AUTOMATIZACIÓN

DEL HEMOGRAMA
Dra. Carolina Cucho Espinoza
Historia

■ Conteo de las células sanguíneas: Hemocitómetro.

■ Concentración de la hemoglobina: Método
cianometahemoglobina.
■ Hematocrito: Tubo de Wintrobe.
■ Diferencial de los glóbulos blancos.
Hematocrito
Manual
Historia
Constantes Corpusculares

■ Wintrobe, en 1932:
■ Volumen corpuscular medio: Hto/Hematíes (fl)
■ Hemoglobina corpuscular media: Hb/Hematíes (pg).
■ Concentración de la hemoglobina corpuscular media: Hb/Hto
(%).
Componentes básicos de un analizador
hematológico
■ Diluidor: sistema que reduce la concentración de las células sanguíneas y las suspende en soluciones
conductoras isotónicas para adecuarla a las capacidades de medida del dispositivo.

■ Aspirador: sistema que toma la muestra diluida y la conduce hacia el dispositivo de medida.

■ Sistema de fluidos: transporta las suspensiones celulares hacia el dispositivo de medida o la cámara de recuento.

■ Cámara de recuento o dispositivo de medida: constituye la parte central o zona sensible del equipo, donde
ocurren los fenómenos ópticos, eléctricos o ambos, medidos posteriormente.

■ Transductor o detector: son los dispositivos que generan linealmente pulsos eléctricos cuando las células pasan
la zona sensible, óptica o eléctrica, del equipo.

■ Discriminador: discrimina los pulsos eléctricos generados por los transductores en correspondencia con el tipo
celular medido.

■ Amplificador: amplifica la señal eléctrica que sale del discriminador para su posterior procesamiento.

■ Convertidor analógico-digital: convierte las señales eléctricas en digitales.

■ Ordenador: procesa las señales digitales y las convierte en datos que serán mostrados en pantalla y que pueden
ser impresos.

■ La parte electrónica del equipo está compuesta por el amplificador, el convertidor y el ordenador.
 PRINCIPIOS GENERALES DE
DETECCIÓN UTILIZADOS POR
LOS ANALIZADORES
HEMATOLÓGICOS
Medida de la variación de impedancia o
resistencia eléctrica (principio Coulter)
Medición de la cantidad de luz
dispersada (método óptico)
Dispersión óptica
Dispersión óptica
Técnicas inmunológicas mediante anticuerpos
monoclonales (Ac Mo) acoplados a
fluorocromos (citometría de flujo)

■ En la técnica de citometría de flujo las células en suspensión se

hacen pasar alineadamente una a una, por delante de un haz de
luz láser monocromático, lo que causa su dispersión en diversos
ángulos y la emisión de energía fluorescente, previo marcaje de
las estructuras celulares con anticuerpos monoclonales
acoplados a fluorocromos. La utilización de una fuente de luz
láser, generalmente de argón, ofrece un rayo monocromático
más intenso, más colimado y capaz de inducir la excitación de
ciertos compuestos (fluorocromos) con la consecuente inducción
de la señal fluorescente, lo que garantiza una medición
fotométrica más exacta
La interacción de haz láser con cada célula marcada produce 2 tipos de
señales: de dispersión y de fluorescencia. Para su detección, las señales de
dispersión se dividen en 2 fracciones: fracción dispersa ángulo estrecho (0-
100) hacia adelante en o Forward Scatter (FSC), y fracción dispersa en
ángulo de 900 con respecto al haz incidente o Side Scatter (SSC), las que
serán recogidas por 2 detectores de dispersión colocados al efecto
Citometría de fujo

■ Las señales de fluorescencia serán recogidas por 3 detectores de

fluorescencia en equipos de un solo láser y por un cuarto detector en
equipos de 2 láseres.
■ Esta característica de la citometría de flujo la convierte en una
poderosa técnica multiparamétrica al ofrecer simultáneamente varios
parámetros sobre cada célula y la relación de estos parámetros con los
de otra célula también analizada.
■ En la práctica médica hematológica e inmunológica, este principio
encuentra aplicación en el conteo e identificación de subpoblaciones
linfocitarias (inmunofenotipo), estudios de función plaquetaria,
determinación de reticulocitos inmaduros y en la caracterización de las
leucemias agudas y síndromes mieloproliferativos, entre otras
Para evitar errores, tienen dos
mecanismos:
■ Enfoque hidrodinámico.
Logra que las células disueltas en la corriente salina transportadora
penetren en la cámara de medición de forma cónica estrechada hasta
unos 20 mm.
■ Flujo de barrido
Consiste en el flujo perpendicular de una corriente estacionaria de
diluyente por detrás de las aberturas destinadas al recuento celular
para evitar que dichas células sean removidas de la zona de
detección una vez atravesada
 Principio de detección
Principio de detección

