anticuerpos responsables de la defensa celular, que reconocen a los antígenos (sustancias por
lo general exógenas).

Hormonas Insulina y somatotropina, hormonas de naturaleza peptídica.

Toxinas Muchas sustancias de este tipo son de naturaleza peptídica, como la toxina diftérica, la
botulínica y veneno de ofidios.

Transportadores Transportadores de nitrato, proteínas de membrana de células de raíz que permiten el ingreso de
de membrana ese ión a la planta.

+ Observe que una característica de las proteínas es la especificidad que tienen muchas de ellas,
como las enzimas, transportadores y anticuerpos.

Figura 1. Formación e hidrólisis del enlace peptídico. El enlace peptídico se da entre el C y el N, y es consecuencia de
la reacción entre un -COOH y un -NH2, con liberación de H2O. La hidrólisis del enlace peptídico libera aminoácidos.
6

2. Los péptidos y proteínas tienen -N ter-

minal y -C terminal
Cada elemento de la cadena polipeptídica es un
producto de la condensación entre aminoácidos,
pero en sentido estricto no son aminoácidos y se
denominan residuos.
• Como el enlace peptídico se establece entre el
-COOH y el -NH2 de los aminoácidos, la cadena
polipeptídica tiene un extremo amino libre
(N terminal) y un extremo carboxilo libre (C
terminal) (fig. 2).
• Por convención, las cadenas polipetídicas se Figura 3. Síntesis proteica. A partir de una hebra de
orientan en sentido N terminal a C terminal ADN se sintetiza un ARNm, este proceso es la Tran-
scripción. Observe que las bases del ADN y ARN son
(fig.2).
complementarias (A con U, C con G). En los ribo-
somas, los tripletes de bases del ARNm (codón) inter-
accionan con tres bases de un ARNt (anticodón) unido
a un aminoácido. Cada triplete de bases del ARNm
codifica un aminoácido.

+ Observe que la información pautada como

secuencia de bases en el ADN da lugar a la
Figura 2. Representación de una cadena
polipeptídica. El polipéptido tiene nueve residuos, de
secuencia de aminoácidos en la proteína.
los cuales la serina (ser) está en el extremo amino y la
arginina (arg) en el extremo carboxilo. 4. Estructura de las proteínas

4.1 Estructura primaria: ordenamiento de

3. La función de las proteínas está deter- aminoácidos unidos por enlaces peptídico
minada por la secuencia de aminoácidos
La secuencia y el número de resiudos
aminoacídicos unidos entre sí por enlace
La hidrólisis de las proteínas libera unos 20 peptídico constituyen el nivel elemental de las
aminoácidos diferentes, que son los mismos en proteínas: la estructura primaria (fig. 4).
todas. De esta forma, la función de las proteínas
se debe a la cantidad, porcentaje y secuencia de
los aminoácidos que la componen.

• La secuencia y cantidad de aminoácidos de

una proteína están determinadas en el ADN,
concretamente en regiones conocidas como
genes.
• Simplificado este concepto se puede asumir: un
gen una proteína, si bien más adelante se verán
limitaciones a esta generalización. Para revisar
este proceso, en la figura 3 se representan las
etapas de la expresión de los genes que llevan a
la síntesis proteica.
Figura 4. Representación de la estructura primaria de
una proteína. El aminoácido del extremo N terminal,
la glicina (gly), corresponde al primer residuo de la
cadena polipeptídica y el del C terminal, la asparagina
(asn), al último.
+ Observe que a partir de 20 aminoácidos
diferentes se sintetizan todas las proteínas.

4.2 Estructura secundaria:
proteínas fibrilares
La estructura secundaria corresponde a
organizaciones espaciales regulares: la α hélice
y la lámina plegada, llamada también hoja ß. En
estos ordenamientos, la fuerza estabilizadora
es el puente de hidrógeno, una interacción
no covalente, que en este caso se da entre los
grupos -NH y -C=O, según se representa a
continuación:
-N-H |||||||||| O=C-
• La forma α hélice es característica de proteínas
como las queratinas del pelo, la lana, la
sustancia córnea de los cuernos y las pezuñas
(fig. 5 A).
• La lámina plegada (hoja ß) corresponde a
ordenamientos lineales, de tipo paralelo y
antiparalelo (fig. 5 B).
Figura 5. Estructura secundaria de proteínas. A.
Ordenamiento en forma de α hélice. B. Lámina
plegada en forma de hoja ß antiparalela. En los dos
ordenamientos los puentes de H que estabilizan las
estructuras se dan entre los grupos -C=O y -NH de los
enlaces peptídicos.
+ Observe que la estructura secundaria es un
ordenamiento espacial que abarca partes de la
proteína (Fig. 6).
7
4.3 Estructura terciaria:
proteínas globulares
La estructura terciaria corresponde al
ordenamiento de toda la proteína plegada.
Es decir, incluye regiones con estructura
secundaria. En la estabilización de la estructura
terciaria participan diferentes interacciones
o fuerzas estabilizadoras que se describen a
continuación.
• Interacciones hidrofóbicas entre -R.
En medio acuoso, los grupos -R apolares
se orientan hacia el interior de la molécula,
reduciendo el contacto con las moléculas de
agua (fig. 6).
• Puentes de hidrógeno. Se forma entre un
H unido a un átomo “X” más electronegativo
que el C (por ejemplo: N, O, S) y un átomo “Y”,
también más electronegativo que el C, como se
representa a continuación:
-X-H |||||||||| Y-
• Interacción con metales. Los metales
forman parte de la estructura de diferentes
proteínas. Entre los que comúnmente
estabilizan la conformación de las proteínas
se encuentran el Ca+, Mg+2, Zn+2, Cu+2 y Fe+2+3
(fig. 6).
• Interacciones electrostáticas. Se dan
entre -R cargados. Por ejemplo entre un -R con
un grupo ácido (-COO-) y otro -R con un grupo
básico (-NH3+). Las proteínas en general tienen
escasas interacciones electrostáticas, por lo que
estas contribuyen poco a su estabilidad (fig. 6).
• Enlace disulfuro. Entre dos residuos
cisteína, de la misma o diferente cadena
peptídica, se pueden formar enlaces disulfuro,
después de que la proteína se ordenó
espacialmente (fig. 6).
8

Figura 6. Proteína con estructura terciaria. Se indican con flechas las diferentes interacciones que estabilizan
a la estructura tericiaria y las regiones con estructura secundaria.

+ Observe que en la estructura terciaria 4.4 Estructura cuaternaria: proteínas

participan diferentes interacciones que oligoméricas
involucran a toda la molécula, y no sólo a una La estructura cuaternaria se estabiliza por las
región de esta como ocurre en la estrucutura mismas interacciones que la estructura terciaria,
secundaria. pero a diferencia de esta, ocurren entre dos
o más moléculas de proteínas, cada una un
monómero (fig. 7). La estructura cuaternaria
forma ensamblajes de gran tamaño, como por
ejemplo la hemoglobina.

5. La estructura espacial de las proteínas

depende de la secuencia de aminoácidos y
de las condiciones del medio

• Las proteínas adquieren una conformación

Figura 7. Proteína con estructura cuaternaria. La mo-
lécula está formada por dos monómeros: es un díme-
ro. Cada monómero tiene un extremo N y C terminal.
espacial que depende de la secuencia de los
aminoácidos que las constituyen, es decir de su
estructura primaria, y de condiciones del medio
tales como la temperatura y el pH. Observe
que: el ordenamiento espacial de la molécula
se estabiliza por interacciones débiles entre los
 9

-R, y entre los -R y el medio acuoso en el que
están las proteínas.
• Los grupos -R polares, por lo general se
orientan hacia la parte externa de la proteína e
interaccionan con el agua.
• El plegamiento de la proteína resulta de la
conformación con menor energía, es decir, la
forma más estable.
• La flexibilidad de la molécula permite que
-R alejados en la estructura primaria se
encuentren próximos cuando esta se pliega
formando la estructura terciaria.
6. Desnaturalización
Una cadena polipeptídica podría plegarse en un
número infinito de conformaciones. Sin embargo,
una secuencia adopta la misma conformación a
determinada temperatura, pH y fuerza iónica. Esa
conformación más estable termodinámicamente,
se denomina conformación nativa.
• La conformación nativa de las proteínas puede
perderse por acción de agentes químicos
y físicos. Este proceso se conoce como
desnaturalización y corresponde a la pérdida
de la estructura espacial de la molécula (fig. 8),
que se acompaña de la pérdida de su función.
• Entre los desnaturalizantes químicos se
encuentran los ácidos, las bases, los metales
pesados, la urea y los solventes orgánicos. Entre
los agentes físicos, el calor y las radiaciones.
Cualquiera de estos agentes produce cambios
en la conformación espacial de la proteína, sin
afectar la secuencia de aminoácidos (estructura
primaria).
Hay muchos ejemplos cotidianos relacionados
con la desnaturalización de proteínas. El

Figura 8. Desnaturalización por pH. La proteína tiene la conformación nativa a pH 7.2. Al aumentar el pH a 8.2
pierde parcialmente la estructura terciaria, pero se conservan regiones en α hélices y hoja β. Si el pH vuelve a pH
7.2, la proteína puede recuperar su conformación nativa (renaturalización). Si el pH continúa aumentando, se
pierde la estructura secundaria y ocurre un desplegamiento completo de la proteína. Cuando la alteración es tan
grande, la renaturalización no suele ocurrir.
10

cortado de la leche, que es consecuencia del b. Estructura terciaria. Implica la ruptura de

pH ácido producido por la fermentación interacciones iónicas entre -R de aminoácidos
láctica. También la cocción de los alimentos se polares, interacciones hidrofóbicas entre -R
basa en la desnaturalización de las proteínas apolares y enlaces disulfuros entre cisteínas.
por calentamiento,lo que reduce la cantidad
c. Estructura secundaria. Se pierden los patrones
de microorganismos. El alcohol, un solvente
de repetición regular, como las α hélices, y
orgánico, es un eficaz agente desnaturalizante de
esas regiones adoptan formas aleatorias.
proteínas y por eso se lo usa como desinfectante.

• La desnaturalización afecta a la: + Observe que la estructura primaria, es decir

la secuencia de aminoácidos unidos por enlaces
a. Estructura cuaternaria. Las subunidades de peptídicos, no se pierde por desnaturalización,
proteínas se separan. eso ocurre sólo por hidrólisis.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

1. Reconocer las principales funciones biológicas de las proteínas.

2. Formular un dipéptido y su hidrólisis.

3. Caracterizar las estructuras espaciales de las proteínas.

4. Explicar cómo la temperatura y el pH pueden producir cambios en la estructura de las proteínas.

 11

3. ENZIMAS

S. Signorelli, O. Borsani y J. Monza

Revisado por la Dra. Beatriz Alvarez,
Laboratorio de Enzimología, Facultad de Ciencias, UdelaR.

1. Las enzimas son catalizadores biológicos

Las enzimas son proteínas que aceleran

reacciones químicas: son biocatalizadores. La
degradación y síntesis de moléculas en el medio
intra y extracelular se da por lo general a través
de reacciones catalizadas por enzimas. También
algunos ácidos nucleicos tienen actividad
catalítica, y en ese sentido se pueden considerar
enzimas.
1.1 Las enzimas son específicas para el
sustrato
Cada enzima cataliza una reacción particular,
para lo que cuenta con una región que es el
sitio activo, capaz de reconocer al sustrato y Figura 1. Estructura espacial de una enzima. Algunas
transformarlo en producto. enzimas requieren para poder actuar un componente
adicional que puede ser un ion metálico (Fe+2, Mn+2,
• La forma del sitio activo está determinada por Zn+2, etc.), o una molécula orgánica denominada
coenzima. Algunas coenzimas derivan de vitaminas, la
el ordenamiento espacial de los residuos y es
flavina que forma parte del FMN y del FAD deriva de
única y específica para el sustrato. la vitamina B2 (riboflavina) y el ácido nicotínico del
NAD(P) de la vitamina B3 (niacina).
• El sitio activo está conformado por grupos
funcionales pertenecientes a aminoácidos 1.2 La enzima y el sustrato forman el
próximos espacialmente, que pueden estar complejo enzima-sustrato
alejados en la estructura primaria (fig. 1). Para que ocurra la catálisis, la enzima debe unirse al
• Los sustratos se unen a los sitios activos de las sustrato y formar el complejo enzima-sustrato (ES)
enzimas por múltiples uniones no covalentes,
entre las que se incluyen interacciones (ec. 1 )
electrostáticas, puentes de hidrógeno,
interacciones de van der Waals e interacciones
• Los sustratos y las enzimas están en
concentraciones relativamente bajas en las
hidrofóbicas.
células, pero el continuo movimiento y los
• Los grupos funcionales de los aminoácidos choques entre las moléculas hace posible que
participan primero uniendo y orientando se encuentren y formen el complejo ES.
al sustrato y seguidamente formando o • La velocidad con la que se forma el complejo
rompiendo enlaces. ES se incrementa a medida que aumenta la
• El reconocimiento de la enzima por el sustrato concentración de E, de S y/o la temperatura.
depende de la conformación espacial de la • Las enzimas no se consumen durante la reacción,
enzima, que está determinada por el pH y la por lo que pueden catalizar muchas veces el
temperatura del medio, entre otros factores. mismo proceso: son moléculas eficientes.
12

1.3 Diferentes modelos explican la y el sustrato sería tan fuerte en el complejo ES,
formación del complejo enzima-sustrato que el sustrato no se transformaría en producto.

Para explicar la especificidad de la enzima por
el sustrato, se propuso inicialmente el modelo
llave-cerradura (fig. 2), en el cual la cerradura es
el sitio activo de la enzima y la llave es el sustrato.
Si bien el modelo ejemplifica el concepto de
especificidad, las enzimas no actúan de este
modo. De ser así, la interacción entre la enzima
El modelo aceptado actualmente propone que
el sitio activo es complementario al estado
de transición que se forma en el proceso de
transformación del reactivo en el producto
(fig. 3). El sustrato debe modificarse para
unirse a la enzima en forma óptima. Esta
modificación hace que el sustrato se asemeje

Figura 2. Modelo llave-cerradura. E: enzima; S: sustrato; P: producto. El modelo propone que el sitio activo es
complementario al sustrato.

Figura 3. Mecanismo de acción de las enzimas. Los signos de + y – indican los -R con carga positiva y negativa
respectivamente, y las A los -R apolares. El modelo plantea que el S no es complementario al sitio activo y que
debe ser modificado para interactuar con este en forma óptima. En esta representación el S entra en el bolsillo
hidrofóbico, se desestabiliza y se facilita su modificación a producto.
más al producto y pueda convertirse en él (E + se oxida y otro se reduce. La enzima
P) o volver a sustrato libre (E + S). lactato deshidrogenasa es un ejemplo de
oxidorreductasa (cáp. 9, fig. 2).
2. Las enzimas se nombran y clasifican de 2. Transferasas: transfieren grupos funcionales
acuerdo al tipo de reacción que catalizan de un compuesto a otro. Un tipo de transferasas
son las quinasas, que transfieren al grupo
Las enzimas pertenecen a seis grupos que se fosfato (cáp. 9, reacción 7).
resumen a continuación, junto a ejemplos que se 3. Hidrolasas: rompen un enlace con adición de
verán en el curso. una molécula de agua. La lactasa que hidroliza
1. Oxidorreductasas: catalizan reacciones de a la lactosa es un ejemplo de este tipo de enzima
oxidorreducción, en las cuales un sustrato (cáp. 5, fig. 6).

4. Liasas: rompen enlaces por mecanismos
distintos a la hidrólisis o la oxidación. Las
descarboxilasas y aldolasas son ejemplos de
liasas (cáp. 9, reacción 4).
5. Isomerasas: catalizan reacciones de
interconversión de isómeros. La glucosa-6-
fosfato isomerasa es un ejemplo de este grupo
(cáp. 9, reacción 5).
6. Ligasas: unen moléculas utilizando energía
proveniente del ATP. También se llaman
sintetasas y un ejemplo es la glutamina
sintetasa (cáp. 13, fig. 4).
Cada enzima tiene un nombre recomendado,
generalmente el nombre trivial o histórico;
también tiene un nombre sistemático, que
consiste en el nombre del sustrato seguido del
tipo de reacción; por último, tiene un número,
que incluye a su vez cuatro números precedidos
de la abreviatura EC (por Enzyme Commission).
Figura 4. Velocidad de una reacción. [P] es la
concentración de producto, t el tiempo y v la velocidad
de reacción definida como la variación de la [P] (d[P])
sobre la variación del tiempo (dt).
Por ejemplo, la enzima que cataliza la reducción
de nitrato a nitrito tiene el nombre sistemáti
conitrato reductasa y el número EC1.18.6.1.
+ Observe que el nombre de una enzima hace
referencia al sustrato y tipo de reacción que cataliza.
3. Cinética enzimática
3.1 consideraciones sobre cinética química
La velocidad de una reacción está definida por la
disminución de la concentración de reactivo o el
13
aumento de la formación de producto por unidad
de tiempo, según se representa en la figura 4.
Generalmente, la velocidad depende de la
concentración de las especies incluidas en el
proceso y de la constante de velocidad de dicha
reacción.
Por ejemplo, para una reacción de orden uno
la conversión reversible de A en B tiene una
velocidad de reacción directa, cuya ecuación es:
v = k+1 [A] (ec. 2)
y otra inversa que es:
v inversa = k-1 [B] (ec. 3)
en las que k+1 y k-1 son las constantes de velocidad
y [A] y [B] representan las concentraciones de
A y B respectivamente. En el equilibrio, las dos
velocidades son iguales, lo que lleva a definir la
constante de equilibrio de la reacción (Keq) como:
Keq = k+1/k-1 = [B]/[A]
+ Observe que la ecuación 2 corresponde a la
ecuación de una recta, en que y es la velocidad, x
la concentración de reactivo y k+1 es la pendiente.
En la figura 5 se grafica la ecuación 2.
Figura 5. Velocidad de reacción en función de la
concentración de reactivo para una reacción de orden
uno. [A] es la concentración de reactivo y v la velocidad
de reacción.
14
3.2 La cinética de la reacción catalizada
permite caracterizar a la enzima
La cinética enzimática estudia las velocidades
de las reacciones catalizadas por enzimas y
su variación frente al cambio de parámetros
experimentales.
• La velocidad de una reacción enzimática
se puede medir por la variación de la
concentración de sustrato o de producto por
unidad de tiempo. En la figura 6 se representa
la formación de producto en función del
tiempo, es decir, la velocidad de la reacción
catalizada.
Figura 6. Velocidad de una reacción enzimática. [P],
concentración de producto; t, tiempo y v0, velocidad
inicial de la reacción. La velocidad inicial está definida
como la variación de la [P] (d[P]) sobre la variación
del tiempo (dt) en los primeros instantes de reacción.
• En la figura 6 se observa una curva de progreso
de la reacción, en la cual la velocidad disminuye
a medida que pasa el tiempo. Esto se debe al
consumo de sustrato. Además, puede ocurrir
inactivación de la enzima u otros fenómenos
como inhibición por producto.
• Para definir un único valor de velocidad
enzimática se introdujo el concepto de
velocidad inicial (vo), que hace referencia
a la velocidad en los primeros instantes de
reacción, cuando la concentración de sustrato
puede considerarse constante y se ha formado
muy poco producto.
• La velocidad se calcula como la pendiente
d[P]/dt (fig. 6, línea punteada) en los primeros
momentos de la reacción.
• En reacciones en las que intervienen
coenzimas, como el NADH.H+, la velocidad
puede determinarse por la cantidad de
coenzima transformada por unidad de tiempo.
Es necesario tener presente que, en cinética
enzimática, cuando hablamos de velocidad
se hace referencia a la velocidad inicial de la
reacción (v0).
3.3 Las reacciones catalizadas por enzimas
presentan cinética de saturación
En la figura 7 se representa la variación de
la velocidad de una reacción enzimática con
distintas concentraciones de sustrato [S]. Para
esto se establecen condiciones óptimas de
pH y temperatura, y se mantiene constante la
concentración de enzima [E], que siempre es
mucho menor que la de sustrato.
Figura 7. Velocidad de reacción (v0) con diferentes
concentraciones de sustrato [S]. Vmáx, velocidad
máxima; Vmáx/2, velocidad mitad de la Vmáx; KM,
constante de Michaelis-Menten.
 15

• Cuando la [S] es baja, la vo aumenta en forma
proporcional a la [S]. En esa parte de la
curva (fig. 7) el aumento de moléculas de S
incrementa la formación de ES y la cinética de
reacción es de orden uno (fig. 5).
• A determinada [S], todas las moléculas de E
están formando el complejo ES, por lo que la vo
se hace independiente de la [S] (fig. 7). En ese
momento, la cinética de reacción es de orden
cero y alcanza la velocidad máxima (Vmáx).
+Observe que, alcanzada la Vmáx aunque
aumente [S] no se incrementa la velocidad de
reacción, porque todas las moléculas de enzima
tienen su sitio activo ocupado con sustrato.
3.5 KM y Vmáx se pueden calcular por el
método de las inversas
Para determinar KM y Vmáx se usa una
transformación de la ecuación 4, realizada por
Lineweaver-Burk, que consiste en usar la inversa
de cada término, de manera que la ecuación
queda:
(ec. 5)
La representación gráfica con coordenadas 1/vo y
1/[S] es una recta (fig. 8). El corte de la recta en
el eje y permite calcular Vmáx y el corte con el eje
x permite calcular KM.

3.4 La relación entre la vo y [S] se puede

expresar cuantitativamente
La cinética enzimática (fig. 7) fue descrita por
Michaelis y Menten (1913) como:

(ec. 4, Michaelis-Menten)

Figura 8. Representación según Lineweaver-Burk.

• La ecuación describe cuantitativamente la
relación entre la vo, la [S] y dos constantes,
la Vmáx y la KM. La función es una hipérbola
equilátera con coordenadas vo y [S] (fig. 7).
• La Vmáx es la asíntota de la curva y, para el
esquema de reacción planteado en la ecuación
1, Vmáx= k2 [E]total. Por lo tanto, si aumenta la
[E], mayor será la Vmáx y por lo tanto la vo. La
Vmáx tiene unidades de concentración/tiempo,
por ejemplo µM/min. La KM se define como
la [S] necesaria para que la vo sea la mitad de
la Vmáx. Como se observa en la figura 7, la KM
corresponde a una [S], por lo que se expresa en
unidades de concentración.
+ Observe que en condiciones definidas de
pH y temperatura, los valores de KM y Vmáx son
los parámetros cinéticos para una determinada
enzima frente a su sustrato.
En el eje y se representa la inversa de la v0 y en el eje
x la inversa de la [S].
4. La actividad de las enzimas varía con el
pH y la temperatura
Las enzimas, como cualquier proteína,
tienen una conformación determinada por
interacciones no covalentes entre distintos
residuos aminoacídicos. Cualquier factor externo
que altere estas fuerzas estabilizadoras puede
modificar su estructura y de este modo hacer
variar la actividad enzimática, a veces de forma
irreversible. Entre estos factores se encuentran
el pH y la temperatura (fig. 9).
• El pH afecta el estado de protonación y, por
lo tanto, la carga de residuos críticos para
la actividad enzimática. Por ejemplo, si es
necesario que un residuo de cisteína (-RSH)
esté desprotonado (-RS-) para la catálisis, la
16
actividad va a tender a aumentar conforme
aumente el pH, porque habrá más cisteínas
desprotonadas.
• La temperatura afecta la actividad y la
estabilidad de la enzima. Por un lado, el
aumento de la temperatura hace que la
velocidad de la reacción catalizada aumente,
pues determina que hayan más moléculas con
la energía suficiente para reaccionar, en forma
consistente con la ecuación de Arrhenius. En
cambio, a temperaturas bajas la actividad de
la enzima está disminuida. En esto se basa
la conservación de los alimentos en frío.
No obstante, el aumento de la temperatura
también afecta la estructura de la proteína y
puede llevar a su desnaturalización irreversible.
Por lo tanto, suele observarse que los gráficos
de velocidad en función de temperatura pasan
por un máximo (fig. 9 B), que corresponde a la
temperatura óptima.
5. Las enzimas se cuantifican a través de
las reacciones que catalizan
Una unidad de actividad enzimática (U) se define
como la cantidad de enzima que cataliza la
transformación de 1 µmol de sustrato en producto,
en un minuto, bajo condiciones definidas. Por
lo tanto, las U/mL de un preparado biológico
representan la concentración de enzima. De esta
forma, si se quiere saber a qué concentración se
encuentra una enzima presente en un preparado
biológico, se puede conocer determinando la
velocidad de la reacción que cataliza.
Figura 9. Efecto del pH (A) y de la temperatura (B)
sobre la actividad de una enzima.
6. Las enzimas pueden ser inhibidas por
moléculas específicas
Algunos medicamentos, insecticidas y
herbicidas interfieren con el funcionamiento de
determinadas enzimas. Los principios activos de
esas moléculas pueden actuar como inhibidores y
producir descensos en la actividad de las enzimas
a las que se unen reversible o irreversiblemente.
• Los inhibidores que se unen de manera
irreversible, como el Hg+2 y el Pb+2, lo hacen
formando interacciones fuertes, incluso enlaces
covalentes, con residuos aminoacídicos. Un
ejemplo de inhibidor irreversible es el ácido
acetilsalicílico (Aspirina®), que inactiva
irreversiblemente la ciclooxigenasa, enzima
de la vía de síntesis de prostaglandinas. Otro
ejemplo son los compuestos organofosforados,
como el paratión y el malatión. Estos compuestos
inactivan la enzima acetilcolinesterasa e
interfieren en la conducción nerviosa. Tienen
utilidad como insecticidas.
• Los inhibidores que se unen reversiblemente
a la enzima lo hacen por interacciones
débiles. Entre ellos se encuentran los
inhibidores competitivos y acompetitivos. Un
ejemplo de inhibidor competitivo de unión
reversible es el ibuprofeno, principio activo
de varios analgésicos, que también se une a la
ciclooxigenasa, pero reversiblemente.
6.1 Inhibición competitiva
Cuando un inhibidor competitivo (IC) y un
sustrato están en presencia de una enzima,
compiten entre sí por ocupar el sitio activo.
• El IC generalmente tiene una estructura similar
a la del sustrato (fig. 10 A), por lo que puede
formar un complejo EIC que no permite formar
el complejo ES.
• El complejo EIC no libera producto de reacción
y disminuye el número de moléculas de E libre
capaz de interaccionar con el S (fig. 10 B).
Por eso la cantidad de producto formado con
la misma cantidad de sustrato es menor en
presencia de un inhibidor competitivo.
 17

Figura 10. Inhibición competitiva. A. Interacción de la E con el S y con el IC, con la formación de los complejos
ES y EIC. Observe que el S y el IC tienen similitud estructural, por lo que el IC es reconocido por el sitio activo. B.
Al aumentar las concentraciones de S o IC se puede desplazar el equilibrio hacia la formación de EIC que no rinde
P o ES, sino que rinde E y P. C. Velocidades de reacción en ausencia del inhibidor (línea continua) y en presencia
del inhibidor (línea punteada). KMap es la KM aparente, que corresponde a la KM en presencia de IC.

+ Observe que la unión del IC a la E es reversible,
por lo que, si se aumenta la [S] se puede aumentar
el número de complejos ES y se alcanzar laVmáx
(fig. 10 C).
6.2 Inhibición acompetitiva
Cuando el aumento de la concentración de
sustrato no puede revertir el efecto de un
inhibidor, la inhibición no es competitiva.
Un ejemplo de este tipo de inhibición es la
acompetitiva.
• En la inhibición acompetitiva el inhibidor
(IA) se une a un sitio distinto del sitio activo,
una vez que se ha formado el complejo ES
(fig. 11 A). Esto da lugar al complejo ESIA, que
no rinde producto (fig. 11 B).
• La unión del sustrato a la enzima produce
un cambio en el sitio de unión al IA, que
favorece su unión (fig. 11 A). Por esta razón
el inhibidor sólo se une a la enzima cuando
está formado el ES.
• Como algunos complejos ES están unidos
al IA y no rinden producto (fig. 11 B), la Vmáx
disminuye (fig. 11 C).
• La formación del complejo ES se ve
incrementada por la presencia del IA, ya que
el equilibrio se desplaza hacia la formación
de ES y ESIA, y de este modo la KMap es menor
a la KM sin inhibidor (fig. 11 C).
7. Las enzimas son regulables
En el metabolismo, el producto de una reacción
enzimática es el sustrato de la enzima siguiente
en la vía. A su vez, el conjunto de reacciones
que integran una vía metabólica está controlado
por enzimas cuya estructura-función varía por
diferentes razones. Además, la concentración
de enzima puede regularse a través de procesos
celulares como la transcripción, traducción y
degradación de proteínas.
18

Figura 11. Inhibición acompetitiva. A. Interacción ES y EIAS. Observe que el S y el IA no tienen similitud
estructural y se unen en distintos sitios de la E. Cuando se forma ES, el sitio de unión al IA se modifica de manera
que puede unirse. B. La E no se une al IA hasta que no se forma el complejo ES. Esto hace que en presencia del
IA el equilibrio se desplace hacia la formación de ES. C. Velocidad de reacción en ausencia (línea continua) y en
presencia (línea punteada) del IA. KMap y Vmáxap son las constantes KM y Vmáx aparentes en presencia de IA.

7.1 Regulación de la actividad enzimática ejemplos son el pepsinógeno, tripsinógeno y

por modificación covalente quimotripsinógeno, que se transforman en
La regulación de algunas enzimas se da a través las respectivas enzimas proteolíticas activas:
de la formación o ruptura de enlaces covalentes, pepsina, tripsina y quimotripsina.
que hacen que la enzima se active o inactive.
• Un ejemplo de este tipo de regulación es la
unión de un grupo fosfato (fosforilación) a
un -OH de un residuo de un aminoácido de la
enzima (fig. 12). Esta modificación covalente
está mediada por una quinasa que fosforila, y
puede ser revertida por una fosfatasa que quita
el grupo fosfato.
• Otro tipo de modificación covalente, pero
para la cual no hay vuelta atrás, es la
transformación de zimógenos en enzimas
activas. Esto ocurre por hidrólisis y pérdida
de parte de la cadena aminoacídica de la Figura 12. Activación/inactivación de una enzima por
enzima. Como consecuencia de esto se da un modificación covalente. E1 corresponde a la subunidad
catalítica de la enzima piruvato deshidrogenasa. La
nuevo plegamiento que permite la formación unión del fosfato a la forma activa conduce al estado
del sitio activo en la molécula. Algunos inactivo y la defosforilación de este, a la forma activa.
 19

7.2 Las enzimas alostéricas tienen cinética • La unión del modulador al sitio alostérico
diferente a la de Michaelis-Menten origina cambios conformacionales que
se trasmiten al sitio activo y producen
La mayoría de las enzimas que catalizan
modificaciones en las propiedades catalíticas
reacciones sucesivas en las vías metabólicas
de la enzima.
tienen cinética de Michaelis-Menten (fig. 7). Sin
embargo, la regulación fina de la vía se da por la • Las moléculas que al unirse al sitio alostérico
participación de enzimas alostéricas que tienen incrementan la actividad catalítica son
una cinética distinta. moduladores positivos y los que reducen o
inhiben la actividad catalítica son moduladores
• Las enzimas alostéricas, además del sitio activo,
negativos (fig. 14).
tienen un sitio al que se unen los moduladores,
llamado sitio alostérico (fig. 13).
• Las enzimas alostéricas catalizan reacciones
ubicadas en sitios claves de la vía, por ejemplo
en su inicio (fig. 13). La retroalimentación
negativa (feedback) es un mecanismo de
regulación del metabolismo a través del cual la
vía metabólica se enlentece cuando la cantidad
de producto final es alta.

