HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

INTRODUCCION:

Los métodos manuales tradicionales han sido sustituidos por contadores electrónicos que
conllevan mejores condiciones en rentabilidad, fiabilidad y condiciones de trabajo.

Estos contadores permiten realizar el hemograma analizando en pocos segundos miles de células.

HISTORIA:

En 1934 Andrew moldavan, realizo el recuento fotoeléctrico de células en suspensión que pasan a
través de un capilar montado a un microscopio (detectaría cambios de luz producidos por GR).

En 1956 los hermanos Coulter, Wallace y Joseph, patentan su equipo basado en el método de la
impedancia eléctrica, únicamente para contar leucocitos y eritrocitos.

VENTAJAS DE LA AUTOMATIZACION:

 RAPIDEZ
 EFICIENCIA
 PRECISION
 EXACTITUD
 NUEVOS INDICES

DELTA CHECK:

Delta Check es el proceso de revisar los resultados de pacientes actuales y compararlos con
resultados previos en busca de diferencias significativas
GENERACION SEGÚN AVANCE TECNOLOGICO:

1RA GENERACION: hemograma manual.

2DA: GENERACION: hemograma semiautomatizado.

3RA GENERACION: hemograma automatizado: histogramas de GR, Plaquetas y recuento

diferencial de GB en 3 estirpes.

4TA GENERACION: hemograma automatizado con perforación de tapa, histograma,

dispersograma para GB, diferencial de GB en 5 estirpes.

PARAMETROS HEMATOLOGICOS DIRECTOS (determinados)

 Recuento de eritrocitos
 Volumen de eritrocitos
 Recuento de plaquetas
 Volumen de plaquetas
 Hemoglobina
 Recuento de leucocitos
 Volumen de leucocitos
 Formula leucocitaria

PARAMETROS HEMATOLOGICOS INDIRECTOS (calculados)

 Hematocrito
 Índices eritrocitarios: VCM, HCM, CHCM
 ADE (RDW)
 VPM, plaquetocrito
 Histograma leucocitario, eritrocitario, plaquetario

DIAGRAMA FUNCIONAL SIMPLIFICADO DE UN SISTEMA MULTIPARAMETRICO DE RECUENTOS

CELULARES

Muestra de sangre anticoagulada

Muestreo procesamiento medición

Aspiración y fraccionamiento dilución y etiquetado recuento celular y tamaño

Procesamiento de señal

Definición de parámetros resultados

EQUIPOS AUTOMATIZADOS Y TECNICAS DE RECUENTO CELULAR:

Existen tres tipos de equipos automatizados según su funcionamiento:

 Por impedancia
 Radiofrecuencia y corriente directa
 Por dispersión de luz

IMPEDANCIA ELECTRICA:

PRINCIPIO:

 se basa en la resistencia que ofrecen las células al paso de la corriente eléctrica, cuando
atraviesan un orificio de apertura que separa dos medios con diferente potencias (uno
positivo y otro negativo)
 sistema de medición no óptico, con un rango de medición que excede las 6000 células
individuales por segundo
 el número de células contadas por muestra es aproximadamente 100 veces mayor que los
recuentos microscópicos, reduciendo el error estadístico aproximadamente 10 veces

ERITROCITOS Y PLAQUETAS:

Las células de una muestra de sangre total es diluida en una solución electrolítica, se hacen pasar
una detrás de otra a través de una abertura de determinado diámetro, por la que circula una
corriente eléctrica de cierta intensidad inducida por 2 electrodos dispuestos a ambos lados de la
abertura u orificio.

Cada que una célula atraviesa el orificio de apertura obstaculiza la corriente (se produce un
cambio de resistencia eléctrica), que genera un cambio en la diferencia de potencial: pulso
Se producen pulsos que son clasificados por tamaños, varias miles de células por segundo,
haciendo que los resultados sean más fiables que los obtenidos por métodos manuales.