Citometría de flujo, citoquímica fluorescente WBC, WBC 5 DIFF, NRBC, RET

Detección por corriente directa RBC, PLT

Método de Hemoglobina-SLS - Colorimetría Hemoglobina

Método de radiofrecuencia/corriente directa HPC (células pluripotenciales hematopoyéticas)

Hemoglobina
C A B
Blood Cells

Aperture
Critical Zone

• Reactivo libre de cianuro

• Amigable al medio Señal C Señal A Señal B
ambiente
• Mejores resultados de
hemoglobina para
muestras
• con conteo de
leucocitos altos Fe 2+ Fe 3+ Fe 3+
• con lipemias
SLS
• con proteínas
anormales
 Hematocrito
Medido directamente

 Volumen constante
 Detección de la altura de pulsos
cumulativos: (Volumen
conocido)
El hematocrito es medido sumando el volumen de cada célula

que pasa por la abertura

= Pulso generado de
RBC
 Método de Citometría de Flujo
• Láser Semiconductor
■ Vida larga
■ Larga estabilidad
■ Consumo bajo de energía
■ Bajo costo
■ Arrancado rápido
■ Compacto
■ 633 nm

Citometría de Flujo
Fluorescente
 Método de Citometría de Flujo
Signos del método de citometría Información
de flujo

Luz dispersa frontal Volumen celular

Luz dispersa lateral Contenido celular (núcleo,
presencia de gránulos, etc)

Luz fluorescente lateral Contenido de ARN y ADN

Volumen corpuscular medio
■ El valor de este parámetro puede ser obtenido a partir del
histograma de distribución de volumen de los eritrocitos o
medido directamente mediante la técnica de dispersión de la luz
láser, lo que ha significado un notable avance.
 RDW

RDW-SD no es afectado por el RDW-CV dependiente del valor de

VCM VCM
Hombre: 39,9 - 46,3 fL Hombre: 11,9 - 12,9%
Mujer: 36,9 - 50,2 fL Mujer: 11,6 - 14,7%
Otros parámetros

■ Hemoglobina corpuscular media (HCM): es el valor promedio de la hemoglobina

contenida en cada eritrocito. Sus valores de referencia son de 28-32 pg. Se calcula a
partir del valor de hemoglobina y del recuento de eritrocitos.
■ Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM): se refiere a la
concentración promedio de hemoglobina por mililitro (mL) de eritrocitos. En
adultos, los valores de referencia son 32-36 %. Puede ser calculada utilizando los
valores de hemoglobina y de hematocrito o medida directamente mediante luz láser
y su grado dispersión.
■
A partir de su medición directa se obtiene el histograma de distribución de
eritrocitos según su concentración de hemoglobina corpuscular media y la amplitud
de distribución de los hematíes (ADH) según su concentración de hemoglobina,
conocida por sus siglas en ingles como HDW (haemoglobin distribution width).
HDW : Amplitud de desviación de
la concentración de Hb.
■ En el histograma de la CHCM, el desvío de la curva normal se
da como HDW o índice de anisocromía de los eritrocitos o grado
de variación de la Concentración de Hb en los eritrocitos.-
■ Este histograma puede detectar y cuantificar eritrocitos
hiperdensos lo cual es una gran ayuda en el diagnóstico de la
esferocitosis.
■ En la esferocitosis se aprecia un histograma de la CHCM hacia
la derecha y un histograma de los volúmenes a la izquierda
Alertas o Interferencias
Recuento de Reticulocitos
automatizado
1.- Por absorción de luz.-
■ Sustancias como la
oxacina 750 se incorpora
al ARN de los reticulocitos
y alteran la absorción de
luz lo que no ocurre con
los eritrocitos maduros.
2.- Por Fluorescencia
(luminosidad).
■ Fluorocromo como la
auramina o el Tiazol
naranja se unen a las bases
nitrogenadas del ARN de
los reticulocitos y emiten
una luz que es captada por
un fotodetector.
Subtipos de reticulocitos : Para
evaluar la eritropoyesis medular.
■ La oxacina 750 es específica para el ARN m de los reticulocitos.
■ Según la cantidad de luz absorbida se puede diferenciar tres
tipos de reticulocitos. Fracción de reticulocitos inmaduros (IFR).
■ Tipo I (H) .- Alta carga de ARN.- los más inmaduros. Indican
salida prematura de la médula ósea.
■ Tipo II (M) .- Moderada carga de ARN
■ Tipo III (L).- Baja carga de ARN .- los más maduros.
Canal Reticulocitos