Figura 13. Regulación de una vía por
retroalimentación negativa de una enzima alostérica.
E1 a E4 son las enzimas de la vía. A es el producto
de E1 y sustrato de E2, y así sucesivamente. D es el
producto final que se une a un sitio alostérico de la
primera enzima de la vía (E1). Como D es modulador
negativo de E1, la actividad de esta enzima disminuye.
Figura 14. Cinética de una enzima alostérica en
presencia de diferentes moduladores. Se representan
los cambios en la velocidad de reacción en respuesta al
agregado de un modulador positivo (punteado ancho)
o negativo (punteado fino). Observe cómo en presencia
o ausencia de moduladores varía la velocidad de
reacción para una misma concentración de sustrato.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Relacionar la estructura de la molécula enzimática con su actividad.
• Analizar los parámetros cinéticos y diferenciar los tipos de inhibición.
• Reconocer la importancia del uso de inhibidores con diferentes fines.
• Explicar el significado biológico de la regulación enzimática.
20

4. LÍPIDOS
Revisado por la Dra. Inés Ponce de León,
Departamento Biología Molecular, Instituto de Investigaciones
1. Los lípidos son moléculas apolares
Los lípidos constituyen un grupo heterogéneo
de moléculas orgánicas caracterizadas por su
solubilidad en solventes orgánicos e insolubilidad
en agua: son apolares.
• Desde el punto de vista de sus funciones
biológicas pueden tener un rol estructural
(fosfolípidos de las membranas), reservar
energía (grasas), captar luz (pigmentos
como los carotenos) y regular diferentes
procesos (hormonas esteroideas y vitaminas
liposolubles).
• La estructura química de los lípidos es muy
diversa. Están agrupados según un criterio
físico: la solubilidad.
• Otro criterio para agruparlos es si presentan
o no ácidos grasos en su molécula. Siguiendo
este criterio se establecen dos categorías, que
se desarrollan a continuación.
2. Lípidos que presentan ácidos grasos
2.1 Ácidos grasos
Son ácidos orgánicos que tienen un grupo
carboxilo (-COO-) y una cadena hidrocarbonada
de longitud variable (fig. 1).
Figura 1. Ácido graso. A. En el ácido mirístico (14C) se
indica el grupo carboxilo y la cadena hidrocarbonada. B.
Representación del ácido graso. C. Fórmula del mirístico.
21
O. Borsani, M. Sainz y J. Monza
Biológicas Clemente Estable.
• Según el número de carbonos, los ácidos
grasos pueden ser pares o impares, pero en la
naturaleza predominan los de número par (de
14 a 22C).
• Cuando la cadena hidrocarbonada no tiene
dobles enlaces, los ácidos grasos son saturados,
y cuando presentan dobles enlaces (cis o trans)
son insaturados.
• El punto de fusión de los ácidos grasos depende
de la longitud de la cadena, es decir de la cantidad
de C, y del grado de insaturación (Cuadro 1).
2.2 Los ácidos grasos insaturados pueden
autooxidarse
La autooxidación de los ácidos grasos insaturados
(fig. 2) tiene efectos dañinos a nivel celular y
también sobre los alimentos, que se enrancian
como consecuencia de este proceso.
+ Observe que moléculas antioxidantes como
el ácido ascórbico (vitamina C) y los tocoferoles
(vitamina E) reaccionan con los radicales libres y
protegen de la oxidación.
2.3 Triacilgliceroles: grasas y aceites
Los triacilglicéridos (TAG) son moléculas de
reserva que se acumulan en el tejido adiposo de
animales y en algunas semillas, y son fuente de
energía para las células: liberan 9.4 kcal/g. Los
glúcidos y proteínas liberan 4.1 kcal/g.
A lo largo de la evolución, las grasas se han
convertido en la reserva de energía por excelencia.
Las migraciones de las aves no podrían ocurrir
si no fuera por la reserva de energía acumulada
como grasas. Si acumularan sólo glucógeno
como reserva, en la medida que esta molécula se
hidrata, el peso del animal impediría el vuelo.
22

Cuadro 1. Punto de fusión de ácidos grasos. Se incluyen ácidos grasos pares con diferente cantidad de C y grado
de insaturación.
Nombre N ° de C Dobles Fórmula Punto de
común enlaces fusión (°C)
Láurico 12 - CH3(CH2)10COOH 44,2

Mirístico 14 - CH3(CH2)12COOH 53,9

Palmítico 16 - CH3(CH2)14COOH 63,1

Esteárico 18 - CH3(CH2)16COOH 69,6

Araquírico 20 - CH3(CH2)18COOH 76,5

Palmitoleico 16 1 CH3(CH2)5CH=CH(CH2)7COOH 0

Oleico 18 1 CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH 13,4

Linoleico 18 2 CH3(CH2)4CH=CHCH2CH=CH(CH2)7COOH -5

Linolénico 18 3 CH3CH2CH=CHCH2CH=CH CH2CH=CH(CH2)7COOH -11

Arquidónico 20 4 CH3–(CH2)4–CH=CH–CH2–CH=CH–CH2–CH=CH–CH2–CH=CH–(CH2)3–COOH -50

+ Observe que cuanto mayor es el número de C mayor es el punto de fusión, mientras que al aumentar
la cantidad de dobles enlaces el punto de fusión disminuye.

• Las grasas, mantecas y aceites son TAG. Estos
se forman por esterificación de los grupos
alcohol del glicerol con los grupos carboxilos
• Los ácidos grasos insaturados se pueden saturar,
de tres ácidos grasos, con liberación de agua
(fig. 3).
• Los aceites son TAG frecuentes en plantas y se
encuentran en estado líquido a temperatura
ambiente por tener en su molécula ácidos
grasos insaturados.
parcial o totalmente, por hidrogenación de los
dobles enlaces. Así se producen las margarinas,
que son aceites hidrogenados viscosos o sólidos a
temperatura ambiente.

Figura 2. Autooxidación de un ácido graso. La luz incrementa la producción del radical superóxido (O2•-) y de
H2O2, que generan radical hidroxilo (•OH). El •OH reacciona con el ácido graso insaturado y causa la pérdida
de hidrógeno. El radical ácido graso derivado reacciona con el O2 y con un H de otro ácido graso instaurado
que ingresa en el proceso de oxidación. De este modo se forman aldehídos y cetonas, que dan el sabor y olor
desagradable a los alimentos rancios.
 23

Figura 3. Formación e hidrólisis de un triglicérido. El glicerol se esterifica con tres ácidos grasos y se produce un
TAG y H2O. La hidrólisis, que libera los ácidos grasos y glicerol, ocurre por entrada de H2O en los enlaces éster. Los
adipocitos y algunas semillas tienen lipasas, enzimas que hidrolizan a los TAG y liberan ácidos grasos y glicerol.

2.4 Ceras + Observe que la impermeabilidad implica

Las ceras están formadas por un ácido graso y un
alcohol de cadena larga, hasta 36C (fig. 4), lo que
determina un punto de fusión alto: son sólidas a
temperatura ambiente.
Las ceras se encuentran en las cubiertas de muchos
organismos. Están presentes en la piel, el pelo, las
plumas, el exoesqueleto de insectos, las hojas y
frutos, y confieren impermeabilidad al agua.
tanto la entrada como la salida de agua. De esta
forma las ceras protejen de la pérdida de agua y
también de su ingreso.
2.5 Lípidos compuestos: los fosfolípidos y
esfingolípidos
Los fosfolípidos forman parte de las
membranas celulares, y al igual que otros
lípidos compuestos, derivan del ácido fosfatídico
(fig. 5). La hidrólisis de un ácido fosfatídico libera
glicerol, dos ácidos grasos y ácido fosfórico.

• Los diferentes fosfolípidos resultan de la

Figura 4. Cera de abeja. La molécula representada
está formada por un ácido graso de 16C (subrayado) y esterificación de distintos aminoalcoholes al
un alcohol de cadena larga (30C). grupo fosfato del ácido fosfatídico (figs. 5 y 6) .

Figura 5. Ácido fosfatídico. A. El glicerol está esterificado a dos ácidos grasos, en este caso al ácido palmítico
(saturado) y al ácido oleico (insaturado), y al ácido fosfórico. La X representa a un aminoalcohol esterificado al
grupo fosfato. B. Aminoalcoholes frecuentes.
24
• Los fosfolípidos son moléculas anfipáticas,
tienen una región hidrofóbica (apolar) y otra
hidrofílica (polar) debido al grupo fosfato y al
amino del aminoalcohol (figs. 5 y 6).
• En la figura 7 se representan los posibles
ordenamientos de los fosfolípidos en agua,
consecuencia de su característica anfipática:
a. Monocapa, con las regiones polares hacia el agua.
b. Micelas, con las regiones polares hacia el
agua y las apolares hacia el interior.
c. Bicapas, con las regiones apolares que
coexisten en una zona común y los extremos
polares hacia el agua.
Figura 6. Fosfolípido de membrana. A. Modelo de
una molécula de lecitina donde se indica la región polar
y las cadenas apolares. B. Fórmula de una lecitina. El
grupo fosfato y la colina (trimetiletanolamina) tienen
carga a pH celular.
+ Observe que al ser anfipáticos, los fosfolípidos
pueden formar bicapas en un medio acuoso.
Esta propiedad es clave para la estructura de las
membranas biológicas.
Otros lípidos compuestos son los esfingolípidos,
que forman parte de la estructura de las
membranas biológicas. Estas moléculas se
forman de la unión de un aminoalcohol de 18C, la
esfingosina, con un ácido graso de cadena larga.
Figura 7. Ordenamiento de fosfolípidos en agua. A.
Monocapa. B. Bicapa. C. Micela.
3. Lípidos sin ácidos grasos
El otro grupo de lípidos según el criterio establecido,
incluye a aquellos que no tienen ácidos grasos en su
molécula. Este grupo es muy grande y diverso, y
se hará referencia sólo a algunos de ellos como los
esteroides, terpenos y prostaglandinas.
3.1 Esteroides
Los esteroides tienen diferentes funciones,
algunos son hormonas (progesterona,
testosterona, cortisona y aldosterona), otros
vitaminas (A, D, E y K).
• Los esteroides derivan del ciclopentano
perhidrofenantreno, que es el núcleo
básico común a todos ellos (fig. 8). Los
distintos esteroides se diferencian entre sí
principalmente por los grupos radicales unidos
a esa unidad básica (fig. 8).
• El esteroide más abundante es el colesterol,
y también el más conocido porque puede
generar patologías cardiovasculares. Sin
embargo, también es una molécula necesaria
por ser un componente esencial de las
membranas de células animales y el precursor
de las hormonas esteroideas y de los ácidos
biliares (fig. 8).

Figura 8. Colesterol y algunos derivados. Con A, B, C y D se indican los anillos del ciclopentano
perhidrofenantreno.
3.2 Terpenos
Los terpenos derivan de una molécula de 5C, el
isopreno, que puede polimerizarse y originar
moléculas de estructura lineal o cíclica (fig. 9).
• Los terpenos forman parte de algunos aceites
esenciales de las plantas como el mentol,
alcanfor, limoneno y geraniol, que les dan
olores y sabores característicos.
Figura 9. Terpenos. A. Clorofila. El fitol forma parte
de la molécula de clorofila (se indica sobre ella). B.
Vitamina A.
25
• Entre los terpenos de estructura compleja
se encuentran los carotenoides, como el β-
caroteno precursor de la vitamina A (fig. 9)
y el fitol (fig. 9). También son terpenos las
vitaminas E y K.
3.3 Prostaglandinas
Estos lípidos son derivados de ácidos grasos.
Actualmente se conocen unas 20 prostaglandinas
distintas, presentes en la mayoría de los
tejidos animales. La sobreproducción de
prostaglandinas provoca inflamación y dolor.
Las propiedades terapéuticas de la Aspirina®
se basan en la inhibición de la síntesis de
prostaglandinas.
Al finalizar la preparación del tema será
capaz de:
• Reconocer las funciones biológicas de los
principales tipos de lípidos.
• Comprender cómo se forma y cómo se hidroliza
un TAG.
• Relacionar la fórmula de un fosfolípido con
el modelo usado para representar a esas
moléculas en las membranas.
• Explicar la disposición de fosfolípidos y
triacilglicéridos en agua.
26

5. GLÚCIDOS
Revisado por la Dra. Susana Castro Sowinski,
Sección Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Ciencias, UdelaR.
1. Los glúcidos tienen más de un grupo
alcohol y un grupo aldehído o cetona
A los glúcidos o azúcares, moléculas compuestas
por C, H y O, también se los conoce como
carbohidratos. Su fórmula general suele ser
(CH2O)n, con n entre 3 y 7. Desde el punto de
vista químico los glúcidos son polialcoholes
con un grupo aldehído o cetona (fig. 1 A), o bien
productos derivados de su oxidación, reducción,
sustitución o polimerización.
• Desde el punto devista biológico los
gúcidos están relacionados con funciones
energéticas, de reserva (almidón y glucógeno)
y estructurales de la pared celular (celulosa
en vegetales, peptidoglicano en bacterias y
quitina en algunos animales). También forman
parte de los ácidos nucleicos (desoxirribosa en
el ADN y ribosa en el ARN).
• Los glúcidos más simples son los
monosacáridos, y de la condensación covalente
entre ellos se originan los oligosacáridos (de
tres a nueve monosacáridos) y los polisacáridos
(más de 10 monosacáridos).
2. Monosacáridos
Según el grupo carbonilo los monosacáridos
pueden ser aldosas o cetosas, y según la cantidad
de carbonos triosas (3C), tetrosas (4C), pentosas
(5C), hexosas (6C), etc.
• Las aldosas y cetosas más simples tienen 3C y
se conocen con el nombre de gliceraldehído y
dihidroxicetona, respectivamente (fig. 1 A).
• Los monosacáridos tienen uno o más carbonos
asimétricos (excepto la dihidroxicetona). Un
27
S. Signorelli, E. Casaretto y J. Monza
carbono asimétrico, o carbono quiral, lleva
cuatro sustituyentes diferentes.
• Los monosacáridos poseen configuración
derecha (D) o izquierda (L). Para saber si un
glúcido es D o L se debe escribir su fórmula en
proyección de Fischer (fig. 1 B), y considerar la
configuración del penúltimo C (C asimétrico
más alejado del grupo funcional aldehído o
cetona). La posición del grupo -OH, a la derecha
o a la izquierda, determina que sean D o L
respectivamente. En la naturaleza predominan
los azúcares en configuración D.
• Los monosacáridos se diferencian, además,
por la dirección en la que desvían la luz
polarizada (formas ópticamente activas). La
desviación del plano de luz polarizada en una
dirección específica se designa con las letras d
(dextrógiro) y l (levógiro).
Figura 1. Monosacáridos. A. Triosas, los
monosacáridos más simples. Los glúcidos tienen más
de un grupo alcohol y un grupo carbonilo que puede ser
aldehído (aldosas) o cetona (cetosas). B. Proyección de
Fisher del D-gliceraldehído y L-gliceraldehído.
28

2.1 Las hexosas son monosacáridos de 6C
Las hexosas y pentosas se encuentran
predominantemente en forma cíclica (fig. 2). La
ciclación ocurre por la formación de un enlace
covalente intramolecular: el enlace hemiacetal.
Este enlace se da entre el grupo carbonilo y el
oxígeno de un grupo -OH en posición 4 ó 5, y la
molécula se cicla en forma semejante al furano y
al pirano respectivamente (figs. 2 y 3).
• Como consecuencia de la ciclación se genera el
C anomérico, que en la glucosa es el C1 (fig. 2).
• En las fórmulas escritas en proyección lineal, los
-OH se representan a la derecha o a la izquierda.
En la fórmula cíclica (Haworth) los -OH que en la
fórmula lineal están a la derecha, se representan
hacia abajo y los que están a la izquierda, hacia
arriba del plano definido por el ciclo (fig. 2).
• En las fórmulas cíclicas es común representar
el -OH como una barra, hacia arriba o hacia
abajo (fig. 2).
• Según la posición del -OH del C anomérico, los
isómeros pueden ser α (-OH hacia abajo) o β
(-OH hacia arriba).
• Otro monosacárido abundante en la naturaleza
es la fructosa. Mientras que la glucosa es una
aldohexosa (hexosa con un grupo aldehído),
la fructosa es una cetohexosa (hexosa con un
grupo cetónico) que se cicla como un anillo de
cinco vértices (fig. 3). El enlace hemiacetal se
forma entre el -OH del C5 y el carbonilo del C2.
• La fructosa es abundante en frutas y su poder
edulcorante es casi el doble comparado con
el poder del azúcar de mesa, el disacárido
sacarosa.

Figura 2. Fórmula lineal y cíclica de la D-glucosa. A. Fórmula lineal. El -OH del C asimétrico más alejado del
grupo carbonilo define la serie D o L. En la glucosa, ese C es el 5, por lo que la forma representada es la D. B. Entre
el grupo alcohol del C5 y aldehído del C1 se forma el enlace hemiacetal. C. Fórmula cíclica de la glucosa. Con
círculos se indica la posición del -OH del C anomérico, que define los anómeros α y β. Se indican los porcentajes
de las distintas formas en agua.

Figura 3. Fórmula lineal y cíclica de la D-fructosa. En la fórmula lineal el -OH del C5 está a la derecha. Entre los
grupos -C=O y -OH de los C2 y C5 se forma el enlace hemiacetal. La molécula ciclada corresponde a la α fructosa
porque el -OH del C anomérico, indicado con un círculo, está hacia abajo.

2.2 Las pentosas son monosacáridos de 5C
Las pentosas también se encuentran
predominantemente en forma cíclica (fig.4). La
ribosa y la 2-desoxirribosa son aldopentosas que
forman parte de los nucleótidos y de los ácidos
nucleicos. La diferencia entre ellas está dada en
el C2: mientras que en la ribosa hay un -OH, en
la 2-desoxirribosa hay un -H (fig. 4).
Figura 4. Fórmulas cíclicas de la β ribosa y β
2-desoxirribosa. El C2 de la ribosa tiene un grupo -OH
y el de la 2-desoxirribosa, -H.
2.3 En las células los monosacáridos se
fosforilan
Los intermediarios del metabolismo de los
glúcidos son derivados fosforilados de los
monosacáridos glucosa, fructosa, ribosa, etc. La
fosforilación consiste en la reacción del grupo
fosfato con un grupo alcohol, que da lugar a un
éster fosfórico (fig. 5).
Los monosacáridos fosforilados (fig. 5) no
pueden atravesar la membrana y salir de la
célula. Además, los ésteres fosfóricos de los
monosacáridos tienen una energía libre de Gibbs
Figura 5. Fosforilación de la glucosa. Se representa la fosforilación de la glucosa, en que la molécula adenosín
trifosfato (ATP) es el dador del grupo fosfato, para formar glucosa-6-fosfato y adenosín difosfato (ADP).
29
mayor que el monosacárido sin fosforilar, lo
que favorece su participación en las reacciones
metabólicas.
2.4 Los monosacáridos son agentes
reductores
Los monosacáridos pueden ser oxidados por
agentes oxidantes suaves como Fe+3, Cu+2 o
Ag+2. En estas reacciones el carbonilo se oxida a
ácido carboxílico. Esta propiedad es la base de
la reacción de Fehling, ampliamente usada para
determinar la presencia de glúcidos reductores.
En la reacción de Fehling el C aldehídico se oxida
a un grupo ácido. En el ejemplo que aparece
abajo la glucosa actúa como un reductor y el Cu2+
se reduce a Cu+: actúa como un oxidante.
3. Disacáridos
Los oligosacáridos más sencillos y representativos
desde el punto de vista biológico son los
disacáridos, que se forman por la condensación
de dos monosacáridos.
• La reacción de condensación ocurre entre
grupos -OH de los monosacáridos, con la
formación de agua y un enlace covalente: el
enlace O-glucosídico o acetal, de ahora en
adelante glucosídico (fig. 6).
30

Figura 6. Condensación e hidrólisis de la lactosa. La reacción ocurre entre el grupo -OH del C1 de la β galactosa
y el C4 de la β glucosa. Se forma un enlace glucosídico β 1-4, indicado con una flecha, y se libera H2O. La hidrólisis
ocurre por la ruptura de ese enlace con entrada de H2O. Se indica con un círculo el C anomérico libre.

• La hidrólisis del enlace glucosídico, es decir su de α glucosa y β fructosa a través de un enlace

ruptura por entrada de agua, libera a los dos α 1-2 (fig. 8). La caña de azúcar y la remolacha
monosacáridos. azucarera producen y acumulan grandes
cantidades de sacarosa, por lo que se cultivan
3.1 La lactosa: un glúcido presente en la
con fines comerciales.
leche

La lactosa está formada por los monosacáridos

D β galactosa y D β glucosa, unidos por un enlace
glucosídico β 1-4 (fig. 6). Cuando el -OH del C
anomérico de uno de los monosacáridos no forma
parte del enlace glucosídico, como ocurre en la lactosa,
puede participar de reacciones de oxidorreducción.
Por este motivo, el disacárido es reductor.

3.2 La maltosa: un glúcido abundante en

algunas semillas durante la germinación

La maltosa es un disacárido formado por dos α
glucosas unidas por enlace α 1-4 (fig. 7). Las células
no sintetizan maltosa, esta se obtiene por hidrólisis
de los polisacáridos almidón y glucógeno.
Figura 8. Sacarosa. El enlace glucosídico α 1-2
se establece entre el C1 de la glucosa y el C2 de la
fructosa. Como el enlace se establece entre los dos C
anoméricos, el disacárido no es reductor.
4. Polisacáridos

La mayoría de los glúcidos naturales son

Figura 7. Maltosa. La maltosa está formada por dos
α glucosas unidas por un enlace glucosídico α 1-4. Es
un disacárido reductor porque tiene un C anomérico
libre, el C1 del residuo de glucosa.
3.3 Sacarosa: azúcar de mesa
La sacarosa es un disacárido producido por
los vegetales, formado por la condensación
polisacáridos, macromoléculas con una masa
molecular del orden de millones de dalton (Da).
Todos los polisacáridos tienen un C anomérico
libre en un extremo de la cadena, conocido
como extremo reductor. Pero no se los considera
agentes reductores porque poseen sólo un
extremo reductor cada centenares o miles de
monosacáridos condensados.
• Los polisacáridos difieren en la cantidad de
unidades de monosacáridos, en la naturaleza
química de esas unidades, que pueden ser

iguales o diferentes, y en la cantidad de enlaces
entre ellas.
• La posibilidad de que haya más de un
enlace glucosídico por unidad permite que
se produzcan ramificaciones, como en el
glucógeno o en la fracción amilopectina del
almidón (figs. 9 y 10).
• Las células no acumulan monosacáridos porque
tienen actividad osmótica y producirían una
entrada de agua al citoplasma que generaría
plasmólisis. Los polisacáridos tienen baja
actividad osmótica, por eso son adecuados
como moléculas de reserva en un contexto
celular.
4.1 Polisacáridos de almacenamiento o
reserva
Cuando el nivel energético de la célula es alto
(altos niveles de ATP), los glúcidos se almacenan
en forma de polisacáridos de reserva. En caso
contrario, cuando el ATP celular disminuye (bajo
nivel energético), los polisacáridos se degradan,
y a partir del catabolismo de los monosacáridos
liberados se obtiene ATP.
Entre los autótrofos y heterótrofos hay una
clara diferencia en los polisacáridos de reserva,
mientras las bacterias heterótrofas, hongos y
animales almacenan glucógeno, los vegetales y
las bacterias fotosintéticas acumulan almidón.
Figura 9. Glucógeno. A. Se identifica con un * un residuo glucosa con un enlace glucosídico α 1-4 y una
ramificación formada por un enlace glucosídico α 1-6. B. Esquema de la molécula de glucógeno, con ramificaciones
cada menos de 10 residuos de glucosa. En general, posee unos 120.000 residuos de glucosa.
31
4.1.1 Glucógeno
El glucógeno está formado por glucosas unidas
por enlace α 1-4 y ramificaciones formadas
por enlaces α 1-6, cada aproximadamente 10
residuos de glucosa (fig. 9). La importancia de
las ramificaciones de la molécula de glucógeno
radica en que aumenta su solubilidad y permite
un gran número de residuos de glucosa, que
van a ser los lugares de unión de las enzimas de
síntesis y de degradación del glucógeno.
En los mamíferos, el glucógeno se acumula en
las células del hígado y también en células del
músculo estriado. En ambos órganos la molécula
es la misma, pero la función es diferente. El
glucógeno hepático (10 % de la masa hepática)
sirve para mantener el nivel de glucosa en
sangre y contribuye con el aporte de glucosa a
los diferentes tejidos. El glucógeno muscular
es utilizado sólo en ese órgano, para fines
energéticos propios del músculo.
4.1.2 Almidón
El almidón está formado por amilosa y
amilopectina y constituye un 65 % de la materia
seca de los granos de cereales y es abundante
en tubérculos como la papa. Los almidones
contienen de 20 a 30 % de amilosa y de 70 a 80
% de amilopectina (fig. 10). Su almacenamiento
es en los cloroplastos (reserva a corto plazo) o en
los amiloplastos (reserva a largo plazo).
32

Figura 10. Almidón. A. Amilosa, fórmula y esquema de la disposición espacial. El yodo presente en el reactivo
Lugol, usado para identificar almidón, se ubica en el interior de la hélice que forma la amilosa y da el color
azul característico. B. Amilopectina, se indican los enlaces α 1-4 y α 1-6, estos últimos son los que generan las
ramificaciones.

• La amilosa es una cadena de 1000-4000
residuos de α glucosa, unidos por un enlace
α 1-4, que se ordena en el espacio de manera
helicoidal.
• La amilopectina consta de α glucosas unidas
por enlaces α 1-4 y α 1-6, lo que la hace
similar al glucógeno, pero difiere de este en la
frecuencia de las ramificaciones (una cada 25-
30 unidades) y en la longitud de estas (fig. 10).
forma parte de las paredes celulares de los
vegetales y contribuye a darles estructura
y sostén. La resistencia y flexibilidad de
la pared celular está determinada por la
cantidad de celulosa y de otros polisacáridos
como las hemicelulosas y pectinas, además
de polímeros no glucídicos como la lignina y
de proteínas como la extensina.

4.2 Polisacáridos estructurales: moléculas

para protección y sostén
4.2.1 Celulosa
Es el compuesto carbonado más abundante
en la naturaleza y está formado por la unión
de β glucosas, unidas por enlaces glucosídicos Figura 11. Celulosa. Las unidades son β glucosas
β 1-4 entre los C1 y los C4 (fig. 11). La celulosa unidas por enlaces β 1-4.
 33

Los animales no poseemos celulasa, la

enzima que hidroliza a los enlaces β 1-4 de
la celulosa. Sin embargo en los rumiantes
hay degradación de la celulosa, pero
por acción de la celulasa presente en los
microorganismos del rumen. También las
termitas utilizan la celulosa como fuente
de energía, porque en su tracto digestivo
se aloja un microorganismo simbiótico que
produce y secreta celulasa.

4.2.2 Quitina

La quitina es un polisacárido nitrogenado no

ramificado formada por residuos de N-acetil
glucosamina, unidos por enlace β 1-4 (fig. 12).
El grupo acetamida incrementa el número
de  puentes hidrógeno entre las  moléculas de
polímeros adyacentes, lo que le da al material una
Figura 12. Quitina. Las unidades son N-acetil
mayor resistencia. La quitina es un polisacárido
glucosaminas unidas por enlaces β 1-4. La quitina
estructural que forma parte de la pared celular depositada en la pared celular de los artrópodos forma
de hongos y del exoesqueleto de artrópodos. su exoesqueleto, como en este coleóptero.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Reconocer las características químicas de los glúcidos.

• Formular un disacárido y su hidrólisis.

• Describir las características y funciones biológicas de los polisacáridos.

