INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA
ACADEMIA DE FERMENTACIONES
INGENIERÍA BIOQUÍMICA, PLAN 2019
LABORATORIO DE INGENIERÍA DE BIORREACCIÓN

Reporte práctico 05:

Validación experimental de un sistema de fermentación “Fed-

Batch” con alimentación exponencial.

Grupo: 6IM2

Profesora:
M. en C. María Elena Mondragón Parada
Equipo 05:
• Coronel Del Monte Catherine
• De Jesús Campuzano Alejandro
• Sánchez Vargas Arturo
• Ramírez López Juventino

Fecha de entrega:
21 de diciembre de 2022

1
INTRODUCCIÓN
Para mejorar la producción de bienes o servicios con microorganismos, células o sus partes, es necesario el
diseño y operación de bioprocesos eficientes y reproducibles mediante la integración de las ciencias biológicas
con diversas ingenierías como la mecánica, eléctrica, y técnicas de control. Es importante proporcionarle un
entorno adecuado al material biológico y esto se logra con el diseño de reactores y sus estrategias para
controlarlos y operarlos. Los sistemas de cultivo se clasifican en:
a) Sistemas cerrados, cultivos lote;
b) Sistemas abiertos, cultivos continuos y
c) Sistemas semicerrados, cultivos alimentados.
Los cultivos alimentados combinan las bondades de los primeros dos tipos de cultivo eliminando sus
desventajas. Por ejemplo, son cultivos altamente productivos, su instalación no es muy costosa, evitan la
degeneración del microorganismo y bajo ciertas condiciones se puede controlar la velocidad específica de
crecimiento para mejorar la producción. (Hernández, 2015)
El cultivo por lote alimentado (CLA) es una modalidad de fermentación, cuyas características hacen atractiva
su aplicación a una variada gama de procesos de fermentación, tanto en el área de la investigación, como en
el área de producción. Principalmente se trata de una operación discontinua, durante la cual los nutrientes o
parte de ellos ingresan al fermentador por una corriente de alimentación, y al no existir una corriente de
descarga, resulta en una continua variación del volumen de fermentación. Las condiciones iniciales de un
cultivo por lote alimentado se logran a través de una etapa previa de carácter obligatoria de cultivo por lote.
Una vez que se han alcanzado las condiciones deseadas, se inicia la alimentación, marcando el comienzo del
CLA. (Arraño, 2015)
Para realizar una correcta programación con respecto a la velocidad de alimentación del cultivo, se debe
considerar la demanda del microrganismo, la cual se define por las condiciones de crecimiento que se
impongan en el proceso que se lleve a cabo. Generalmente, para obtener estas funciones de alimentación se
ha optado por mantener constante SR y variar F con el tiempo del cultivo. No obstante, se pueden obtener
distintas funciones de la oferta de forma más simple, manteniendo F constante y haciendo variable SR con el
tiempo. Para plantear en forma simple los balances de materia del sistema, se deben tener en consideración
las siguientes suposiciones, validadas por la investigación de Jones y Anthony (Jones y Anthony, 1977),
primero que todo, el rendimiento del sustrato limitante (YX/S) es constante durante toda la fermentación; en
segundo lugar, el consumo de sustrato para la mantención es despreciable; y, por último, el aumento de
volumen en el reactor es igual al volumen de solución de nutriente alimentada.
En el caso del CLA con velocidad de alimentación exponencial, se impone que la masa celular crezca a una
velocidad específica de crecimiento (µ) constante durante todo el cultivo y se determina cuál debe ser la
función oferta para satisfacer esta condición, considerando SR constante. En el caso del CLA con velocidad
de alimentación constante, F y SR vienen dados, y son constantes. (Arraño, 2015)
OBJETIVO GENERAL
Realizar un sistema de fermentación Fed-Batch alimentado exponencialmente para la obtención de proteína
unicelular de la levadura Candida utilis Y-900 validando los resultados experimentales del sistema de
alimentación con resultados teóricos arrojados a través de un simulador que utiliza parámetros cinéticos
previamente obtenidos a través de un cultivo por lote.
OBJETIVOS PARTICULARES
1. Contrastar que sistema de fermentación (lote o Fed-Batch alimentado exponencialmente) es mejor en
cuanto a rendimientos y productividades.
2. Determinar la concentración celular por métodos directos como peso seco y turbidez y mencionar cuál es
más eficiente.
3. Establecer como varía el sustrato residual en un cultivo Fed-Batch alimentado exponencialmente.

