Extensiones Sanguneas

El frotis sanguneo consiste en la

extensin uniforme de una gota de sangre
sobre un portaobjetos; la misma que se
lleva a cabo con otro portaobjetos
El frotis sanguneo se realiza de forma
manual y automatizada ( spinner )

Partes de una extensin

Cabeza
- es la zona inicial de la extensin
- es la regin mas gruesa
- en esta regin se encuentra el mayor
nmero de linfocitos y GR apilados
- No es una zona de lectura
Cuerpo
- es la zona media del frotis
- su espesor es el apropiado
- en ella existe una adecuada proporcin de leucocitos
- contiene la zona ideal de observacin, que
corresponde a la zona que limita con la cola

 Cola
- es la zona final de la extensin
- suele tener un aspecto redondeado
- es la regin mas fina
- mayor proporcin de leucocitos grandes,
hemates deformados y tonalidad uniforme

Caractersticas de un buen frotis

- la cabeza ha de estar cerca de uno de los
extremos del porta
- la cola debe estar cerca de uno de los bordes
- toda la extensin ha de ser fina y homognea
- los bordes laterales han de estar separados de los
bordes del porta por 1 mm aproximadamente
- presencia de barbas en el extremo terminal

Defectos de una extensin

Presencia de escalones o estras. originado por una falta
de uniformidad en el momento de realizar la extensin
Un lmina con zonas huecas redondeadas por efecto de
restos de grasa y suciedad
Excesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud
excesivo grosor
Error en el tamao de la gota
Error en la velocidad de la extensin
Error por causa de un ngulo inapropiado
Se debe tener en cuenta el Hto del paciente,
dependiendo de esta, se aplicar el ngulo apropiado de
extensin

Anticoagulantes
El estudio de la sangre en hematologa, requiere
siempre el empleo de sangre sin coagular.
Se debe elegir el anticoagulante idneo y
mantener una adecuada proporcin con la
sangre extraida ( medio isotnico )
Caractersticas del Anticoagulante Idneo :
No altera el volumen de los hemates
No produce hemlisis
Evita la agregacin plaquetaria
No altera la morfologa leucocitaria

EDTA( cido
etilendiaminotetractico )
Esta sal realiza su accin quelando el
calcio ( Ca ++ ), es decir, fijndolo sin
llegar a precipitarlo.
Sal de EDTA : C10H16N2O8
Existen sales disdicas EDTA Na2
EDTA K2 y EDTA K3
Se recomienda las de K mas que las de
Na por su mayor solubilidad en sangre,
especialmente en forma seca

Coloraciones Hematolgicas
Las
coloraciones
hematolgicas son un
conjunto de procesos que
conducen a la coloracin
de las estructuras que
componen las clulas
sanguneas
Esto tiene por objeto el
aumentar el contraste
entre esas estructuras y
el medio que las rodea, y
esto permite observarlas
con mayor facilidad

Las tinciones
hematolgicas se pueden
clasificar en :
De acuerdo al nivel de
vitalidad de lo que se
quiere colorear
a . Vitales
b . No vitales
De acuerdo a su
frecuencia :
a . Rutina
b . Especiales

 Todos los colorantes derivan del tipo

Romanowsky, constituidos por la mezcla de
eosinas y derivados de las tiazinas.
Romanowsky lo utiliz por vez primera para
observar el parasito de paludismo o malaria,
basada en la neutralidad de Ehrlich
Este principio consiste en dejar que un colorante
bsico reaccione con otro cido, que da lugar a
un compuesto con nuevas propiedades.
Posteriormente May-Grunwald y Reuter en
Alemania y Leishmann y Jenner en Inglaterra
perfeccionaron el colorante

Principios :
a fijacin de la sangre extendida sobre el
portaobjetos
b empleo de derivados del azul de metileno (
demitilacin oxidativa ) llamados Azures ( azur
A, B y C ), responsable de la coloracin rojapurpura de la cromatina y de los grnulos
azurfilos
La calidad de la coloracin y su reproducibilidad
dependen del tipo y calidad de colorante
Los colorantes de tipo romanowsky son muy
sensibles a las variaciones del pH