34

6. ÁCIDOS NUCLEICOS
Instituto de Biología. Facultad de Ciencias. UdelaR.
1. Los ácidos nucleicos están formados
por nucleótidos
Desde el punto de vista funcional el ácido
ribonucleico (ARN) y el ácido desoxirribonucleico
(ADN), llamados colectivamente ácidos
nucleicos, son moléculas relacionadas con el
almacenamiento de información y la expresión
de los genes.
• Los ácidos nucleicos son polinucleótidos,
formados por la condensación de unidades
llamadas nucleótidos (fig. 1).
• Un nucleótido está formado por una pentosa
(ribosa o desoxirribosa), un grupo fosfato y
una base nitrogenada que puede ser la adenina
(A), timina (T), guanina (G), citosina (C) o
uracilo (U).
• La base nitrogenada está unida al C1´ de la
pentosa por un enlace N-glucosídico, y el grupo
fosfato (-PO4-2) al C5’ por un enlace éster (fig. 1).
La hidrólisis de los enlaces del nucleótido libera
una pentosa, un fosfato y una base.
Figura 1. Nucleótido monofosfato (CMP). La base (C)
y el grupo fosfato (-PO4-2) están unidas a la pentosa
(ribosa), a los C5’y C1´ respectivamente.
35
S. Signorelli y J. Monza
Revisado por la Dra. Estela Castillo,
Sección Bioquímica-Biología Molecular.
• Al grupo fosfato esterificado al C5’ se puede
unir un segundo grupo fosfato, y a este un
tercero, mediante enlaces fosfoanhidro (fig.
2). Este tipo de enlace requiere mucha energía
que para su formación, parte de la cual libera
cuando se hidroliza .-Si la base es la adenina,
el nucleótido puede ser el AMP, ADP o ATP,
según la cantidad de grupos fosfato (fig. 2). Si
la base es la guanina será el GMP, GDP o GTP,
etc.
• Según la pentosa los nucleótidos pueden ser
ribonucleótidos (ribosa) o desoxirribonucleótidos
(desoxirribosa), que forman al ARN y ADN
respectivamente .
Figura 2. ATP, un nucleótido trifosfato. Para formar
cada enlace fosfoanhidro se necesitan unas 7.5 kcal,
que se liberan cuando se hidroliza.
• La diferencia entre la ribosa y la desoxirribosa
es que la ribosa tiene un -OH en el C2’, mientras
que en la 2-desoxirribosa en su lugar hay -H
(fig. 3).
• Las bases son moléculas cíclicas derivadas de
los anillos purina y pirimidina (fig. 4). En el
ADN hay dos bases púricas (A y G) y dos bases
pirimidínicas (C y T).
36
Figura 3. Ribosa y 2-desoxirribosa. Los números con
superíndice indican el número de C. El C2´ de la ribosa
tiene un grupo -OH que no está en la desoxiribosa.
Según la posición del -OH del C anomérico, el C1 en
este caso, será el isómero α o β.
• El ARN tiene las mismas bases púricas que el
ADN, y también la misma base pirimidínica C,
pero tiene U en vez de T.
2. Los nucleótidos unidos entre sí forman
polinucleótidos
El ADN y el ARN son polinucleótidos formados
por la condensación de desoxirribonucleótidos y
ribonucleótidos respectivamente.
• Los polinucleótidos se forman por la
condensación de nucleótidos a través de
enlaces fosfodiéster entre el -OH del grupo
fosfato del C5’ de una pentosa y el -OH del C3’
de otra pentosa (fig. 5).
Figura 4. Bases nitrogenadas. Bases derivadas de la pirimidina: C, U y T. Bases derivadas de la purina: A y G.
• Una cadena polinucleotídica siempre tiene un
grupo fosfato libre en el extremo 5’ y un grupo
-OH libre en el extremo 3’ (fig. 5).
• Los grupos fosfato a pH celular se desprotonan
y quedan con carga negativa, por esta razón
los ácidos nucleicos exhiben carga negativa en
torno al esqueleto pentosa-fosfato (fig. 5): son
polianiones.
• La secuencia de nucleótidos de un ácido
nucleico se representa con la letra que se
designa a la base nitrogenada (A, T, C, G y U) y
por convención se lee en sentido 5’-3’.
3. El ADN está formado por dos cadenas
de desoxirribonucleótidos
En 1953 Watson y Crick determinaron la
estructura tridimensional del ADN. La molécula
está formada por dos cadenas de polinucleótidos
enrolladas alrededor del mismo eje, dando lugar
a un ordenamiento espacial llamado doble hélice
(fig. 5). Las principales características de la
molécula de ADN son:
• Las dos hebras son antiparalelas, debido a
que las pentosas de una hebra se orientan en
dirección contraria respecto a la otra (fig. 5).
Esto hace que la dirección de las hebras sea
opuesta, es decir, el extremo 5’ de una hebra
coincide con el extremo 3’ de la otra.
 37

• El esqueleto pentosa-fosfato está hacia el 3.1 Estabilización de la doble hebra

exterior de la molécula, mientras que las bases
están hacia el interior, formando un ángulo
recto con el eje de la hélice. Esta disposición
permite que las bases de ambas hebras queden
enfrentadas.
• Las bases se aparean de manera específica: A
con T a través de dos puentes hidrógeno (A=T)
y C con G a través de tres puentes hidrógeno
(C≡G).
• La secuencia de las bases del polinucleótido
corresponde a la estructura primaria del ADN.
Cuando se hace referencia a que un organismo
tiene secuenciado el genoma, lo que quiere
decir es que se sabe la secuencia de bases de su
ADN: conocer la secuencia implica conocer la
información genética.
Las dos hebras del ADN se mantienen
estabilizadas por puentes de hidrógeno entre las
bases, las interacciones hidrofóbicas entre ellas y
las cargas de los grupos fosfato.
• Los puentes de hidrógeno entre las bases
complementarias son interacciones débiles,
pero están en gran cantidad y estabilizan la
estructura secundaria (fig. 5).
• Las bases son moléculas aromáticas planas, de
naturaleza hidrofóbica. Esta característica las
mantiene orientadas hacia la región interna de
la doble hebra, donde establecen interacciones
hidrofóbicas entre sí (fig. 5).
• Los grupos fosfato, cargados negativamente, son
hidrofílicos y se encuentran en el exterior de la
molécula (fig. 5), de manera que interaccionan
con el agua, una molécula polar sin carga .

A B

Figura 5. Representación espacial y estructura química del ADN. A. Modelo de la molécula de ADN propuesto
por Watson y Crick (1953). Las cintas representan el esqueleto pentosa-fosfato y las barras orientadas hacia el
eje las bases nitrogenadas. B. Molécula de ADN. Cada hebra tiene dos extremos, uno 5’ y otro 3’. Los enlaces
fosfodiéster se dan entre un grupo fosfato del C5’ y un -OH de un C3’. Las bases complementarias se aparean
entre sí por puentes de hidrógeno, dos entre A=T y tres entre C≡G.
38
3.2 El ADN puede perder la estructura
secundaria al aumentar la temperatura
Cuando el ADN se somete a calentamiento se
logra una agitación térmica suficiente para
separar puentes de hidrógeno entre los pares de
bases: el ADN se desnaturaliza.
• La temperatura en la cual el 50 % de las
bases están desapareadas corresponde a la
temperatura media de fusión, constante para
un mismo ADN.
• La desnaturalización consiste en la ruptura de
puentes de hidrógeno entre bases apareadas y
en la pérdida de las interacciones hidrofóbicas:
las hebras se separan, pero los enlaces
covalentes se mantienen intactos. Lo mismo
ocurre con pH extremos.
• Si la temperatura o el pH vuelven a valores
fisiológicos, las bases complementarias
de regiones desapareadas pueden volver a
aparearse y se restablece la estructura de
doble hebra: el ADN se renaturaliza parcial o
totalmente.
Figura 6. Curva de fusión de diferentes ADN. Las
curvas de fusión representadas corresponden a ADN
de distintos orígenes, con diferentes porcentajes GC. La
transición de ADN doble hebra a monohebra se detecta
por el incremento de absorción de luz UV, debido a que
las bases absorben más luz cuando están desapareadas.
• El ADN de distintos organismos tiene
diferente temperatura de desnaturalización,
que depende del porcentaje de bases AT y CG.
Cuanto mayor es el porcentaje de GC, mayor es
la temperatura media de fusión (fig. 6). Esto se
debe a que entre esas bases se establecen tres
puentes de hidrógeno, por lo que se requiere
más energía para separarlas que si fueran AT,
entre las que hay dos puentes de hidrógeno.
4. En los cromosomas de eucariotas el
ADN está asociado a proteínas
Tanto en células procariotas como eucariotas el
ADN se compacta, lo que permite una adecuación
a las dimensiones celulares. Los grupos fosfato
cargados negativamente son un impedimento
para que el ADN se enrolle sobre sí mismo. En
las células eucariotas esto es posible en parte por
la participación de las histonas que son proteínas
básicas, ricas en aminoácidos básicos con -R
positivo, que permiten el enrollamiento del ADN.
• Las histonas son proteínas pequeñas, con alta
proporción de aminoácidos básicos como la
lisina y arginina, cuyo -R positivo interacciona
con el ADN.
• La doble hélice se enrolla a intervalos regulares
de unos 200 pares de bases (pb) alrededor de
un octámero de histonas, dando lugar a los
nucleosomas (fig. 7).
• La doble hebra de ADN, fibra de 2 nanómetros
(nm), se enrolla a las histonas y genera el
nucleosoma, fibra de 11 nm. El cromosoma
interfásico tiene 700 nm.
Figura 7. Nucleosoma. Un nuclesoma está formado
por moléculas de histonas (H2A, H2B, H3 y H4) sobre
las que se enrolla el ADN. La histona H1 se asocia al
ADN internucleosómico y favorece la aproximación de
nucleosomas adyacentes.
 39

5. El ARN está formado por ribonucleótidos ribosomas está en el tamaño de las subunidades,
debido a la cantidad de proteínas y ARNr que las
El ARN mensajero (ARNm), el ribosómico integran (fig. 8).
(ARNr), el de transferencia (ARNt) y el nuclear de
pequeño tamaño (ARNsn) son polinucleótidos.
Al igual que en el ADN, los mononucleótidos se
unen a través de enlaces fosfodiéster, pero entre
el grupo -PO4-2 del C 5’de una ribosa y el -OH del
C 3’ de otra.

• Los ARN constan de una hebra única, que

puede tener regiones que adoptan forma de
hélice debido al apareamiento entre bases
complementarias de la misma hebra (fig.9-10).
• Si bien en algunos virus el ARN constituye el
material genético, en procariotas y eucariotas
las funciones del ARN están relacionadas
principalmente con la síntesis de proteínas.
En el cuadro 1 se resumen las funciones de
algunos ARN.
Cuadro 1. Funciones de algunos ARN.
Tipos de ARN Función
ARNm Lleva la información del ADN al ribo- muy complejas, con regiones en hélice
soma.
ARNr Participa en la síntesis de proteínas
formando parte de los ribosomas.
ARNt Permite el posicionamiento de cada
aminoácido frente al codón
correspondiente.
ARNsn Participa en la maduración del ARNm.
Figura 8. Ribosomas procariotas y eucariotas.
El tamaño se expresa en Svedberg (S) unidad de
sedimentación usada en ultracentrifugación. En la
subunidad mayor de ribosomas procariotas hay dos
moléculas de ARNr y en la de eucariotas tres. En la
subunidad menor de los dos tipos de ribosomas
hay un ARNr, pero distinta cantidad de proteínas.
Los tamaños de los ARNr, expresados como S, son
diferentes en ambos tipos de células.
• Si bien es común representar a los ribosomas
con las subunidades juntas, sólo lo están en el
momento de la traducción.
• Los ARNr presentan estructuras espaciales
estabilizadas por puentes de hidrógeno entre
las bases complementarias de la misma hebra
(fig. 9).

5.1 ARN mensajero

El ARNm, como todos los ARN, resulta de la

transcripción de un gen, es decir, de una región
determinada del ADN. Su función es transportar
la información, bajo la forma de secuencia de
bases, desde el cromosoma hasta los ribosomas,
donde ocurre la traducción de la síntesis proteica.

5.2 ARN ribosómico

Los ribosomas de procariotas y eucariotas están

formados por el ensamblaje de moléculas de Figura 9. Estructura del ARNr 16S. La flecha continua
señala una región del ARNr con bases apareadas y la
proteínas y ARNr, que conforman una subunidad discontinua, una región con bases no apareadas. Los *
mayor y otra menor. Las diferencias entre estos indican los extremos 5’ y 3’.
40
Figura 10. Representación del ARNt. A. Modelo de la estructura primaria, en forma de hoja de trébol. B.
Modelo de la estructura secundaria. El anticodón, formado por tres bases de secuencia, es variable según el
ARNt y reconoce las bases complementarias en el ARNm. Al extremo 3’ libre se une el aminocácido y se forma
el aminoacil-ARNt.
5.3 ARN de transferencia
Los ARNt son moléculas pequeñas formadas
por unos 80 nucleótidos que se pliegan en una
estructura tridimensional compleja (fig. 10). Una
representación sencilla de esta molécula es la
forma de hoja de trébol (fig. 10 A), sin embargo su
estructura secundaria es más compleja (fig. 10 B).
Las principales características de la molécula de
ARNt son:
• La presencia de 4 segmentos o brazos en los
que hay regiones con apareamientos entre
bases complementarias, 3 ó 4 bucles con bases
no apareadas y un extremo abierto (fig. 10).
• Un bucle donde se encuentra el anticodón,
que corresponde al triplete de bases
complementarias al codón del ARNm.
• El extremo 3’ (CCA), donde se une el
aminoácido, específico para cada ARNt.
• El extremo 5’ con una G.
• La presencia de bases poco frecuentes, como
la pseudouridina, dihidrouridina e inosina,
que se generan por modificaciones de las bases
comunes, después de la síntesis del ARNt
5.4 ARNsn: pequeñas moléculas de ARN
nuclear
El ARNsn (small nuclear) tiene pocos nucleótidos
y está asociado a proteínas formando complejos.
Se localiza en el núcleo celular y participa
principalmente en el proceso de maduración del
ARNm, en el corte de intrones y ensamble de
exones.
6. Enzimas de restricción
Las enzimas de restricción o restrictasas son
endonucleasas que reconocen secuencias
específicas en el ADN, de 4, 6 o más bases,
denominadas sitios de restricción o dianas. La
hidrólisis de los enlaces pentosa-fosfato por las
restrictasas, genera fragmentos de restricción
(fig. 11).
• Las restrictasas son enzimas de origen
bacteriano, que se denominan según el género

y especie de la bacteria de donde se las aisló.
Por ejemplo, EcoRI se obtuvo de E. coli, cepa
R, y I por ser la primera que se aisló de esa
cepa.
• Hay tres tipos de enzimas de restricción que
cortan el esqueleto pentosa-fosfato, y según
donde lo cortan generan extremos romos o
extremos cohesivos (fig. 11).
• Las endonucleasas de tipo II, las más usadas,
cortan de manera predecible dentro de la
secuencia que reconocen, a diferencia de las de
tipo I y III.
Las restrictasas son producidas por bacterias,
donde tienen función defensiva frente a virus,
porque son capaces de hidrolizar el ADN viral.
Estas enzimas pueden degradar cualquier ADN,
inclusive el de la bacteria que la produce, por
eso las bacterias metilan bases de su ADN para
impedir el reconocimiento de la diana en el
genoma.
Figura 11. Dianas y tipos de extremos generados
por dos endonucleasas. A. Diana de la endonucleasa
HaeIII, que genera extremos romos. B. Diana de la
endonucleasa EcoRI, que genera extremos cohesivos.
7. Los fragmentos de ADN se pueden
separar por electroforesis
Cuando se aplica un campo eléctrico, las
moléculas con carga neta se desplazan hacia
el polo contrario a su carga. En este principio
se basa la electroforesis. Para esta técnica se
requiere una fuente de poder que genera el
campo eléctrico, una cuba con un electrodo
41
Figura 12. Equipo de electroforesis. A. Fuente de
poder que genera el campo eléctrico. B. Cuba, con
el gel donde va la muestra y el buffer con un pH
definido.
en cada extremo rellena con un buffer y de un
soporte donde va la muestra (fig. 12).
• Para separar o visualizar ácidos nucleicos es
común el uso de geles de agarosa y de diferentes
buffer de pH alcalino (8,2). Cuando se genera
el campo eléctrico, las moléculas de ADN y
ARN se desplazan al polo positivo, porque con
buffer a pH superior a 5 estas moléculas tienen
carga neta negativa.
• Los poros del gel permiten separar moléculas
según su tamaño y forma. Una mezcla de
fragmentos de ADN de diferentes tamaños,
por ejemplo generados por enzimas
de restricción, se pueden separar por
electroforesis, de manera que los fragmentos
de menor tamaño migran más lejos del
origen (fig. 13).
• El patrón de bandas que genera un
ADN cortado por una o más enzimas
de restricción se conoce como perfil de
restricción (fig. 13).
• En la figura 13 se muestran fragmentos de
restricción separados en un gel de agarosa,
generados con distintas restrictasas.
+ Observe cómo el mismo ADN, cortado con
diferentes restrictasas, produce diferentes
perfiles.
42
Figura 13. Perfiles de restricción. Arriba se indican
las restrictasas utilizadas en cada caso y el marcador de
peso molecular (fragmentos de ADN de peso molecular
conocido). Los fragmentos de ADN se tiñeron con
bromuro de etidio. Los fragmentos de mayor tamaño
migran menos que los de menor tamaño, que quedan
más próximos al polo positivo.
8. Tecnología del ADN recombinante
El desarrollo de la ingeniería genética, basada
en la tecnología del ADN recombinante, ha
permitido por un lado, comprender otro nivel
del funcionamiento de los seres vivos, y por otro
modificar en forma controlada su información
genética.
Si bien son muchos los ejemplos de aplicaciones
biotecnológicas derivadas de la tecnología del
ADN recombinante, nos vamos a centrar en
un procedimiento usado para generar plantas
transgénicas. La biotecnología vegetal permite
la generación de plantas transgénicas para la
investigación y también para el desarrollo de
nuevas variedades con alguna característica que
mejore su valor frente a la especie ya existente.
Por ejemplo, plantas tolerantes a condiciones
adversas, resistentes a determinados herbicidas,
o al ataque de patógenos.
El uso de la tecnología del ADN recombinante
permitió el desarrollo de líneas de maíz
transgénico con capacidad de producir moléculas
con acción insecticida. Este maíz, denominado
Bt, se logró por introducción en el genoma de
la planta un gen bacteriano que codifica para la
proteína Cry. La fuente natural de esta proteína
es Bacillus thuringiensis (de donde deriva la
denominación Bt), que ha sido empleada desde
los años 30 para asperjar el cultivo de maíz y
controlar insectos como los taladros.
Una estrategia para obtener plantas transgénicas,
si bien no es la usada para obtener el maíz
Bt, se resume en la figura 14 y se describe a
continuación.
• Para clonar el gen de interés (cry) se digiere al
plásmido vector y al ADN donde se encuentra
ese gen con la misma restrictasa, para generar
extremos cohesivos complementarios (fig. 11).
• La unión del ADN donde se encuentra el gen
de interés al esqueleto pentosa-fosfato del
plásmido vector, se logra con una enzima de
modificación del ADN, la ADN ligasa. Esta
enzima sella tanto extremos cohesivos como
romos y requiere de la presencia de ATP, un
grupo fosfato en el extremo 5’y de un -OH
en un extremo 3’. Así se obtiene el plásmido
recombinante con el gen de interés (fig. 14).
• Para introducir el gen en células vegetales hay
diferentes estrategias. Una de ellas es introducir
el plásmido recombinante en Agrobacterium
tumefaciens, una bacteria que infecta plantas
(fig. 14). Esta bacteria cuenta naturalmente
con un sistema para infectar plantas y por esa
razón se la usa para incorporar genes foráneos
en células vegetales.
• Una vez transformadas las células de la planta
con el gen de interés, como el plásmido también
lleva algún gen de resistencia a antibiótico, las
líneas transformadas se seleccionan haciéndolas
crecer en medio con el antibiótico de selección.
Allí crecen sólo las células transformadas, a
partir de las cuales se regeneran plantas que
llevan el gen cry (fig. 14).
 43

Figura 14. Secuencia de pasos para construir maíz Bt. 1. El ADN de Bacilus thuringiensis (donde se encuentra el gen
de interés cry) y el plásmido donde se clonará ese gen, se cortan con una enzima de restricción o se amplifica por PCR
(no mostrado). 2. El fragmento de ADN que contiene el gen de interés se separa de los otros fragmentos por electrofore-
sis y se extrae del gel (no mostrado). 3. La enzima ligasa permite unir el gen de interés al plásmido vector. 4. El plásmido
recombinante (plásmido vector con el gen clonado) se transfiere a Agrobacterium, que naturalmente puede infectar
plantas. 5. Para introducir el gen en células vegetales se co-cultiva al Agrobacterium con segmentos de epicótilo. 6. Los
epicótilos se transfieren a un medio de selección con un antibiótico, donde crecen los tejidos transformados, a partir de
los cuales se regeneran plantas con el gen de interés. 7. Cultivo en condición de campo.
44

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Identificar el patrón común en la estructura y función de los ácidos nucleicos.
• Describir la estructura de la molécula de ADN.
• Explicar el mecanismo de acción d e las restrictasas y sus aplicaciones biotecnológicas.
• Reconocer los principios fisicoquímicos y el uso práctico de la electroforesis.
• Establecer una secuencia de procedimientos que permitan la obtención de un organismo
genéticamente modificado (transgénico vegetal).
 45

7. MEMBRANAS BIOLÓGICAS
M. Sotelo y O. Borsani
Revisado por Dr. Flavio Zolesi, Departamento
Biología Celular y Molecular, Facultad de Ciencias. UdelaR.

1. La membrana celular es un elemento 1.1 Fosfolípidos y proteínas son las

común a todas las células
Todos los tipos celulares presentan una
membrana que separa el medio intra del
extracelular: la membrana plasmática. Esta
membrana semipermeable regula la composición
del interior de la célula mediante el control del
movimiento de las sustancias que entran y salen,
es decir, que pasan a través de ella.
moléculas más abundantes de las
membranas
Las membranas biológicas tienen una estructura
común que consiste en una bicapa de fosfolípidos
y proteínas (fig. 1).
• La membrana es fluida, ya que los lípidos y
las proteínas se mueven en el mismo plano e
interaccionan entre sí.

En las células eucariotas la membrana delimita • Los glúcidos están unidos covalentemente
los organelos y se distribuye formando el sistema a lípidos y a proteínas, y se encuentran en el
retículo endoplásmico, que aumenta la superficie exterior de la membrana plasmática de las
de intercambio con el medio extracelular. células animales (fig 1).

Figura 1. Modelo de la membrana plasmática. Las membranas están formadas por una bicapa de fosfolípidos
con proteínas embebidas en ellos. La fracción glucídica de las glucoproteínas se encuentran del lado extracelular
y el colesterol interacciona con las zonas apolares de los fosfolípidos.
46
1.2 En las membranas también hay
glucolípidos y colesterol
Los fosfolípidos, glucolípidos y el colesterol son
los lípidos más abundantes en las membranas.
• Los lípidos de las membranas son anfipáticos,
es decir, tienen una región hidrofóbica
(apolar) y una región hidrofílica (polar).
Estas moléculas en medio acuoso pueden
formar espontáneamente bicapas con las colas
hidrofóbicas hacia el interior de la bicapa y las
cabezas hidrofílicas hacia afuera, en contacto
con el medio acuoso (fig. 1).
• El fosfolípido más abundante en la membrana
son las lecitinas, compuesta por glicerol, dos
ácidos grasos, fosfato y colina.
• Otra molécula particularmente abundante en la
membrana de células animales es el colesterol.
• La fluidez de la membrana depende de la
temperatura, de la insaturación de los ácidos
grasos de los fosfolípidos y del contenido de
colesterol.
1.3 Las proteínas definen la funcionalidad
de las membranas biológicas
La funcionalidad de las membranas biológicas
está determinada por las proteínas que poseen,
cuanto más activas metabólicamente son las
membranas, más proteínas contienen.
Figura 2. Proteína transmembrana. Los residuos
aminoacídicos hidrofóbicos, representados como
círculos rellenos, se encuentran al interior de la bicapa
de fosfolípidos, y los hidrofílicos, representados como
círculos vacíos, hacia el medio acuoso.
• Las proteínas transmembrana tienen una
región embebida en la zona apolar de la bicapa
de fosfolípidos (figs. 1 y 2). En contraste con
esa región, rica en residuos hidrofóbicos,
los dominios citosólicos y extracelulares son
hidrofílicos e interaccionan con el medio
acuoso (fig. 2).
• Las proteínas periféricas interaccionan con
otras proteínas de membrana o con las cabezas
polares de los fosfolípidos. Estas proteínas se
localizan en el citosol o en el medio extracelular
(fig. 1).
2. Mecanismos de transporte a través de
la membrana plasmática
La membrana funciona como una barrera de
permeabilidad selectiva entre el citosol y el medio
extracelular. A través de ella, las moléculas se
mueven continuamente hacia adentro y hacia
afuera de la célula. En ese intercambio las células
incorporan y liberan sustancias, entre las que
se encuentran nutrientes y también moléculas
que pueden ser tóxicas para la célula, como los
venenos.
Los mecanismos que permiten el movimiento
de iones y moléculas pequeñas a través de la
membrana pueden ser clasificados, según quién
aporte la energía, en transporte pasivo cuando
esta proviene de trabajo químico, eléctrico o
electroquímico, y transporte activo cuando la
energía la provee la célula.
2.1 Transporte pasivo
El transporte pasivo permite el pasaje de
moléculas a través de la membrana, sin que
la célula aporte energía. Hay tres tipos de
transporte pasivo: ósmosis, difusión simple y
difusión facilitada.
2.1.1 Ósmosis
Una membrana semipermeable permite el
pasaje de moléculas de agua (solvente), que
difunden a través de ella, pero no permite el
pasaje de solutos. El agua pasa desde la zona
 47

de menor concentración de soluto hacia la de

mayor concentración para alcanzar un equilibrio
a ambos lados de la membrana (fig. 3).

Figura 3. Ósmosis. Cuando una membrana semi-

permeable separa dos soluciones con diferente
concentración e igual volumen, el agua difunde hacia
el compartimento de mayor concentración de soluto
para alcanzar el equilibrio. En el compartimento
donde la concentración de soluto es mayor, el volumen
de la solución aumenta.
Figura 4. Proteína canal. El canal es hidrofílico,
lo que permite el pasaje de iones. Algunos
transportadores están permanentemente abiertos,
como el representado, otros se abren frente a
determinada señal. Las moléculas se mueven a través
de la membrana a favor del gradiente.

2.1.2 Difusión simple Las proteínas carriers se unen a moléculas

Las moléculas hidrofóbicas pequeñas pueden específicas o iones y los transfieren a través de
atravesar fácilmente la bicapa de fosfolípidos la membrana. Por ejemplo, el transportador
disolviéndose en el interior hidrofóbico de la de glucosa sólo transporta glucosa y no otros
membrana. Cuanto más pequeña e hidrofóbica azúcares. La unión de la molécula transportada
es la molécula, más fácilmente pasará a través de provoca un cambio conformacional en el
ella. Las moléculas no polares, como el O2, CO2 transportador (fig. 5).
y N2, y moléculas polares sin carga como la urea
y el etanol, se mueven rápidamente a través de
la membrana. En cualquiera de estos casos, la
energía proviene del gradiente de concentración
o del gradiente eléctrico, pero no del metabolismo
celular.

2.1.3 Difusión facilitada

Algunas moléculas debido a su tamaño, carga, o
forma, para atravesar la membrana requieren de
proteínas integrales especializadas denominadas
transportadores, a través de los cuales las
moléculas difunden, sin consumo de energía
celular. Esos transportadores pueden ser las
proteínas canal o las proteínas carriers.

• Las proteínas canal forman poros, cubiertos
de agua en la superficie interna del canal,
que permite el pasaje de iones y moléculas
hidrofílicas pequeñas (fig. 4).
Figura 5. Transporte mediado por una proteína
carrier. Este tipo de proteína se une a la molécula
a ser transportada para transferirla a través de la
membrana. Las moléculas se mueven a través de la
membrana a favor del gradiente.
48

• La velocidad de la difusión facilitada depende contracción muscular y transmisión de impulsos

inicialmente de la concentración de la molécula nerviosos. Esas células destinan un tercio de su
a ser transportada. La velocidad máxima se energía a mantener la asimetría de esos iones a
logra cuando se saturan los trasnportadores ambos lados de su membrana.
presentes en la membrana (fig. 6). En cambio
en la difusión simple, la velocidad depende del
gradiente de concentración de la molécula a ser
transportada (fig. 6).

Figura 6. Cinéticas de difusión simple y facilitada.

En la difusión simple, la velocidad de transporte es
directamente proporcional a la concentración de la
molécula a ser transportada. En los mecanismos en los
que participan proteínas carriers como en la difusión
facilitada, o en el transporte activo, la velocidad llega
a un máximo determinado por los transportadores
disponibles.
2.2 Transporte activo
Cuando las moléculas se mueven en contra
del gradiente químico o eléctrico es necesario
utilizar energía. La forma de obtener la energía
para realizar el transporte activo depende del
tipo de proteína transportadora.
2.2.1 Transporte activo primario
Las moléculas que atraviesan la membrana
en contra de su gradiente utilizan energía
liberada por el ATP. Para esto, las proteínas
transportadoras hidrolizan ATP y bombean a
la molécula en cuestión contra gradiente: son
bombas dependientes de ATP (fig. 7).
El primer complejo de proteínas de transporte
activo que se identificó fue la bomba de Na+/
K+, que mantiene dentro de la célula baja
concentración de Na+ y alta de K+. Esos iones
son transportados contra gradiente y mantienen
la concentración y carga necesarias para la
Figura 7. Transporte activo primario. La bomba
de Na+/K+ transporta ambos iones en contra del
gradiente, y utiliza para esto la energía de la hidrólisis
del ATP.
2.2.2 Transporte activo secundario
Otras moléculas se mueven en contra de
su gradiente de concentración mediante el
acoplamiento de un proceso energéticamente
favorable con uno energéticamente desfavorable.
Para este tipo de transporte se utiliza la energía
acumulada en el gradiente electroquímico (fig.
8). Por eso, a este transporte se lo denomina
activo secundario.
• Según la dirección en que se trasportan las
moléculas, el transporte activo secundario
puede ser simporte, cuando se transportan dos
moléculas en la misma dirección, o antiporte,
cuando las moléculas son transportadas en
direcciones opuestas (fig. 8).
• La velocidad de transporte en los mecanismos
de transporte activo, al igual que la difusión
facilitada, tiene un máximo que depende de la
cantidad de proteínas transportadoras (fig. 6).
• En la membrana coexisten mecanismos de
trasporte pasivo y activo
 49

Figura 8. Transporte activo secundario. Como en el transporte activo primario, las moléculas atraviesan la
membrana en contra del gradiente de concentración, utilizando energía que proviene del pasaje de otras
moléculas a favor de su gradiente de concentración.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Explicar la estructura de la membrana a partir de las propiedades de las moléculas que la integran.

• Diferenciar los distintos tipos de transporte según la energía y la cinética.

• Reconocer que todos los mecanismos de transporte requieren energía.

50
 51

La Cadena respiratoria, en la que participan trasportadores de

electrones como el NAD, FAD, C0Q y citocromos, se abastece
del poder reductor de los glúcidos, además del que proveen los
ácidos grasos y aminoácidos que no se representan el esquema.
52
 53

8. CADENA RESPIRATORIA

J. Monza y S. Signorelli
Revisado por la Dra. Ana Denicola,
Laboratorio de Fisicoquímica Biológica,
Instituto de Química Biológica, Facultad de Ciencias. UdelaR

1. La cadena respiratoria se abastece de • La formación de un enlace fosfoanhidro, que

poder reductor
Las células almacenan energía bajo la forma
de ATP. En las células aerobias, la mayor parte
del ATP se produce como consecuencia de la
Cadena respiratoria, a partir del poder reductor
(en forma de NADH.H+, FADH2) que aportan
los glúcidos, lípidos y aminoácidos, entre otras
moléculas que las células oxidan.
se da entre dos fosfatos (HPO4-2), requiere de
unas 7.5 kcal/mol (fig. 2) y su hidrólisis libera
esa cantidad de energía.
• Así como en la transformación del ATP en
ADP se liberan 7.5 kcal/mol y un fosfato, lo
mismo se libera cuando el ADP se transforma
en AMP.

• Los glúcidos, ácidos grasos y aminoácidos

proveen de poder reductor a la cadena
respiratoria (fig. 1). A partir de su oxidación,
se reducen cofactores (NAD+ y FAD), desde
donde comienza la transferencia de electrones
hasta el aceptor final, que en los organismos
aerobios es el O2.

• La liberación de energía de los electrones desde

los precursores reducidos hasta la formación
de H2O, impulsa una reacción endergónica de
síntesis de ATP a partir del ADP y fosfato (figs.
1 y 2).

2. El ATP como otros mononucleótidos

acumula energía

A través de los transportadores de la

Cadena respiratoria ocurren reacciones de
oxidorreducción que liberan energía. Las células
utilizan esa energía para la síntesis de ATP,
según se resume en la figura 1. Esta molécula es
un reservorio de energía en animales, vegetales,
hongos y bacterias.
• El ATP está formado por adenina, ribosa y
tres grupos fosfato: es un nucleótido trifosfato
(fig. 2). También son nucléotidos, pero mono
y difosfato, el AMP y el ADP, respectivamente.
Figura 1. Convergencia del poder reductor en
la cadena respiratoria. A través de la oxidación
de glúcidos, aminoácidos y lípidos se reducen
las coenzimas NAD + (a NADH.H +) y FAD (a
FADH 2). Estas coenzimas se vuelven a oxidar y
los electrones finalmente reducen el O 2 a H 2O. El
pasaje de electrones libera energía que se utiliza
para la síntesis de ATP a partir de ADP y fosfato.
Este proceso se conoce como fosforilación
oxidativa.
54

+ Observe que la hidrólisis de los enlaces de alta

energía de cualquier mononucleótido trifosfato a
monofosfato rinde lo mismo. Por ejemplo, en la
transformación de GTP a GMP o de TTP a TMP
se liberan 15 kcal/mol en cada caso.