La amplitud de los pulsos es directamente proporcional al tamaño de la partícula (volumen celular)

PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO:

IMPEDANCIA ELECTRICA:

 suspensión celular en medio electrolítico

 paso de células por apertura pequeña
 GR y plaquetas: 50 x 60 micras
 Leucocitos: 100 x 70 micras
 Flujo eléctrico por el poro
 Elaboración de graficas
 Eritrocitos: 30 a 350 Fl
 Plaquetas: 2 a 20 fl
 Leucocitos: 35 a 430 fl

ENFOQUE HIDRODIMANICO:

Para conseguir una trayectoria uniforme de las células por el centro de la región sensible del
orificio de apertura (en hilera)

Con esto se evita que las células pasen por el borde del orificio de una apertura o que una vez
atravesada este no retroceda e interfiera en la lectura de las otras células.

La sensibilidad y exactitud de la lectura dependen de que las células en suspensión fluyan por un
núcleo central sin mezclarse con el líquido de arrastre (flujo en hilera)

Mejora la exactitud y reproducibilidad del conteo de células sanguíneas

Previene de esta manera la generación de pulsos anormales.

ERITROCITOS Y PLAQUETAS EN IMPEDANCIA ELECTRICA:

Son contados en un canal exclusivo, discriminadores automáticos separan las dos poblaciones
celulares.

GR y plaquetas se cuentan juntos y se separan por la altura de los pulsos.

IMPEDANCIA DE LOS LEUCOCITOS:

El conteo es posible gracias a la adición del lisante, que ocasiona salida de agua del citoplasma,
ocasionando que la membrana se adhiera al núcleo de la célula.

Las células lisadas pasan por la apertura de 70 u, lo que genera impulsos eléctricos de alta
variabilidad generándose 3 poblaciones:

 Linfocitos
 Región media (monocitos, eusinofilos y basófilos)
 Granulocitos: neutrófilos

En la actualidad este principio se aplica como método de referencia para el recuento celular
hemático y la medición de los volúmenes (tamaño) de cada población celular

Es utilizado por la mayoría de los contadores hematológicos debido a su marcada reproducibilidad,

rapidez y disminución del error estadístico.

RADIOFRECUENCIA Y CORRIENTE DIRECTA:

PRINCIPIO: el tamaño de la célula es detectado por medio de cambios en la resistencia a la

corriente eléctrica y la densidad del interior de las células (tamaño del núcleo y otras
informaciones) se detecta por medio de cambios en la resistencia a la frecuencia de radio.

DISPERSION LUMINICA (método óptico):

PRINCIPIO: técnica de análisis celular multiparametrico.

Analiza el efecto que sobre un haz de luz monocromática de alta densidad (laser) ejercen las
células de la sangre al cruzarse una a una en su trayectoria.

Una suspensión de células diluidas fluye a través de una abertura. Las células pasan alineadas una
detrás de otra, a través de una pequeña zona sobre la que incide perpendicularmente un haz de
luz alógeno o laser, lo que provoca la interrupción y dispersión lumínica de la energía radiante en
diversos ángulos.

Es más compleja que la impedancia. Además del tamaño y la concentración de las células permite
analizar la complejidad de la estructura celular (granularidad, característica del núcleo)

Por ello es el procedimiento de elección para la automatización de la formula leucocitaria.

METODOS ADICIONALES: los métodos pueden incluir también:

 Actividad de enzimas celulares como la peroxidasa (citoquimica)

 Fluorescencia
 Análisis digital de la imagen

CITOQUIMICA CELULAR:

Citoquimica son aquellas reacciones químicas que se dan en la célula para evidenciar las
estructuras que la componen.

Proporcionan la formula leucocitaria, de acuerdo con el tamaño de los leucocitos y su tinción con
determinados colorantes.

Ventaja: en cada espécimen se cuentan muchas celulas (unas 10000) lo que hace que aumente su
precisión.

ACTIVIDAD DE ENZIMAS CELULARES: PEROXIDASA:

Para aumentar la fiabilidad del recuento diferencial combinan citometria de flujo con la
citoquimica, miden con un colorante la actividad peroxidasa:

 Alta en eosinofilos
 Menor positividad en neutrófilos
 Monocitos tienen muy poca actividad
 Linfocitos no tienen actividad peroxidasa

RECUENTO DIFERENCIAL AUTOMATIZADO:

La mayoría de contadores diferenciales automatizados utilizan la citometria de flujo incorporada a

un contador de sangre total.

Proporcionan recuento diferencial de 3,5 a 7 componentes.

Los recuentos se realizan en sangre completa diluida en la que los eritrocitos se han lisado o se
han vuelto transparentes.