Tinciones Habituales
Colorantes cidos: tienen especial afinidad por
las estructuras alcalinas de las clulas, como
por ejemplo la hemoglobina. El principal de ellos
es la eosina.
Colorantes bsicos : especial afinidad por las
estructuras cidas de las clulas, como por
ejemplo los cidos nucleicos. Uno de ellos es el
azul de metileno
Colorantes neutros : son los que no tienen
afinidad con las estructuras cidas o bsicas,
uno de ellos es el Sudn III

 Existen tambin combinaciones de colorantes

que dan origen a tinciones polcromas
El primero de ellos fue Romanowsky, y todos
los colorantes hematolgicos de la actualidad
suelen derivar del que l prepar
Estos colorantes constan de un colorante cido
(eosina) y otros bsicos (tiacinas).las tiacinas
son el azul de metileno y los azures
Tambin existen tinciones panpticas rpidas
que producen una coloracin fcil y rpida en
las estructuras celulares

 Estructuras acidfilas : son aquellas que fijan

colorantes de naturaleza cida. Si captan la
eosina se llaman eosinfilas. Con las tinciones
habituales adquieren un color rosado
Estructuras basfilas : son aquellas que fijan
colorantes de naturaleza alcalina. Con los
tinciones habituales adquieren un color
azulado.
Si se tien de lila o prpura con colorantes de
tipo azur, se llaman azurfilas.

Tinciones especiales
Solo se usan en condiciones especficas
Tinciones fluorescentes : emplean colorantes
(fluorocromos) que se fijan a las clulas y que, cuando
son estimulados por LUV, emiten una radiacin visible
caracteristica.
Tinciones Citoqumicas : demuestran la presencia, mas
o menos abundante, o la ausencia de determinadas
sustancias y/o enzimas, localizadas en el interior de los
grnulos citoplasmticos de los leucocitos.
Sirven para reconocer clulas normales de las
anmalas, y por tanto, reconocer una leucemia de otra.
Por ejemplo : PAS, Sudan Black, MPO, alfa
Naftilestearasa, etc

Coloracin cida

Coloracin Bsica

Causas de Error en las Tinciones Habituales de

Frotis Sanguneo

Si la tincin de una extensin sangunea es

demasiado rosa, probablemente se deba a :
Un pH bajo de colorante
Un tiempo de coloracin insuficiente
Un lavado excesivamente prolongado
Si la tincin es demasiado azul probablemente
sea por :
Un empleo de portas sucios
Falta de filtracin del colorante
Una coloracin excesivamente prolongada
Un secado del colorante durante al tincin
Un lavado insuficiente

Preparacin del Colorante de Wright ( Merck )

Pesar 2 3 gr del colorante en polvo comercial

1000 ml de metanol
Glicerina ( 5 ml ) opcional
Colocar en un mortero el colorante y aadir la glicerina
Aadir de a pocos el metanol al mortero e ir machacando hasta que
adquiera una coloracin azul intensa y luego verter a un frasco color
caramelo o mbar, previo filtrado con papel filtro
Repetir la operacin hasta que se acabe el metanol
Guardar en lugar oscuro, fuera de la luz para evitar su oxidacin por aprox.
una semana hasta que madure
Luego de cumplido el tiempo filtrar nuevamente
Listo para su uso
tcnica de tincin :
Cubrir el frotis con el colorante por 1 3 minutos
Agregar agua tamponada pH 7.2 7.4 por 5 7 minutos ( homogenizar )
Verificar la formacin de una pelcula plateada sobre el colorante
Lavar con agua corriente y dejar secar
Leer con objetivo de inmersin