• El ATP es la molécula que mayormente usan

las células para almacenar la energía, y a partir
de él se transfiere a otros mononucleótidos
mono o difosfato. Así, mientras un ATP rinde
ADP, un GDT se puede fosforilar a GTP según:

Figura 2. Molécula de ATP. A. Diferentes estados

de fosforilación de un mononucleótido. ATP:
adenosín trifosfato. ADP: adenosín difosfato. AMP:
adenosín monofosfato. La fórmula de la base adenina
está simplificada. Las flechas indican los enlaces
fosfoanhidro y la energía aproximada contenida en
ellos. B. Condensación de dos grupos fosfato. La
reacción entre los grupos fosfato (subrayados) es
fuertemente endergónica y en este tipo de enlace se 3. La Cadena respiratoria en las células
conserva la mayor parte de la energía celular. eucariotas ocurre en la membrana
mitocondrial interna
• La transformación del ATP en AMP rinde
entonces 15 kcal/mol. Observe que el fosfato
La mitocondria es un organelo presente en
unido a la ribosa no es un enlace de alta energía.
células vegetales, animales y de hongos, es decir
• Los mononucleótidos trifosfato (fig. 3) pueden en todas las células eucariotas. Si bien la cantidad
contener otras bases nitrogenadas, como la de mitocondrias por célula es variable, las
guanina el GTP, la citosina el CTP, el uracilo el células con mayores requerimientos energéticos
UTP y la timina el TTP. Para la síntesis de estos tienen más mitocondrias. En deportistas, una
nucleótidos trifosfato se requiere de la misma adaptación fisiológica al entrenamiento es el
cantidad de energía que para la síntesis de ATP incremento de la cantidad de mitocondrias en las
desde el ADP o AMP. células musculares.

Figura 3. Mononucleótidos trifosfato. Los enlaces de alta energía, indicados con flechas, ocurren entre dos
fosfatos con pérdida de agua. Su hidrólisis, es decir su ruptura con entrada de agua, libera en todos los casos la
misma cantidad de energía.
 55

Figura 4. Esquema y microscopía electrónica de una mitocondria. A. Esquema de una mitocondria donde se
observa la membrana interna, que separa la matriz del espacio intermembrana, y la membrana externa, que
separa este espacio del citoplasma. En la matriz hay ADN y ribosomas que le permiten sintetizar algunas proteínas
necesarias para el funcionamiento mitocondrial. Por esta razón las mitocondrias son organelos semiautónomos.
B. Microscopía electrónica de trasmisión de una mitocondria (corte longitudinal).

• Las mitocondrias están limitadas por dos
membranas, una externa y otra interna, que
delimitan dos espacios: la cámara externa o
espacio intermembrana y la matriz (fig. 4).
• En la membrana interna se localizan enzimas
y transportadores de electrones de la cadena
respiratoria (NADH.H+ deshidrogenasa,
Coenzima Q, citocromos, etc.).
• La Cadena respiratoria está asociada a una
membrana, dado que para su funcionamiento
es necesario un ordenamiento espacial
estrictamente definido de los transportadores
y proteínas que la integran, como se verá más
adelante. En las células procariotas la cadena
respiratoria se localiza en la membrana celular.
3.1 Los transportadores tienen diferente
afinidad por los electrones
La Cadena respiratoria consiste en centros
redox donde se llevan a cabo reacciones de
oxidorreducción. Mediante estas reacciones se
transfieren electrones desde el NADH.H+ o desde
el FADH2 hasta el oxígeno, que es reducido a H2O
(fig. 5).
+ Observe que los electrones pueden ser
captados o cedidos de diferentes formas: un
electrón individualmente, un electrón unido a un
protón (como un átomo de H), o dos electrones
unidos a dos protones, es decir como molécula de
hidrógeno (H2).

Figura 5. Representación de la cadena respiratoria. Los cofactores y transportadores están ordenados según su
afinidad creciente por los electrones, desde los que tienen menor potencial redox (menor afinidad) a los de mayor
potencial redox (mayor afinidad). NAD+: nicotín adenín dinucleótido. FAD: flavín adenín dinucleótido. CoQ:
coenzima Q o ubiquinona. Cit: citocromos.
56

Figura 6. Representación de la cadena respiratoria en la membrana mitocondrial. Las flechas indican el sentido
del transporte de electrones (e-) a través de los Complejos I al IV. Las flechas verticales indican el sentido del
bombeo de H+ desde la matriz al espacio intermembrana, o desde este espacio a la matriz a través de la ATPasa.
El Complejo V no está vinculado al transporte de electrones como los otros, sino a la síntesis de ATP.

En la figura 5 se representan los transportadores • El Complejo II (succinato deshidrogenasa)

de la cadena respiratoria (NAD+, FAD, coenzima
Q y citrocromos) ordenados según su potencial
redox. La dirección del flujo de electrones,
indicada con la flecha en la figura 5, muestra el
sentido del movimiento de electrones desde los
transportadores con menor afinidad (potencial
redox más negativo) a los de mayor afinidad
(potencial redox más positivo).
• El Complejo I (NADH.H+-ubiquinona
reductasa) es por donde ingresa la mayoría de
los electrones a la cadena. Los electrones son
transferidos desde el NADH.H+ a la CoQ (fig.
6) a través del flavín mononucleótido (FMN)
que es parte del Complejo I, con bombeo de
H+. El esquema que se presenta a continuación
resume el proceso.
es el otro punto de entrada de electrones a la
cadena (fig. 6), pero no bombea H+. Por esto
se genera un ATP menos cuando la cadena
comienza por el Complejo II (FADH2), a
diferencia de cuando lo hace por el Complejo
I (NADH.H+).
• El Complejo III (CoQ-citocromo c reductasa)
recibe electrones de los Complejos I y II (figs.
5 y 6). A partir de este paso se transportan
electrones, y quedan libres los H+. El Complejo
III, que incluye al citocromo b, transfiere
electrones al citocromo c y mediante el
bombeo de H+ acumula energía suficiente
para formar un ATP (figs. 6 y 7).
• El Complejo IV (citocromo c oxidasa) cataliza
la formación de H2O a partir de los dos
electrones, medio O2 y dos H+. Este complejo
contribuye con la generación de un gradiente
de H+ suficiente para generar un ATP.

• El Complejo V, anclado en la membrana

mitocondrial interna (fig. 6), está formado
por los componentes F0 y F1 (canal protónico
y ATPasa o ATPsintasa):

a. F0 corresponde al canal protónico (fig. 7). La
oligomicina, un antibiótico que se une a este
canal y no permite el pasaje de H+, por lo que
inhibe la síntesis de ATP.
b. F1 contiene las unidades catalíticas de la
ATPasa, que permite sintetizar el ATP a partir
del ADP y P (figs. 6 y 7).
+ Observe que en el Complejo IV se reduce el O2
a H2O y que parte de la energía que se libera por el
gradiente de pH permite la fosforilación del ADP
a ATP en el complejo V. Por eso este proceso de
formación de ATP se llama fosforilación oxidativa.
Figura 7. Modelo de la ATPasa y canal protónico. Se
representan los oligómeros que conforman al canal
protónico (F0) y a la ATPasa (F1), orientada hacia la matriz.
En las células procariotas el complejo F1 está situado en la
membrana celular orientado hacia el citoplasma, y los H+
son bombeados hacia el espacio extracelular.
3.3 La cantidad de ATP generado es
diferente según los electrones ingresen
por el Complejo I o II
Para que el ADP se fosforile y forme ATP se
requiere de energía, se trata de una reacción
endergónica. La energía se obtiene al disolverse el
gradiente de H+ establecido durante el transporte
de electrones en la Cadena respiratoria. La
citocromo c oxidasa (Complejo V) logra transferir
cuatro electrones al O2 para formar dos H2O
(figs. 5 y 6). De esta forma, se puede establecer
la relación P/O, que relaciona los moles de ATP
formados (P) por átomo de oxígeno reducido (O).
57
• Desde el NADH.H+ al O2 los electrones liberan
la energía suficiente para el bombeo de H+
al espacio intermembrana, de manera que
cuando vuelven a la matriz se generan tres
ATP. La relación P/O = 3.
• Desde el FADH2 al O2 los electrones liberan la
energía suficiente para generar dos ATP. La
relación P/O = 2.
+ Observe que la relación P/O se refiere a cuántos
fosfatos pasan a formar enlaces de alta energía en
relación con la cantidad de oxígeno consumido. Así,
por cada NADH.H+ se generan 3 ATP (relación 3/1) y
por cada FADH2 se generan 2 ATP (relación 2/1).
4. La variación de energía libre se puede
cuantificar
Cuando se transfieren electrones desde una
molécula a otra la variación de energía libre
(∆Gº´) que se produce en las reacciones redox,
está relacionada con el potencial de reducción
estándar (Eº´).
• El cambio de ∆Gº´ de una reacción redox se
puede calcular a partir de la diferencia del
potencial redox de los dos pares que participan
en la reacción, según la fórmula:
∆G º´ = - n · F · Eº´
donde n es el número de electrones transferidos,
F la constante de Faraday (23.06 kcal·V-1·mol-1,
o 96.5 kJ·V-1·mol -1) y ∆Eº´ la variación del
potencial redox en voltios.
• La cadena respiratoria es un proceso exergónico
y la energía liberada por el transporte de
electrones es utilizada para la fosforilación del
ADP.
+ Observe que si relaciona la cantidad de energía
(kcal) que se conserva en los ATP formados con
la cantidad de energía que se libera en la cadena
respiratoria, alrededor del 60 % de esta se disipa.
58

5. La teoría quimiosmótica explica la + Observe que:

síntesis de ATP a partir del gradiente de H+
• La fosforilación del ADP (síntesis de ATP)
está estrechamente ligada al transporte de
En las células eucariotas, la energía liberada
electrones en la cadena respiratoria: los
por el transporte de electrones es usada para
procesos están acoplados.
el bombeo de H+ desde la matriz mitocondrial
hacia el espacio intermembrana (figs. 4 y 8). Este • La fuerza protón motriz entre los dos
bombeo es el que genera el gradiente de H+, y por compartimentos es el acontecimiento primario
lo tanto la desigualdad de cargas y de pH a ambos para la conservación de energía.
lados de la membrana mitocondrial interna.

• La membrana mitocondrial interna es 6. Los inhibidores impiden el pasaje de

impermeable a los iones, incluyendo a los H+, que electrones y la síntesis de ATP
sólo pueden atravesarla por los canales F0 (fig. 7).

• El bombeo de H+ hace que el pH de la matriz sea
alcalino y el del espacio intermembrana ácido, lo que
genera un gradiente químico y también eléctrico por
la asimetría de cargas. La fuerza protón motriz hace
que los H+ vuelvan a la matriz (fig. 8).
• Cuando los H fluyen pasivamente hacia
+ insecticida) bloquean el flujo de electrones
la matriz a través del canal F0, el complejo
enzimático ATPasa (F1) utiliza la fuerza protón
motriz para generar el enlace fosfoanhidro
entre el ADP y el fosfato, y producir ATP.
Las moléculas que actúan como inhibidores
de la cadena respiratoria impiden el flujo de
electrones entre los transportadores, y por lo
tanto la síntesis de ATP.
• El amital (un barbitúrico) o la rotenona (un
entre el NADH.H+ y la CoQ, la antimicina (un
antibiótico) lo hace entre la CoQ y el Cit b y
el cianuro, la azida y el monóxido de carbono
actúan sobre la citocromo c oxidasa.

Figura 8. Teoría quimiosmótica de Mitchel. Mientras los electrones pasan desde el Complejo I hasta el O2, la
energía liberada se usa para bombear H+ desde la matriz hacia el espacio intermembrana. Los H+ vuelven a la
matriz a través de los canales protónicos (F0), que se abren como consecuencia del gradiente generado a ambos
lados de la membrana. Parte de la energía liberada por los H+ al volver a la matriz genera ATP.
 59

• La aplicación de estos inhibidores bloquea 7. Los desacopladores dificultan la

el pasaje de electrones por la cadena
respiratoria. Así, “por detrás” del punto
de inhibición los transportadores quedan
reducidos.
• Como consecuencia de la interrupción del flujo
de electrones no se produce ATP, porque no se
genera el gradiente de H+. Tampoco se forma
agua porque los electrones no llegan a reducir
el O2.
Los inhibidores a determinada concentración
son venenos, porque conducen a la muerte
celular. Entre ellos, el monóxido de carbono
(CO) es responsable de muchos accidentes por
año, en general en invierno, dado que se produce
como consecuencia de la combustión incompleta
en braseros y estufas. También es generado por
los motores de combustión.
+ Observe que en los organismos aerobios
el O2 es necesario porque es el aceptor final de
los electrones transportados por de la Cadena
respiratoria.
formación del gradiente protónico
• Los desacopladores, como el dinitrofenol y
la termogenina, dificultan la generación del
gradiente de H+ y por lo tanto la síntesis de ATP.
Esto se debe a que hacen permeable a los H+ a la
membrana mitocondrial interna, que vuelven a
la matriz a través del desacoplador y no por los
canales CF0. En presencia de desacopladores
la Cadena respiratoria consume O2 porque no
está alterado el transporte de electrones, pero
se forma menos ATP porque no se establece
normalmente el gradiente protónico.
• La termogenina es una proteína presente en
la membrana mitocondrial interna del tejido
adiposo pardo a través de la cual pasan H+. Por
esto el gradiente de H+ que se genera es menor,
como también lo es la cantidad de ATP producido,
pero aumenta la liberación de energía como calor.
+ Observe que la termogenina disipa el
gradiente de H+ y contribuye con la termogénesis
adaptativa. Durante el período de hibernación los
animales generan calor gracias a este mecanismo.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Relacionar el catabolismo de las biomoléculas con la Cadena respiratoria, y la generación del

gradiente protónico con la síntesis de ATP.

• Justificar el papel del O2 en la Cadena respiratoria.

• Explicar el concepto de la relación P/O y vincularlo con la fosforilación oxidativa.

• Fundamentar cómo actúan los inhibidores y los desacopladores.

60
 61

La Glucólisis y el Ciclo de las pentosas son vías degradativas de

los glúcidos. La Glucogénesis es la síntesis de glúcidos y comparte
reacciones comunes con la Glucólisis, pero tiene reacciones pro-
pias, representadas en rojo.
62
 63

9. Glucólisis, Vía de las pentosas fosfato y Glucogénesis

S. Signorelli, P. Irisarri y J. Monza
Revisado por el Dr. Andrés Troschansky,
Centro de Investigaciones Biomédicas, Facultad de Medicina, UdelaR.

1. La Glucólisis es una vía catabólica de 1.1 La Glucólisis se puede dividir en dos

glúcidos fases

La Glucólisis consiste en una serie de reacciones

Los glúcidos, como la glucosa y la fructosa entre
otros, se degradan a piruvato a través de una vía
metabólica conocida como Glicólisis y parte de
su energía se conserva como ATP.
• Esta vía, también llamada vía Glicolítica,
consiste de una serie de reacciones catalizadas
por enzimas localizadas en el citoplasma de
células animales, vegetales, de hongos y de
bacterias.
• El hecho que organismos filogenéticamente
distantes presenten la misma vía, indica que
es una estrategia metabólica muy antigua y
conservada.
en las que una hexosa, por ejemplo la glucosa,
genera dos moléculas de piruvato (fig. 1).
En la Glucólisis se pueden distinguir dos etapas
o fases:
• La primera fase es endergónica, consume ATP,
y a partir de una hexosa se genera fructosa 1,6
P (fig. 1, reacciones 1 y 3).
• La segunda fase es exergónica, genera ATP
(Fig. 1 reacciones 7 y 10) a partir de la energía
almacenada en la molécula de glucosa y NADH.
H+ (fig.1 reacción 6).

Figura 1. Esquema general de la Glucólisis. GA3P: gliceraldehído 3P. D3P: dihidroxicetona 3P. PEP:
fosfoenolpiruvato. Las reacciones, identificadas con números, se describen en el texto.
64

La vía se puede resumir en 10 reacciones Esta reacción irreversible consume ATP y es el

catalizadas por enzimas que se describen principal paso regulador de la Glucólisis.
a continuación. Algunas de las cuales se
representan en la figura 1.
1.2 Fase en la que se consume ATP

Reacción 1
La primera reacción de la Glucólisis consiste en
la fosforilación de la glucosa, que tiene como Reacción 4
producto glucosa 6P (G6P). Esta reacción es La F1,6P una hexosa, genera por acción de la
catalizada por la enzima hexoquinasa y consume aldolasa (liasa) dos triosas (moléculas de tres
ATP. La hexoquinasa fosforila a otras hexosas carbonos): la dihidroxicetona 3 fosfato (D3P) y
como fructosa, galactosa y manosa. Este paso es el gliceraldehído 3 fosfato (GA3P). Esta reacción
uno de los tres irreversibles de la vía. De todas es reversible.
formas, como se verá en Glucogénesis, con otra
enzima (una fosfatasa) se puede remover el
grupo fosfato y obtener glucosa.

La G6P tiene carga negativa, lo que impide que
vuelva a atravesar la membrana celular y salga
de la célula. Esto evita la pérdida de un sustrato
energético.
Reacción 5
La D3P se isomeriza a GA3P. Esta reacción es
reversible y la cataliza una isomerasa (triosa
fosfato isomerasa).

Reacción 2
La G6P se transforma en fructosa 6P (F6P) por
acción de una isomerasa. Esta enzima cataliza la
isomerización reversible de estas hexosas.

+ Observe que mediante la reacción 4 se

genera una molécula de GA3P y en la reacción
5 una segunda molécula de GA3P, por lo que en
la Glucólisis a partir de una hexosa se pueden
formar dos moléculas de piruvato.

1.3 Fase en la que se genera ATP

Reacción 3 Reacción 6
La tercera reacción, catalizada por la enzima El GA3P es oxidado y fosforilado a 1,3
fosfofructoquinasa 1(FFQ-1), fosforila a la F6P bisfosfoglicerato (1,3P glicerato). La reacción
en el C1 y produce fructosa 1,6 bifosfato (F1,6P). es catalizada por la gliceraldheído 3P

deshidrogenasa que tiene como cofactor al
NAD+, que acepta los electrones y se reduce a
NADH.H+.
Reacción 7
En esta reacción, catalizada por una quinasa que
transfiere el grupo fosfato del C1 a una molécula
de ADP generándose un ATP, el primero que se
forma en la Glucólisis. Esta forma de obtener
ATP en la que no participa la Cadena respiratoria
se denomina fosforilación a nivel de sustrato
(FNS). Si bien esta reacción es reversible, la
energía liberada por la hidrólisis del grupo
fosfato del 1,3P glicerato es suficiente para dirigir
la reacción hacia la formación de ATP.
+ Observe en la reacción 4 se generan dos
triosas, de manera que en esta reacción se
producen 2 ATP por hexosa.
Reacciones 8 y 9
A través de dos reacciones (8 y 9), el
3-fosfoglicerato se transforma en PEP mediante
isomerización a 2-fosfoglicerato catalizada
por la enolasa. La reacción 9 se representa a
continuación.
65
Reacción 10
En esta reacción irreversible, la última de
la Glucólisis, el PEP se desfosforila y se
obtiene piruvato y ATP. Ocurre así la segunda
fosforilación a nivel de sustrato de la Glucólisis.
La transferencia del grupo fosfato del PEP al
ADP es catalizada por una quinasa (piruvato
quinasa), una enzima alostérica que tiene como
moduladores negativos al ATP y la acetil-CoA.
2. El NADH.H+ generado en la Glucólisis
debe oxidarse y regenerar NAD+
El NADH.H+ generado en la formación del 1,3P
glicerato (fig. 1, reacción 6) se debe oxidar para
que la enzima citosólica que cataliza esa reacción
disponga del cofactor oxidado (NAD+). De no
ser así, la obtención de ATP por la Glucólisis se
interrumpiría. El mecanismo por el cual se oxida
el NADH.H+ y se regenera NAD+ es distinto
según la célula sea fermentativa o aerobia.
2.1 Oxidación del NADH.H+ en células
fermentativas
En las células fermentativas el NADH.H+
regenera NAD+ mediante diferentes mecanismos.
Uno de ellos es la fermentación láctica, en la cual
el piruvato es reducido a lactato con el poder
reductor del NADH.H+ (fig. 2).
En animales en ejercicio prolongado, debido
a que la demanda de oxígeno por las células
musculares no no es satisfecha, estas células en
vez de oxidar totalmente al piruvato a través del
ciclo de Krebs lo oxidan parcialmente mediante
fermentación láctica (fig. 5). El lactato producido
en el músculo es transformado en glucosa en el
hígado (fig. 5), surtiendo a la Glucólisis de un
sustrato para la generación de ATP.
66
Las células musculares realizan fermentación
láctica cuando el aporte de O2 no es suficiente
para mantener el metabolismo aerobio.
Figura 2. Fermentación láctica. El piruvato es
transformado en lactato por acción de la lactato
deshidrogenasa, lo que permite regenerar NAD+
citosólico, necesario para la continuidad de la Glucólisis.
Figura 3. Lanzadera del glicerol 3P. El poder reductor del NADH.H+ generado en la Glucólisis es transferido a
la mitocondria por el GP. El GP es oxidado por una enzima que tiene como cofactor el FAD y el FADH2 generado
se oxida en Cadena respiratoria. Como consecuencia de esto se generan 2 ATP por triosa.
• Las levaduras, denominadas facultativas,
utilizan la estrategia aerobia cuando hay
suficiente O2 y fermentan cuando hay
limitación de este gas. Las levaduras
responsables de la producción de vino se
comportan como aerobias mientras que el
mosto se airea, pero cuando se deja de airear
y se genera un ambiente microaerobio se pone
en marcha la estrategia fermentativa.
• Además de la fermentación láctica y alcohólica
hay otras fermentaciones como la acética,
propiónica etc. Lo común en las distintas
fermentaciones es que el aceptor final de
electrones no es el oxígeno, como ocurre en
la estrategia aerobia. Por esto la fermentación
es un proceso anaerobio, que si bien es propio
de algunas bacterias ylevaduras, también
ocurre en algunas células animales y vegetales
aerobias, en condiciones de bajo O2.
2.2 Oxidación del NADH.H+ en células
aerobias
La oxidación del NADH.H+ a NAD+ en el
citoplasma involucra un mecanismo denominado
lanzadera, que consiste en el transporte de
H2 del NADH.H+ a las mitocondrias, donde se
incorporan a la Cadena respiratoria (Fig. 3).

• Hay dos lanzaderas, la del Glicerol fosfato (GP)
y la del malato – aspartato (malato):
a. En la lanzadera del GP un transportador de
la membrana mitocondrial le permite a esa
molécula llegar a la matriz, donde se oxidada
por una deshidrogenasa que tiene como
cofactor al FAD. Así se regenera D3P que
vuelve al citoplasma (fig. 3) mientras que el
FADH2 se oxida en la Cadena respiratoria.
Finalmente los electrones son aceptados por
el O2 y se forma H2O. La energía liberada es
suficiente para producir 2 ATP.
La lanzadera malato-aspartato regenera
NAD+ a partir del NADH.H+ con reducción
de oxalacetato a malato (fig. 3). La reacción
es catalizada por la malato deshidrogenasa
citosólica. El malato se oxida en la
mitocondria y como consecuencia se generan
3 ATP en la Cadena respiratoria.
+ Observe que cuando actúa una lanzadera el
aceptor final de los electrones es el O2.
3. La cantidad de ATP producido por
la Glucólisis en células aerobias y
fermentativas es diferente
En células fermentativas:
• En la primera fase de la Glucólisis (hexosa no
fosforilada hasta F1,6P) se consumen 2 ATP/
hexosa (fig. 1).
• A partir de una hexosa se generan 2 triosas
y por cada triosa ocurren 2 FNS (fig. 1), de
manera que se producen 4 ATP/hexosa .
• El b2ulas aerobias:
• Al igual que en células fermentativas, en la
primera fase de la Glucólisis se consumen 2
ATP/hexosa y en la segunda etapa las 2 triosas
producen por FNS 4 ATP (fig. 1).
• Como por cada hexosa se producen 2 triosas se
generan 2 NADH.H+ que se oxidan y reducen a
2 GP (fig. 3). Cada GP se oxida, de manera que
67
por hexosa se reducen 2 FAD a 2 FADH2 en la
mitocondria. Como cada FADH2 genera 2 ATP,
se producen 4 ATP/hexosa.
• En resumen, por cada hexosa se generan 4
ATP por fosforilación a nivel de sustrato y
4 ATP por lanzadera del GP: se producen
8 ATP/hexosa. Como se consumen 2 ATP
para producir la F1,6P el balance neto son 6
ATP/hexosa.Si ocurre lanzadera del malato
se generan 3 ATP/triosa, es decir 6 ATP/
hexosa. En este caso el balance es 8 ATP/
hexosa.
4. El piruvato tiene diferentes destinos en
células aerobias y fermentativas
En las células aerobias la oxidación del piruvato
continúa en el ciclo de Krebs, en el que se generan
NADH.H+ y FADH2, cuya oxidación en la Cadena
respiratoria produce ATP. Por otro lado, en células
fermentativas y en algunas células aerobias en
condiciones de bajo oxígeno, el piruvato se reduce
a lactato por fermentación láctica (fig. 2), o deriva
a otras fermentaciones como la alcohólica, que
produce etanol.
+ Observe que en las fermentaciones el
piruvato no es oxidado totalmente, por lo que
el rendimiento energético, expresado como
cantidad de ATP formado, es inferior al que
ocurre en condiciones aerobias.
5.Regulación de la Glucólisis: hexoquinasa,
FFQ-1 y piruvato quinasa
Las enzimas que catalizan las tres reacciones
irreversibles de la glicólisis son las responsables
de la regulación de la vía. Estas son: la
hexoquinasa (fig. 1, reacción 1), la FFQ-1 (fig. 1,
reacción 3) y la piruvato quinasa (fig. 1, reacción
9). La regulación de la vía tiene su punto
limitante en la reacción 3, e incluye mecanismos
tales como inhibición por producto, modulación
alostérica y modulación covalente de las enzimas
mencionadas.
68

• La hexoquinasa es inhibida por el producto de
reacción, la G6P (fig. 1).
• La FFQ-1 tiene como moduladores alostéricos
positivos el AMP y ADP y como modulador
negativo el ATP y el citrato (fig. 4). Observe que
se da una lógica metabólica que asegura el uso
de las hexosas según la necesidad celular.
• La piruvato quinasa tiene como moduladores
negativos al ATP y a la acetil-CoA.
El principal mecanismo de regulación de la
Glucólisis y Glucogénesis es el estado energético
de la célula: más ATP o más ADP-AMP (fig. 4).
Sin embargo, en las células del hígado la actividad
hexoquinasa sólo se inhibe por el producto (G6P)
y es independiente de la concentración de ATP.
6. La Glucogénesis es una vía que permite
síntetizar glucosa
La Glucogénesis es una vía anabólica que
permite la síntesis de glucosa a partir de lactato,
piruvato, glicerol y de algunos aminoácidos e
intermediarios del ciclo de Krebs. Esta vía ocurre
en órganos como el hígado (90 %) y el riñón.
Para que ocurra la síntesis de glucosa sin la
formación de ciclos fútiles, en la Glucogénesis
se deben saltear las reacciones irreversibles
de la Glucólisis: de piruvato a PEP (rodeo
metabólico), de F1,6P a F6P y de G6P a glucosa
(fig.1, reacciones. 1, 3 y 10).
• Piruvato a PEP. Las reacciones involucradas
en la conversión de piruvato a PEP, conocidas
en conjunto como rodeo metabólico, están
catalizadas por la piruvato carboxilasa que
carboxila al piruvato, y la PEP carboxiquinasa
que fosforila y descarboxila al OAA, generando
PEP (fig. 4, reacción C).
• F1,6P a F6P. Una fosfatasa, la fructosa 1,6
bifosfatasa, elimina el grupo fosfato del C1 de
la F1,6P y rinde F6P (fig. 4, reacción B).
• G6P a glucosa. Una fosfatasa elimina el grupo
fosfato del C6 de la G6P y rinde glucosa (fig. 4,
reacción A).

Figura 4. Regulación de la Glucólisis y Glucogénesis por ATP/ADP. El ATP modula negativamente a la FFQ-1, lo
que produce una disminución en el flujo de moléculas a través de la Glucólisis, mientras que activa a la piruvato
carboxiquinasa que permite la formación de PEP y que ocurra la Glucogénesis. El ADP y AMP (este último no
se representa en el esquema) modulan negativamente a la piruvato carboxiquinasa y positivamente a la FFQ,
aumentando el flujo de intermediarios de la Glucólisis, y por lo tanto la síntesis de ATP.

Para que estas reacciones tengan lugar, la
relación ATP/ADP debe ser alta o debe haber
una señal hormonal como la liberación de
glucagón por el páncreas. En esa condición,
la FFQ-1 y la piruvato quinasa se inhiben al
tiempo que se activa la piruvato carboxiquinasa
(fig. 4, reacciones A y C). A su vez, el ADP y
AMP inhiben la piruvato carboxiquinasa lo que
favorece que el piruvato se metabolice a través
del ciclo de Krebs, con la consecuente formación
de ATP (fig. 4).
+ Observe que esas reacciones son las únicas
propias de la Glucogénesis, catalizadas por enzimas
diferentes a las de la Glucólisis (figs. 1 y 4).
7. El lactato generado en el músculo se
puede transformar en glucosa en el hígado
El ciclo de Cori permite regenerar glucosa en el
hígado a partir del lactato producido en el músculo
cuando la actividad física es intensa (fig. 5).
• En las células musculares la fermentación
láctica es un mecanismo que permite oxidar el
NADH.H+ generado en la Glucólisis (fig. 2).
• El lactato generado es transportado por la
sangre al hígado, donde se transforma en
piruvato (fig. 5). En ese órgano el piruvato
produce glucosa, que es transportada por la
sangre hacia el músculo (fig. 5)
Figura 5. Ciclo de Cori. El lactato producido en el
músculo en condiciones de bajo oxígeno genera en el
hígado glucosa, mediante Glucogénesis.
69
8. Vía de las Pentosas fosfato: otra vía
catabólica de hexosas
La vía de las Pentosas es otra ruta catabólica de
hexosas que ocurre en el citoplasma y genera
poder reductor como NADPH.H+ y produce
glúcidos con diferente cantidad de carbonos.
• El poder reductor acumulado como NADPH.
H+ es usado principalmente en la biosíntesis
de ácidos grasos.
• Los glúcidos que se producen son pentosas
como la ribosa (que forma parte de los
nucleótidos), la ribulosa y la xilosa y otros con
3, 4, 6 y 7C (fig. 6).
La vía consta de una fase oxidativa y otra no
oxidativa (fig. 6).
• En la fase oxidativa, a partir de la G6P y con
pérdida de CO2 se produce NADPH.H+ y
ribulosa 5P.
• En la fase no oxidativa, la ribulosa 5P puede
dar ribosa 5P (R5P) o xilulosa 5P (X5P) por
acción de una isomerasa. Estas moléculas
pueden generar F6P y GA3P por acción de
transcetolasas (transfieren grupos de 2C) y
transaldolasas (transfieren grupos de 3C). De
esta forma, se pueden producir glúcidos de
diferente número de C, con variados destinos
metabólicos.
• El alto nivel de NADP+ indica necesidad de
poder reductor y en esa condición la actividad
de la G6P deshidrogenasa se estimula. De
esta forma, el flujo hacia la fase oxidativa está
regulado principalmente por la disponibilidad
de G6P.
+ Observe que la vía de las pentosas fosfato
produce R5P, necesaria para la síntesis de
nucleótidos, y NADPH.H+ utilizado en procesos
anabólicos. Las enzimas de esta vía están en
el citosol, donde también ocurre la Glicólisis,
Glucogénesis y la síntesis de ácidos grasos.
70

Figura 6. Vía de las pentosas fosfato. La ribulosa 5P puede dar xilulosa 5P (X5P, reacción 1), o ribosa 5P
(R5P, reacción 2). Estas pentosas pueden intercambiar 2C y los productos son el gliceraldehído 3P (GA3P)
y la sedoheptulosa 7P (P7P), las cuales pueden intercambiar 3C y dar fructosa 6P (F6P) y eritrosa 4P (E4P).
Finalmente, la E4P puede reaccionar con una segunda molécula de X5P (reacción 3) y rendir F6P y GA3P.