2
DIAGRAMA DE FLUJO

3
4
RESULTADOS

Tabla 1. Parámetros iniciales para el sistema de fermentación Fed-Batch con alimentación exponencial.
Microorganismo Candida utilis Y-900
Sr 40 g/L
T 28-30 °C
pH 4.5-5.5 Adim
Concentración del control
0.21 g/L
de glucosa

Tabla 2. Resultados obtenidos para la concentración celular en cultivo por lote.

Peso Vol Peso Peso
Muestra Edad A Filtro Absorbancia
Dil Hora (f) muestra (f+biofilm) seco
N (h) s600nm N [x] g cél/L
mg (mL) mg [x] g cél/L
1:10 M1 09:18:00 a. m. 0 0.19 1 23.8 5 31.3 1.33 1.5
1:10 M2 09:48:00 a. m. 0.5 0.24 2 23.8 5 33 1.68 1.84
1:10 M3 10:18:00 a. m. 1 0.31 3 23 5 33.4 2.17 2.08
1:25 M4 10:48:00 a. m. 1.5 0.12 4 25.2 5 37.6 2.1 2.48
1:25 M5 11:18:00 a. m. 2 0.16 5 23.3 5 38.1 2.8 2.96

Tabla 3. Resultados obtenidos para el sustrato residual en cultivo por lote.

Volumen (µL) Dilución A S540 nm Control A S540nm Muestra s (g/L)
200 1:10 0.022 0.0385 3.675
200 1:10 0.022 0.028 2.6727
200 1:10 0.022 0.022 2.1
200 1:10 0.022 0.005 0.4772
200 - 0.022 0.005 0.04772

Tabla 4. Resultados obtenidos para la concentración celular en cultivo Fed-Batch alimentado

exponencialmente.
Vol Peso
Muestra Edad Filtro Peso Peso seco
Dil Hora As600nm muestra (f+biofilm) [x] g cel/L
N (h) N (f) mg [x] g cél/L
(mL) mg
1:25 M1 11:18:00 a. m. 0 0.16 5 23.3 5 38.1 2.8 2.96
1:25 M2 12:18:00 p. m. 1 0.185 6 22.9 5 40.1 3.2375 3.44
1:25 M3 13:18:00 p. m. 2 0.28 7 23.4 5 38.8 4.9 3.08
1:50 M4 14:18:00 p. m. 3 0.175 8 23.4 3 41.3 6.125 5.9666
1:50 M5 15:18:00 p. m. 4 0.222 9 25 3 44.9 7.77 6.6333

Tabla 5. Resultados obtenidos para el sustrato residual en cultivo Fed-Batch alimentado

exponencialmente.
Volumen (µL) Dilución A S540nm Control A S540nm Muestra s (g/L)
200 - 0.022 0.005 0.04772
200 - 0.022 0.025 0.23863
200 - 0.022 0.011 0.1050
200 - 0.022 0.02 0.1909
200 - 0.022 0.02 0.1909

5
 Tabla 6. Logaritmos de la concentración celular obtenida por peso seco en
cultivo por lote para obtener la velocidad específica máxima de
crecimiento.
Peso seco
Edad (h) Ln peso seco [x]
[x] g cél/L
0 1.5 0.4054
0.5 1.84 0.6097
1 2.08 0.7323
1.5 2.48 0.9082
2 2.96 1.085189

Velocidad específica máxima de crecimiento en cultivo por

1.2 lote

1
Ln peso seco [x]

0.8
0.6 Ln [x]= 0.3316 t + 0.4166
R² = 0.9957
0.4
0.2
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Tiempo (h)

Gráfico 1. Velocidad específica máxima de crecimiento experimental calculada

por peso seco en función del tiempo en la primera fase del sistema de
fermentación, es decir, por cultivo por lote.

