CURVAS TEMPORALES DE

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Discusión
OBJETIVOS

 Conocer las características generales de las enzimas

como catalizadores biológicos.
 Adquirir la habilidad para medir la actividad de una
enzima utilizando un método espectrofotométrico.
 Relacionar los distintos parámetros asociados a la
medición de la actividad enzimática que permiten seguir
y evaluar la purificación de una enzima (actividad
específica, rendimiento y enriquecimiento).
LACTATO DESHIDROGENASA
DATOS OBTENIDOS DE LA ACTIVIDAD DE LOS EXTRACTOS DE LAS
FRACCIONES OBTENIDAS DE LA PURIFICACIÓN DE LA LDH DE
MÚSCULO DE BOVINO

TIEMPO FRACCION 3 FRACCION 4 fpii Fpii2 FPA

dil 1:20 dil 1:20 conc conc conc
0.5 1.027 1.047 1.257 1.263 1.107
1 0.919 0.922 1.257 1.263 1.109
1.5 0.8 0.798 1.253 1.261 1.105
2 0.697 0.68 1.261 1.106
2.5 0.59 0.567 1.241 1.261 1.008
3 0.487 0.461 1.261 1.007
3.5 0.392 0.364 1.237 1.26 1.008
4 0.307 0.276 1.240 1.26 1.008
4.5 0.23 0.202 1.240 1.259 1.007
5 0.166 0.141 1.237 1.005

 Después se grafican los datos para obtener las pendientes de las

curvas
CÁLCULOS

mg proteína F3= 0.01812 mg (lo obtuve al considerar que había 7.25 /L en el
concentrado (datos de determinación de proteína de mi extracto) al diluir 1:20
quedaron 0.3625 g/L, como añadí 50 L entonces la celda tenía 0.01812 mg)
ACTIVIDAD DE LDH DE LAS FRACCIONES 3 Y 4
DEL PROCESO DE PURIFICACIÓN DE AL ENZIMA

Fracción 3 Fracción 4
(mol min-1mg-1) (mol min-1mg-1)
 
m 0.1946 0.2043
r2 0.99 0.99
Actividad 29.490499 33.293998
 ¿CÓMO CALCULAR EL FACTOR DE
PURIFICACIÓN O LAS VECES DE
PURIFICACIÓN?
Cuando se purifica a una proteína es habitual usar una tabla con datos que nos
indiquen si el proceso que se llevo a cabo fue efectivo.
 Cuando una proteína no pierde actividad biológica esta se sigue a través de
medir esa actividad.

Etapa Volumen Actividad Proteína Act. Espec. Cantidad Factor de

(ml) Total Total (U/mg) (%) Purificación
(U) (mg)
EC 500 3,000 15,000 0,2 100

SA 100 2,400 4,000 0,6 80 3,0

CII 45 1,440 500 2,9 48 14,5

FG 50 1,000 125 8.0 33 40,0

EC: Extracto crudo. SA: Precipitación con sulfato de amonio. CII: Cromatografía de intercambio iónico. FG: Filtración en gel.
TABLA DE PURIFICACIÓN DE LA LDH DE
MÚSCULO ESQUELETO DE BOVINO (EQUIPO
6)

Fracción Proteína [µg Volumen total de la Proteína total en la fracción Rendimiento

/µL] fracción [µL] [µg]

1 13.72 30000 411600 100%

2 14.13 29000 282600 68.66%

3 15.55 2500 38875 9.44%

4 15.93 1000 15930 3.88%

FPA 1.474 900 1326.6 0.32%

FPB 1.364 900 1227.6 0.29%

PURIFICACIÓN DE LA LDH