+ Observe que a partir de tres R5P se generan tres NADPH.H+ y se pierden tres CO2.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Describir en general la Glucólisis como vía metabólica a partir de sus reacciones.
• Fundamentar qué es una vía conservada.
• Diferenciar la fosforilación a nivel de sustrato de la fosforilación oxidativa.
• Explicar la necesidad de oxidar al NADH.H+ y los mecanismos propios para esto en células aerobias
y fermentativas.
• Establecer un patrón en la regulación mediada por ATP/ADP que explique cuándo tiene lugar la
Glucólisis y cuándo la Glucogénesis.
• Describir las funciones de la vía de las Pentosas fosfato a partir de sus productos.
 71

El piruvato se transforma en acetil CoA, principal molécula

abastecedora del Ciclo de Krebs. A su vez, el Ciclo abastece
de poder reductor a la Cadena respiratoria.
72

10. CICLO DE KREBS
Centro de Investigaciones Biomédicas, Facultad de Medicina. UdelaR
1. Al ciclo de Krebs convergen distintas
vías catabólicas
En las células aerobias el catabolismo de los
glúcidos, ácidos grasos y aminoácidos abastece
de intermediarios al ciclo de Krebs. Este ciclo,
también llamado ciclo del ácido cítrico o ciclo de
los ácidos tricarboxílicos, consiste en la oxidación
de la acetil CoA a CO2, generando poder reductor
para la cadena respiratoria (fig. 1).
Figura 1. Convergencia de rutas catabólicas al
ciclo de Krebs. Los aminoácidos, glúcidos y lípidos
abastecen al ciclo. Algunos intermediarios del ciclo
se oxidan y abastecen de hidrógeno y electrones a la
cadena respiratoria. Como resultado de la degradación
oxidativa de la acetil CoA se libera CO2.
2. El piruvato genera acetil CoA: la
principal molécula abastecedora del ciclo
La principal molécula que abastece el ciclo de
Krebs, la acetil CoA, se genera a partir de la
73
J. Monza y S. Signorelli
Revisado por el Dr. Homero Rubbo,
descarboxilación y oxidación del piruvato, o
de la oxidación de ácidos grasos (fig. 1). En las
células eucariotas el piruvato pasa desde el
citoplasma a la matriz mitocondrial a través
de transportadores presentes en la membrana
mitocondrial interna, mientras que en las células
procariotas todo ocurre en el citoplasma.
• La piruvato deshidrogenasa (PDH) cataliza la
descarboxilación oxidativa del piruvato. En la
reacción el piruvato pierde el grupo carboxilo
como CO2 y se reduce un NAD+, cofactor de la
enzima (fig. 2).
• La oxidación del NADH.H+ en la cadena
respiratoria conduce a la formación de 3 ATP.
Figura 2. Descarboxilación oxidativa del piruvato. En
eucariotas la reacción ocurre en la matriz mitocondrial,
donde se encuentra la ezima PDH. El ΔGº´ es de -8
kcal·mol-1; lo que hace irreversible a esta reacción.
+ Observe que esta reacción es el nexo entre la
glucólisis y el ciclo de Krebs (fig. 2 y 3).
3. Visión panorámica del ciclo de Krebs
El ciclo de Krebs puede ser alimentado a través de
cualquiera de sus intermediarios (fig. 3), pero la
principal molécula que lo abastece es la acetil CoA.
• La acetil CoA se condensa con el oxalacetato
y genera citrato, y a través de siete reacciones
sucesivas (fig. 3, reacciones 2 a 8) se regenera
el oxalacetato, capaz de iniciar otro ciclo.
74

• En cuatro reacciones del ciclo se oxidan 4. Reacciones del ciclo

intermediarios y se reducen cenzimas: 3 NAD+
y un FAD (fig. 3) que se oxidan en la cadena
respiratoria. Parte de la energía liberada por
estás reacciones de oxidación se utiliza para
fosforilar el ADP a ATP.
• En una reacción del ciclo se da una fosforilación
a nivel de sustrato y se produce un GTP, que
equivale energéticamente a un ATP.
Reacción 1: condensación del oxalacetato
con la acetil CoA
La enzima citrato sintasa condensa la acetil CoA
(2C) con el oxalacetato (4C) y se forma citrato
(6C), con liberación de HSCoA. La reacción,
fuertemente exergónica, es irreversible.

+Observe que los dos carbonos que ingresan al

ciclo como un acetilo salen como 2 CO2 (fig. 3,
reacciones 3 y 4).

Figura 3. Ciclo de Krebs. Cuatro reacciones están catalizadas por deshidrogenasas (3, 4, 6 y 8), tres tiene como
cofactor al NAD+ y una al FAD. En la reacción 5 se genera un GTP por fosforilación a nivel de sustrato. Los dos
carbonos que ingresan al ciclo como un acetilo salen como CO2 (reacciones 3 y 4).
+Observe que el ciclo se puede resumir en la siguiente ecuación:
Acetil CoA + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi g HSCoA + 3NADH.H+ + FADH2 + GTP + 2CO2

Reacción 2: isomerización del citrato a
isocitrato
La isomerización del citrato en isocitrato ocurre
por dos reacciones sucesivas, que se resumen en
una.
Reacción 3: oxidación y descarboxilación
del isocitrato
El isocitrato (6C) forma α cetoglutarato (5C) por
una descarboxilación oxidativa catalizada por
la isocitrato deshidrogenasa, que tiene como
cofactor al NAD+. Mientras el CO2 se libera, se
reduce un NAD+ que se oxidará en la cadena
respiratoria y se formarán 3 ATP.
Reacción 4: el α cetoglutarato se transforma
en succinil CoA
La enzima α cetoglutarato deshidrogenasa
cataliza la segunda descarboxilación oxidativa
del ciclo y se forma succinil CoA (4C). El NADH.
H+ generado se oxida en la cadena respiratoria y
se formarán 3ATP.
75
Reacción 5: la succinil CoA rinde succinato
y GTP
La succinil CoA es un tioéster de alta energía,
con un ΔG°′ de hidrólisis de -33,5 kJ·mol-1.
Con la energía liberada por la ruptura de ese
enlace se forma un GTP por fosforilación a
nivel de sustrato. Es decir, se forma un enlace
fosfoanhidro entre un fosfato y un GDP.
El GTP se puede convertir en ATP según la
siguiente reacción:
GTP + ADP 1 GDP + ATP ΔG°′ = 0 kJ·mol- 1
Reacción 6: el succinato se transforma en
fumarato
El succinato es oxidado a fumarato por la
succinato deshidrogenasa, que tiene como
cofactor al FAD. La oxidación del FADH2 en la
cadena respiratoria produce 2 ATP. La enzima
usa FAD como cofactor porque la energía
derivada de la reacción no es suficiente para
reducir al NAD+.
El complejo enzimático succinato deshidrogenasa
es el único del ciclo que está asociado a la
membrana mitocondrial.
76
Reacción 7: el fumarato se hidrata y
genera malato
La fumarasa cataliza la adición de agua; es decir,
la hidratación del fumarato. El producto de la
reacción es el malato.
Reacción 8: el malato se oxida a
oxalacetato
Las reacciones del ciclo en su conjunto conducen
a la regeneración del oxalacetato. La malato
deshidrogenasa cataliza la última reacción del
ciclo, que consiste en la oxidación del malato a
oxalacetato, con la reducción de un NAD+. La
oxidación del NADH.H+ en la cadena respiratoria
forma 3 ATP.
5. Balance de la degradación total de la
glucosa
Para calcular la energía que puede obtenerse
de la degradación total de la glucosa hay que
considerar la glucólisis, la descarboxilación
oxidativa del piruvato, el ciclo de Krebs y la
cadena respiratoria (fig. 1).
• La cantidad de ATP generado difiere según
la lanzadera involucrada en la oxidación del
NADH.H+ glucolítico.
• En el cuadro 1 se plantea un balance posible
de la degradación de la glucosa en una célula
eucariota, en la que operó solo la lanzadera del
glicerol fosfato.
Tabla 1. Resumen del balance energético en ATP de
la degradación total de la glucosa.
Proceso metabólico Rendimiento
Glucólisis Etapa de gasto de la glucólisis -2 ATP
Fosforilación a nivel de sustrato 2 x 2 ATP = 4 ATP
Lanzadera de glicerol P (2 × 2 FADH2) 4 ATP
Oxidación del Decarboxilación oxidativa (2 × 1 NADH2) 6 ATP
piruvato
Ciclo de Krebs Fosforilación a nivel de sustrato (2 × 1 GTP) 2 ATP
NAD deshidrogenasas (2 × 3 NADH.H) 18 ATP
FAD deshidrogenasa (2 × 1 FADH2) 4 ATP
Total 36 ATP
6. El propionato generado en el rumen
ingresa al ciclo como succinil CoA
En los rumiantes, los microorganismos del
rumen producen por fermentación ácidos
grasos volátiles (AGV) a partir de los alimentos
ingeridos.
• El AGV producido mayormente por la
fermentación es propionato (3C), que mediante
dos reacciones produce succinil CoA (fig. 4).
• La succinil CoA ingresa al ciclo de Krebs, donde
se transforma en malato (fig. 1, reacciones 5,
6 y 7) que puede salir de la mitocondria por
transportadores específicos.
Figura 4. Producción de succinil CoA a partir de
propionato. El propionato generado en la fermentación
ruminal se transforma en succinil CoA, con consumo
de 3 ATP.
• En el citoplasma el malato es convertido en
oxalacetato y este en PEP, a través de las
reacciones conocidas como rodeo metabólico.
El rodeo permite saltear la reacción irreversible

de piruvato a PEP. A partir del PEP las células
del hígado pueden sintetizar glucosa (ver
glucogénesis).
7. Regulación del ciclo de Krebs
La regulación del ciclo, como la de las vías
metabólicas en general, permite adecuar su
actividad a las necesidades celulares momentáneas.
• La principal molécula que abastece al ciclo
de Krebs es la acetil CoA, pero también
es abastecido a nivel de cualquiera de sus
intermediarios.
• Como consecuencia de las múltiples reacciones
de abastecimiento, el ciclo de Krebs es regulado
tanto a nivel de la reacción que produce acetil
CoA como a través de reacciones propias del
ciclo.
7. 1. Regulación de la síntesis de acetil CoA
La enzima PDH cataliza la transformación de
piruvato en acetil CoA (fig. 2). Esta reacción es
un punto clave de regulación del ciclo porque la
acetil CoA es la principal molécula abastecedora.
La PDH es regulada alostéricamente y también
por modificación covalente (fig. 5).
• La regulación alostérica está dada por la
relación ATP/ADP, NADH.H+/NAD+ y acetil
CoA/HSCoA. El ATP es un modulador negativo
de la PDH y el ADP un modulador positivo.
• La regulación por modificación covalente se da
por fosforilación/desfosforilación de la PDH,
concretamente de la subunidad E1 (fig. 5).Una
quinasa fosforila y una fosfatasa desfosforila un
residuo de serina del sitio activo de esa enzima.
A su vez, la quinasa también está regulada
alostéricamente por ATP, su modulador
positivo. Cuando aumenta la concentración de
ADP se desfosforila la PDH y pasa a su forma
activa (fig. 5).
• La actividad del complejo PDH también
es modulada negativamente a nivel de la
subunidad E2 por alta concentración de acetil
77
CoA, y a nivel de la subunidad E3 por alta
concentración de NADH.H+.
Figura 5. Regulación de la actividad de la piruvato
deshidrogenasa por modificación covalente. La
fosforilación/desfosforilación de un residuo serina de la
subunidad E1 inactiva/activa a la enzima. La quinasa que
fosforila la serina es activada por ATP, de manera que
cuando hay suficiente ATP se inactiva la PDH. Cuando la
relación ATP/ADP baja, la actividad fosfatasa remueve el
fosfato de la PDH y la convierte en la forma activa.
7. 2. Regulación del ciclo a través de la
enzima citrato sintasa
La actividad citrato sintasa (fig. 3, reacción 1)
está regulada por sus sustratos: la acetil CoA y el
oxalacetato. El ATP es un modulador alostérico
negativo de esta enzima que aumenta la KM por
la acetil CoA. Cuando aumenta la concentración
de NADH.H+, también disminuye la actividad de
esta enzima.
7. 3. Regulación de las deshidrogenasas NAD+
Los pasos catalizados por las deshidrogenasas
NAD+ dependientes (reacciones 3, 4 y 8, fig. 3)
regulan la velocidad del ciclo según la relación
NADH.H+/NAD+. De esta forma, si desciende
la concentración del cofactor de estas enzimas,
el NAD+, la actividad de las deshidrogenasas
desciende. A su vez, el ATP es un modulador
negativo de estas enzimas y el ADP es un
modulador positivo (fig. 6).
78

+ Observe que hay un principio unificador en la regulación: cuando la concentración de ATP celular
es alta se reduce su producción, y viceversa (fig. 6).

Figura 6. Regulación del ciclo de Krebs. La piruvato deshidrogenasa es inhibida alostéricamente cuando son
altas las relaciones ATP/ADP, NADH.H+/NAD+ y acetil CoA/HSCoA. La baja disponibilidad de NAD+ enlentece
los tres pasos catalizados por deshidrogenasas dependientes de ese cofactor.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Identificar la relación del ciclo de Krebs con diferentes vías metabólicas.

• Explicar la reacción de formación de la principal molécula abastecedora del ciclo.

• Fundamentar la relación entre el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria.

• Argumentar sobre la necesidad de la regulación en múltiples reacciones.

• Establecer la “lógica” de la regulación enzimática que controla el ciclo.

 79

Fotosíntesis

En la Fase luminosa la energía de los fotones permite la fotólisis del

agua y la generación de ATP y poder reductor (NADPH.H). Estas
moléculas son necesarias para la Fase de fijación del CO2, en la que a
través del Ciclo C3 se producen glúcidos, como la glucosa.
80
 81

11. FOTOSÍNTESIS
S. Signorelli, M. Sainz y J. Monza
Revisado por la Dra. Mariam Sahrawy,
Depto. de Bioquímica y Biología Molecular y Celular de Plantas.
Consejo Superior de Investigaciones Científicas, España.

1. La fotosíntesis en eucariotas tiene lugar

en los cloroplastos

Las plantas, algas y cianobacterias mediante

la fotosíntesis producen sustancia orgánica
a partir de moléculas inorgánicas: son
organismos autótrofos. En los eucariotas,
Figura 1. Estructura del cloroplasto. A. Esquema de
plantas y algas, este proceso tiene lugar en los un cloroplasto. B. Microscopía de trasmisión de un
cloroplastos. cloroplasto.

• En el parénquima clorofiliano de hojas y tallos

verdes hay cloroplastos en un número variable
entre 25 y 100 por célula.
• Los cloroplastos tienen dos membranas: la
externa, que separa el espacio intermembrana
del citosol, y la interna, que separa ese espacio
del estroma (fig. 1).
• En el estroma ocurre la fijación de CO2, que es
la fase de la fotosíntesis en la que se sintetizan
los glúcidos.
• Las granas están formadas por vesículas
membranosas llamadas tilacoides, que se
relacionan entre sí por las láminas intergrana
(fig. 1). En la membrana de los tilacoides y
en las intergranales, donde se encuentran
los pigmentos, ocurre la fase luminosa de la
fotosíntesis.
• Los cloroplastos son organelos semiautónomos
debido a que tienen en el estroma entre 20 y 60
copias de ADN y ribosomas. Esto hace posible
que puedan sintetizar proteínas relacionadas
con la fotosíntesis, como la subunidad mayor
de la enzima rubisco (ribulosa 1,5 bisfosfato
carboxilasa).
• En las cianobacterias, que son procariotas,
la fase luminosa ocurre en la membrana
celular, y la fijación de CO2, en el citoplasma.
2. En la fotosíntesis se distinguen dos
fases: la luminosa y la de fijación de CO2
La fotosíntesis es un proceso de óxido-reducción
en el cual el H2O aporta los electrones para
la fijación y reducción del CO2 con el que se
producen azúcares (CH2O)n, y se libera O2.
Desde el punto de vista energético el proceso es
endergónico y la energía proviene de la luz.
2. 1. Fase luminosa
Esta fase se da solo en presencia de luz. En
ella participan pigmentos, transportadores
de electrones y enzimas, localizados en la
membrana tilacoidal. Los productos de la fase
luminosa son el NADPH.H+ y el ATP, ambos
necesarios para la fase de fijación de CO2.
Además se produce O2 que, si bien es consumido
en parte por las plantas en la respiración,
mayormente se libera al medio.
2. 1. 1. Los pigmentos se excitan con fotones
Los fotones, o cuantos de luz, son cantidades
discretas de energía que se propagan como
ondas. La luz visible corresponde a la región del
espectro electromagnético comprendida entre
400 y 700 nm (fig. 2). Dentro de esta región los
pigmentos fotosintéticos absorben cantidades
particularmente altas de fotones.
82
Figura 2. Espectro electromagnético. Se representan las regiones del espectro y sus longitudes de onda (λ). El
espectro visible se sitúa entre 400 y 700 nm. Observe que la λ es inversamente proporcional a la energía.
• Según la longitud de onda (λ), los fotones
tienen diferente energía: a menor λ, mayor
energía. De esta forma la energía decrece desde
la región violeta a la roja (fig. 2).
• Los pigmentos, como las clorofilas a y b
(fig. 3), carotenos, xantofilas, ficoeritrinas y
ficocianinas, captan fotones porque tienen
electrones fácilmente excitables. La excitación
consiste en que los electrones más externos, al
absorber la energía de un fotón, pasan desde
un estado basal a un estado excitado de mayor
energía.
Figura 3. Molécula de clorofila. La absorción de
fotones ocurre en la región del tetrapirrol. La cadena
hidrofóbica facilita el anclado a la membrana tilacoidal.
Según el -R sea un metileno (-CH3) o un aldehído
(-COH), será la clorofila a o b respectivamente.
• Los electrones excitados se estabilizan al volver
al estado basal con la liberación de la energía
absorbida (fig. 4). La energía liberada puede:
a. Disiparse como calor (relajación).
b. Disiparse como luz emitiendo un fotón con
menor energía (fluorescencia).
c. Transferirse a otra molécula adyacente
(transferencia de energía).
d. Producir la transferencia del electrón
previamente excitado a una molécula
adyacente, que se reduce (transferencia de
carga o fotoquímica).
Figura 4. Excitación-vuelta al estado basal de un
electrón. La excitación de un electrón consiste en el
pasaje a un orbital molecular de mayor energía, con el
aporte de energía de un fotón (h.ν). Al volver al estado
basal el electrón libera la energía absorbida (ε).

2. 1. 2. Los pigmentos agrupados en antenas
absorben fotones en todo el espectro
visible
Cada pigmento tiene máximos de absorción de
luz con longitudes de onda características (fig. 5).
De esta forma los diferentes pigmentos absorben
fotones de todo el espectro visible.
Figura 5. Espectros de absorción de pigmentos
fotosintéticos. La diversidad de pigmentos de las
antenas permite la absorción de fotones en todo el
rango del espectro visible.
2. 1. 3. Cada antena rodea a un centro de
reacción
Los pigmentos, clorofilas, xantofilas y carotenos,
entre otros, se agrupan en la membrana tilacoidal
en estructuras llamadas antenas o complejos
antena, formados por unas 200-400 moléculas.
• La captación de energía comienza cuando un
pigmento de la antena es excitado por un fotón.
Esto desencadena la excitación-vuelta al estado
basal entre pigmentos adyacentes de la antena
hasta el centro de reacción (fig. 6).
• El centro de reacción del fotosistema,
cuando es excitado, pierde un electrón (fig.
6). Este electrón es captado por un aceptor
(transferencia de carga), donde comienza una
cadena de trasporte de electrones.
• La transferencia de energía desde la antena
al centro de reacción se realiza en 10-10 seg
83
con una pérdida mínima de energía. Para la
transferencia de energía es determinante el
ordenamiento preciso de los componentes
de la antena y del centro de reacción en la
membrana de los tilacoides.
Figura 6. Antena y centro de reacción. Un fotón excita
a un electrón de un pigmento de la antena. La energía
se transfiere de una molécula a otra (flechas) hasta el
centro de reacción. Cuando se excita la molécula de
clorofila del centro de reacción, se oxida: pierde un
electrón.
2. 1. 4. En la fase luminosa se produce ATP
y NADPH.H+
Las antenas, centros de reacción y transportadores
de electrones situados en la membrana tilacoidal
conforman dos unidades funcionales de la fase
luminosa: el fotosistema I (PSI) y el fotosistema
II (PSII).
• Si un electrón de un pigmento de la antena
del PSII se excita, cuando vuelve al nivel basal
excita a un electrón del pigmento contiguo por
transferencia de energía (fig. 6). Esto ocurre
hasta la excitación del centro de reacción
(P680), que pierde un electrón y queda como
radical catiónico (con carga +). El electrón
perdido por el P680 es captado por la feofitina,
una clorofila sin Mg2+, y es transferido a través
de una cadena de transporte electrónico hasta
P700, centro de reacción del PSI (fig. 7).
• El P680 necesita un electrón para llenar el
"hueco electrónico" que se generó. Ese electrón
84

lo obtiene del agua, que por fotólisis da 2H+, 2
e- y oxígeno (fig. 7).
• El O2 generado se libera al medio y es utilizado
como aceptor final de electrones en la cadena
respiratoria de plantas y animales. En plantas,
si bien el consumo de O2 ocurre durante el
día y la noche, es muy bajo en relación al que
producen.
• Cuando un fotón excita a un electrón de un
pigmento antena del PSI, ocurre lo mismo que
en la antena del PSII. Se da una transferencia
de energía desde los pigmentos de la antena
hasta el centro de reacción P700 (fig. 7), que
se oxida y queda como radical catiónico (con
carga +).
• El electrón liberado por el P700 es captado por
un aceptor primario, diferente al del PSII, y
pasa por transportadores de electrones hasta
reducir el NADP+ a NADPH.H+ (fig. 7). Observe
que ocurre un flujo de electrones desde el H2O
hasta el NADP+.
• A través de sucesivas reacciones redox los
electrones pierden gradualmente energía,
que es utilizada para generar un gradiente
protónico capaz de sintetizar ATP. Este
transporte de electrones se denomina “flujo no
cíclico” porque parten del H2O y terminan en el
NADPH.H+ (fig. 7).
• Cuando la cantidad de NADPH.H+ es alta
ocurre el “flujo cíclico de electrones” porque
los electrones del P700 llegan a la ferredoxina
pero en lugar de derivar al NADP+ vuelven al
P700 (fig. 7). De esta forma se sintetiza ATP
por fotofosforilación cíclica, pero no se produce
NADPH.H+ ni se libera oxígeno. Esta vía de
síntesis de ATP es minoritaria respecto del que
se produce por fotofosforilación no cíclica.
2. 1. 5. La energía de los fotones genera un
gradiente protónico que produce ATP
La energía liberada por los electrones entre el
PSII y el PSI es utilizada para bombear H+ contra

Figura 7. Diagrama Z: una representación del flujo de electrones por los fotosistemas. Los electrones del H2O pasan al P680
—centro de reacción del PSII— y desde este, a través de una cadena de transporte de electrones, al centro de reacción del PSI
(P700) donde se había generado un hueco electrónico. La energía liberada por los electrones en la cadena de transportadores
se usa para bombear H+ y generar ATP (fotofosforilación acíclica). Los electrones del centro de reacción P700 reducen al
NADP+. El flujo cíclico de electrones (P700, ferredoxina reducida y vuelta al P700) genera ATP (fotofosforilación cíclica)
pero no NADPH.H+
 85

Figura 8. Síntesis de ATP cloroplástico. La energía liberada por los electrones es utilizada para bombear H+
desde el estroma al espacio tilacoidal, lo que genera un gradiente electroquímico. Cuando los H+ se muevan a
favor del gradiente a través del complejo CF0, la ATPasa (CF1) fosforila el ADP a ATP.

gradiente electroquímico. El bombeo ocurre la mitocondria los H+ pasan desde el espacio

desde el estroma hacia el interior de los tilacoides intermembrana a la matriz (de “afuera” hacia
(fig. 8) a través de una membrana impermeable “adentro”), con la ATPasa dirigida hacia la
a H +. matriz, mientras que en los cloroplastos pasan
desde el espacio intratilacoidal hacia el estroma
• Como consecuencia del bombeo de H+ hacia el
(de “adentro” hacia “afuera”), con la ATPasa
interior de los tilacoides, el estroma se alcaliniza
dirigida hacia el estroma.
(pH > 8) y se acidifica el espacio intratilacoidal
(pH ≈ 5). El potencial electroquímico a ambos
lados de la membrana tilacoidal hace que los 3. Fase de fijación de CO2
H+ pasen desde el espacio intratilacoidal al
estroma a través de los canales protónicos CF0 La fijación de CO2 ocurre en el estroma del
(fig. 8). cloroplasto a través de un proceso reductivo
y endergónico que consume poder reductor
• La energía liberada por los H+ permite la
(NADPH.H+) y energía (ATP) producidos en la
fosforilación del ADP, que rinde ATP. Este
fase luminosa.
proceso se conoce como fotofosforilación.
• El CO2 ingresa a la planta a través de los
• La disposición de los transportadores de
estomas limitados por células oclusivas que
electrones y de la ATPasa en la membrana
pueden aumentar o disminuir el grado de
tilacoidal hace que el ATP y el NADPH.H+ se
apertura-cierre (fig. 9) y definir la magnitud
generen en el estroma (fig. 8), donde serán
del intercambio de gases: O2, CO2 y vapor de
consumidos en la fijación de CO2.
H2O.

+ Observe que el mecanismo de síntesis de • El CO2 que ingresa a la célula es fijado a través
ATP en mitocondrias y cloroplastos se da por de distintas estrategias, según la planta sea C3,
la generación de un gradiente protónico. En C4 o CAM (Crassulacean Acid Metabolism).
86

- RuBP es un compuesto de 6 C que sin liberarse

de la enzima origina dos moléculas de ácido 3
fosfoglicérico (3 C), al que se debe el nombre de
ciclo C3.

• La estequiometría del ciclo, definida para

Figura 9. Estomas de hojas de lotus. Se indican las
células oclusivas y el estoma (130 X). Laboratorio de
Bioquímica, Facultad de Agronomía.
3. 1. Ciclo C3 o ciclo de Calvin y Benson:
conversión del CO2 en glúcidos
La energía y el poder reductor generados en la
fase luminosa se usan para la conversión del CO2
en glúcidos a través del ciclo de Calvin (fig. 10).
Este ciclo ocurre en el estroma del cloroplasto,
donde se encuentran, además de las enzimas que
catalizan sus reacciones, el ATP y el NADPH.H+
necesarios (fig. 10).
que se produzca glucosa y se regenere la
RuBP, se logra a partir de 6 CO2. Para esto
son necesarias 6 RuBP, que con 6 CO2 forman
12 moléculas de 1,3 fosfoglicerato (1,3PGA)
con un consumo de 12 ATP (fig. 10). Para
reducir las 12 moléculas de 1,3 PGA a 12
gliceraldehído 3 P (GA3P) se requieren 12
NADPH.H+ (fig. 10). Considere que:
a. El ciclo se cierra a partir de 10 GA3P, que
regeneran 6 RuBP, con consumo de 6 ATP
(10 GA3P x 3C = 30C y 6 RuBP x 5C =
30C).

El CO2 se une a la ribulosa 1,5 bisfosfato (RuBP) b. La glucosa se sintetiza a partir de 2

por acción de la enzima rubisco (ribulosa GA3P (6C). Observe que las reacciones
bisfosfato carboxilasa-oxigenasa), que constituye involucradas en la síntesis de glucosa en
aproximadamente el 50 % de las proteínas del el estroma del cloroplasto son iguales a las
cloroplasto. El producto de la condensación CO2 que ocurren en la glucogénesis.