Tabla 7. Productividades y rendimientos celulares obtenidos por peso

seco en cultivo por lote.
RX (g cél/ L*h) 0.7300
Yx/s (g cél/ g sus) 0.4025

Los datos presentados a continuación corresponden al sistema de fermentación Fed-Batch alimentado

exponencialmente, iniciando por los resultados obtenidos en el simulador, es decir, los datos teóricos y
posteriormente los datos experimentales con sus respectivos gráficos comparativos.
Tabla 8. Datos cinéticos de Candida utilis Tabla 9. Condiciones iniciales utilizadas
Y-900 experimentalmente para validarlas teóricamente en el
µ máx 0.3 1/h simulador para el sistema de fermentación Fed-Batch
Ks 0.05 gs/ L alimentado exponencialmente.
Sr 40 gs/ L
m 0.02 gs/g cél*h
s 0.25 gs/ L
Yg 0.5 g cél/ gs Vo 1 L
Yxs 0.4808 g cél/ gs V máx 2.5 L
µ oper 0.25 1/h xo 2.96 g cél/ L

6
 Tabla 10. Resultados teóricos obtenidos en el simulador para el sistema de fermentación Fed-Batch
alimentado exponencialmente.
t (h) F (L/h) V (L) D (1/h) x (g/L) X (g cél) dV (L) dV (mL) s (g/L) µ (h-1)
0.00 0.03872 1.00000 0.03872 2.96000 2.96000 - - 0.25000 0.25000
1.00 0.04972 1.04399 0.04762 3.64056 3.80070 0.04399 43.98933 0.25000 0.25000
2.00 0.06384 1.10047 0.05801 4.43463 4.88019 0.05648 56.48341 0.25000 0.25000
3.00 0.08197 1.17300 0.06988 5.34209 6.26626 0.07253 72.52614 0.25000 0.25000
4.00 0.10525 1.26612 0.08313 6.35483 8.04601 0.09313 93.12541 0.25000 0.25000

35 Simulador Fed Batch 0.12

30 0.10
25
V (L); x (g/L); X (g cél)

F (L/h); D (1/h); dV (L)

0.08
20
0.06
15
0.04
10

5 0.02

0 0.00
0 1 2 3 4 5
Tiempo (h)
V (L) x (g/L) X (g cél) F (L/h) D (1/h) dV (L)

Gráfico 2. Comportamientos teóricos obtenidos en el simulador para el sistema de

fermentación Fed-Batch con alimentación exponencial.

Tabla 11. Productividades y rendimientos celulares teóricos obtenidos en el

simulador para el sistema de fermentación Fed-Batch alimentado
exponencialmente.
1.0042
RX (g cél/ L*h)
0.4808
Yx/s (g cél/ g sus)

Tabla 12. Resultados obtenidos experimentalmente para el sistema de fermentación Fed-Batch

alimentado exponencialmente.
Peso seco
Edad (h) V (L) X (g cél) Ln [x] s (g/L) µexp (h-1)
[x] g cél/L
0 1.0000 2.9600 2.9600 1.0852 0.0477 0.0000
1 1.0251 3.4400 3.5264 1.2355 0.2386 0.1503
2 0.9694 3.0800 2.9857 1.1249 0.1050 -0.1105
3 1.9697 5.9667 11.7523 1.7862 0.1909 0.6613
4 1.0816 6.6333 7.1745 1.8921 0.1909 0.1059

7
 7
x = f (t) X = f (t)
14
6 12
5 10
x (g ce´l/L)

4 8

X (g cél)
3 6
2 4
1 2
0 0
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
Tiempo (h) Tiempo (h)
x Teórica x Experimental X Teórico X experimental

Gráfico 3. Concentración celular teórica y experimental Gráfico 4. Cantidad celular teórica y experimental
calculada por peso seco en función del tiempo en el calculada por peso seco en función del tiempo en el
sistema de fermentación Fed-Batch con alimentación sistema de fermentación Fed-Batch con alimentación
exponencial. exponencial.

