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GOBIERNO AUTONOMO DE CHUQUISACA

SERVICIO DEPARTAMENTAL DE SALUD


HOSPITAL DEL NIÑO
 POE 01 Área: Química
UNIDAD DE
Sanguínea
LABORATORIO DE UREA COLORIMETRICA
DIA MES AÑO PAGINA
ANALISIS CLINICO LABTEST
01 08 2015 1 de 4

1. Objetivo Determinació n la concentració n de urea en suero y orina a través


de un sistema enzimá tico colorimétrico por reacció n de punto final

2. Alcance / campo de A todas las solicitudes médicas de los pacientes que lo requieran
aplicación
3. Responsable Bioquímico del á rea de química sanguínea, y todo el personal
encargado del procesamiento.

4. Definiciones La urea constituye la fracció n de nitró geno no proteico má s


importante en la mayoría de los líquidos bioló gicos. En el hombre
es el principal producto final del metabolismo proteico. Se produce
en el hígado y es excretada por la orina a través de los riñ ones.
Una elevació n de la concentració n sérica de urea, se interpreta
generalmente como una posible disfunció n renal. Sin embargo, no
debe dejarse de lado el hecho de que los valores séricos de urea se
encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el metabolismo
proteico, por lo que cualquier alteració n en estas variables se
traducirá en un cambio de la concentració n de urea en suero.
5. Desarrollo del 5.1 Fundamento
procedimiento Se basa en una reacció n enzimá tica colorimétrica La ureasa
descompone específicamente la urea produciendo dió xido de
carbono y amoníaco. Este reacciona en medio alcalino con salicilato
e hipoclorito bajo la acció n catalizadora del nitroprusiato de sodio
para formar el indofenol color verde.

5.2 Especificaciones del método


a. Incertidumbre de la medición
 Tiempo: 10 minutos
 Interferencia o influencias pre analíticas: después del
ejercicio físico sube considerablemente, en el embarazo
bajan los niveles.

5.3 Muestra requerida


Suero, plasma y orina fresco y límpido, en caso de que la muestra a
emplear sea plasma, se recomienda el uso de oxalato, heparina,
EDTA como anticoagulante para su obtenció n.
La muestra de orina de 24 horas debe ser recogida en frasco
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Dra. Neydoca Otondo G. Dra. Liliana Barrancos Sierra Consejo Técnico Hospital del
Bioquímica - Hospital del Niño Responsable de Laboratorio Niño “Sor Teresa Huarte
“Sor Teresa Huarte Tama” Hospital del Niño Tama”
“Sor Teresa Huarte Tama”
Fecha de redacción: Fecha de redacción: Fecha de aprobación:
29 abril 2015
VERSIÓN ORIGINAL ACTUALIZACIÓN Nº: 1
FECHA DE VIGENCIA:
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conteniendo 2 ml de HCl % y centrifugada antes de usar. No utilizar


formol como preservante para la orina.

a. Estabilidad de la muestra: La urea en suero es estable 12


horas entre 15-25°C y varios días en refrigerador (2 -8ºC) o
6 meses en congelador, sin agregado de conservadores.
5.4 Reactivos

R-1 Ureasa: tampó n fosfato 10 mmol/L y ureasa


R-2 Tampon: tampó n fosfato 100 mmol/L ph 6,9, salicilato de
sidio 312 mmol/L y nitroprusiato de sodio 16,8 mmol/L.
R-3 Oxidante:Hidroxido de sodio 2,8 mmol/L e hipoclorito de
sodio 121 mmol/L
R-4 Estandar: 70 mg/dl

5.5 Materiales
- Micropipetas 1 ml
- Micropipetas graduable de 10 uL
- Tips o puntas de 5- 200 uL
- Tips o puntas de 1000 ul
- Tubos de ensayo de borosilicato.
- Cronó metro

5.6 Equipos
- Analizador químico o fotocolorímetro
- Bañ o maría manteniendo a temperatura constante 37°C

5.7 Procedimiento detallado

a. Preparación de reactivos
Reactivos de Trabajo:
Tampón de uso: añ adir el contenido del frasco 2(100ml) a 400 ml
de agua destilada o desionizada y mezclar es estable 12 meses en
frasco ambar entre 2-8 °C

Ureasa Tamponada: Añ adir 1ml de ureasa frasco 1 a 20 ml de


tampó n de uso. Estable 21 dias en frasco de vidrio ambar entre 2-8
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°C.

Oxidante de uso: añ adir el contenido del frasco 3 (25 ml) a 475 ml


de agua destilada o desionizada y mezclar. Estable 12 meses en
frasco plá stico entre 2-8 °C.

b. Procedimiento

TECNICA PARA SUERO O PLASMA Y ORINA


Para la dosificació n de urea en orina diluir la muestra 1:50 (0.1ml
de orina + 4.9 ml de agua destilada o desionizada). Multiplicar el
resultada obtenido por 50.

En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco) S (Standard)


y D (Desconocido) colocar:

B S D
Standard 10 ul
Muestra 10 ul
Ureasa Tamponada 1 ml 1ml 1ml
Incubar 5 minutos en bañ o a 37 ºC
Oxidante de uso 1 ml 1 ml 1 ml
Incubar 5 minutos en bañ o de agua a 37oC y leer a 600 nm
(580-620). El color de la reacció n final es estable 2 horas por
lo que debe ser lecturada dentro de ese tiempo.
Orina (mg/24 hrs=mg/dl x vol. de 24 hrs (ml)/100

LINEALIDAD: la reacció n es lineal hasta 300 mg/dl. Para valores


superiores, diluir la solució n coloreada final con agua destilada
hacer nueva lectura y multiplicar el resultado por el factor de
dilució n o también se puede diluir la muestra con NaCl
150mmol/(85%) y realizar una nueva medició n y multiplicar el
resultado por el factor de dilució n.
c. Valor de referencia
Suero o plasma:
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 Recién nacidos – 1 año: 2-34 mg/dl


 1 - < 13 años: 8 – 36 mg/dl
 Adultos : 15 – 45 mg/dl

Orina: 26 – 43 g/24 hrs.

d. Validación de los resultados

 Incluir controles de calidad interno del laboratorio cuyos


valores deben caer dentro de +- 2 DS del curva de control de
calidad.
 Procesar por duplicado

e. Bioseguridad
Utilizar guantes, gafas y mandil de manga larga.
Manejo del medio ambiente: Desechar todo el material utilizado en
hipoclorito de sodio al 0,5% de preparació n reciente, siempre y
cuando este material no sea incinerado.

f. Informe

Datos del paciente y resultados en el formato establecido.

6. Formulario y Formulario:
registro  Orden de laboratorio
 Cuaderno de registro general del paciente.
 Cuaderno de registro química sanguínea.
 Cuaderno fase analítica de química sanguínea.

7. Referencia  Henry, R.J. et.al. - Clinical Chemistry

 Inserto del Kit Labtest


8. Anexos
9. Lista de distribución  Laboratorio hospital del niñ o (original)
 Responsable del á rea de química sanguínea (Controlada)

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