Figura 10. Ciclo C3 o Calvin y Benson. A la derecha del nombre de cada molécula se indica la cantidad de C y abajo
y entre paréntesis, el total de C para esta estequiometría. Las reacciones ocurren en el estroma; el ATP y el NADPH.
H+ consumidos son productos de la fase luminosa. La D3P, una triosa fosfato, es transportada al citoplasma.

c. En el estroma del cloroplasto la glucosa se
acumula como almidón.
d. La dihidroxicetona 3 P (D3P) es
transportada al citosol, donde puede
abastecer a la glucólisis o derivar a la
síntesis de sacarosa (fig. 10).
Las células fotosintéticas para mantener su
metabolismo consumen glúcidos que ellas
sintetizan. Sin embargo, células no fotosintéticas,
como las del floema, meristemo y parénquima
no clorofiliano, dependen de los glúcidos que les
llegan desde los tejidos fotosintéticos.
+ Observe que los vegetales, como individuos,
son autótrofos, pero no todas las células producen
las moléculas con las que se nutren.
3. 2. La rubisco puede carboxilar u oxi-
genar a la RuBP
La enzima rubisco está formada por 16
subunidades, 8 mayores (55 kDa) codificadas
en el ADN del cloroplasto y 8 menores (14 kDa)
codificadas en el ADN nuclear.
• La rubisco tiene dos sustratos, el CO2 y el O2,
que se unen en el mismo centro catalítico, de
manera que la enzima cataliza la carboxilación
o la oxigenación de la RuBP. De ahí su nombre
ribulosa 1,5 bisfosfato carboxilasa - oxigenasa.
• Cuando la enzima actúa como carboxilasa, fija
CO2 a la RuBP y comienza el ciclo C3. Cuando
actúa como oxigenasa, oxigena a la RuBP y
da lugar a la fotorrespiración (fig. 11), que a
diferencia de la respiración no produce ATP
sino que lo consume.
Figura 11. Fotorrespiración y asimilación de CO2.
La rubisco actúa como carboxilasa y fija CO2 (Ciclo
C3), o como oxigenasa y da lugar a la fotorrespiración
(Ciclo C2).
87
• La afinidad de la rubisco por el CO2 es mayor
que por el O2, con KMCO2 = 12 µM y KMO2 = 250
µM.
• En condiciones normales de presión parcial
de O2 y CO2, hasta el 50 % del carbono
fijado por fotosíntesis puede perderse por
fotorrespiración. Este proceso reduce la
eficiencia fotosintética de algunas plantas.
• La capacidad oxigenasa de la rubisco no se ve
como un mecanismo útil para la planta, porque
desde el punto de vista de la producción
de biomasa no resulta en un beneficio: la
fotorrespiración no fija CO2 y gasta ATP.
Sin embargo, como se verá, la función de la
fotorrespiración tiene otra interpretación en
condiciones de estrés ambiental.
• Mediante ingeniería genética se logró
disminuir la fotorrespiración en plantas de
tabaco y se observó que toleraban menos la alta
intensidad lumínica por no poder eliminar el
exceso de poder reductor (NADPH.H+).
• En condiciones experimentales, cuando
las plantas C3 crecen en una atmósfera
enriquecida en CO2, por ejemplo a 700 ppm,
la fotorrespiración no es detectable porque la
rubisco se satura con CO2.
3. 3. Ciclo C4 o de Hatch-Slack: una estra-
tegia que minimiza la fotorrespiración
Paspalum, maíz, caña de azúcar y “sorgo dulce”
tienen una estrategia de fijación de CO2 que
minimiza la fotorrespiración. Estas plantas
tienen una vía metabólica conocida como ciclo
C4, que ocurre en el citosol de las células del
mesófilo, donde el CO2 es fijado por la enzima
PEP carboxilasa, que no oxigena a la RuBP. En
los cloroplastos de las células de la vaina opera el
ciclo C3, que se abastece del CO2 liberado por el
ciclo C4 (fig. 12).
• Las plantas C4 tienen una anatomía de hoja
denominada Kranz (fig. 12), que si bien es
característica de ellas, no es única. En las
células del mesófilo la fijación de CO2 ocurre
88
por la PEP carboxilasa, y en las de la vaina, por
la rubisco.
Figura 12. Corte trasversal de hoja de Paspalum
notatum, una gramínea nativa C4. Se indican las
células del mesófilo (M) donde ocurre el ciclo C4 y
las células de la vaina (V) donde ocurre el ciclo C3.
Laboratorio de Botánica, Facultad de Agronomía.
• En las células del mesófilo la PEP carboxilasa
(PEPc) carboxila al fosfoenolpiruvato (PEP)
que se transforma en oxalacetato (OAA) de 4C,
que le da el nombre al ciclo (fig. 13).
• El OAA se transforma en malato (o en
aspartato), que pasa a la célula de la vaina
donde hay cloroplastos con rubisco. En la
célula de la vaina el malato es decarboxilado,
rinde CO2 y piruvato (fig. 13). El CO2 es usado
por la rubisco para carboxilar a la RuBP y dar
comienzo al ciclo C3 (fig. 13) y el piruvato
vuelve a la célula del mesófilo, donde con gasto
de ATP regenera el PEP “cerrando” el ciclo.
Figura 13. Ciclo C4. El CO2 se une al PEP por acción
de la enzima PEP carboxilasa. El producto de 4C
(OAA) se reduce a malato que pasa a la célula de la
vaina, donde por un lado abastece de CO2 al ciclo C3 y
por otro da piruvato que regenera el PEP.
• La concentración de CO2 en las células de la
vaina llega a 2000 ppm, unas seis veces más
que en la atmósfera (330 ppm). Así minimizan
la actividad oxigenasa de la rubisco, por lo que
la fotorrespiración no es evidente.
• Esta estrategia hace a las plantas C4 más
eficientes que las C3 si se relaciona fotón
absorbido con CO2 fijado, ambas en su condición
óptima. En las plantas C4 la condición óptima
se caracteriza por requerir alta cantidad de luz
y elevada humedad y temperatura.
3. 4. Plantas CAM
Las crasuláceas, cactáceas, bromeliáceas y
orquídeas son plantas CAM (Crassulacean Acid
Metabolism), adaptadas a condiciones extremas
de temperatura y sequía (fig. 14).
• Durante la noche el CO2 ingresa por los
estomas, que están abiertos sin restricción
debido a que no hay riesgo de pérdida de agua
por evapotranspiración. El CO2 es usado por
la PEPc para carboxilar al PEP, que produce
OAA (fig. 14), y este se transforma en malato
que se almacena en vacuolas de células del
parénquima.
• Durante el día, cuando se genera ATP y
NADPH.H+, el malato se descarboxila y
suministra CO2 a la rubisco que cataliza la
segunda carboxilación, en los cloroplastos. Así
se pone en marcha el ciclo C3 (fig. 14), común a
las plantas C3, C4 y CAM.
• El piruvato generado por descarboxilación del
malato regenera el PEP con consumo de ATP y
cierra el ciclo C4.
• Como el CO2 liberado por la descarboxilación
del malato y la PEPc están en el mismo
compartimento, si la enzima no estuviera
regulada, se generaría un ciclo fútil
carboxilación-descarboxilación. Pero la PEPc
durante el día está inhibida por modificación
covalente mediante la fosforilación de un
residuo de serina.
• En general las plantas CAM son facultativas;
es decir, tienen metabolismo CAM en

determinadas condiciones ambientales y C3 en
otras. Es más, es común que en determinados
momentos del día las plantas CAM funcionen
como C3. Si bien las plantas CAM son
características de regiones con climas extremos,
su distribución geográfica está generalizada,
probablemente por la flexibilidad metabólica
que tienen.
Figura 14. Fijación de CO2 por una planta CAM. El
CO2 ingresa por los estomas, abiertos durante la noche,
y se fija como grupo carboxilo del oxalacetato (OAA)
y se acumula en la vacuola como malato. Durante el
día el ATP y el NADPH.H+ hacen posible la fijación del
CO2 aportado por el malato, a través del ciclo C3. En las
plantas CAM la fijación de CO2 está separada tempo-
ralmente; las dos carboxilaciones se dan en la misma
célula.
+ Observe que el ciclo C3 es común a todos
los tipos fotosintéticos, porque las plantas C4
y las CAM presentan ciclo C3 responsable de la
fijación “secundaria” de CO2.
Figura 15. Activación de la rubisco. Cuando se alcaliniza el estroma, se activa la rubisco activasa, enzima que
remueve la RuBP del sitio activo de la rubisco. El residuo Lys del sitio activo se desprotona y carbamila, y la
rubisco pasa a la forma activa.
89
4. La fijación de CO2 está regulada
La regulación de la fijación de CO2 se da a
dos niveles: uno, que afecta la cantidad de
determinadas enzimas, y otro, la actividad de
las enzimas. Un ejemplo de enzima regulada por
ambos mecanismos es la rubisco, que se describe
a continuación.
4. 1. Regulación por cantidad de enzima
La cantidad de rubisco aumenta como
consecuencia de la luz debido a que se induce la
expresión de genes cloroplásticos que codifican
para la subunidad mayor de la enzima, donde
está el sitio activo.
4. 2. Regulación de la actividad de la enzima
• La actividad óptima de la rubisco es en torno a
pH 9. Cuando hay luz el pH del estroma se hace
alcalino por el bombeo de H+ hacia el espacio
intratilacoidal, que se da con cotransporte de
Mg2+ para regular el gradiente eléctrico (fig. 8).
De esta forma, en presencia de luz, cuando hay
transporte de electrones y bombeo de H+, se logra
el pH óptimo de la enzima.
• La activación de la rubisco por modificación
covalente se debe a que un -NH3+ de un residuo de
lisina del sitio activo se desprotona y carbamila,
una forma inactiva de la enzima (fig. 15). Para
la activación es necesaria la participación de la
rubisco activasa que saca del sitio activo de la
rubisco a la RuBP, que lo ocupa cuando la enzima
está en su forma inactiva (fig. 15).
90
• Otra forma de regular la actividad de enzimas
del ciclo de Calvin es a través del estado redox
de grupos sulfhidrilos (-SH) que se encuentran
en los -R aminoacídicos. Los electrones de la
cadena de transporte electrónico fotosintética
movidos por la luz reducen la ferredoxina, y
esta la tiorredoxina, por acción de la enzima
tioredoxina-ferredoxina-oxidoreductasa (fig. 16).
Así se reducen los enlaces disulfuro (-S-S-) de la
tiorredoxina y se forman -SH (fig. 16). Finalmente
la tiorredoxina se oxida y reduce a un enlace -S-
S- de la enzima, que pasa de su forma inactiva
(oxidada) a la forma activa (reducida).
Figura 16. Activación de enzimas por el sistema
tiorredoxina-oxidorreductasa. Cuando la ferredoxina
(Fd) reducida se oxida, la tiorredoxina (Tx) se reduce, y
cuando esta se reoxida, se reduce a un enlace disulfuro
(-S-S-) a sulfhidrilos (-SH), y la enzima se activa.
5. Algunos herbicidas inhiben el transporte
fotosintético de electrones
• Los derivados de la urea, como el Monurón
o CMU (3-p-clorofenil-1,1-dimetilurea)
y el Diurón o DCMU (3 [3,4 diclorofenil]
1,1-dimetilurea), se aplican en el suelo, llegan
a las hojas por el xilema e inhiben el transporte
de electrones fotosintético (fig. 17).
• Los herbicidas, a base de triazinas (Simazina y la
Atrazina), y otros, a base de uracilos sustituidos
(Bromacil e Isocil), desplazan la forma oxidada de
la PQ y ocupan el sitio de unión específico de QB
del PSII. Como los herbicidas no son capaces de
aceptar electrones, las QA no puedan oxidarse y se
bloquea el flujo de electrones (fig. 17).
• Otros herbicidas como el Paraquat
(metilviológeno) actúan capturando electrones
que van desde la ferredoxina al NADP+ (fig. 17).
En las últimas décadas, muchas especies se han
vuelto resistentes a las triazinas, lo que en parte se
debe a una mutación en el gen cloroplástico que
codifica el polipéptido D1 que forma parte del PSII.
En los genotipos salvajes este polipéptido se une
tanto a QB como a las triazinas; en cambio en los
mutantes D1 se puede unir a QB pero no a triazinas
Figura 17. Acción de herbicidas sobre el transporte
de electrones fotosintético. Se indican los sitios de
inhibición de algunos herbicidas. Observe que la
inhibición impide que se forme ATP y NADPH.H+,
necesarios para la fase de fijación CO2.
Al finalizar la preparación del tema será
capaz de:
• Diferenciar la antena del centro de reacción
según la estructura y función de cada uno.
• Establecer una relación entre fotones, agua y
generación de ATP y NADPH.H+.
• Caracterizar los mecanismos de síntesis de
ATP por fotofosforilación.
• Explicar el papel del H2O en la síntesis de
glucosa.
• Justificar por qué las plantas consumen
menos O2 del que producen.
• Caracterizar funcionalmente la enzima rubisco.
• Establecer el patrón común en la fijación de
CO2 por las plantas C3, C4 y CAM.
• Diferenciar la fijación de CO2 de la fotorrespiración.
• Fundamentar cómo las plantas C4 minimizan
la fotorrespiración.

12. METABOLISMO DE LÍPIDOS:β oxidación,
síntesis de ácidos grasos y ciclo del glioxílico
Revisado por la Dra. Ana Cantera, Laboratorio de enzimas proteolíticas,
1. Triacilglicéridos : reserva energética
El grupo de moléculas llamadas lípidos
comprende, además de ácidos grasos y
triacilglicéridos (TAG), a los fosfoglicéridos,
ceras, esfingolípidos, colesterol y derivados.
En este capítulo se considerará el catabolismo
y anabolismo de los ácidos grasos, que forman
parte de los TAG, fosfolípidos y ceras.
• En los mamíferos entre el 5 y 25% de su peso
corporal son lípidos y el 90% de ellos están
como TAG.
• En las plantas los TAG no tienen relevancia
como fuente de energía; se usan como
reserva de ácidos grasos para sintetizar
fosfolípidos de membranas, y en semillas de
oleaginosas en germinación, como fuente de
carbono para la síntesis de glúcidos.
• Las demás moléculas lipídicas cumplen roles
fisiológicos y metabólicos fundamentales, pero
no son preferencialmente energéticos.
Figura 1. Ingreso del glicerol a la glucólisis. El glicerol se oxida y fosforila a expensas de ATP y rinde
dihidroxicetona 3P, que por una isomerasa se transforma en gliceraldehído 3P.
91
O. Borsani, S. Signorelli y J. Monza
Facultad de Ciencias, UdelaR.
2. La digestión de los triglicéridos rinde
ácidos grasos y glicerol
En los animales la digestión de los TAG se
realiza en el tracto digestivo por acción de
las lipasas, enzimas que los hidrolizan. En las
células del intestino se sintetizan de nuevo
TAG, que son transportados a los tejidos como
partículas lipoproteicas.
• En los tejidos, los TAG que provienen de grasas
y aceites ingeridos o del tejido adiposo donde
se reservan, se hidrolizan en glicerol y ácidos
grasos que se oxidan y son fuente de energía.
• Los ácidos grasos son degradados por la β
oxidación, una vía que suministra poder
reductor a la cadena respiratoria y abastece
de acetil CoA al ciclo de Krebs, con la
consecuente formación de ATP.
• El glicerol se metaboliza a través de la
glucólisis, previa transformación en
dihidroxicetona 3P (fig. 1).
92
3. Oxidación de los ácidos grasos
En los animales la β oxidación ocurre
principalmente en mitocondrias y menos
en peroxisomas, mientras que en las células
vegetales ocurre en peroxisomas. Más allá de la
localización el proceso en general es el mismo.
3. 1. Activación de ácidos grasos y
transporte a mitocondria
• Antes de ser oxidados los ácidos grasos se
activan mediante unión a la HSCoA, generando
acil CoA (ácido graso activado). Esta reacción
ocurre en el citoplasma (fig. 2).
• En las células animales los ácidos grasos
activados son transportados a la mitocondria
por una proteína (acil-carnitina translocasa)
que permite su pasaje a través de la membrana
mitocondrial interna (fig. 2).
• El ácido graso activado unido a la carnitina
(acil-carnitina) es transportado al interior de la
mitocondria donde rinde ácido graso activado
(acil-CoA) y carnitina (fig.2). La carnitina es
trasportada al espacio intermembrana para
unirse a otro ácido graso activado (fig. 2).
3. 2. Los ácidos grasos se catabolizan por
β oxidación
En la matriz mitocondrial el ácido graso activado
participa de reacciones de oxidación que generan
NADH.H+, FADH2 y acetil CoA.
• En la primera reacción de la β oxidación la
acil CoA deshidrogenasa oxida al ácido graso
activado. La oxidación (fig. 9, reacción 1)
ocurre entre el C2 (Cα) y el C3 (Cβ), y se reduce
un FAD. El FADH2 se oxida en la cadena
respiratoria con la consecuente formación de
2 ATP.
• El producto de esta oxidación (2 enoil CoA)
es hidratado (fig. 9, reacción 2) y se genera β
hidroxiacil CoA, con un grupo alcohol en el Cβ.
• La β hidroxiacil CoA es oxidada a β cetoacil
CoA por una enzima que tiene como cofactor
al NAD+, que se reduce a NADH.H+ (fig. 9,
reacción 3). El NADH.H+ se oxida en la cadena
respiratoria, de manera que se forman 3 ATP.
• Por acción de una enzima que incorpora una
HSCoA (fig. 9, reacc. 4) la β cetoacil CoA libera
un ácido graso activado con 2C menos y una
acetil CoA (2C).
• El ácido graso con 2C menos vuelve a ser
oxidado en su Cβ en otra “vuelta” de la β
oxidación. Esto ocurre hasta que todo el ácido
graso se transforma en acetil CoA.
• Una relación ATP/ADP alta inhibe las
deshidrogenasas, lo que resulta en una
regulación negativa por ATP de la β oxidación,
al igual que ocurre en el ciclo de Krebs y en la
glucólisis.
+ Observe que los productos obtenidos después
de una vuelta de la β oxidación son:
a) Una molécula de acetil CoA.
b) Una molécula del ácido graso-CoA con 2C
menos que la molécula inicial.
c) Un NADH.H+ y un FADH2 que se oxidan en
cadena respiratoria forman 5 ATP.
3. 3. A partir del número de C de un ácido
graso se puede calcular cuántos ATP se
forman
• Las vueltas que un ácido graso puede dar en
la β oxidación depende de los carbonos que
tenga; por ejemplo, si tiene 16C podrá dar 7
vueltas. Esto se debe a que en la última vuelta
se liberan 2 moléculas de acetil CoA, que no
pueden ser oxidadas en β oxidación. Así, el
número de vueltas se puede calcular como:
(número de C/2) – 1.
• Como consecuencia de la β oxidación el ácido
graso se transforma en acetil CoA. Si el ácido
graso tiene 16C, se generarán 8 acetil CoA que
pueden ser oxidadas en el Ciclo de Krebs. El
número de acetil CoA se puede calcular como:
(número de C)/2.
 93

Figura 2. Etapas de la degradación de un ácido graso. A. Activación de un ácido graso. La activación consume dos enlaces de
alta energía (ATP a AMP) y rinde un ácido graso activado (acil CoA). B. Transporte de un ácido graso activado a la mitocondria.
El ácido graso activado se une a la carnitina y la acil carnitina es transportada por la translocasa a la matriz mitocondrial. C.
Reacciones de la β oxidación. En cada vuelta se reduce un FAD y un NAD+, coenzimas de deshidrogenasas que se oxidan en la
cadena respiratoria, y se libera un ácido graso activado con 2C menos y una acetil CoA (2C)
94
Cuadro 1. Balance de la degradación total del ácido
palmítico (16C)
• El balance en ATP de la degradación total de un
ácido graso implica llevarlo a CO2 y H2O. Esto
involucra, además de la β oxidación, al ciclo de
Krebs y a la Cadena respiratoria (cuadro 1).
• Los ácidos grasos insaturados también
son degradados por β oxidación, pero se
necesitan dos enzimas diferentes para poder
metabolizarlos. La oxidación de estos ácidos
grasos no va a ser motivo de estudio en el curso.
3. 4. La β oxidación de ácidos grasos impares
produce acetil CoA y propionil CoA
Los ácidos grasos de número impar de carbonos
aparecen en baja proporción en los seres vivos.
De todas formas, en los rumiantes se generan
como consecuencia de la fermentación ruminal
ácido propiónico (3C), importante para estos
animales.
• Los ácidos grasos de número impar de C
se metabolizan en la misma secuencia de
reacciones de β oxidación, pero en la última
vuelta quedan 5C, que por ruptura generan
una molécula de 2C (acetil CoA) y otra de 3C
(propionil CoA).
• El ácido propiónico (3C) generado en los
rumiantes por fermentación se transforma en
propionil CoA, y esta en succinil CoA a través
de una reacción de carboxilación (fig. 3).
Figura 3. Obtención de succinil CoA a partir del
propionil CoA. La reacción es endergónica y se
consumen 2 ATP.
• En el hígado de los mamíferos la succinil CoA
puede tranformarse en malato, que a su vez
por glucogénesis puede generar glucosa.
3. 5. La acetil CoA puede producir cuerpos
cetónicos
La acetil CoA producida por la β oxidación
mitocondrial puede abastecer al Ciclo de Krebs,
pero no es su único destino.
• En las mitocondrias de células del hígado,
algunas moléculas de acetil CoA se convierten
en acetoacetato, β hidroxibutirato y acetona,
compuestos llamados genéricamente cuerpos
cetónicos (fig. 4).
• Los cuerpos cetónicos son transportados por
la sangre al cerebro, músculo y corazón, donde
se convierten de nuevo en acetil CoA y se usan
como fuente de energía (fig. 4).
En ovejas preñadas puede producirse lo que
se conoce como toxemia de la preñez, una
fisiopatía generada por un desorden metabólico
caracterizado por un bajo contenido de azúcar
y una alta acumulación de cuerpos cetónicos en
sangre. Esto se explica por una baja actividad del
Ciclo de Krebs debido a un inadecuado suministro
de OAA derivado de la glucosa u otros precursores
glucogénicos (propiónico, por ejemplo). En
esta situación la acetil CoA producida por la β
oxidación para suplir el déficit energético deriva
en la acumulación de cuerpos cetónicos, tóxicos
a determinadas concentraciones.

Figura 4. Producción de cuerpos cetónicos en
mitocondrias de células del hígado. La acetil CoA se
transforma enzimáticamente a acetoacetato, acetona
y β hidroxibutirato. En el estado metabólico llamado
cetosis los cuerpos cetónicos se producen más rápido
de lo que son consumidos, por lo que el olor a acetona
puede detectarse en el aliento.
4. Biosíntesis de ácidos grasos saturados
Si bien la síntesis de ácidos grasos puede parecer
el “sentido inverso” de la β oxidación, ambas
rutas difieren en las enzimas que intervienen y
en la localización celular.
• La acetil CoA mitocondrial, proveniente de
la degradación de glúcidos por ejemplo, es
transportada al citosol por la lanzadera del
citrato, proceso que involucra una reacción del
Ciclo de Krebs (fig. 5).
• El citrato en el citosol actúa como modulador
positivo de la enzima que cataliza la
95
carboxialicón de la acteil CoA (acetil CoA
carboxilasa). A determinada concentración de
citrato en el citosol se estimula la síntesis de
ácidos grasos.
Figura 5. Lanzadera del citrato. La acetil CoA gene-
rada en la mitocondria es trasportada como citrato al
citoplasma, donde rinde acetil CoA y oxalacetat
• La síntesis de ácidos grasos comienza con la
transformación de la acetil CoA en malonil
CoA (fig. 6). Esta reacción, que consume ATP,
es catalizada por la acetil CoA carboxilasa, que
se activa alostéricamente cuando la relación
ATP/ADP es alta.
• La acetil CoA y la malonil CoA se unen a la
proteína transportadora de acilos (ACP) que
forma parte del complejo enzimático ácido
graso sintasa (AG sintasa) y se liberan 2 HSCoA
(fig. 6, reacción 1).
• El acetil ACP se une al acetilo que resulta de la
descarboxilación del malonil-ACP y se obtiene
un compuesto de 4C: el β cetoacil-ACP (fig. 6,
reacción 2).
• Las tres reacciones siguientes permiten reducir
el grupo cetona del C β del β cetoacil-ACP a
butiril-ACP con poder reductor del NADPH.H+
(fig. 6, reacciones 3, 4 y 5).
• Al butiril-ACP se une otro residuo acetilo
proveniente de la descarboxilación de la
malonil-ACP y se repite el ciclo de reacciones
antes descritas para formar el ácido graso.
96

+ Observe que el ácido graso

crece de a 2 C, por lo que se
puede predecir el número
de vueltas necesarias para
la síntesis de un ácido graso:
para el ácido palmítico (16C)
son necesarios 7 ciclos.

Figura 6. Síntesis de un ácido graso. La malonil CoA que abastece la síntesis de ácidos grasos se produce por
carboxilación de la actil CoA con gasto de ATP. El complejo enzimático ácido graso sintasa (AG sintasa), del que
forma parte la proteína portadora de acilos (ACP), cataliza la síntesis de los ácidos grasos. El acetil CoA y malonil
CoA se condensan al ACP y forman el β cetoacil-ACP. Ese compuesto es reducido (reacción 2), deshidratado
(reacción 3) y nuevamente reducido (reacción 4), y se genera butiril-ACP (4C). En cada vuelta se consume una
malonil CoA y se incrementa de a 2 el número de C del ácido graso.
 97

5. Síntesis de ácidos grasos de cadena

larga e insaturados

Las reacciones de síntesis de un ácido graso

son similares en diferentes organismos. Dos
situaciones particulares a las que se consideran
de manera general son:

• En animales y plantas se requieren enzimas

adicionales para generar una cadena mayor a
16C (palmítico).

• También se requieren enzimas adicionales

(desaturasas) para generar AG insaturados.
Los animales tenemos desaturasas que
generan dobles enlaces hasta el C9, mientras
que las plantas pueden generar instauraciones
más allá del C9. Esos ácidos grasos los tenemos
que ingerir con la dieta: son los esenciales.

• Entre esos AG han tomado importancia:ω

3 (ej. ácido α linolénico) Δ9, 12 y 15. ω 6 (ej.
ácido linoleico) Δ9 y 12, abundante en aceites
de maíz y girasol que contienen 65 % y 70 %
respectivamente. ω 9 (ej. ácido oleico) Δ9,
abundante en el aceite de oliva.
•
6. El ácido glioxílico como fuente de glucosa
En los glioxisomas de semillas de oleaginosas
en germinación, la acetil CoA generada por
la β oxidación se puede incorporar al Ciclo del
glioxílico y generar un intermediario glucogénico:
la succinil CoA (fig. 7).
Figura 7. Ciclo del glioxílico. La primera molécula de
acetil CoA se condensa con el OAA para dar citrato.
El isocitrato da glioxilato y succinato por acción de
la isocitrato liasa. El giloxalato, con una segunda
molécula de acetil CoA, se transforma en malato por
acción de la malato sintasa. A partir del succinato se
puede sintetizar glucosa por glucogénesis.
+ Observe que el Ciclo del glioxílico tiene
similitudes con el ciclo de Krebs, pero se
diferencia en que los 2C de la acetil CoA no se
pierden como CO2. Esto permite la síntesis de
glucosa a partir del succinato producido por el
ciclo del glioxílico.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Describir la activación del ácido graso y la β oxidación.

• Calcular los ATP que se pueden generar a partir de ácidos grasos con diferente número de C.

• Establecer relaciones entre la β oxidación, el Ciclo de Krebs y la Cadena respiratoria.

• Identificar otros destinos de la acetil CoA diferentes al abastecimiento del Ciclo de Krebs.

• Relacionar la degradación de glúcidos con la síntesis de ácidos grasos.

98

13. METABOLISMO DE NITRóGENO:
Asimilación del amonio y Ciclo de la urea
E. Casaretto, P. Díaz, O. Borsani y J. Monza
Revisado por los Dres. Antonio Márquez y Marco Betti, Departamento de Bioquímica
y Biología Molecular de Plantas, Facultad de Química, Universidad de Sevilla, España
1. A partir del suelo las plantas obtienen
nitrato y amonio
El nitrógeno forma parte de aminoácidos,
proteínas, nucleótidos, ácidos nucleicos,
clorofilas y fosfolípidos entre otras biomoléculas.
• Las principales fuentes de nitrógeno para
las plantas son el amonio (NH4+) y el nitrato
(NO3-), este último la forma de nitrógeno
combinada más abundante en el suelo.
• El NO3-, absorbido activamente por las células
de las raíces, debe ser reducido a NH4+ para ser
asimilado (fig. 1).
• En las plantas hay dos tipos de transportadores
para de NO3-, los de baja afinidad (LATS) que
tienen una KM alta (en el rango de mM) y los
de alta afinidad (HATS) que tienen una KM baja
(en el rango de μM).
• El NH4+ también es absorbido activamente
por transportadores específicos y una vez en la
célula se asimila como tal (fig. 1).
Figura 1. Fuentes de nitrógeno utilizadas por las
plantas. El N2 es reducido a NH4+ por la nitrogenasa,
enzima presente en el rizobio, que se denomina
bacteroide cuando está dentro de la célula vegetal. El
NO3- y el NH4+ ingresan a las células epidérmicas de
la raíz mediante transportadores específicos. El NO3-
es reducido a NH4+ en células de las raíces o de otros
órganos de la planta.
99
• Como el NH4+ y el NO3- ingresan por transporte
activo, su absorción decrece con baja presión
parcial de O2 en el entorno radicular; esto
mismo sucede si se aplican inhibidores o
desacoplantes de la cadena respiratoria.
2 El N2 del aire es reducido a NH4+ por
bacterias
El 78% de la atmósfera es N2. Esta molécula no
puede ser utilizada como tal por las plantas ni los
animales porque es muy estable. Sin embargo,
un grupo minoritario de bacterias pueden
reducir el N2 a NH4+ por medio de una enzima,
la nitrogenasa. Este proceso se conoce como
fijación biológica del nitrógeno (FBN).
• Entre las bacterias fijadoras de N2 están los
rizobios que se asocian a leguminosas y otras
que fijan N2 sin asociarse a plantas (fig. 2).
• Los rizobios dentro de las células radiculares
de las leguminosas son capaces de reducir el N2
a NH4+. Por esto, las leguminosas noduladas
por rizobios pueden utilizar tanto el nitrógeno
del suelo como el que proviene del aire que
deriva de la FBN (fig. 1).
• En el Cuadro 1 se presentan ejemplos de la
magnitud de la FBN realizada por algunos
microorganismos con importancia agronómica.
Cuadro 1. Cantidad de nitrógeno fijado por diferentes
bacterias. Las cianobacterias y Azospirillum sp. fijan N2
en vida libre, es decir fuera de la planta. Los rizobios lo
hacen dentro de las células de la planta, en una relación
que se conoce como simbiosis rizobio - leguminosa.
Microorganismo kg/ha año
Cianobacterias 5
Azospirillum 12
Rizobio-soja 90
Rizobio-lotus 100
Rizobio-alfalfa 200
100
Figura 2. Fijadores simbióticos y en vida libre A. Nódulos
inducidos por rizobios en raíces de una leguminosa.
B. Cianobacteria fijadora de nitrógeno en vida libre. El
ejemplar mostrado pertenece al género Anabaena y fue
aislado de arrozales de INIA Treinta y Tres.
• Mediante una reacción fuertemente
endergónica catalizada por la nitrogenasa
el N2 es reducido a NH4+, según se resume a
continuación:
nitrógeno
N2 + 8e- + 8 H+ + 16 ATP g 2 NH4+ + H2 + 16 ADP + 16 Pi
• La nitrogenasa se inhibe a determinadas
concentraciones de nitrógeno combinado
(NO3- o NH4+) en el suelo. Esto se debe a que la
reducción de N2 por FBN es un proceso costoso
energéticamente, de manera que frente a una
fuente de nitrógeno más económica se usa
esta última.
• Los rizobios generan el ATP necesario
para reducir al N2 a partir de moléculas
carbonadas derivadas de la fotosíntesis que
la planta les proporciona. Los rizobios a
su vez le suministran NH4+ a planta. A esta
relación entre individuos de distinta especie
en la que ambos se benefician se denomina
simbiosis.
El nitrógeno limita la productividad de las
plantas, por lo que en agricultura se ha
recurrido al uso de fertilizantes nitrogenados,
como la urea. El uso en exceso de fertilizantes
tiene importantes repercusiones económicas,
medioambientales y para la salud. Por esto,
la FBN tiene connotaciones cada vez más
relevantes en la agricultura sostenible.
3. El nitrato debe ser reducido a amonio
para ser asimilado
La reducción de NO3- a NH4+ es un proceso que
ocurre en dos reacciones consecutivas: una
citoplasmática catalizada por la enzima nitrato
reductasa (NR) que reduce el NO3- a nitrito
(NO2-) y otra plastídica catalizada por la nitrito
reductasa (NiR), que reduce NO2- a NH4+ (fig. 3).
Figura 3. Reducción de NO3- a NH4+. En la reducción
de NO3- a NH4+ participan la nitrato reductasa (NR)
de localización citosólica y la nitrito reductasa (NiR)
de localización plastidial. La fuente de poder reductor
son los cofactores NAD(P)H.H+ y la Fd red.
• La NR utiliza como fuente de poder reductor
el NADH.H+ generado en la vía glucolítica o
el del NADPH.H+ producido en la vía de las
pentosas.
• En hojas la NiR utiliza el poder reductor
aportado por la Fdred generado en la fase
luminosa de la fotosíntesis. En raíces utiliza el
poder reductor del NADPH.H+ generado en la
vía de las pentosas, que reduce la Fd por acción
de una Fd-NADP reductasa.
• Cuando a una planta se le suministra NO3-
aumenta la cantidad y actividad de proteína NR
en hojas y raíces. El aumento de la cantidad de
NR se debe a la síntesis de novo de la enzima.
En plantas este es uno de los ejemplos más
conocidos de inducción de la síntesis de una
enzima en presencia de su sustrato.
• Los niveles de NiR son siempre muy superiores
a los niveles de NR. Eso garantiza que no se
acumule NO2-, que es tóxico.