Para tener en cuenta

Un aspecto clave es el grosor del extendido.
Una extensin de calidad no debe ser gruesa ni
muy delgada
Una extensin gruesa dificultar la observacin
de la morfologa eritrocitaria y la diferenciacin
entre linfocitos y monocitos. Adems de
dificultar al ojo inexperto la tincin de las clulas
sanguneas
Por el contrario, si es muy fina, la mayora de
neutrfilos y monocitos se hallarn en las reas
perifricas. Esto alterar la relacin normal de la
distribucin celular leucocitaria
Se recomienda entonces, que el grosor ideal, es
aquel que nos permita leer a travs de la
extensin

Estudio de Lmina Perifrica

El estudio de lmina perifrica comprende
la evaluacin morfolgica de las tres
lneas celulares ( elementos formes ) que
componen la sangre
Serie Blanca : Leucocitos
Serie Roja : Hemates
Serie Tromboctica : Plaquetas

Procedimiento del Diferencial Manual de Sangre

Perifrica

Examen ocular a bajo aumento ( 10X )

Determinar las caractersticas de la tincin
Determinar la distribucin celular
a. verificar si hay presencia de agregados
plaquetarios que pueden producir
errores de
conteo en los
equipos o
llevar a conteos
bajos falsos
b. Verificar la presencia de Rouleaux en GR
c. verificar la presencia de agregados
leucocitarios
causados por inadecuada
mezcla de sangre despus de su
coleccin
Seleccionar la mejor rea para una detallada evaluacin
morfolgica
a. buscar una distribucin homognea donde los eritrocitos no se
sobrepongan unos a otros
b. evitar reas huecas
c. evitar reas extremas donde los eritrocitos adopten forman
geomtricas

 Lectura a mediano aumento ( 40X o 50X )

este tipo de lectura nos sirve para tener una
visin panormica y completa del frotis y es de
utilidad para el personal adiestrado en el
reconocimiento celular, porque nos permite
lecturas a mayor velocidad, sin sacrificar la
precisin. Se recomienda su uso para lminas
de pacientes leucopnicos.
Algunas personas inclusive pueden calcular el
numero de leucocitos pmmc contando las
clulas blancas normales y rotas, contando 10
campos, luego obteniendo su media y
posteriormente multiplicandolo por 3000

Lectura a mayor aumento ( 100x )

Se lleva acabo usando un tabulador o contmetro, manual o digital.
Deben incluirse todas las clulas de la serie blanca, maduras e
inmaduras.
No deben incluirse en el recuento de 100 leucocitos a los GR
nucleados y megacariocitos nucleados
Cualquier leucocito conteniendo una inclusin anormal deber ser
reportado pero con un conteo en paralelo por las 100 clulas
contadas
Ejemplo : Ud observ 60 neutrfilos en su conteo de100 de los
cuales 20 de ellos tenan cuerpos de Dhle, ud deber informar al
final del recuento : neutrfilos (60%), y cuerpos de Dhle 20%
Se deber reportar los siguientes inclusiones :
- cuerpos de Dhle
- cuerpos de Auer
- anomala de Pelger Huet
- anomala de May hegglin
- inclusiones de Alder Reilly
- inclusiones Chediak Higashi
- granulaciones txicas
- vacuolas citoplasmticas o degenerativas

 Usted deber reportar cualquier clula

anormal o indiferenciada que observe
Deber reportar GR nucleados si estos
exceden al 6% y corregir su recuento de
leucocitos con la siguiente formula :

Leucocitos contados / mm3 x 100

= leucocitos corregidos / mm3
100 + N hemates nuclados
Ejemplo : si un paciente tiene un conteo de 15,000 leucocitos pmmc y 35 %
de GRN, su conteo corregido ser de 11,111 pmmc

Evaluacin de la Serie Roja

En este punto el observador deber
reportar su minucioso examen de los GR,
indicando la presencia de Hipocroma,
Anisocitosis y Poiquilocitosis.
Deber reportar tambin inclusiones
eritrocitarias y hemoparsitos si los
hubiera.
Tambien indicar la presencia de clulas
inmaduras de la serie roja si las hubieran

