RESUMEN

COMPLEJO HEMATOLÓGICO
Principios Generales Y Grado De Complejidad:
Existen importantes diferencias de tipo constructivo entre los distintos modelos de analizadores
hematológicos disponibles en el mercado, en dependencia de su complejidad y grado de
automatización sin embargo, de una manera muy general, casi todos constan de:
a) Una unidad principal: donde la muestra es identificada, separada, aspirada, diluida, y
analizada.
b) Una unidad de procesamiento de datos: que recibe la información de la anterior, realiza los
cálculos, desarrolla histogramas y muestra mensajes en la pantalla, en caso de que esta exista
c) Una unidad neumática, que suministra el vacío a la unidad principal, para el funcionamiento de
las válvulas y pistones que mueven el aire y los fluidos a través de las cámaras y conductos.
d) Una unidad impresora que recibe los datos procesados y los imprime en una cinta o tarjeta.
CONTEO DE CÉLULAS:
Algunos sistemas emplean un tubo de apertura, unido a un transductor, a través del cual las
células pasan arrastradas por el líquido dilutor: una corriente eléctrica circula entre el electrodo
interno y el externo del transductor y cada vez que un núcleo celular atraviesa la apertura,
provoca un cambio de voltaje que es directamente proporcional al tamaño del núcleo. La
duración del ciclo de conteo es monitoreada estrechamente y el conteo registrado cada segundo
durante dicho ciclo. De manera similar son contados las plaquetas y los eritrocitos, para los
cuales está establecida una discriminación por el tamaño celular respectivo. Otro sistema más
avanzado, hace pasar las células de una en una, por medio de una estrecha corriente, a través de
un canal de fluido, para ser contadas y medidas empleando un rayo de láser situado en un lado
de éste y dirigido a un sensor a través de la corriente. Cuando no está pasando ninguna célula,
el rayo de láser está enfocado directamente sobre una barra bloqueadora que evita que incida
sobre los foto- detectores donde se genera un pulso de voltaje cuya área corresponde al tamaño
de la partícula. Las células son diferenciadas mediante un voltaje prefijado.

Determinación de Hb y Hto: La Hb es cuantificada por fotometría, empleando algunos sistemas el

método de Drabkin; y otros simplemente una solución lisante, comparando la absorbancia con un
estándar interno o calibrador. En cuanto al hematocrito, generalmente se calcula en base al
número de eritrocitos y el volumen celular de los mismos, más un factor de corrección que tiene
en cuenta la dilución, la calibración y otras variables. Otra variante se basa en el tiempo empleado
por cada célula para atravesar el rayo de láser; los pulsos generados son combinados para
determinar el área bajo la señal. La suma de estas áreas es directamente proporcional al % del
Hto.

Diferenciación celular: En la actualidad casi todos los sistemas realizan recuento diferencial de las
células de la serie blanca. Los métodos comúnmente empleados se basan en la diferenciación
por el tamaño celular o la forma del núcleo y en algunos modelos empleando una coloración
citoquímicas (peroxidasas). Generalmente, se diferencia en linfocitos, mononucleares grandes y
poli nucleares.

Parámetros derivados:
a) Las constantes corpusculares HCM y CHCM, se calculan en base a la Hb, Hto y conteo de
eritrocitos.
b) El RDW-SD, es una medida de anisocitosis, se define como el ancho, en fl, de la curva de
distribución de células rojas en un punto 20% por encima de la línea de base.
c) Determinación de la distribución por tamaño, de los leucocitos y del volumen plaquetario medio.
La primera se realiza en base al histograma leucocitario y la segunda, de manera similar al RDW.
Complejo Hematológico(Horiba Medical- ABX Micros Es 60)
Partes del mismo:
Los complejos hematológicos constan de:

 unidad principal: donde la muestra es identificada, separada, aspirada, diluida, y

analizada.
 unidad de procesamiento de datos: que recibe la información de la anterior, realiza los
cálculos, desarrolla histogramas y muestra mensajes en la pantalla, en caso de que esta
exista
 unidad neumática, que suministra el vacío a la unidad principal, para el funcionamiento de
válvulas y pistones que mueven el aire y los fluidos a través de las cámaras y conductos.
 unidad impresora que recibe los datos procesados y los imprime en una cinta o tarjeta.
Principios de funcionamiento
 IMPEDANCIA:

Principio Coulter Establece que partículas que ingresan a un orificio, conjuntamente con
corriente eléctrica continua, producen un cambio en la impedancia (resistencia), que es
proporcional al tamaño de la partícula que atraviesa el orificio.
R/: # células contadas x Unidad de Volumen
x Coeficiente de Calibración
 Medición de la cantidad de luz dispersada o absorbida
 Citoquímica

Detección de Eritrocitos y Plaquetas

Principios de Detección

■ Medición de la variación de impedancia que genera el paso de células a través de una

microabertura calibrada.
■ El espécimen se diluye en un diluyente electrolítico (conductor actual) y se obtiene a través de
la microabertura calibrada. Se colocan dos electrodos en cada lado de la abertura. La corriente
eléctrica pasa continuamente a través de los electrodos.
■ Cuando la célula pasa a través de la abertura, la resistencia eléctrica entre los dos electrodos
aumenta proporcionalmente al volumen de células.
1 = Picos de voltaje para ERI y PLA
■ Los impulsos generados tienen un voltaje muy bajo, que el circuito de amplificación aumenta,
de modo que el sistema electrónico puede analizarlos y eliminar el ruido de fondo.
■ Resultados: número de células contadas por unidad de volumen multiplicados por el
coeficiente de calibración.