4. Las aminotransferasas transfieren
grupos aminos
Las enzimas aminotransferasas o transaminasas
catalizan la transferencia del grupo amino del
Cα de un aminoácido al Cα de un cetoácido,
permitiendo sintetizar aminoácidos a partir
de cetoácidos y viceversa (fig. 4 A). Este
tipo de reacción se denomina reacción de
transaminación.
• En una reacción de transaminación (fig. 4 A)
un aminoácido cede su grupo amino al fosfato
de piridoxal (PAL) que lo capta, dando fosfato
de piridoxal amino (PAM), mientras que el
aminoácido se transforma en un cetoácido.
• A su vez, la transaminasa transfiere el grupo
amino del PAM a otro cetoácido que se
transforma en el correspondiente aminoácido y
se regenera el PAL. En la figura 4 B se representa
un ejemplo concreto de transaminación.
• La reversibilidad de las reacciones de
transaminación permite ajustes de acuerdo a
la demanda de aminoácidos.
Figura 4. Transaminaciones. A. Reacción general
de transaminación. Se requiere el cofactor fosfato de
piridoxal (PAL) que capta el grupo amino y queda como
fosfato de piridoxal amino (PAM). B. Transaminación
glutamato - piruvato.
+ Observe que la síntesis de un nuevo
aminoácido implica la degradación de otro
que funciona como dador del grupo amino, y
viceversa (fig. 4).
101
5. El amonio es asimilado mediante el
Ciclo GS/GOGAT
La asimilación de NH4+ consiste en su
incorporación a moléculas orgánicas. En los
tejidos vegetales prácticamente la totalidad del
amonio es asimilado por la enzima glutamina
sintetasa (GS) y la glutamato sintasa (GOGAT),
una amido transferasa (fig. 5).
• La GS cataliza la incorporación del NH4+ al
glutamato para dar glutamina (fig. 5) en una
reacción que requiere ATP. La baja KM de la GS
para el NH4+ asegura su inmediata asimilación,
lo que evita que este ión tóxico quede libre en
la célula.
• A continuación, el grupo amida de la glutamina
es transferido a un α-cetoglutarato y se
obtienen dos moléculas de glutamato (fig. 5).
Esta reacción es catalizada por la GOGAT,
que tiene dos isoformas: la NADH-GOGAT
que utiliza NADH.H+ como fuente de poder
reductor y la Fd-GOGAT, que utiliza Fdred.
+ Observe que un glutamato se genera a
partir de la glutamina y vuelve a aceptar NH4+
cerrando el Ciclo GS/GOGAT. El otro glutamato,
proveniente del α-cetoglutarato, es el resultado
neto de la asimilación de amonio a partir del cual
se sintetizan otros aminoácidos (fig. 5).
• Una vez asimilado el NH4+, el grupo amino del
glutamato es transferido a cetoácidos mediante
las reacciones de transaminación presentadas
en el punto 4.
5. El glifosato inhibe la síntesis de
aminoácidos aromáticos
En plantas, la síntesis de aminoácidos aromáticos
(fenilalanina, triptófano y tirosina) ocurre a partir
de las mismas reacciones, desde el siquimato
(fig. 6). Estos aminoácidos son necesarios para
la síntesis de proteínas y para la producción
de la hormona vegetal ácido indol acético y
antocianinas, entre otras moléculas (fig. 6).
102

Figura 5. Asimilación de amonio. La GS incorpora el amonio al glutamato con gasto de ATP para dar glutamina.
La GOGAT transfiere el grupo amida de la glutamina al α-cetoglutarato, con poder reductor proviene del NADH.
H+ o de la Fdred, y se generan dos moléculas de glutamato. Una aminotransferasa (AT) permite la síntesis de otros
aminoácidos.

• La vía de síntesis de aminoácidos aromáticos

presenta un particular interés porque el
glifosato, principio activo del herbicida
Roundup®, inhibe competitivamente la
enzima 5 enolpiruvato siquimato sintasa 3P
(EPSP sintasa), que cataliza un paso de esa vía.

• La construcción de plantas transgénicas

con resistencia a ese herbicida se basó en la
posibilidad de inhibir a esa enzima con glifosato.

• Las plantas transgénicas llevan una forma del

gen que codifica la EPSP sintasa bacteriana
que no es inhibida por glifosato. Actualmente
se han generado transgénicos con capacidad de
Figura 6. Síntesis de aminoácidos aromáticos. La
metilar el glifosato, lo que determina que no se inhibición competitiva de la enzima EPSP por glifosato
comporte como inhibidor competitivo. impide la síntesis de aminoácidos aromáticos.

6. Los aminoácidos pierden el grupo
amino por desaminación oxidativa
La desaminación oxidativa es un proceso
degradativo de los aminoácidos que consiste
en la pérdida del grupo amino. Un ejemplo
es la desaminación oxidativa del glutamato,
que ocurre en mitocondrias de animales y
plantas, y es catalizada por la enzima glutamato
deshidrogenasa (GDH) que utiliza NAD(P)+
como cofactor (fig. 7).
Figura 7. Desaminación oxidativa del glutamato.
La reacción, catalizada por la enzima glutamato
deshidrogenasa (GDH), tiene como cofactor el
NAD(P)+.
• En los animales, los grupos amino que se
liberan de la desaminación no se utilizan para
la síntesis de nuevos aminoácidos u otros
productos nitrogenados y deben ser excretados.
• Los peces y larvas de batracios, con alta
disponibilidad de agua en el medio, excretan el
amonio como amoníaco, son amonitélicos. Las
aves y reptiles lo excretan como ácido úrico,
son uricotélicos y los mamíferos lo excretan
como urea, son ureotélicos. En las plantas, la
urea es una molécula de reserva de nitrógeno.
• Los microorganismos y plantas poseen la
enzima ureasa, que hidroliza la urea en CO2 y
NH4+, este último es reasimilado por el Ciclo
GS/GOGAT.
7. Ciclo de la urea
El Ciclo de la urea ocurre en animales y plantas
según las mismas reacciones (fig. 8), pero el
significado biológico es diferente.
103
• El NH4+ liberado por desaminación oxidativa
del glutamato es incorporado a una molécula
de CO2 con gasto de 2 ATP, y se produce el
carbamil fosfato. Esta molécula se condensa
con la ornitina y rinde citrulina, que obtiene
otro grupo NH4+ proveniente del aspartato y
rinde succinil-arginina, con gasto de otros 2
ATP. La enzima arginasa permite que el ciclo
se cierre con la liberación de urea (fig. 8).
• La conversión de succinil-arginina en arginina
se logra con la liberación de fumarato, que
ingresa al Ciclo de Krebs.
• La arginina que se genera en el Ciclo de la urea
es la principal forma de almacenamiento de
nitrógeno en plantas, y en semillas constituye
el 40% del nitrógeno.
• En animales, el flujo de nitrógeno a través
del ciclo de la urea varía con la dieta.
Cuando la ingesta de proteínas es elevada, la
utilización de los esqueletos carbonados de los
aminoácidos como fuente de energía da lugar a
un incremento en la producción de urea.
Figura 8. Ciclo de la urea. La desaminación oxidativa del
glutamato libera NH4+, que en los vegetales y animales
ureotélicos forma carbamil fostato, molécula que abastece
el Ciclo de la urea. Este ciclo libera urea y regenera el
aminoácido no proteico ornitina. En las plantas la urea es
hidrolizada por la ureasa y el amonio liberado se asimila.
104

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Diferenciar transaminación de desaminación.

• Relacionar las transaminaciones con la degradación-síntesis de aminoácidos.

• Identificar los requerimientos para que el NO3- y el N2 sean reducidos a NH4+.

• Explicar en qué consiste la asimilación del amonio.

• Diferenciar la función del Ciclo de la urea en plantas y animales.

• Visualizar la magnitud de la FBN en la entrada de nitrógeno a los ecosistemas.

• Establecer relaciones entre el metabolismo del C y N.

 105

14. DUPLICACIÓN DEL ADN

S. Signorelli y J. Monza
Revisado por la Dra. Ana Ramón, Sección Biología Molecular,
Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, UdelaR.

1. La duplicación del ADN es semiconservativa
La duplicación del ADN ocurre de manera similar
en procariotas y eucariotas. El proceso consiste
en generar dos moléculas de ADN iguales entre
sí y a la molécula que les dio origen. Debido a
esto, como las células duplican su ADN antes de
cada división, las células hijas tienen la misma
información y el mismo contenido de ADN. Una
excepción son los gametos, que contienen la
mitad de ADN que la célula madre, son haploides.
• En la duplicación del ADN cada hebra actúa
como molde para la síntesis de una hebra nueva.
Como se muestra en la figura 1, cada hebra
molde (madre) queda junto a una hebra nueva
(hija): la duplicación es semiconservativa.
duplicación tiene unas 245 pb, con cuatro
sitios de unión para la proteína DnaA.
• Otra proteína con actividad helicasa (DnaB)
separa las hebras del ADN y se forma una
burbuja de duplicación (fig. 2).
• En cada burbuja hay dos horquillas de
duplicación (fig.2), de manera que la síntesis
de ADN se da en dos direcciones. En la figura
2 se representa la formación de la burbuja de
duplicación en un cromosoma procariota y se
indican las horquillas de duplicación.

• Meselson y Stahl usando 15N, un isótopo

pesado, demostraron cómo se asocian las
hebras después de la duplicación (fig. 1).

2. Secuencia de eventos durante la

duplicación

La descripción de la duplicación del ADN se

centrará en el modelo bacteriano, que como
proceso general es el similar al que ocurre en
eucariotas. La secuencia de eventos que terminan
con la duplicación del ADN se describe en los
cuatro puntos que siguen.
2. 1. Reconocimiento del origen de
duplicación
• La duplicación comienza en un único sitio
en el cromosoma bacteriano o en muchos
sitios del cromosoma eucariota. Estos sitios,
denominados orígenes de duplicación (oriC),
están pautados por determinadas secuencias
de bases. En Escherichia coli el origen de
Figura 1. Duplicación semiconservativa del ADN:
experimento de Meselson y Stahl. A. El ADN pesado
tiene las bases de ambas hebras con 15N (isótopo
pesado), y el ADN liviano, con 14N (isótopo liviano).
El ADN con 15N se puede separar del ADN con 14N
por ultracentrifugación porque el ADN pesado queda
en una posición inferior respecto al liviano. B. Si se
parte de bacterias con ADN pesado y se las crece en
un medio con 14N, las hebras hijas serán livianas. Cada
hebra hija se asocia con la hebra madre y el ADN es
semipesado: la duplicación es semiconservativa. La
otra posibilidad, que se asocien las dos hebras hijas y
las dos hebras madres, no ocurre.
106

• A partir de un oriC se replica una unidad
funcional denominada replicón. En bacterias,
que tienen un solo oriC, todo el genoma es un
replicón. En el genoma humano se estiman
entre 10.000 y 100.000 oriC, por lo que habría
hasta 100.000 replicones.
Figura 2. Origen de duplicación en un cromosoma
procariota. En el origen de duplicación se forma la
burbuja de duplicación y se generan dos horquillas,
una para cada lado: la síntesis de ADN avanza en
sentidos opuestos.
2. 2. Separación de las hebras de ADN
La separación de las hebras ocurre por acción
de la enzima helicasa, que rompe los puentes
de hidrógeno entre las bases complementarias.
Como consecuencia se forman dos horquillas
de replicación (fig. 2), pero para facilitar la
descripción se analizará lo que ocurre solo en
una de ellas.
• Para separar las hebras, la helicasa se desplaza
a lo largo del ADN y utiliza energía de la
hidrólisis del ATP.
• Al separar las dos hebras se genera un
superenrollamiento en el ADN “por adelante”
de la helicasa. Para disminuir la tensión
generada actúan las topoisomerasas, enzimas
que hidrolizan una o ambas hebras de ADN y
permiten el giro de la molécula y la eliminación
del superenrollamiento (fig. 3).
• Las hebras se mantienen transitoriamente
separadas como monohebra por la acción
de proteínas SSB (single stranded DNA
binding proteins), también llamadas proteínas
estabilizadoras de monohebra. Estas proteínas
interaccionan con el ADN y mantienen
separadas las hebras para que puedan actuar
como molde.
+ Observe que las hebras de ADN no se
separan ni se mantienen como monohebra
espontáneamente; para ello participan una
enzima y proteínas específicas.

Figura 3. Duplicación del ADN. A. Cebador. El ARN cebador se sintetiza por adición de NTP por acción de la
primasa. Al extremo -OH 3´ libre del cebador se une un dNTP por acción de la ADN pol, que continúa la adición de
dNTP al ADN creciente. B. Síntesis del ADN. La helicasa rompe los puentes de hidrógeno entre las bases, las SSB
estabilizan las hebras simples y la topoisomerasa hidroliza el ADN y permite eliminar el superenrollamiento. El
crecimiento de la hebra continua (superior) acompaña el sentido de apertura de las hebras. La hebra discontinua
(inferior) crece en fragmentos (fragmentos de Okasaki), en sentido opuesto a la hebra continua. La primasa
sintetiza el cebador, al que se adicionan los dNTP por acción de la ADN pol III. El cebador es remplazado por
ADN por acción de la ADN pol I. La ligasa une los fragmentos de ADN de la hebra discontinua.

2. 3. Síntesis del ARN cebador
La enzima encargada de polimerizar los dNTP a
partir de una hebra molde y sintetizar ADN es la
ADN pol. Esta enzima no puede ¨arrancar desde
cero¨ y condensar dNTP uno tras otro, sino que
debe adicionarlos al extremo –OH 3’ libre de un
polinucleótido. Por eso para que comience la
síntesis de ADN se requiere de un cebador, un
polinucleótido de entre 10 y 60 nucleótidos, con
bases complementarias a la hebra molde.
• El cebador es un ARN sintetizado por acción
de una ARN pol, la primasa, que condensa los
ribonucleótidos trifosfato ATP, CTP, GTP y
UTP colectivamente denominados NTP (figs.
3 y 4).
+ Observe que la primasa polimeriza los NTP
a partir de un ADN molde, sin necesidad de
cebador.
Figura 4. Incorporación de un dNTP al extremo -OH
3´ de una cadena en crecimiento. La ADN pol tiene
como sustrato los dNTP; la dirección en que se lee la
hebra molde es de 3´a 5´.
2. 4. Síntesis de ADN
• La ADN pol adiciona el primer dNTP al extremo
-OH 3´ libre del cebador y continua adicionándolos
al extremo -OH 3´ del ADN creciente: el ADN crece
en sentido 5´a 3´ (figs. 3 y 4).
107
• La polimerización de dNTP es catalizada por la
ADN pol (III), y la sintesis del nuevo ADN está
dirigida por una hebra molde de ADN, según
los apareamientos de Watson y Crick: A-T y
C-G. En la figura 4 se muestra la adición de un
dNTP a una hebra creciente de ADN frente a la
hebra molde.
• El ADN molde se lee desde el extremo 3´al 5´en
cada hebra. Como las hebras son antiparalelas,
una crece en el mismo sentido en que se abre
la horquilla y la otra lo hace en sentido opuesto
(fig. 3).
• La hebra que se sintetiza en el mismo sentido en
que se abre el ADN se hace de manera continua
(fig. 3) mientras que la hebra que va en sentido
opuesto debe sintetizarse en fragmentos (fig.
3), a medida que la doble hebra se abre y se
genera una región de hebra simple capaz de ser
¨leída¨.
• En la hebra discontínua se generan fragmentos
compuestos por ARN cebador seguido de ADN
que se conocen como fragmentos de Okasaki
(fig. 3), que en procariotas tienen entre 100 y
400 pb y en eucariotas entre 1.000 y 2.000 pb.
• Los cebadores son eliminados y sustituidos por
ADN por la ADN pol I, que hidroliza el ARN:
cada ribonucleótido es removido y sustituido
por un desoxirribonucleótido (fig. 3).
• Cuando se sustituye el ARN por ADN quedan,
uno tras otro, dos fragmentos nuevos de ADN
que la enzima ligasa une a través de un enlace
5´-3´ (fig. 3).
• En eucariotas hay varias ADN pol. Los tipos I
y III están relacionados con la duplicación del
ADN cromosómico, la ADN pol II participa en
la reparación del ADN y la ADN pol IV en la
síntesis de ADN mitocondrial.
• La velocidad de duplicación del ADN es del
orden de 50 nucleótidos por segundo en
eucariotas y hasta 1.000 nucleótidos por
segundo en procariotas.
108
• La ADN pol I tiene una velocidad menor, de
unos 10-20 nucleótidos por segundo, y se
suelta después de polimerizar menos de 30
nucleótidos, lo que enlentece más el proceso.
En esta enzima la procesividad, que hace
referencia a la cantidad de nucleótidos que
polimeriza sin desprenderse del molde, es
baja.
+ Observe que:
• El ADN se sintetiza por acción de las ADN
pol, que catalizan la condensación de dNTP
(dATP, dCTP, dGTP y dTTP), y la ARN pol, que
cataliza la condensación de NTP (ATP, CTP,
GTP y UTP) para formar el cebador.
• Debido a la complementariedad de bases, las
moléculas de ADN hijas son iguales a la madre, de
manera que la información genética es la misma.
Figura 5. Actividad correctora de la ADN pol. A.
Síntesis de una hebra nueva de ADN. La flecha indica el
sentido de avance de la polimerasa. B. Cuando ocurre
un error, la subunidad ε de la ADN pol con actividad
exonucleasa 3´ a 5´ hidroliza varios nucléotidos “hacia
atrás” (5´).
3. Las ADN pol I y III tienen capacidad de
corregir errores
El ADN debe conservar la información de manera
estable para transmitirla de célula a célula. Las
ADN pol además de ser precisas son capaces de
corregir errores “de copia” lo que garantiza la
fidelidad de la duplicación.
• La incorporación de un nucleótido incorrecto
en la nueva hebra de ADN ocurre a razón de
uno cada 104-105 nucleótidos incorporados.
Sin embargo, como las ADN pol I y III
corrigen errores, al finalizar la duplicación solo
quedaría un nucleótido incorrecto cada 109-1010
incorporados.
• Las ADN pol I y III tienen actividad exonucleasa
(3´a 5´) que consiste en hidrolizar varios
nucleótidos hacia el extremo 5´ de la hebra
nueva (fig. 5). Esto es equivalente a “ir hacia
atrás” respecto al sentido de la síntesis.
• En la figura 5 se representa el mecanismo
de corrección de un error durante la
duplicación. Como las bases no se aparean
correctamente, el nucleótido queda separado
de la base de la hebra molde, que no es la
complementaria. La subunidad ε de la ADN
pol III hidroliza en sentido 3´a 5´ y vuelve
a polimerizar dNTP sobre el ADN molde,
corrigiendo así el error.
+ Observe que la capacidad de las ADN pol de
corregir errores durante la duplicación asegura que
las hebras del ADN duplicado sean iguales a las
madres.
Al finalizar la preparación del tema será
capaz de:
• Explicar el concepto de duplicación semi-
conservativa.
• Relacionar la duplicación del ADN con la
multiplicación celular.
• Describir la síntesis de ADN a partir de la hebra
continua y discontinua.
• Reconocer la importancia de la capacidad de
corregir errores de las ADN pol.
 109

15. TRANSCRIPCIÓN
O. Borsani, M. Sotelo y J. Monza
Revisado por la Dra. Sabina Vidal, laboratorio de Biología Molecular Vegetal,
Instituto de Química Biológica, Facultad de Ciencias, UdelaR.

1. La transcripción es el proceso por el • La enzima que cataliza la reacción de

cual se sintetizan los ARN
Las células necesitan producir proteínas, y
lo hacen a partir de la información genética
contenida en su ADN. Para la síntesis de proteínas
• A diferencia de la ADN polimerasa (ADN pol), la
son necesarios dos procesos: la transcripción y la
traducción (fig. 1).
polimerización entre ribonucleótidos trifosfato
(NTP) que son el ATP, GTP, UTP y CTP, es la ARN
polimerasa (ARN pol). Esta enzima requiere
ADN molde pautado (gen) y los sustratos (NTP).
ARN pol no necesita de un cebador para iniciar
la síntesis de ARN, es decir, la transcripción.

Al igual que en la duplicación, en la transcripción

el ADN es leído desde el extremo 3' al extremo
5', pero el ARN complementario se sintetiza
en la dirección 5´a 3´. De esa forma, los
ribonucleótidos se van agregando al extremo
3´OH libre del ribonucleótido precedente,
formando enlaces fosfodiéster entre ellos según
se muestra en la figura 2.

Figura 1. Transcripción y traducción. La transcripción

genera ARN a partir de ADN: los genes se expresan.
Los ARNm son traducidos y como consecuencia se
sintetizan las proteínas.

• El proceso denominado transcripción consiste

en la síntesis del ARNm (mensajero), ARNr
(ribosomal) y ARNt (transferencia) a partir de
regiones definidas del ADN.

• Cada región de ADN que se transcribe es un gen.

Si el gen transcripto corresponde a una proteína,
el resultado de la transcripción es ARN mensajero
(ARNm), que luego es traducido (fig. 1).

+ Observe que la transcripción corresponde a la

primera etapa en la expresión de los genes (fig. 1).
2. La transcripción involucra una enzima,
sustratos y ADN molde pautado

Cada gen está pautado por secuencias específicas Figura 2. Síntesis de ARN. Formación de un
enlace fosfodiéster entre el -OH 3´y el fosfato 5´ de
que franquean a la región molde y marcan el ribonucleótidos trifosfato. El proceso es catalizado por
principio y fin de la trancripción. la enzima ARN pol y el producto es una hebra de ARN.
110

• En los procariotas hay un tipo de ARN pol, 3.1 Iniciación

mientras que en los eucariotas hay tres: la
ARN pol I que transcribe genes que codifican
ARNr, la ARN pol II que transcribe genes que
codifican proteínas y forman ARNm, y la ARN
pol III que transcribe genes que codifican
ARNt.
• Los promotores son secuencias específicas de
bases que pautan la región del ADN que se va a
transcribir y el inicio de la transcripción (sitio
+1) indicado en la figura 3 como Inicio de la
transcripción.

• En la transcripción, frente a una base A • En procariotas los promotores constan

(adenina) del ADN la ARNpol incorpora un de 40 a 60 pb que incluyen secuencias de
NTP con la base U (uracilo): los ARN no tienen T. 6 pb idénticas o similares a TATAAT. La
comparación de secuencias de promotores
• La ARN pol carece de actividad exonucleasa bacterianos puso de manifiesto similitudes
capaz de corregir errores. Cuando se produce en dos secuencias cortas centradas alrededor
un error (1 por cada 104 ó 105 nucleótidos de las posiciones -10 y -35, denominadas
incorporados) los ribonucleótidos incorrectos secuencia consenso (fig. 3).
no se remueven: el ARN no es reparado
como lo es el ADN. Como a partir de un gen
se producen muchas copias de ARN que
finalmente son degradados y reemplazados por
nuevas copias, un error en la transcripción no
tiene consecuencias para la célula.

• Además de la ARN pol hay otras moléculas

que intervienen en la transcripción. En
procariotas hay diferentes proteínas
llamadas factores sigma que se unen a
la ARN pol y determinan su unión a los
distintos promotores. Los eucariotas
utilizan otras proteínas llamadas factores de
transcripción, necesarias para la unión de la
ARN pol al ADN.

• Los factores de transcripción se unen al ADN,

y luego la ARN pol se les une para formar el
complejo de iniciación de la transcripción.

3. La transcripción consta de tres etapas:

iniciación, elongación y terminación

En procariotas y eucariotas se definen las Figura 3. Promotores de diferentes genes. Las

mismas etapas en la transcripción. Sin embargo,
la maquinaria involucrada y los mecanismos
regulatorios de cada etapa presentan diferencias
entre ambos tipos celulares. La descripción del
proceso que se da a continuación se centra en el
modelo procariota.
similitudes en las secuencias de promotores
procariotas se encuentran alrededor de las posiciones
-10 y -35 del inicio de transcripción. Las secuencias
no son idénticas en todos los promotores, pero hay
nucleótidos que se encuentran con mayor frecuencia
que otros en determinadas posiciones. La secuencia
más frecuente generada por estos nucleótidos se
denomina secuencia consenso.

• Las secuencias de los promotores eucariotas
son más variables que las de los procariotas.
A pesar de ello, muchos promotores de
genes que codifican para proteínas tienen
una secuencia similar llamada TATA box,
localizada en la posición -25 a -30 pb
aproximadamente, y otro elemento (TFIIB)
localizado a -35 pb del sitio de inicio de
la transcripción. Además, en eucariotas
hay secuencias denominadas enhancers
(potenciadores) que aumentan la eficiencia
de la transcripción y pueden localizarse a
cientos o miles de pb del sitio de inicio de la
transcripción.
• Mutaciones en las secuencias conservadas
pueden afectar la función del promotor y
la eficiencia de la unión con la ARN pol, y
como consecuencia la expresión del gen en
cuestión.
• Para que la ARN pol sintetice ARN, el
dúplex de ADN se desenrolla una distancia
corta (unas 17 pb) formando una “burbuja”
de transcripción. Una vez añadidos los dos
primeros nucleótidos se considera finalizada
la iniciación de la transcripción.
3.2 Elongación
Durante la elongación la ARN pol añade NTP
(ATP, GTP, CTP y UTP) complementarios al
ADN a una velocidad de unos 40 nucleótidos por
segundo.
• El extremo en crecimiento de la nueva cadena
de ARN se aparea temporalmente con el ADN
molde para formar una doble hélice híbrida
ADN-ARN (de unas 8 bases de longitud). El
ARN en esta doble hebra híbrida se despega
poco después de su formación y se restablece la
doble hebra de ADN.
• La ARN pol tiene la capacidad de añadir
nucleótidos al ARN en crecimiento sin
disociarse del ADN molde. Sin embargo, ciertas
secuencias en el ADN se pueden producir
pausas en la síntesis del ARN.
111
3.3 Terminación
La terminación de la transcripción ocurre cuando
la ARN pol llega a una secuencia de ADN que
pauta el fin del proceso.
• En procariotas la pauta de terminación está dada
por una secuencia de bases autocomplementaria
que hace que el ARN se pliegue y forme una
estructura en horquilla (fig. 4).
• Esta estructura en horquilla combinada con un
apareamiento débil de bases antes y después
de la misma, hace que la interacción entre el
ARN y la ARN pol se desestabilice facilitando
la disociación del transcripto del ADN (fig. 4).
• En eucariotas la transcripción termina una vez
que se transcribe la secuencia de poliadenilación
(AAUAAA). El transcripto es liberado cuando
la ARN pol supera esta secuencia, de unas 30
pb, aunque el sitio de terminación no es tan
definido como en procariotas.
Figura 4. Horquilla del ARN. Esta estructura
determina el fin de la transcripción. Las bases
autocomplementarias permiten que se forme la
horquilla. Varios U facilitan la separación ADN-ARN
dado que entre A y U se dan dos puentes de H.
4. En eucariotas el transcripto primario
de ARNm es procesado
El transcripto primario, es decir el ARNm recién
sintetizado, es modificado en el núcleo celular
antes de ser exportado al citoplasma donde será
traducido a proteína. A este proceso se le conoce
como maduración del ARN y consiste en:
112

Figura 5. Secuencia de pasos para obtener ARNm maduro. Al transcripto primario (ARNm recién sintetizado)
se le adiciona una caperuza en el extremo 5´y posteriormente es poliadenilado en el extremo 3´. Los intrones
son escindidos y los exones empalmados para formar el ARNm maduro que será traducido. UTR (untranslated
region) región no traducida.

• Adición de la caperuza 5´. Se adiciona un
nucleótido de guanina modificado con un
grupo metilo en el extremo 5´ del ARNm. Esta
adición se realiza durante la síntesis del ARN,
cuando el transcripto tiene unos 20 nucleótidos
de longitud.
• Poliadenilación. Se añaden entre 200 y 250
adeninas (A) al extremo 3', formando la cadena
poli-A que sirve entre otras cosas, para retardar
la hidrólisis del ARN por las endonucleasas y
alargar su "vida media".
• Acortamiento del ARN. El ARN recién
sintetizado es procesado mediante el splicing
(o corte y empalme), que consiste en el corte y
eliminación de segmentos del ARNm (intrones)
que no participan en la síntesis de proteínas,
y en el empalme de segmentos (exones) que
codifican para la proteína (fig. 5). Este proceso
reduce la longitud de la hebra de ARNm
significativamente. La enzima encargada de
catalizar estas reacciones es la snRNA (small
nuclear ribonucleoprotein particles).
5. Regulación de la trasncripción
Para que las células puedan adaptar su
metabolismo a condiciones intra o extracelulares
cambiantes la expresión de los genes debe estar
regulada. Un mecanismo de control común es la
regulación a nivel de la transcripción de los genes.
• Los genes que codifican enzimas que participan
en procesos celulares que son necesarios de
manera permanente se expresan de manera
continua. Es decir, su expresión es constitutiva.
 113

• Otros genes se expresan cuando sus productos
son necesarios, y cuando no lo son dejan de
hacerlo. Estos genes corresponden generalmente
a sistemas adaptativos, necesarios para que la
célula se ajuste a determinada situación.
la década del 50 en Escherichia coli, es un ejemplo
típico de regulación de la transcripción en bacterias.
Estos investigadores propusieron que un grupo
de genes con funciones relacionadas forman una
unidad funcional y la denominaron operón.

• La regulación de la transcripción es diferente Cuando E. coli crece en un medio en el que no

en procariotas y eucariotas, pero la "lógica" es
la misma.
+ Observe que la mayoría de los genes no
se transcriben de manera permanente: la
transcripción está regulada según la necesidad
del producto del gen en cuestión.
5.1 Regulación de la transcripción en
procariotas
5.1.1 Sistemas inducibles: Operón lactosa
El operón lactosa, descrito por Jacob y Monod en
hay lactosa, en la bacteria hay poca cantidad
de la enzima responsable de hidrolizar a
la lactosa (β galactosidasa). Sin embargo,
cuando al medio se agrega lactosa, el sustrato
de la enzima, la cantidad de β galactosidasa
aumenta rápidamente: el gen que la codifica
se induce.
El operón lac está constituido por:
1. Promotor (P). Se localiza antes de las regiones
estructurales y corresponde a la región con una
secuencia de bases reconocida por la ARN pol.