RECUENTO DIFERENCIAL DE 5 COMPONENTES:

 Neutrófilos
 Eosinofilos
 Basófilos
 Linfocitos
 Monocitos

RECUENTO EXTENDIDO:

 Grandes celulas inmaduras (blastos y granulocitos inmaduros)

  Linfocitos atípicos ( incluye blastos pequeños)

ANALISIS DIGITAL DE LA IMAGEN:

PRINCIPIO:

Se basa en el reconocimiento de los leucocitos por medio del análisis computarizado de las
imágenes que proporciona un microscopio a partir de extensiones sanguíneas teñidas

Estas se comparan con imágenes programadas en el ordenador

La extensión teñida se coloca en un microscopio, que se mueve controlada por el ordenador.

Se inicia el sistema de rastreo semejante al manual, cuando se localiza un leucocito, se digitaliza la

imagen con una cámara de video.

Se compara con las características morfológicas programadas en la memoria del equipo para los
distintos tipos de leucocitos.

REPORTE:

 Polinucleares neutrófilos: segmentados y no segmentados

 Eosinofilos
 Basófilos
 Monocitos
 Linfocitos
 Algunos identifican; mielocitos, metamielocitos, linfocitos atípicos y blastos.

RECUENTO DE RETICULOCITOS:

Método de referencia: azul de metileno alto coeficientes de variación, laboriosos

Métodos automatizados:

 Fluorescentes: naranja de tiazol, auramina O.

 Absorbancia: oxazina 750, azul de metileno.
 Colorantes que interaccionan con el ARN de reticulocitos.

Actualmente diversos autoanalizadores tienen la capacidad de contar los reticulocitos de sangre

periférica, ofrecen:

Parámetros:

 N° porcentual y absoluto
 Volumen reticulocitario
 Concentración en hemoglobina

DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE LA HEMOGLOBINA:

El sistema utiliza la dilución de LEU lisados para calcular la hemoglobina.

La absorbancia de luz de un foco incandescente se determina en 525nm a través de la longitud
óptica

Un haz de luz del foco pasa a través de la muestra, con un filtro de 525, y se determina mediante
fotodiodo

La señal se amplifica y el voltaje se calcula y se compara con la lectura del blanco de referencia.

TECNOLOGIAS DE HEMOGLOBINOMETRIA:

Con cianuro: cianmetahemoglobina

Sin cianuro: hidroxilamina, lauril sulfato de sodio, formulado a partir de concentración de

hemoglobina y Rcto de GR.

Lauril sulfato sódico:

 reactivo libre de cianuro

 no causa daño al medio ambiente
 menor interferencia en muestras

Lipemicas, ictéricas, conteos altos de leucocitos, proteínas anormales.

HEMATOCRITO:

No se mide directamente con los citometros de flujo y se calcula a partir del VCM y en número de
GR tiene menor precisión.

Calculo VCM X número de GR

INDICES HEMATOMETRICOS:

 VCM
 HCM
 CHCM
 RDW-CV
 RDW-SD
 PLAQUETOCRITO
 VMP

LIMITACIONES DE LA AUTOMATIZACION:

 NO SE DETECTA INCLUSIONES INTRAERITROCITARIAS

 NO PUEDE DISTINGUIR EXACTAMENTE LOS LEUCOCITOS PATOLOGICOS
 EXISTEN INTERFERENCIAS QUE AFECTAN LAS DETERMINACIONES
 PSEUDO TROMBOCITOPENIA POR EDTA
 POLICROMATOFILIA, ELIPTOCITOS, ESFEROCITOS, ACANTOCITOS, HEMATIES
FRAGMENTADOS, GR EN LAGRIMA, MACROOVALOCITOS, ETC.

BIBLIOGRAFÍA:

1: https://es.slideshare.net/kireycita21/hemograma-ppt

2: https://www.ibcrosario.com.ar/articulos/HemogramaElectronicoSuEvaluacion.html

3: https://notiwiener.net/2015/04/automatizacion-en-hematologia/

4: https://www.medigraphic.com/pdfs/medlab/myl-2013/myl131-2b.pdf

5: https://es.slideshare.net/SandraCruzGuerrero/automatizacion-en-hematologia