PRINCIPIOS DE INTERPRETACION DEL HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

Lic. TM Boris Valdivia Vizarraga Servicio de Hematología Hospital Nacional “ Guillermo Almenara Irigoyen “ ESSALUD

Introducción
• El desarrollo de los Autoanalizadores hematológicos comenzó en la década de los 50 con los hermanos Wallace y Joseph Coulter, quienes inventaron en 1956 el primer contador automático de células sanguíneas • Hasta 1973 los hermanos coulter mantuvieron sus diseños en forma exclusiva, desarrollándolos y mejorándolos • Posteriormente otros fabricantes introducen nuevos modelos basados en el mismo principio • En 1980 se introduce el diferencial 3 Diff además del estudio de la serie roja con los cómputos de eritocitos, la determinación de la hemoglobina y el cálculo de los índices eritrocitarios

Hermanos Wallace y Joseph Coulter

Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Unidades Recuento total de glóbulos blancos Porcentaje de neutrófilos Porcentaje de linfocitos Porcentaje de monocitos Porcentaje de eosinófilos Porcentaje de basofilos Valor absoluto de neutrófilos Valor absoluto de linfocitos Valor absoluto de monocitos WBC NEUT % LYNPH % MONO % EO % x 103 / ul % % % % % x 103 / ul x 103 / ul x 103 / ul Abreviarura BASO % NEUT # LYNPH # MONO # .

SD RDW – CV Unidades x 103 / ul x 106 / ul G / dl % fL pg g / dl fL % .Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Valor absoluto de basófilos Recuento total de glóbulos rojos Hemoglobina Hematocrito Volumen Corpuscular Medio Hemoglobina Corpuscular Media Concentración de HGB Corpuscular Media Ancho de Distribución Eritrocitaria Ancho de Distribución Eritrocitaria – CV Abreviarura BASO # RBC HGB HCT MCV HCM MCHM RDW .

Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Unidades Recuento total de Plaquetas Volumen Plaquetario Medio Ancho de Distribución Plaquetario PLT MPV PDW x 106 / ul fL % Abreviarura .

CHCM • Nuevos índices como RDW y PDW • Gráficos de distribución de la población eritroide.Estudio de la Serie Roja • Los años y evaluaciones han dado total aprobación a la impedancia eléctrica para el estudio de las serie roja. HCM. en la obtención del computo de eritrocitos • Hematocrito electrónico • Hemoglobina • VCM. histogramas que se obtienen de los parámetros de volumen celular Vs distribución de frecuencia .

constantes corpusculares .• En el hemograma automatizado por la metodología usada el valor de Hto es menor al método del capilar. . Disminuye 5% ( 1 – 2 unidades del Hto ) • La CHCM deja el significado del método manual debido a la menor variabilidad debido a que el Hto se obtiene electrónicamente • Solo es significativa si presenta variaciones muy importantes ( < 29% ) o elevaciones extremas ( > de 37% ) como se observa en la esferocitosis • Entonces en un caso de anemia la clasificación inicial se realiza con las cifras de HB. RDW y el histograma • Toda esta información muy valiosa para el clínico debe ser corroborada por el examen microscópico de la serie roja. Hto. atendiendo a las alarmas que estos equipos mostrarán en sus pantallas .

4. los autoanalizadores hematológicos presentan limitaciones : No detectan poiquilocitosis No detectan inclusiones eritrocitarias Lo que nos presentan los fabricantes son distintos tipos de alarmas con diversa sensibilidad.Para tener en cuenta : • A pesar del avance tecnológico alcanzado. no se debe por ningún motivo. línea celular. . error intramétodo y/o de proceso. que tienen que ver con el tamaño celular. Finalmente. 2. 3. dejar de realizar el examen microscópico de las células 1.