Figura 6. Modelo del operón lactosa. A. El gen regulador consta de un promotor (P) y una región estructural
(E) y codifica para una proteína represora (r), que reconoce la secuencia de bases del operador (O). El O se
encuentra entre el P del gen regulado y los genes E (Z, Y, A). B. En ausencia de lactosa la Proteína represora está
unida al O, lo que impide la transcripción. C. Si se agrega lactosa (i), esta se une a la proteína r que cambia su
conformación y se libera de la región O. Así la ARN pol puede transcribir los genes E.
114
2. Genes estructurales (E). Los genes estructurales
Z, Y, A codifican respectivamente para la
β galactosidasa que hidroliza a la lactosa,
a la galactósido permeasa que transporta
a la lactosa al interior de la bacteria y a la
tiogalactósido transacetilasa. Estos genes se
disponen en la misma unidad transcripcional,
por lo que se expresan como un único ARNm.
3. Operador (O). Situado entre el P y los genes
E, corresponde a una secuencia de bases
reconocida por la proteína represora.
4. Gen regulador (R). Consta de un P y un E y
codifica a la proteína reguladora (r), represora
en este caso, que reconoce la secuencia de
bases del O y se une a él.
5. Inductor (I). En este caso la lactosa, se une a la
proteína r y permite que se transcriban los genes E.
• El operón lac también puede ser regulado por
la glucosa. Cuando las concentraciones de
glucosa son bajas, se produce la activación de
la transcripción. El control es ejercido a través
del AMP cíclico (AMPc). El AMPc se une a la
proteína receptora de AMPc (CRP), que al
cambiar su conformación se une al promotor
del operón incrementando la afinidad de la
ARNpol por el mismo.
Figura 7. Operón triptofano. En ausencia o poca cantidad de trp, el gen se transcribe porque la proteína
represora, producto del gen regulador, no se une al operador (O). Cuando hay trp (inductor) éste se une a la
proteína r que reconoce al O, impidiendo la transcripción
• Otros operones relacionados con vías
catabólicas necesarias para obtener energía,
como el operón maltosa y arabinosa, se regulan
de la misma manera.
• Los genes estructurales del operón lac (Z, Y,
A) se transcriben en un único ARNm. Estos
ARNm bacterianos que codifican para más de
una proteína se denominan policistrónicos.
5.1.2 Sistema reprimible: Operón triptofano
Los genes reprimibles se expresan en ausencia de
activador, pero dejan de hacerlo en presencia de
un represor. Los operones que codifican enzimas
encargadas de la biosíntesis de los aminoácidos
histidina (his) y triptofano (trp) son ejemplos de
este tipo de regulación. El operón se expresa en
ausencia de trp, o cuando sus niveles son muy
bajos (fig. 7).
+ Observe que el operón trp es semejante al
operón lac (fig. 7) y está constituido por:
1. Genes estructurales (E). Un total de cinco
(trpEDCB y A) que codifican para cinco
proteínas que forman tres enzimas necesarias
en la síntesis de trp.
2. Promotor (P) y operador (O). Conforman
la región reguladora y corresponden al
 115

sitio de unión de la ARN pol y del represor,
respectivamente.
3. Gen regulador (R). Se localiza próximo al gen
regulado y consta de un P y el E, que codifica la
proteína reguladora.
5. Los operones represibles son comunes en la
regulación de vías biosintéticas y se denominan
así porque un intermediario de la vía reprime
la transcripción cuando su producto está
disponible.

4. Proteína reguladora (r). Está formada por

monómeros que se unen para hacerla funcional + Observe que la principal diferencia entre el
en presencia de trp. Esta proteína reconoce la operón inducible lac y el reprimible trp es que
secuencia de bases del O y unida al trp (co- en este último el represor reconoce al operador
represor) inactiva la transcripción. cuando está unido a trp (inductor).

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Describir el proceso de transcripción a través de sus requerimientos y productos.

• Diferenciar la estructura de genes de expresión constitutiva y adaptativa.

• Explicar la expresión diferencial de genes según su promotor.

• Relacionar la regulación de la transcripción con la expresión de un gen.

116
 117

En la traducción participa el ARNm, que informa

sobre la secuencia de aminoácidos de la proteína,
los ARNt que aportan los aminoácidos y los ARNr.
118
 119

16. TRADUCCION

M. Sotelo, O. Borsani, S. Signorelli y J. Monza

Revisado por la Dra. Mónica Marín, Sección Bioquímica,
Instituto de Biología, Facultad de Ciencias, UdelaR.

1. La información que se traduce está en
el ARNm
La traducción consiste en pasar de un lenguaje
dado por la secuencia de bases del ARNm a una
secuencia de aminoacídos. Este proceso ocurre
en los ribosomas e involucra también a los
aminoacil ARNt, que aportan los aminoácidos.
• El ARNm contiene 4 bases diferentes: U, C, A
y G, que agrupadas de a 3 forman 64 codones
distintos, pero hay sólo 20 aminoácidos que
forman proteínas. De esta forma, varios
tripletes codifican para un mismo aminoácido:
el código genético es redundante (cuadro 1).
• El código genético relaciona la secuencia de 3
bases del ARNm (codón) con un aminoácido
(cuadro 1). Es importante destacar que todos
los organismos poseen en general el mismo
código genético; es decir, las mismas tres bases
codifican el mismo aminoácido: el código
genético es universal.
• En la secuencia de bases del ARNm, producto
de la transcripción, está la información para
sintetizar una proteína. En la traducción, que
se da en los ribosomas, ocurre el cambio de
lenguaje de una secuencia de bases del ARNm a
una secuencia de aminoácidos de una proteína.
• La traducción comienza en el codón AUG
que codifica para la metionina (Met). A su
vez, la terminación de la traducción también
está pautada por codones, denominados “sin
sentido” o codones stop (cuadro 1).

Segunda base
Primera base

Tercera base

Cuadro 1. Código genético. El código genético resume la correspondencia de las bases del ARNm (codón) con
cada aminoácido codificado. Observe que hay entre 1 y 6 codones para cada aminoácido: el código genético es
redundante. Los codones que no codifican ningún aminoácido (stop) pautan la terminación de la traducción.
120
2. Los ARNt funcionan como adaptadores
entre el ARNm y los aminoácidos
Los ARNt que se encuentran en el citoplasma se
unen de manera específica a los aminoácidos y se
forman los aminoacil – ARNt (AA-ARNt). Estos
son necesarios para la traducción del ARNm en
los ribosomas.
• Los ARNt poseen en el extremo 3' una secuencia
CCA donde se une el aminoácido y en un bucle una
secuencia de 3 bases denominada anticodón,
que reconoce al codón del ARNm (fig. 1).
• La unión de cada aminoácido a su ARNt
es catalizada por enzimas denominadas
aminoacil-ARNt sintetasas. Estas enzimas
tienen un sitio activo que reconoce una
combinación única entre una secuencia
de bases del ARNt y el grupo -R de un
aminoácido.
Figura 1. Representación de un aminoacil-ARNt. El
aminoácido se une al extremo 3´ del ARNt, que tiene
la secuencia CCA. Se indica el bucle del ARNt en el que
se sitúa el anticodón.
• Las aminoacil transfer sintetasas son capaces
de corregir errores; es decir, de disociar un
aminoácido si fue unido a un ARNt incorrecto.
• La formación del enlace covalente entre el
ARNt y el aminoácido requiere la hidrólisis de
ATP. La reacción se puede resumir como:
AA + ARNt + ATP g AA-ARNt + AMP + PPi
• Hay alrededor de 31 ARNt diferentes, según la
especie, con al menos un ARNt específico para
cada aminoácido.
• Algunos AA-ARNt pueden reconocer de 1 a 4
codones que codifican un mismo aminoácido.
Estos codones sólo difieren en la tercera base.
Por ejemplo, el ARNt-serina reconoce a AGU,
AGC, AGA y AGG (fig. 1).
3. La traducción ocurre en los ribosomas
Los ribosomas de procariotas y eucariotas están
formados por diferentes ARNr y proteínas y
constan de una subunidad menor y una subunidad
mayor. Las subunidades se encuentran separadas
en el citosol y se asocian entre sí al comienzo de
la traducción. En los ribosomas es donde se da
el reconocimiento entre los codones del ARNm y
los anticodones del AA-ARNt (fig. 2).
Figura 2. Estructura y sitios de un ribosoma. Cada
ribosoma está formado por una subunidad mayor y
otra menor. En la subunidad mayor se definen tres
sitios: el aminoacídico (A), el peptídico (P) y el de
salida del ARNt (E). El sitio A es el lugar por donde
entran los AA-ARNt, excepto el primer AA-ARNt
(f-met-ARNt) que se sitúa en el sitio P antes de la
asociación de las subunidades ribosómicas. El sitio
P es donde se encuentra el péptido en formación
(peptidil-ARNt). El sitio E corresponde al lugar de
salida del ARNt, luego de que el aminoácido se unió a
la cadena peptídica en crecimiento.
La traducción consta de tres etapas: la iniciación,
la elongación - traslocación y la terminación, cada
una de ellas con características particulares. En
la figura que precede a este capítulo se resume
a la traducción como proceso, lo que ayuda a

visualizarlo. Las características de cada etapa
se describen a continuación y se resumen en el
esquema de la página inicial de este tema.
3.1. Iniciación
Esta etapa comienza con el posicionamiento del
ARNm en el ribosoma, que se produce de manera
diferente en procariotas y eucariotas. Pero el fin es el
mismo: el codón que marca el inicio de la traducción
debe quedar en una posición determinada para
empezar desde allí la traducción.
• En bacterias la unión del ARNm al ribosoma está
determinada por una corta secuencia de bases
denominada secuencia de Shine-Dalgarno. Esta
secuencia precede al codón de iniciación y es
complementaria de otra secuencia presente en el
extremo 3' del ARNr 16S, que forma parte de la
subunidad menor del ribosoma (fig. 3).
• En eucariontes no se han detectado esas
secuencias en el ARNr 18S. De todas formas, la
traducción también comienza siempre a partir
del triplete AUG más cercano al extremo 5' del
ARNm.
• En procariotas, una vez posicionado el codón
AUG del ARNm en el sitio P del ribosoma (fig.
Figura 3. Secuencia Shine-Dalgarno y sitio de iniciación de la traducción. A. La secuencia Shine-Dalgarno está situada
entre -3 y -10 nucleótidos antes del codón AUG del ARNm. B. Interacción de la secuencia Shine-Dalgarno (ARNm) con el
extremo 3´ del ARNr 16S del ribosoma (subunidad menor). A partir del codón de iniciación AUG se sintetiza el polipéptido.
121
4) se une el AA-ARNt formil-Met (f-Met). De
esta forma el primer aminoácido traducido es
la f-Met, aunque en la mayoría de las proteínas
se elimina al finalizar la traducción.
• Seguidamente se unen las subunidades mayor y
menor del ribosoma, con energía aportada por
la hidrólisis de GTP. De este modo se forma el
complejo de iniciación de la traducción: las dos
subunidades juntas con el ARNm posicionado
y el primer aminoacil-ARNt frente al codón
AUG en el sitio P (fig. 4).
• La síntesis del polipéptido se realiza siempre
en la misma dirección a partir de la f-Met o
de la Met. La proteína crece desde el extremo
N-terminal, de manera que cada aminoácido
es adicionado al extremo carboxilo del último
aminoácido.
3.2. Elongación-translocación
Una vez formado el complejo de iniciación, el
polipéptido se elonga por la formación de un
enlace peptídico entre el grupo carboxilo del
aminoácido que se encuentra en el sitio P y el
grupo amino del aminoácido entrante, ambos
unidos al ARNt correspondiente.
122

Figura 4. Iniciación. En la iniciación se posiciona el ARNm en el ribosoma, es decir, se determina el marco de lectura,
y seguidamente se une el anticodón del f-Met-ARNt con el codón AUG del ARNm. Las subunidades mayor y menor del
ribosoma se juntan, con energía de la hidrólisis del GTP, para formar el complejo de iniciación de la traducción. El primer
f-Met-ARNt queda posicionado en el sitio P del ribosoma.

• La formación del primer enlace peptídico ocurre
entre la f-Met situada en el sitio P y el aminoácido que
esté codificado por el segundo codón, que ingresa al
ribosoma por el sitio A como AA-ARNt (fig. 5).
• La fuente de energía para la unión de los
aminoácidos proviene de la activación de estos. La
reacción no se cataliza por una enzima proteica,
sino por un ARN ribosomal con actividad
catalítica, que se conoce como “ribozima”.
• Una vez formado el enlace peptídico entre los
aminoácidos, el ribosoma se transloca; es decir,
avanza un codón sobre el ARNm (en dirección
5'g3'). De esta forma el péptido en crecimiento
ocupa el sitio P, dejando libre el sitio A para la
entrada de un nuevo AA-ARNt. El ARNt libre (sin
el aminoácido) sale del ribosoma por el sitio E (fig.
5) y se utiliza para formar un nuevo aminoacil-
ARNt. La translocación requiere energía que
proviene de la hidrólisis de GTP (fig. 5).

Figura 5. Elongación-translocación. Una vez formado el complejo de iniciación en el que se consume GTP, llega el segundo
aminoacil-ARNt que ingresa por el sitio A del ribosoma (1). Entre los aminoácidos se forma un enlace peptídico. (2). Luego el
ribosoma se desplaza en dirección 5´ a 3´ del ARNm, con gasto de GTP (3), y el peptidil-ARNt queda en el sitio P del ribosoma
y el ARNt libre sale por el sitio E (4). El sitio A queda desocupado; allí ingresará el próximo aminoacil-ARNt.

• La elongación-translocación se repite hasta
que llegue una señal de stop en el ARNm.
Figura 6. Terminación. El ribosoma llega al codón
de stop del ARNm y se liberan el péptido sintetizado,
el ARNt y el ARNm. Las subunidades del ribosoma se
disocian.
123
3.3. Terminación
La terminación de la cadena polipeptídica
en bacterias tiene lugar cuando al ribosoma,
que se desplaza sobre el ARNm, ingresan
tripletes de terminación (stop) o codones
sin sentido.
• Los codones stop (UAA, UAG y UGA) no
son reconocidos por ningún aminoacil-
ARNt, pero son reconocidos por factores
proteicos de terminación (release factor:
RF1, RF2 y RF3) que producen la liberación
de la proteína sintetizada (fig. 6). Cuando un
codón stop queda en el sitio A, una proteína
de terminación que reconoce este codón
hidroliza el enlace entre el último ARNt y el
aminoácido.
• Al desplazarse el ribosoma el polipéptido que
estaba en el sitio P queda en el sitio E, por
donde es liberado. Las dos subunidades del
ribosoma disocian, con gasto de GTP (fig. 6).
+ Observe que:
• La secuencia de aminoácidos de una proteína
—su estructura primaria— está determinada
por la secuencia de bases del ADN que funciona
como molde para la síntesis de ARNm en la
transcripción.
• La traducción permite que la información
contenida en el ARNm como secuencia de bases
establezca una secuencia de aminoácidos,
que determina la estructura y función de las
proteínas.
4. Un ARNm puede ser traducido por
varios ribosomas
En procariotas y eucariotas muchos ribosomas
se unen a un ARNm y son capaces de traducirlo
al mismo tiempo. Este agrupamiento
transitorio de ribosomas se conoce como
polisoma (fig. 7) y permite obtener muchas
copias de la misma proteína en poco tiempo, a
partir del mismo ARNm antes que se degrade.
124

• En la secreción de proteínas por bacterias,

una peptidasa situada en el lado externo de la
membrana hidroliza un enlace peptídico y se
libera el péptido señal de la proteína (fig. 8).

Figura 7. Representación de un polisoma. Un mismo

ARNm es traducido por varios ribosomas al mismo
tiempo. Así se sintetizan múltiples copias de un mismo
polipéptido. La dirección de la traducción es 5´a 3´.

5. Modificaciones postraduccionales de
las proteínas

Los polipéptidos sintetizados son procesados de

manera diferente según el destino que tengan
en la célula, o fuera de ella. A continuación se
describe una de las modificaciones más frecuentes
que tiene lugar en el extremo N-terminal.

• Muchas proteínas tienen una secuencia de 15 a

25 aminoácidos en el extremo N-terminal que
corresponde al péptido líder o señal.
• Los aminoácidos del péptido líder, en su
mayoría hidrofóbicos, son reconocidos por
receptores proteicos de la membrana celular
y de los organelos, que intervienen en el
transporte del polipéptido a su destino.
Figura 8. Modelo de una forma de secreción de
proteínas en procariotas. La cadena polipeptídica (la
pro-proteína) forma complejos con proteínas (Sec
B) que impiden su plegamiento completo durante su
transporte hasta la membrana; una ATPasa (Sec A)
facilita su pasaje a través de la membrana con la ayuda
de dos proteínas que conforman un poro en ella. En
el periplasma una proteasa asociada a la membrana
hidroliza el enlace entre el péptido señal y la proteína.

Al finalizar la preparación del tema será capaz de:

• Relacionar el código genético con la secuencia de aminoácidos de las proteínas.

• Explicar la necesidad de la especificidad en la unión ARNt con el aminoácido.

• Reconocer las características de las distintas etapas.


17. MUTACIONES
* Laboratorio de Radiobiología, Departamento de Biofísica de
1. La mutación: un cambio en la secuencia
de bases del ADN
Las mutaciones son cambios estables en una
o más bases en la secuencia del ADN que se
heredan de célula a célula. El mecanismo de
síntesis de ADN, que permite su duplicación,
garantiza una alta fidelidad en la copia de la
hebra nueva, por lo que la variabilidad entre
una generación celular y la otra es muy baja. Sin
embargo finalizada la duplicación, es decir a lo
largo de la vida de la célula, ocurren mutaciones
que no siempre se reparan, y así cuando el ADN
se duplica nuevamente éstas se transmiten de
célula a célula.
• Es necesario tener presente que las mutaciones
no siempre generan perjuicios; de hecho, son
la base de la variabilidad biológica necesaria
para que los seres vivos puedan adaptarse a las
condiciones cambiantes del ambiente.
• Las mutaciones se generan como consecuencia
de la inestabilidad propia de la molécula de
ADN, pero además pueden ser provocadas por
agentes físicos, químicos y biológicos. Estos
agentes son conocidos genéricamente como
agentes mutagénicos.
+ Observe que las mutaciones en el ámbito
de los sistemas vivos pueden tener efectos
positivos (biodiversidad, evolución, adaptación)
o negativos (enfermedades hereditarias o
adquiridas).
2. Agentes mutagénicos
Los agentes mutagénicos físicos, químicos y
biológicos incrementan la frecuencia con que
ocurren las mutaciones debido a que inducen
cambios a nivel del ADN.
125
J. Monza, E. Nunes* y S. Signorelli
Facultad de Medicina,UdelaR.
• Las lesiones en el ADN pueden ser reparadas
por vías enzimáticas presentes en sistemas
de distinta complejidad, tales como bacterias,
levaduras, vegetales y animales.
• La reparación puede realizarse con error
(mutagénica) o sin error.
2. 1. Agentes físicos
Las radiaciones ionizantes y no ionizantes son los
principales agentes físicos mutagénicos de origen
natural y artificial. Además de la importancia
que han tenido y tienen las radiaciones en la
generación de diversidad y en la evolución, sus
aplicaciones deben considerarse también en el
plano industrial, biotecnológico y en el área de
la salud.
• Los efectos de las radiaciones de alcance
molecular, celular y de sistemas, según su
energía y dosis pueden producir daño.
• Es es necesario conocer y controlar, en la
medida de lo posible, los mecanismos de
radioprotección a través de antioxidantes de
origen natural y mediante el uso de filtros.
2. 1. 1. Radiaciones ionizantes
Los rayos X y γ, así como partículas de alta
energía como los positrones, pueden provocar
ionización de átomos de la materia con la que
chocan. Estas radiaciones pueden dañar el ADN
directa o indirectamente.
• Directamente, a travéz de la ruptura de enlaces
fosfodiéster o por la pérdida de bases.
• Indirectamente, por la interacción con
productos que se generan como consecuencia
de reacciones de oxidación en el medio
circundante, con producción de radicales
hidroxilo y superóxido, entre otros.
126
2. 1. 2. Radiaciones no ionizantes
Según su longitud de onda la radiación UV se
clasifica en: UVA (320 a 400 nm), UVB (290 a
320 nm) y UVC (150 a 290 nm).
• Los tres tipos de radiación UV pueden producir
mutaciones.
• Las radiaciones de onda larga y media (UVA
y UVB) provenientes del sol predominan en
la superficie terrestre y pueden producir en la
piel inflamación (enrojecimiento, ulce-ración),
hiperpigmentación, envejecimiento y cáncer.
Estos dos últimos efectos se han observado
principalmente en personas que debido a su
actividad laboral, están expuestas largo tiempo
a la radiación solar (agrónomos, trabajadores
rurales, pescadores y marineros, entre otros).
• Estas radiaciones predisponen a una
disminución de la respuesta inmune,
estrés oxidativo y daño a nivel del ADN,
con perturbación de redes reguladoras de
la estabilidad genómica y del ciclo celular
(ejemplo: supresores tumorales).
La radiación UVC ha sido objeto del mayor
número de investigaciones en el plano molecular.
El ADN absorbe específicamente la radiación
UVC, que es responsable de la formación de
dímeros de pirimidina entre bases adyacentes:
T-T, T- C y C - C (fig. 1). Si bien las células son
capaces de reparar esos dímeros mediante un
mecanismo específico de escisión de nucleótidos
que involucra varias enzimas (fig. 2), el daño
producido aumenta con la dosis o fluencia
Figura 1. Dímeros de timina. La exposición al sol favorece la formación de dímeros entre T de la misma hebra,
que forman entre sí enlaces covalentes. Esto produce una modificación en la estructura del ADN.
energética (energía/superficie). En general, a
mayor dosis menor probabilidad de reparación;
es decir, aumenta la probabilidad de que algunos
dímeros no sean corregidos por los mecanismos
enzimáticos específicos.
• Si el dímero no es reparado, cuando el ADN
se duplica ADN la ADN pol puede incorporar
un nucleótido incorrecto frente al dímero de
pirimidinas. Estos dímeros son altamente
mutagénicos y potencialmente cancerígenos.
• La remodelación de la cromatina en torno a
las lesiones es importante para permitir la
accesibilidad de las enzimas de reparación.
Estudios con mutantes en la vía de reparación
específica y el análisis en seres humanos,
evidenciaron que la falta o deficiencia de ciertas
enzimas de reparación predispone la aparición
de cánceres de piel de distintos tipos.
• A grandes rasgos, el mecanismo de reparación
del dímero de T consiste en:
a. Reconocimiento del fallo estructural y
la hidrólisis del ADN por endonucleasas
(UvrABC) que cortan un fragmento a ambos
lados del dímero.
b. Separación del oligonucleótido generado por
acción de la helicasa II.
c. Síntesis de nuevo ADN por la ADN pol I que
usa como molde la hebra de ADN "sana",
complementaria a la que tenía el dímero.
d. Unión del ADN nuevo con el existente por
acción de la enzima ligasa.

Figura 2. Reparación de un dímero de timina. Una
endonucleasa (UvrABC) realiza la escisión (a -22 pb y
+6 pb respecto del dímero). La helicasa II remueve el
fragmento y la ADNpol I sintetiza el nuevo ADN que la
ligasa une al ADN existente.
Figura 3. Intercalantes. Estas moléculas se incorporan entre bases adyacentes.
127
Algunas de las enzimas mencionadas con
función de reconocimiento y corte de la lesión se
denominan XP (xeroderma pigmentosum). La
enfermedad xeroderma pigmentoso en la especie
humana ocurre por falta de alguna de esas
enzimas, y lleva a una alta incidencia de cáncer
de piel.
2. 2. Agentes químicos
Los mutágenos químicos pueden clasificarse
en intercalantes, análogos de bases y los que
reaccionan con el ADN.
• Los intercalantes provocan inserciones o
deleciones de un par de nucleótidos cuando
el ADN se duplica; lo que puede generar
corrimiento del marco de lectura. Los
colorantes de acridina y el bromuro de etidio
usado para teñir ADN, se intercalan entre dos
bases púricas adyacentes (fig. 3).
• Los análogos de bases son compuestos similares
a las bases nitrogenadas; pueden incorporarse
al ADN y cuando se duplica producir errores en
128
la hebra hija. Entre los análogos de bases (fig. 4)
se encuentran el 5-bromouracilo (análogo de
la timina) y la 2-aminopurina (análogo de la
adenina).
Figura 4. Dímeros con análogos de bases. A. Dímero
de 5-BU (5-bromouracilo) con adenina. B. Dímero de
2-AP (2-aminopurina) con timina.
• Entre las moléculas que reaccionan con el ADN
se encuentran el benzopireno, el etil metano
sulfonato (EMS) y la aflatoxina B1.
• El benzopireno, abundante en el humo de
cigarrillo, se genera durante la combustión
incompleta de sustancias de origen orgánico
(carbón, aceites, madera, nafta). Esta molécula
es metabolizada y transformada por las
células en dioloepóxido, un potente agente
cancerígeno que se une covalentemente a la G.
El EMS metila la G y genera el cambio de GC a
AT, mientras que la aflatoxina B1 se une a la G
y produce ruptura del enlace entre la base y la
pentosa: deja un sitio apurínico.
2. 3. Agentes biológicos
Los virus pueden alterar el material genético a
través de inserciones o deleciones en el genoma
de la célula huésped. También los trasposones,
secuencias de ADN que pueden “saltar” de un
lugar a otro en el cromosoma, pueden producir
mutaciones.
Cuadro 1. Mutaciones por sustitución, inserción deleción.
Tipo de mutación
Sustitución. Cambia un nucleótido por otro
Deleción. Se elimina uno o más nucleótidos
Inserción. Se incorpora uno o más nucleótidos
3. Las mutaciones pueden generar o no
cambios en el número de bases
Las mutaciones pueden alterar o no la cantidad
de bases del ADN. Las mutaciones por sustitución
de una base por otra no generan cambio en la
cantidad de nucleótidos (cuadro 1), mientras
que las mutaciones por delección e inserción
producen respectivamente disminución o
aumento en el número de nucleótidos (cuadro 1).
Para analizar las consecuencias que puede tener
una mutación se debe considerar, además de si
varía o no el número de bases, el lugar donde
ocurrió; es decir, si se localiza en la región
estructural o en regiones reguladoras del gen, o
si ocurre en regiones intergénicas.
A continuación se analizan las consecuencias que
pueden tener mutaciones ocurridas en diferentes
regiones de un gen.
3. 1. Consecuencia de mutaciones en la
región estructural de un gen que codifica
una proteína
a. Mutación por sustitución: no modifica el
número de bases del gen y pueden o no producir
el cambio de un aminoácido en la proteína.
• Mutación con cambio de un aminoácido.
El cambio de un aminoácido en la proteína
puede hacer variar o no su función. A modo de
ejemplo, si como consecuencia de la mutación
cambia un aminoácido del sitio activo de una
enzima probablemente ocurra una variación
en la funcionalidad de esa molécula. Si el
aminoácido estuviera en una región no
ADN ADN mutado
AGTTACCAT AGCTACCAT
AGTTACCAT - ATTACCAT
AGTTACCAT AGTTCACCAT

comprometida con la función, la mutación
podría no afectar la calidad de la enzima.
Otro aspecto a considerar es que el cambio
del aminácido puede no producir un cambio
funcional de la proteína cuando los -R son
similares en polaridad y tamaño.
• Mutaciones sinónimas. Estas mutaciones
son consecuencia del cambio de una base que
genera un codón (ARNm) que codifica para
el mismo aminoácido Por esto no cambia
la función de la proteína: son mutaciones
“silenciosas”. En el cuadro se muestra un
ejemplo.
--TTT--
ADN
--AAA--
ARNm --UUU--
Aminoácido --Fen--
+ Observe como debido a la redundancia del
código genético este tipo de mutación no conduce
a un cambio de aminoácido .
• Mutación sin sentido. Este tipo de
mutación genera un codón de terminación
a partir de otro que codificaba para
un aminoácido. Como consecuencia se
genera un polipéptido de menor tamaño,
probablemente no funcional.
b. Mutaciones con cambio en el número de
bases: por lo general tienen como consecuencia
la formación de proteínas no funcionales, porque
generan corrimiento del marco de lectura (cuadro 1).
Esto hace que se modifique la secuencia de todos los
Al finalizar la preparación del tema será capaz de:
• Explicar por qué las mutaciones pueden resultar beneficiosas o perjudiciales.
• Distinguir las consecuencias de una mutación en el ámbito celular o del sistema.
• Describir la formación y reparación de un dímero de timina y sus consecuencias.
• Predecir consecuencias de distintos tipos de mutación en diferentes regiones.
129
aminoácidos codificados después de la inserción/
deleción, incluso el codón stop. Sin embargo el
marco de lectura no cambia si la inserción/deleción
es múltiplo de 3: si se pierden 6 nucleótidos la
proteína tendrá 2 aminoácidos menos.
3. 2. Mutación en el promotor de un gen
que codifica ARNm
Las mutaciones en el promotor o en otras regiones
reguladoras no traen cambios en la calidad
de las proteínas en la mayor parte de los casos
estudiados. Las mutaciones en esas regiones,
sean por sustitución o con cambio en el número
--TTC--
ADN mutado
--AAG--
ARNm --UUC--
Aminoácido -- Fen --
de bases, pueden afectar la expresión del gen
si como consecuencia de ellas varía la cantidad
de ARNm transcripto. Si se afecta la cantidad
del ARNm transcripto variará la cantidad de
proteína, pero no la calidad de la misma dado
que para que eso ocurra la mutación debe ocurrir
en la región estructural del gen, donde está la
información para la secuencia de aminoácidos de
la proteína como se vio en el punto 3.1.
+ Observe que una mutación puede hacer
variar la afinidad promotor - ARN pol y traer
un aumento o descenso de la cantidad del
transcripto. También puede no afectar la afinidad
promotor - ARN pol y no haber variación en la
expresión del gen.
130

Bibliografía

Entre la bibliografía consultada se indica con * la sugerida para ser utilizada en el curso.

• Bioquímica. D. Voet, J. G. Voet. Ed. Médica Panamericana. 2006 y otras ediciones.*

• Principios de Bioquímica. D. Nelson, A. Lehninger, M. Cox. Ed. Omega. 2001 y otras
ediciones.*
• Bioquímica. Jeremy Mark Berg, Lubert Stryer, John L. Tymoczko. Ed. Reverte. 2008 y
otras ediciones.*
• Bioquímica. C. K. Mathews, K. G. Ahern, K. E. Van Holde. Ed. McGraw Hill. 1998 y otras
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• Principios de bioquímica. A. L. Lehninger, D. L. Nelson, M. M. Cox. Ed. Omega S. A. Bar-
celona. Ed. Omega. 1993 y otras ediciones.*
• Biología Celular y Molecular. H. Lodish, A. Berk, S. L. Zipursky, P. Matsudaira, D. Balti-
more y J. Darnell. 2005. Ed. Médica Panamericana.*
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Watson. 2002 y otras ediciones. Ed. Omega.*
• Biochemistry & Molecular Biology of Plants. Buchaban Gruisem and Jones. otras Ameri-
can Society of Plant Physiologits 2000 y otras ediciones.
• Biological Membranes. Brown BS 1996. Biochemical Society.
• Metabolismo del nitrógeno en las plantas. J. Monza y A Márquez Editores. 2004. Ed.
Almuzara.
• Proliferación Celular y su  perturbación. Aspectos cuantitativos y moleculares 2006. E.
Nunes y U. Gelós. FEFMUR- Facultad de Medicina.UdelaR.