M
A
D
U
R
A
C
I

S
E
R
I
E

R
O
J
A

 Hipocroma : cuando una clula roja individual contiene

un rea plida central que es mayor a la tercera parte de
su dimetro se denomina clula hipocrmica
Rango medio para denominar hipocrma en 10 campos
microscpicos ( 100 160 hemates por campo )
a. normocroma : 0 - 5
b. leve hipocroma : 6 - 15
c. moderada hipocroma : 16 - 30
d. marcada hipocroma : > 30
Nota : la hipercroma no esta reportada aqu pero se
relaciona con la presencia de esferocitos.
Hipercroma : se denomina as a las clulas rojas
profundamente coloreadas en relacin al resto, y esto
debido a su alto contenido en hemoglobina, mayor al
que debera contener

 Anisocitosis : cuando se
presenta en el campo
eritrocitos de diferentes
tamaos
Normoctos :
dimetro longitudinal : 7
8
Diamatro transversal
( espesor )
perifrico : 2
central : 1
- Superficie : 120 - 140
- Volumen : 80 95

Microcitosis : hemates
con un dimetro inferior a
7 y un volumen inferior
a 80 3
Macrocitosis : hemates
con un dimetro superior
a las 8 y un volumen
superior a las 100 3
Megalocitos : hemates
con dimetro superior a
las 11

Rango medio para anisocitosis / 10 campos

Normal

Leve Anisocitosis

0-5

6 - 15

Moderada Anisocitosis
15 - 30

Marcada Anisocitosis
> 30

 Poiquilocitosis : cuando se presentan varias formas

diferentes en los hemates en un campo microscpico
Si se observa solo un tipo leve de anormalidad la
poiquilocitosis ser leve, pero si coexisten diferentes
formas de hemates, entonces ser marcada, no
importando que individualmente sean leves
Se recomienda que cada forma anormal sea evaluada
separadamente
Rango medio para tipificar poiquilocitosis /10 campos

Normal
Leve
Moderada
Marcada

:
:
:
:

0
1
6
>

- 1
- 5
- 15
15

Acantocitos
AHA
A. sideroblstica
AHM
Enfermedad heptica
Enfermedad renal
Post- esplecnotoma

Drepanocitos
Clulas facliformes
A. drepanoctica
Enfermedad Hb S - C

Esquistocitos
Son GR fragmentados
AHM
A. megaloblastica
Talasemia mayor
A. hemolticas
Leucemia aguda
Hiperesplenismo
Megalocitos

Anemias megaloblasticas
Dimetro > a 11 micras

 ANEMIA MEGALOBLASTICA
ELIPTOCITOSIS HEREDITARIA
MIELOFIBROSIS
TALASEMIA MAYOR
TRAUMA MECANICO

Rouleaux
Cuando los GR se
presentan en fila de
moneda
Mieloma Multiple
Incremento de
gamma globulina
Macroglobulinemia de
Waldenstrom

Dianocito
Clula en Tiro al Blanco

ESTOMATOCITOSIS HERDITARIA
LEUCEMIA AGUDA
ALCOHOLISMO CON ENFERMEDAD HEPTICA
ARTEFACTOS
TALASEMIAS

Anillo de Cabot

Punteado Basfilo

Cuerpos de Pappenheimer

Cuerpos de Heinz

Pappenheimer
Cuerpos de Howell Jolly

Policromatofila

Reticulocitos

Serie Blanca
La frmula leucocitaria es la denominacin
usual que se da al recuento porcentual de los
diferentes leucocitos que circulan en la sangre
En condiciones de normalidad esta constituida
por 5 poblaciones de leucocitos :
Neutrfilos ( en su gran mayora segmentados )
Eosinfilos
Basfilos
Monocitos
Linfocitos

Variables que pueden influir en la formula

leucocitaria realizada mediante el mtodo
visual
Distribucin irregular y no aleatoria de los leucocitos en
la extensin
Realizacin de la lectura en una zona inapropiada
Variaciones de la calidad y las caractersticas de la
tincin ( tincin cida o bsica )
Observacin de un nmero insuficiente de clulas
Pericia del observador en la identificacin celular
neutrfilos segmentados Vs neutrfilos en banda
monocitos Vs linfocitos activados o atpicos
formas inmaduras de granulocitos neutrfilos