5. asi como. 3. la observación microscópica nos permite confirmar lo señalado por los índices hemáticos. 6. 4. establecer la presencia de anormalidades • Deben considerarse además una serie de interferencias que alteran el hemograma automatizado : • • • • • • • 1. 7.Estudio de la Serie Roja • Por lo tanto. lipemia ictericia severa hemólisis auto-aglutinación por anticuerpos fríos plaquetas gigantes leucemias otras anormalidades . 2.

aglutinación de GR Por anticuerpos fríos. hemólisis Causa inmune.ANEMIA Deficiencia de B12/folato. anemia aplásica Insuficiencia severa de fierro Hemoglobinopatías heterocigóticas Hemoglobinopatías homocigótas Mielofibrosis / anemia sideroblástica Anemia hemolítica Anemia secundaria Talasemia y Hemoglobina S combinada Talasemia MCV elevado RDW CV elevado RDW SD elevado bajo normal normal normal normal normal bajo bajo elevado normal elevado elevado normal normal elevado normal elevado bajo elevado elevado elevado normal elevado bajo .

Principio de Medición por el Método de la Impedancia Eléctrica El número de pulsos eléctricos indica la cantidad de partículas que pasan a través de la apertura y el tamaño de los pulsos es proporcional al volumen de las partículas .

el cambio de la impedancia eléctrica es detectado como un Pulso. El número total de pulsos corresponde al conteo total de células y La altura de cada pulso es proporcional al correspondiente volumen celular .Un pequeño voltaje aparece A travez de los electródos Señal celular Apertura Cuando una célula suspendida en una solución electrolítica pasa a través De la apertura.

. El grado de perdida de Coincidencia depende de la concentración Celular .Apertura Célula 1 Célula 2 Apertura Cuando 2 o mas células son detectadas en La apertura. la célula 1 y célula 2 son Detectadas como un gran pulso. por lo tanto Una de las células no es contada ( perdida De coincidencia ).

VOLUMETRIA No se puede obtener el recuento celular absoluto a menos que se conozca el volumen preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo de recuento .

Talasemia .

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forma.Estudio de la Serie Blanca • Es en el estudio diferencial de leucocitos donde se han desarrollado mas y nuevas tecnologías. • La cuenta total de leucocitos se da con la impedancia en la mayoría de aparatos • Algunos aparatos usan la impedancia para medir el volumen nuclear y realizar un diferencial 3 Diff. pero nunca ser los definitivos. Mas usados en pacientes saludables . granularidad y estructuras complejas. granulocitos y células mixtas • Estos diferenciales se acompañan de histogramas y deben ser tomados en cuenta. que muestra linfocitos. morfología nuclear. con el fin de detectar con mayor precisión : tamaño.

Estudio de la Serie Blanca • Los datos mas confiables para el leucograma electrónico los ofrecen los diferenciales 5 Diff • Estos ofrecen análisis por medi de : • 1. impedancia • 4. canales de lobularidad . citoquímica • 5. radiofrecuencia • 3. rayo láser ( scatter light ) • 2.

que son diferentes para cada tipo de célula • Una reacción cito-química. muestra patrones característicos.• La utilización de citoquímica para detectar los granulocitos se encuentra en algunos instrumentos. la composición y cantidad relativa de diferentes clases de lípidos en la membrana de los leucocitos. en conjunto con un canal de lobularidad. basada en estas características de la membrana es la mejor forma de estos instrumentos para diferenciar granulocitos maduros de los inmaduros . para basófilos • Análoga a la especificidad de los antígenos. con el uso de la peroxidasa.

4.• Causas de interferencia en serie blanca : • • • • • • • • 1. 6. 2. crioglobulinas criofibrinógeno proteínas monoclonales eritroblastos agregados plaquetarios eritrocitos no lisados microcoagulos heparina circulante . 3. 5. 8. 7.

Estudio de las Plaquetas • El computo se hace habitualmente por impedancia • La condición de una muestra en circunstancias de tiempo. Son indispensables para un resultado confiable . homogenización. y la no formación de hemólisis y espuma. temperatura. relación sangre total / anticoagulante.

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Histogramas de Plaquetopenias .