Medición de la Hemoglobina

El reactivo lisante rompe la membrana de eritrocitos y libera la hemoglobina de la célula. La

hemoglobina, liberada por el reactivo lisante, se combina con el cianuro de potasio del reactivo
lisante para formar un compuesto cromogénico de cianometahemoglobina. Después, se mide
este compuesto a través de la parte óptica de la cámara de LEU/HGB por medio de una
espectrofotometría a una longitud de onda de 550 nm.

Medición de Hematocritos

Todos los impulsos de ERI se agrupan en distintos tamaños. A continuación, se obtiene el

promedio de amplitud de impulso de cada grupo, para seguidamente, utilizarlos para obtener un
último promedio de todas las amplitudes de impulsos de ERI. Esta función es una integración
numérica del VCM. Los resultados de HCT se muestran en porcentajes de esta integración

Cálculo de IDE

El valor IDE (Índice de Distribución de Eritrocitos) se utiliza para determinar las anomalías de
eritrocitos relacionadas con la anisocitosis. El valor IDE le permite seguir la evolución del índice
del histograma de ERI en relación con el número de células y su volumen medio. El IDE también
es un cálculo a partir del histograma de ERI.
Los cálculos se llevan a cabo como sigue:
■ IDE = (K X SD) / VCM
Con:
■ K = constante del sistema
■ SD = Desviación Típica según los estudios estadísticos sobre la distribución celular en el
histograma de ERI.
■ VCM = Volumen Corpuscular Medio de eritrocitos

Cálculo de VCM, HCM, CHCM

■ El valor VCM (Volumen Corpuscular Medio) se calcula directamente a partir del histograma de
ERI completo.
■ El valor HCM (Hemoglobina Corpuscular Media) se calcula a partir del valor de hemoglobina y
del recuento de ERI.
■ El peso medio de hemoglobina en cada ERI viene dado por la fórmula:
■ HCM (pg) = HB/ERI x 10
■ El valor CHCM (Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media) se calcula según los
valores de hemoglobina y hematocrito. La concentración media de hemoglobina en el volumen
total de ERI viene dada por la fórmula:
■ CHCM (g/dL) = HB/HCT x 100

Medición de VPM

El valor de VPM (Volumen Medio de Plaquetas) se obtiene directamente del análisis de la

curva de distribución de plaquetas.

Cálculo de Plaquetocritos
Los plaquetocritos (o trombocritos) se calculan según la fórmula siguiente:
Pct% = PLA (103/mm3) x VPM (μm3) / 10000

Recuento de leucocitos

Principios de medida diferenciales LMG

El recuento de LEU se efectúa en la cámara de LEU/HGB. El principio de detección es el
mismo que para ERI. Los impulsos electrónicos se definen en 256 canales de acuerdo con el
tamaño del impulso. Los impulsos se diferencian por umbral, se agrupan y se calculan
matemáticamente para obtener un valor numérico.
Resultados
LEU: El número de células contadas en un tiempo determinado por volumen X el coeficiente de
calibración de LEU.
Histograma de LEU
El histograma de LEU es un estudio de distribución que muestra los 3 tipos siguientes de
subpoblaciones de leucocitos: linfocitos, monocitos y granulocitos (LMG).
■ Linfocitos: entre 30 y 100 fL.
■ Monocitos: entre 100 y 150 fL.
■ Granulocitos: entre 150 y 450 fL.
ABX Minidil LMG conserva y prepara la membrana de LEU para la reacción diferencial. El reactivo
lisante posee un modo de acción diferencial en las membranas citoplásmicas de LEU.
■ Si el reactivo lisante entra en contacto con los linfocitos, el citoplasma y la membrana se
destruyen. Al final de la acción lisante, sólo permanece intacto el núcleo, y el resultado es un
volumen más pequeño detectado por el instrumento.
■ Si el reactivo lisante entra en contacto con la membrana citoplásmica de monocitos, se produce
una reacción intermedia que vacía el citoplasma de la célula. Al final de la acción lisante, los
monocitos obtenidos tiene un tamaño intermedio entre los linfocitos y los granulocitos.
■ Cuando el reactivo lisante entra en contacto con los granulocitos, se produce una reacción
limitada, puesto que su estructura citoplásmica contiene una molécula que los protege de la
acción reductora de la solución lisante. Esto, a su vez, convierte a los granulocitos en el
componente de mayor tamaño en las subplobaciones de leucocitos durante la diferenciación
celular.

Cálculo de IDP

El valor de IDP (Índice de Distribución de Plaquetas) se calcula a partir del histograma de

plaquetas. El valor IDP está representado por la anchura de la curva entre el 15% del número de
plaquetas que comienza desde 2 fL (S1) y el
15% del número de plaquetas que comienza con el umbral superior variable (S2).

Control de la calidad
El Control de calidad permite controlar un conjunto de análisis basados en valores de muestras e
intervalos conocidos durante un período de varios meses. Los cálculos estadísticos que se llevan
a cabo sobre esta población permiten extraer información de calidad relacionada con la
estabilidad del instrumento. Hay tres niveles de control disponibles para cada una de las pruebas.
Los tres controles pueden estar activados simultáneamente.
Calibración
La función de calibración se utiliza para determinar la precisión y la exactitud del analizador, con
el uso de un producto formulado de forma específica, para recuperar cada parámetro en
tolerancias cercanas de valores diana y límites conocidos. Los coeficientes de variación y la
recuperación de la diferencia porcentual deben encontrarse dentro de sus límites especificados.