SERIE
MIELOIDE

Mieloblastos :
Es redondeado
Dimetro entre 15 20
Su ncleo es grande,
redondeado, rojizo y tiende a
centrarse
Su cromatina es laxa y
contiene de 2 a 3 nucleolos
visibles
Su citoplasma es basfilo y
algunas contienes finas
granulaciones azurfilas

Promielocito :
Se origina por maduracin y
maduracin del mieloblasto
Es redondeado
Dimetro de 16 25
Ncleo grande,
redondeado, menos rojizo y
tiende a excentrarase
Cromatina laxa y
generalmente se observa
nucleolos en ella, puede
presentar zonas de
condensacin
Citoplasma abundante,
repleto de grnulos
primarios muy azurfilos

M
I
E
L
O
C
I
T
O
S

JUVENILES O METAMIELOCITOS

METAMIELOCITOS

Metamielocitos Vs No Segmentados
Regla de la Mediana

Juvenil

: Si al completar mentalmente la circunferencia

nuclear y trazamos una lnea media imaginaria
y esta muestra la hendidura antes de la media
estamos frente a un juvenil o metamielocito. Si
por el contrario la hendidura esta detrs de la
lnea media, estamos frente a un abastonado

No Segmentado

Metamielocitos Vs No segmentados
Regla del Dimetro :

Juvenil

esta se basa en el ancho del ncleo. Si la anchura

de esta es similar a la mitad de la longitud del ncleo
estamos frente a un metamielocito o juvenil, en cambio
si el ancho nuclear es menor a la mitad de la longitud
del ncleo, estamos frente a una clula en banda.

No Segmentado

CLULAS
EN
BANDA
O
EN
CAYADO
O
ABASTONADOS

Clulas Neutrfilas en Banda

Neutrfilos Vs No Segmentados
Regla del Tercio
Si la estrangulacin
de la continuidad
nuclear es menor a
un tercio de la parte
mas ancha del mismo
ncleo, entonces es
un segmentado

Regla del Filamento

Se dice que estamos
frente a un
segmentado siempre
y cuando se observe
un ncleo
polisegmentado y se
observe al menos un
puente de cromatina

Neutrfilos Vs No Segmentados

Neutrfilos

Clulas en Banda

Criterios para la diferenciacin entre neutrfilos Vs no

segmentados

Fig. 2
Si seguimos con la mirada la continuidad nuclear
Y en algn momento esta se entrecruza con otra
Lnea del mismo ncleo , entonces lo llamamos
Segmentado. Del mismo modo si al termino de la
Observacin de la continuidad de la membrana
Nuclear sobra ncleo lo llamamos segmentado.
( Fig. 1 )
Si al observar la continuidad nuclear no notamos
Cruce de lneas, entonces lo estamos frente a un
Abastonado. ( fig. 2 )

NEUTRFILOS
POLISEGMENTADOS

Son clulas redondeadas, de

tamao entre 12 y 14 um.
Su ncleo est segmentado en
2 a 5 lbulos, unidos por unos
finos puentes cromatnicos.
El citoplasma es rosa plido y
contiene numerosos grnulos
neutrfilos que se tien de
color marrn con las
coloraciones panpticas
habituales, as como cierto
nmero de grnulos primarios
( 10 20 % ) o azurfilos
dificilmente visibles al quedar
enmascarados por los
neutrfilos.
Su ncleo es de color violeta
oscuro y presenta cromatina
densa
Algunas veces su ncleo
presenta un pequeo pndice
en palillo de tambor
( cromatina sexual )

Granulaciones Txicas

Pelger - Huet

Vacuolas Citoplasmticas

Vacuolas Degenerativas

BASFILO
Poseen un ncleo
bilobulado y grandes
grnulos esfricos
basoflicos y
metacromticos
dados por heparina e
histamina. Liberan
adems aminas
vasoactivas y
sustancia de reaccin
lenta de la anafilaxia.