µ = f (t) s = f (t)
0.70 0.30
0.60
0.25
s residual (g sustrato/L)

0.50
0.40 0.20
µ (h-1)

0.30
0.15
0.20
0.10 0.10
0.00
0.05
-0.10
-0.20 0.00
0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
Tiempo (h) Tiempo (h)
µ Teórico µ Experimental s Teórico s Experimental

Gráfico 5. Velocidad específica de crecimiento teórica y Gráfico 6. Sustrato residual teórico y experimental en
experimental calculada por peso seco en función del función del tiempo en el sistema de fermentación Fed-
tiempo en el sistema de fermentación Fed-Batch con Batch con alimentación exponencial.
alimentación exponencial.

Tabla 13. Productividades y rendimientos celulares obtenidos

experimentalmente para el sistema de fermentación Fed-Batch alimentado
exponencialmente.
RX (g cél/ L*h) 0.9742
Yx/s (g cél/ g sus) 1.3575

8
EJEMPLO PARA LA MEMORIA DE CÁLCULO
Como los resultados experimentales independientemente de que sean en la parte de cultivo por lote o Fed
Batch reciben el mismo tratamiento matemático la evidencia de cálculo ser realizará con base en la muestra
M1 presentada en el Tabla 2. Resultados obtenidos para la concentración celular en cultivo por lote.
➢ Cálculos de los métodos empleados para medir concentración de biomasa

Método espectrofotométrico

• Aprob 0.19
• Acontrol 0.7
• Factor de dilución (FD)=10
𝐴[𝑥] = 𝐴𝑝𝑟𝑜𝑚 𝐴𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝐹𝐷 = 0.19 ∗ 0.7 ∗ 10 = 1.33 𝑔𝑐é𝑙/ 𝐿

Método de peso seco

• Peso (f)=23.8 mg
• Volumen de muestra = 5 mL
• Peso (f + bioflilm) = 31.3 mg

(31.3 − 23.8)𝑚𝑔 𝑐é𝑙 1000 𝑚𝐿 1𝑔

[𝑥] = ∗ ∗ = 1.5 𝑔 𝑐é𝑙/𝐿
5 𝑚𝑙 1𝐿 1000 𝑚𝑔
Cálculo para obtener la concentración de sustrato

• Aprob =0.0385
• Acontrol =0.022
• Acontrol gluc =0.21
• FD =10
𝐴𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑔𝑙𝑢 ∗ 𝐴𝑝𝑟𝑜𝑚 ∗ 𝐹𝐷 0.21 ∗ 0.0385 ∗ 10
𝐴[𝑆] = = = 3.675 𝑔 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜/𝐿
𝐴𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 0.022
Cálculo de las productividades con los datos obtenidos a partir de peso seco en cultivo por lote.
𝑥𝑓 − 𝑥1 (2.96 − 1.5) 𝑔 𝑐é𝑙/𝐿 𝑔 𝑐é𝑙
𝑅𝑥 = = = 0.7300
𝑡𝑓 − 𝑡𝑖 (2 − 0) ℎ ℎ∗𝐿

Cálculo de los rendimientos con los datos obtenidos a partir de peso seco en cultivo por lote.
𝑥𝑓 −𝑥1 (2.96−1.5)𝑔𝑐é𝑙/𝐿 𝑔𝑐é𝑙
𝑌𝑥/𝑠 = = (3.675−0.047727)𝑔𝑠𝑢𝑠/𝐿 = 0.40256
𝑠𝑓 −𝑠𝑖 𝑔𝑠𝑢𝑠

Para la evidencia de cálculo de los resultados teóricos obtenidos en el simulador para el sistema de
fermentación Fed-Batch alimentado exponencialmente se utilizará el tiempo correspondiente a 0 horas.
Cálculo del flujo teórico:
1 𝑔 𝑐𝑒𝑙
𝜇𝑥0 0.25 ∗ 2.96 𝐿 1
𝐹= 𝜇𝑡
𝑒 = ℎ 𝑒 0.25ℎ∗0ℎ = 0.03872 𝐿/ℎ
𝑌𝑥/𝑠 (𝑠𝑟 − 𝑠) 𝑔 𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑠
0.4808 𝑔 𝑠 (40 − 0.25) 𝐿

Cálculo del volumen teórico:

9
 𝑔 𝑐𝑒𝑙
𝑥0 2.96 𝐿 1
𝑉 = 𝑉0 + (𝑒 𝜇𝑡 − 1) = 1𝐿 + (𝑒 0.25ℎ∗0ℎ − 1) = 1𝐿
𝑌𝑋/𝑆 (𝑆𝑅 − 𝑠) 𝑔 𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑠
0.4808 (40 − 0.25)
𝑔𝑠 𝐿
Cálculo de la velocidad de dilución teórica:
𝐹 0.03872 𝐿 1 1
𝐷= = ∗ = 0.03872
𝑉 ℎ 1𝐿 ℎ

Cálculo de la concentración de biomasa teórica:

𝑔 𝑐𝑒𝑙 1
𝑥0 𝑉0 𝑒 𝜇𝑡 2.96 ∗ 1𝐿 ∗ 𝑒 0.25ℎ∗0ℎ 𝑔 𝑐é𝑙
𝑥= = 𝐿 = 2.96
𝑥0 𝑉0 𝑒𝜇𝑡 (𝜇 + 𝑚𝑌𝐺 ) 𝜇𝑡 𝑔 𝑐𝑒𝑙 1 1 𝑔𝑠 𝑔𝑐𝑒𝑙
0.25 ∗0ℎ 𝐿
𝑉0 + (𝑒 − 1) 2.96 ∗ 1𝐿 ∗ 𝑒 ℎ (0.25 + 0.02 ∗ 0.5 ) 1
𝜇𝑌𝑔 (𝑆𝑟 − 𝑠) 𝐿 ℎ 𝑔𝑐𝑒𝑙 ∗ ℎ 𝑔𝑠
1𝐿 + (𝑒 0.25ℎ∗0ℎ − 1)
1 𝑔 𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑠
0.25 ∗ 0.5 ∗ (40 − 0.25)
ℎ 𝑔𝑠 𝐿

Cálculo de cantidad celular teórica:

𝑔 𝑐𝑒𝑙
𝑋 = 𝑉 ∗ 𝑥 = 1𝐿 ∗ 2.96 = 2.96 𝑔𝑐𝑒𝑙
𝐿

Cálculo de las productividades con datos teóricos (obtenidos en el simulador para el sistema de fermentación
Fed-Batch alimentado exponencialmente)
𝑥𝑓 𝑉𝑓 − 𝑥0 𝑉0 (6.35483 ∗ 1.26612 − 2.96 ∗ 1) 𝑔𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑐é𝑙
𝑅𝑥 = = = 1.0042
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑖 )𝑉𝑓 (4 − 0)1.26612 𝐿 ∗ ℎ ℎ∗𝐿

Cálculo del rendimiento con datos teóricos (obtenidos en el simulador para el sistema de fermentación Fed-
Batch alimentado exponencialmente)
𝑥𝑓 𝑉𝑓 − 𝑥0 𝑉0 (6.35483 ∗ 1.26612 − 2.96 ∗ 1) 𝑔𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑐𝑒𝑙
𝑌𝑥/𝑠 = = = 0.4808
𝑠0 𝑉0 + ∆V𝑠𝑟 − 𝑉𝑓 𝑠𝑟 (0.25 ∗ 1 + (1.26612 − 1) ∗ 40 − 1.26612 ∗ 0.25)𝑔𝑠𝑢𝑠 𝑔𝑠𝑢𝑠

Para la evidencia de cálculo de los resultados obtenidos experimentalmente para el sistema de fermentación
Fed-Batch alimentado exponencialmente se utilizará el tiempo correspondiente a 0 horas.
Cálculo del volumen:
𝑔 𝑐𝑒𝑙
𝑥0 2.96 𝐿 1
𝑉 = 𝑉0 + (𝑒 𝜇𝑡 − 1) = 1𝐿 + (𝑒 0ℎ∗0ℎ − 1) = 1𝐿
𝑌𝑋/𝑆 (𝑆𝑅 − 𝑠) 𝑔 𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑠
0.4808 𝑔 𝑠 (40 − 0.0477) 𝐿

Cálculo de cantidad celular:

𝑔 𝑐𝑒𝑙
𝑋 = 𝑉 ∗ 𝑥 = 1𝐿 ∗ 2.96 = 2.96 𝑔𝑐é𝑙
𝐿
Cálculo de µ experimental para el tiempo de 1 hora:
𝐿𝑛(𝑥2 ) − 𝐿𝑛(𝑥1 ) 𝐿𝑛(3.44) − 𝐿𝑛(2.96)
𝜇exp = = 𝜇efectiva = = 0.1503 ℎ−1
𝑡2 − 𝑡1 (1 − 0)ℎ

Cálculo de las productividades con datos obtenidos experimentalmente para el sistema de fermentación Fed-
Batch alimentado exponencialmente

10
 𝑥𝑓 𝑉𝑓 − 𝑥0 𝑉0 (6.6333 ∗ 1.0816 − 2.96 ∗ 1) 𝑔𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑐é𝑙
𝑅𝑥 = = = 0.9741
(𝑡𝑓 − 𝑡𝑖 )𝑉𝑓 (4 − 0)1.0816 𝐿 ∗ ℎ ℎ∗𝐿

Cálculo del rendimiento con datos obtenidos experimentalmente para el sistema de fermentación Fed-Batch
alimentado exponencialmente
𝑥𝑓 𝑉𝑓 − 𝑥0 𝑉0 (6.6333 ∗ 1.0816 − 2.96 ∗ 1) 𝑔𝑐𝑒𝑙 𝑔𝑐𝑒𝑙
𝑌𝑥/𝑠 = = = 1.3575
𝑠0 𝑉0 + ∆V𝑠𝑟 − 𝑉𝑓 𝑠𝑟 (0.0477 ∗ 1 + (1.0816 − 1) ∗ 40 − 1.0816 ∗ 0.1909)𝑔𝑠𝑢𝑠 𝑔𝑠𝑢𝑠