RBC
FORWARD LIGHT SCATTER

FLUORESCENCE
Dispersograma reticulocitos

Forward Scatter
RBC-O LFR MFR HFR

WBC

IRF
RET

f-PLT
Fluorescence
Fracción de reticulocitos
inmaduros
■ Contaje de Reticulocitos = Porcentaje de producción de
eritrocitos (Cuantos)
■ IRF = Porcentaje de cambio en la producción de eritrocitos
(Que tan rápido)
IRF- Utilidad

■ IRF medida sensible de la actividad de la médula ósea

– Actividad eritropoyética
– Clasificación de las anemias o monitoreo del tratamiento
de las anemias
– Monitoreo de la administración de Eritropoyetina
– Monitoreo del éxito de los trasplantes renales
Plaquetas

■ Plaquetas (PLT): se refiere al recuento global de plaquetas

realizado de forma automatizada. Sus valores de referencia
varían en relación con la técnica utilizada para su recuento,
aunque generalmente fluctúan de 150 a 400 × 109/L.4
■ Volumen medio plaquetario (VPM): indicador del tamaño de las
plaquetas y muestra una relación inversa no lineal con el número
de estas. Se deriva directamente del análisis de la curva de
distribución de volumen de las plaquetas 
Plaquetas

■ Componente medio plaquetario o concentración media de

plaquetas (CPM): es un indicador del grado de activación
plaquetaria y una variable clínica útil en el estudio y seguimiento de
pacientes con riesgo de trombosis (dialisados, diabéticos,
fumadores, angina inestable, mujeres embarazadas), ya que la
activación plaquetaria esta implicada en esta enfermedad.
■ Plaquetas reticuladas (PR): las PR son las más jóvenes de la sangre
periférica con un contenido de ARN superior a las demás. Son
detectadas mediante la aplicación del método inmunológico. Las
plaquetas se tiñen con ARN fluorescente (auramina O) y la
intensidad de fluorescencia determina el contenido del ARN de la
plaqueta. El porcentaje normal de PR es de 0,98 ± 0,41 %.
Comportamiento de los parámetros
plaquetarios en diferentes enfermedades
Canal del diferencial

 Los equipos de la serie X analizan

dispersión y fluorescencia lateral en este
canal.
 Dispersión lateral detecta la complejidad de
la lobularidad del núcleo y de los gránulos
dentro del citoplasma
 La fluorescencia lateral depende de la
concentración de ARN y ADN
 GLOBULOS BLANCOS

¿Por qué luz de lámpara de tungsteno es

mejor que el láser?

Laser es una luz monocromática Con su lampara de tungstenio el

concentrada. banco óptico cubre todas las
longitudes de onda

Una longitud de onda Multi longitude de onda

Screening deficiente Screening en alta definición
(Se explora la complejidad de la
célula)
Diferencial de leucocitos

Emitted Light Transmitted Light

Absorbed Light

Diffracted Light
Diferencial de Leucocitos

Absorbance
(Optical)

Transfer time
440 pics (175µs)

Counting and Volume

(Impedance) Total de medidas de conteo:
12 rebanadas
Diferencial de leucocitos

Lost light
Cell Aspect Volume (Absorbance + diffraction)

Small Very Low

Lymphocytes

Big Low
Monocytes

Medium Medium
Neutrophils

Eosinophils Medium High (granulations)

La diferenciación de los eritroblastos se realiza por volumen y

NRBC
absorbancia.
Muestra negativa
Muestra positiva
 Análisis adaptativo de grupos
poblacionales
SFl
Centroide inicial
Monocitos

Centroide inicial
Linfocitos
Centroide inicial
Neutrófilos + Baso

Centroide inicial Centroide inicial

Eosinófilos
Fantasmas
SSc
 Posición de células anormales
en el dispersograma
Promielo
Información RNA/DNA

Mielo

Blasto
Meta

Banda

Estructura interna
Linfocito atípico
Canal IMI (inmaduros)

Lípido
- Colesterol
- Fosfolípido
- Glicolípido
Super surfactante
Aminoácido

WBC maduro WBC inmaduro

Método de detección- Canal
IMI
Corriente directa Radio frecuencia

Mide tamaño Mide densidad celular

Criterios para la Realización
de Láminas
Sysmex Serie XN
Analizadores hematológicos que también pueden
realizar los análisis de fluidos corporales…