Eosinfilos

Clula redondeada
12 17
Ncleo violeta,
generalmente bilobulado
simtrico unido por un
puente de cromatina o en
forma de anteojos
Presenta grnulos,
grandes y acidfilos que
no cubren el ncleo
Estos grnulos se tien
con la eosina y contienen
diversas sustancias como
la peroxidasa, fosfatasa
cida, hidrolasas, etc

Serie Linfoide:

Linfocitos

Linfoblasto

Prolinfocitos

Linfocitos

Dimetro variable de 7 18
Pueden diferir en su relacin
N/C
El citoplasma es variable
( escaso o abundante )
Su coloracin es azul plida,
pero aumenta en los linfos
reactivos ( estimulados )
Pueden presentar una
granulacin azurfila escasa
en el ciptoplasma
Ncleo redondeado y
cromatina compacta
La densidad de la cromatina
puede variar entre los
diferentes estados. Es
generalmente elevada pero
pueden presentar zonas mas
laxas

LINFOCITOS ATPICOS

MAS LINFOCITOS ATPICOS

Plasmocitos

8 20 de dimetro
Relacin N/C 2:1 o 1:1
Ncleo redondo u oval
Cromatina densa azul
purpura con grandes
muescas cerca al margen
nuclear
No presenta nucleolos
Citoplasma moderado,
basfilo, con zona clara
perinuclear adjacente al
ncleo
Puede contener una o
mas vacuolas
No presenta
granulaciones
citoplasmticas

Promonocito

Serie Monoctica

Monoblasto
Monocito

MONOCITOS

Son las clulas circulantes de

mayor tamao. Poseen un ncleo
excntrico en forma de U en
forma arrionada
El ncleo suele presentar una
ubicacin central
14 20 de diametro
Citoplasma abundante y de color
lila plido
Presenta fina granulacin
azurfila
Presenta cromatina laxa o
filamentosa
En ocasiones se halla vacualizado
Son los precursores del sistema
mononuclear fagoctico, que
incluye macrfagos (histiocitos),
osteoclastos, macrfagos
alveolares, clulas de Kupfer en el
hgado y la microglia en el sistema
nervioso central.

 El
recuento
diferencial
leucocitario
suministra informacin sobre aspectos
cualitativos y cuantitativos de los
diferentes leucocitos de la sangre y
permite la deteccin de clulas anormales
Se basa en la observacin microscpica
de 100 a 200 leucocitos dispuestos en una
extensin
de
sangre
(
frotis
)
convenientemente teida
La calidad de la extensin de la sangre es
de vital importancia para la realizacin
de una correcta lectura de la lmina.

Promegacariocito

Megacariocito Granular

Megacariocito en Brotacin

Megacariocito Productor de Plaquetas

Serie Tromboctica

Trombocitopenia :
Leve
Moderada
Severa

: 150,000 - 100,000
: 100,000 - 50,000
: < 50,000

Las plaquetas son las

clulas sanguneas mas
pequeas del organismo
Se producen por
fragmentacin simple del
citoplasma de los
megacariocitos.
Son clulas anucleadas de
forma discoide de 2 4
micras de dimetro y 8
micras de volumen.
poseen una vida media de
7 - 10 das y su rango va
de 150,000 a 450,000
pmmc

Macroplaqueta

Plaquetas Normales

Serie Tromboctica
Debemos reportar la cantidad de plaquetas en
lmina ( trombocitopenias o trombosis )
Debemos dar un informe detallado sobre la
citomorfologa de las plaquetas
Reportar si hay plaquetas normales,
degranuladas, pequeas o macroplaquetas
Se debe informar si existe la presencia de
agregados plaquetarios
Es muy importante una impecable tcnica en el
momento de realizar el frotis, es decisivo.

Recuento en Lmina Perifrica

Damacheck :
( Rcto 1000 GR + F ) x 100

Factor = ?
Hto 35 ( + 5 )
Hto : 35 - 39 ( + 3 )
Hto : 40 ( + 1 )