ANÁLISIS DE RESULTADOS
Para poder llevar a cabo el cultivo alimentado exponencialmente se inició por una fase de cultivo por lote, en el
cual se determinó la velocidad específica de crecimiento máxima en la levadura Candida utilis Y-900 aunque se
usaron dos métodos directos para determinar dicho valor (determinación por peso seco y absorbancia a 468 nm),
se decidió tomar en cuenta a los datos obtenidos por peso seco para calcular a los logaritmos (tabla 6) y obtener
el gráfico 1, resultando una pendiente de 0.3316 h-1 que corresponde a la velocidad específica de crecimiento
máxima con un coeficiente de determinación de 0.9957, siendo muy cercana a lo que se esperaba teóricamente
de acuerdo a la tabla 8 que presenta un valor de 0.3 h-1. La razón del porqué únicamente se decidió tomar en
cuenta a los resultados obtenidos por peso seco es debido a que se trata de un método más confiable para la
cuantificación, en tanto, el método por absorbancia tiene demasiadas interferencias como lo son la posición de
la cubeta, la lectura tomada por el analista, materia extraña presente en la muestra, dilución, cantidad de muestra
colocada, homogenización de la muestra, entre otras que afectan directamente a la difracción de la luz y, por
ende, a la lectura.
Una vez transcurridas las primeras dos horas se llevó a cabo el cambio a un reactor alimentado
exponencialmente que opero cuatro horas más. En cuanto a los valores del volumen, la concentración celular y
la cantidad celular mostrados en la tabla 12, en el gráfico 3 y 4 respectivamente, se observa que ajustan bien al
modelo propuesto en el simulador como se indica en la tabla 10 y el gráfico 2, sin embargo, es importante
destacar que se presentan desviaciones en los resultados obtenidos a la segunda hora de operación en el
sistema alimentado exponencialmente debido a que en la toma de muestra para la determinación de la
concentración celular se realizó de manera inadecuada, removiendo masa con las pinzas al momento de tomar
el filtro, por lo que se obtiene una menor cantidad a la esperada, afectando a los comportamientos estudiados a
este intervalo e intervalos posteriores de tiempo ya que dichos resultados se involucran en el resto de cálculos,
además de ello, deben considerarse las variaciones ocasionadas en el volumen al adicionar el sustrato,
antiespumante, solución alcalina, la toma constante de muestras y la purga, así como el tiempo ya que afecta la
cantidad de sustrato residual y de biomasa con la que opera el reactor.
En cuanto a los valores de las velocidades específicas de crecimiento modelados y obtenidos experimentalmente
como se muestra en el gráfico 5 se tienen variaciones negativas (decaen) y positivas (aumentan) en
determinados tiempos (puntos de inflexión a la 1, 2 y 3 horas mostrados en el gráfico), debido al cambio constante
de volumen en los diferentes intervalos de tiempo ya que se tienen diferentes concentraciones de sustrato por el
flujo suministrado, dilución por otros flujos y la toma de muestras, que condicionan el crecimiento del
microorganismo, exceptuando el valor a las dos horas en el cual se cometió un error por parte del analista para
la determinación de la concentración celular, por lo que el valor de μ es negativo, razón por la cual a las 3 horas
el valor de μ se dispara siendo mucho mayor a la μ máx ya que impacta de manera directa en los cálculos.
Por otra parte, los valores del sustrato residual modelados y obtenidos experimentalmente como se muestran en
el gráfico 6 también presentan variaciones negativas (decaen) y positivas (aumentan) en determinados tiempos
(puntos de inflexión a la 1, 2 y 3 horas mostrados en el gráfico) debido al cambio constante de volumen en los
diferentes intervalos de tiempo ya que se tienen diferentes concentraciones de sustrato por el flujo suministrado,
dilución por otros flujos y la toma de muestras, sin embargo, esto indica que debió suministrarse de manera más
controlada y precisa el sustrato manteniendo en todo momento la concentración limitante de 0.25 g/L ya que
condiciona a la velocidad especifica de crecimiento y, por lo tanto, a la concentración celular que corresponde al
producto de interés.
11
Finalmente, los valores de los rendimientos son muy cercanos a lo esperado teóricamente, pues los valores de
volumen y biomasa son similares a lo simulado, sin embargo, las productividades experimentales dan por encima
de lo contemplado ya que el sustrato y biomasa presentan diferencias a lo teórico, que ocasionan estos valores.
Comparando esto a lo esperado y a lo obtenido en el cultivo por lote, se nota un incremento que es debido al
cambio de volumen con el paso del tiempo, dando una clara ventaja por encima del cultivo por lote para la
obtención de proteína unicelular de la levadura Candida utilis Y-900.
CONCLUSIONES
1. Los resultados experimentales concuerdan con los datos arrojados por el simulador empleado para el sistema
de fermentación Fed-Batch alimentado exponencialmente para la levadura Candida utilis Y-900, a excepción de
la segunda hora debido a errores sistemáticos.
2. El sistema de fermentación operado por un cultivo Fed-Batch alimentado exponencialmente presenta ventajas
sobre un cultivo por lote debido a la naturaleza del incremento en el volumen en función del tiempo, obteniendo
mayores productividades y rendimientos de proteína unicelular de la levadura Candida utilis Y-900.
3. El valor de velocidad de crecimiento específica máxima para la levadura Candida utilis Y-900 durante el cultivo
por lote es de 0.3316 h-1.
4. La determinación de la concentración celular fue más eficiente por el método directo de peso seco, ya que no
presenta demasiadas interferencias, sin embargo, en la segunda hora se removió gran parte de la biomasa
afectando en gran medida a la velocidad máxima de crecimiento y a la cantidad celular en los siguientes intervalos
de tiempo.
5. El sustrato residual varía en un cultivo Fed-Batch alimentado exponencialmente debido a los cambios de
volumen y, por ende, afecta al crecimiento celular en los diferentes intervalos de tiempo.

REFERENCIAS
[1] Arraño, N. (2015) Desarrollo de una Estrategia de Operación en Cultivo por Lote Alimentado de Pichia pastoris
para la Producción de Lipasa Recombinante. Pontificia Universidad Católica de Valparaíso, Tesis de licenciatura.
[2] Hernández, A; Vargas, P. (2015) Sistema de control de alimentación para cultivo lote alimentado exponencial.
Revista de análisis cuantitativo y estadístico. Vol. 3 No. 6.
[3] Jones, R. & Anthony, R. (1977). The Relationship between Nutrient Feed Rate and Specific Growth Rate in
Fed Batch Cultures. European Journal of Applied Microbiology and Biotechnology, 4: 87-92.

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