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PRINCIPIOS DEL CONTADOR HEMATOLGICO

GENERALIDADES

Los
analizadores
automticos
para
hematologa
son
sistemas
mecanizados que se
emplean para hacer
el recuento celular
sanguneo y realizar
la
frmula
leucocitaria.

Hay
Hay varios
varios modelos,
modelos, cada
cada
uno
con
sus
uno
con
sus
caractersticas,
caractersticas, que
que van
van
desde
desde los
los ms
ms sencillos,
sencillos,
que
que solo
solo cuentan
cuentan los
los
leucocitos
leucocitos y
y los
los eritrocitos,
eritrocitos,
hasta
hasta los
los ms
ms complejos,
complejos,
capaces de contar todos
los tipos de clulas y
determinar
sus
determinar
sus
caractersticas.
caractersticas.

Sin
Sin embargo,
embargo, todos
todos
cumplen
con dos
dos
cumplen con
principios
bsicos: la
la
principios bsicos:
impedancia
citometra
impedancia y
y la
la citometra
de flujo.

LA IMPEDANCIA
En los sistemas basados en los principios de impedancia elctrica, la cuanta del pulso
generado es proporcional al volumen del eritrocito.
RECUENTO DE ERITROCITOS

En los sistemas de impedancia electrnica, los eritrocitos se cuentan en


diluciones de sangre de 1/50.000, que generalmente se realizan en dos fases; en
una primera se diluye a 1/500 y, a partir de sta, se hace otra de 1/100

Estos sistemas emplean 0,5 ml de la suspensin celular por lo que,


generalmente, cuentan ms de 50.000 en cada espcimen.

Los pulsos se procesan de forma electrnica para obtener informacin sobre el


nmero de clulas y su tamao. A partir de estos datos se construyen los
histogramas de volumen

Las aperturas utilizadas para contar los eritrocitos son de alrededor de 50 m de


dimetro por 70 m de longitud.

Citometra de flujo
Citmetro de flujo

Aparato que es capaz de medir componentes y propiedades de clulas y


organelos celulares (partculas biolgicas) que fluyen en una suspensin
celular.
Los sorters tienen las mismas prestaciones y posibilidades que los citmetros
de flujo pero con la capacidad adicional de separar partculas selectivamente

Parmetros medibles por CMF

La CMF se ha utilizado
En hematologa: contaje celular, frmula leucocitaria, contaje reticulocitario, anlisis de
mdula sea.
Contador diferencial
En 1953 Parker y Horst describen el primer contador diferencial hematolgico usando
clulas teidas en rojo (hemates) y azul (leucocitos), luz visible y detectores para luz
roja o azul.
Configuracin ptica de un CMF

Fluorocromos

Ofrecen un mtodo sensible para obtener informacin acerca de la estructura, funcin y


vitalidad
de
las
clulas
sanguneas.
Modo de uso:
1. unin covalente del fluorocromo a molculas
especficamente a componentes celulares, y
2. fluorocromos que varan sus
microambiente que les rodea.

caractersticas

en

que

se

funcin

unen
del

Uso de sorters
La unin del anticuerpo a la clula no la mata, lo que permite utilizar sorters para la
caracterizacin funcional o bioqumica posterior en funcin de marcadores celulares de
superficie.

Factores limitantes
La frecuencia relativa de las clulas condiciona la estrategia de marcaje para su
bsqueda
La elevada diferencia de expresin en la superficie celular de los antgenos
(incluso en poblaciones clonadas).
La estrategia tambin depende de lo precisos que deban ser los resultados.
PRESTACIONES DE LOS CITMETROS DE FLUJO
Velocidad de medida:

Es la velocidad media mxima a la que las clulas pueden ser medidas


sin exceder una frecuencia determinada de coincidencias (dos clulas
detectadas como una sola).

En los citmetros lser oscila alrededor de 5.000 clulas/segundo.

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