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Mecanismos de Agresin y Defensa I

MANUAL DE PRCTICAS

PRCTICA No 10

DETERMINACIN DE PROTENA C REACTIVA


(PCR) Y TEST SEROLGICOS RPIDOS
PARA EL DIAGNSTICO BACTERIANO
I.

COMPETENCIAS.
1. Comprende la importancia de la determinacin de la protena C reactiva en procesos
inflamatorios.
2. Comprender el concepto de serologa y aplicarlo correctamente.
3. Valorar el papel de las pruebas inmunocromatogrficas rpidas en el diagnstico de
enfermedades bacterianas.

II.

INTRODUCCION:

La Protena C-reactiva es una protena de fase aguda, presente en el suero de pacientes


sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayora de procesos
infecciosos bacterianos y virales, tejidos daados, inflamacin y neoplasias malignas.
El incremento de concentracin de esta protena se produce despus de unas horas de
desarrollarse la inflamacin pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/L en 12 - 24 horas.
La PCR-Ltex es una tcnica de aglutinacin en porta para la deteccin cualitativa y
semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partculas de ltex recubiertas con
anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por molculas de PCR presentes en la
muestra del paciente.
Durante los ltimos aos el avance tecnolgico ha permitido desarrollar tcnicas que
ayudan al diagnstico de mltiples enfermedades. Las tcnicas inmunolgicas son de
gran ayuda ya que permiten la deteccin de varios autoanticuerpos simultneamente a
partir de volmenes de muestra pequeos. Aunado al desarrollo de las nuevas tcnicas,
la sensibilidad y especificidad en la deteccin de las especificidades de los anticuerpos
tambin han ido en aumento, de tal manera que el profesional en salud puede contar con
pruebas que le permiten hacer los diagnsticos tempranos con mayor certeza y hacer
tambin el seguimiento del curso de la enfermedad en funcin de la variacin de los
anticuerpos presentes en las muestras de los pacientes.
Actualmente existen en el mercado un sinnmero de pruebas inmunolgicas comnmente
llamadas test que mediante la tcnica de inmunocromatografa permiten la deteccin
rpida de anticuerpo o antgenos de diferentes tipos de microorganismos. En la presente
prctica se realizar la determinacin inmunolgica de Helicobacter pylori.

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III.

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MATERIAL Y METODOS:

3.1. Materiales:

Reactivos.

Test rpidos para el diagnstico serolgico de Helicobacter pylori.

MUESTRAS
Suero fresco. Estable 8 das a 2-8C o 3 meses a -20C.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba.
No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipmicas.
3.2. Procedimiento:
DETERMINACIN DE PROTENA C REACTIVA
Mtodo cualitativo
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del
ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 L de la muestra (Nota 1) a ensayar y una gota de cada uno de los
controles Positivo y Negativo, sobre crculos distintos de un porta.
3. Homogeneizar suavemente el reactivo de PCR- ltex antes de usar. Depositar una
gota (50 L) junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie
interior del crculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el portaobjeto sobre un agitador rotatorio a 80 100 r.p.m. y agitar durante 2
minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparicin de falsos positivos.
Mtodo semicuantitativo
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina 9 g/L.
2. Proceder para cada dilucin, como en la prueba cualitativa.

4. RESULTADOS
LECTURA E INTERPRETACION
Examinar macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente
despus de retirar el portaobjeto del agitador. La presencia de aglutinacin indica una
concentracin de PCR igual o superior a 6 mg/L (Nota 2 y 3).

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En el mtodo semicuantitativo, se define el ttulo como la dilucin mayor que da resultado


positivo.
CALCULOS
La concentracin aproximada de PCR en la muestra del paciente se obtiene aplicando la
siguiente frmula:
6 x Ttulo de PCR = mg/L
CARACTERISTICAS DEL METODO
1. Sensibilidad analtica: 6 (5-10) mg/L, en las condiciones descritas en el ensayo.
2. Efecto prozona: No se observa efecto prozona hasta valores de 1600 mg/L (Nota 1).
3. Sensibilidad diagnstica: 95,6 %.
4. Especificidad diagnstica: 96,2%.

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