•COULTER utiliza su tecnología patentada de SWEET FLOW que consiste en hacer circular una corriente de diluyente en la parte inmediatamente posterior de la apertura de eritrocitos. a fin de que las plaquetas como son tan pequeñas no permanezcan en el área de recuento y por lo tanto no se cuenten más de una vez .

ya que cambian de forma desde el momento de su extracción. se debe de hacer un examen microscópico de toda la lámina y/o recuento en cámara. • Los cambios reales dependen de la alteración en la generación medular de plaquetas • Presenta alteraciones en pacientes con plaquetas gigantes • El PDW o ancho de distribución plaquetaria.• Ante un recuento plaquetario disminuido. • Las plaquetas se comportan de manera particular. Mieloproliferación . para luego estabilizarse. Mielodisplasia. corresponde a la amplitud de distribución o anisocitosis plaquetaria y se encuentra alterado en PTI. despues de varias horas pierde confiabilidad.

microcoagulos 6. inclusiones eritrocitarias 5.• Debe tenerse presente que algunas condiciones con producción defectuosa medular liberan plaquetas muy pequeñas y entonces el PDW. fragmetos eritrocitarios 4. VPM y P-LCR presentan valores muy bajos • En trombocitopenias es muy útil el histograma. microcitos 3. ya que el equipo no realiza los cálculos • Es definitivo que toda alteración plaquetaria debe realizarse al examen microscópico • • • • • • • Alteraciones en el recuento automatizado : 1. heparina . pseudotrombicitopenia 2.

en el baño de eritrocitos se encuentra una apertura de 50 µm y en el de los leucocitos otra de 100 µm.• Los sistemas COULTER poseen 2 baños. . uno de eritrocitos y otro de leucocitos.

HISTOGRAMAS .

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Método de Conteo Celular por Dispersión de la Luz • Medida a 0º sirve para medir el tamaño celular Medida a 10º mide la complejidad celular Medida a 90º mide la superficie celular y la estructura interna ( granularidad ) Medida a 90ºD mide determinados tipos de granularidad celular • • • .

se produce la interacción con el rayo láser con ángulos diferentes. la granularidad y la morfología de la superficie. la estructura interna. .FOCALIZACIÓN HIDRODINÁMICA • A medida que las células penetran en el área de visualización específica. que suministran información sobre el tamaño de la célula.

que mide las células en suspensión.• CITOMETRIA DE FLUJO “ Una subdisciplina de la citología analítica. a su paso por una estación de medida ” NCCLS . con orientación metodológica. dentro de un vehículo líquido.

RADIOFRECUENCIA ( Conductividad ) La conductividad de las ondas de radio A través de las células. nos revelan su composición interna Una frecuencia alta. generada por un oscilador de cristal. sobreimpuesta a la corriente directa. que incide sobre las células para medir su densidad. .

TECNOLOGÍA VCS • IMPEDANCIA • SCATTER LIGHT • RADIOFRECUENCIA .

RF Centroide inicial De los granulocitos Centroide Inicial de Linfocitos Centroide inicial de Monocitos DC Centroide inicial Del estroma .

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Eosinófilos Neutrófilos Polinucleados Monocítos Basófilos Linfocítos .

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PARAMETRO PRINCIPIO WBC RBC/PLT HGB HCT LY. RF Retic % Citometria de flujo & fluorescencia . GRAN EO BASO IMI Impedancia Corriente Directa/ enfoque hidrodinámico Lauril Sulfato de sodio (SLS ) Cianmetahemoglobia. CD. MO.VCS CD CD RF. Radiofrecuencia ( RF ). DC. Fotométrico Acumulación de la altura de los pulsos Citometria ( MAPSS ).

Toma de muestra de una cantidad medida 3. Enumeración de partículas Ventajas de los métodos electrónicos : 1.Todo conteo celular comparte tres pasos básicos : 1. Impresión de resultados . Dilución de la sangre 2. Cálculo automatizado del Hematocrito y constantes 4. Velocidad 2. Precisión 3.

El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el Hematocrito • .R.• • El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria de la altura de los pulsos de las células rojas y dividido por el conteo de G. • El volumen del paquete celular es calculado del MCV multiplicado por el conteo de células rojas • El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y el conteo de G.R.

son responsables de macrocitosis y valores altos de MCHM 2. y Hematocrito. pueden alterar el valor de la Hemoglobina. En LLC y otras leucemias las células son fácilmente dañadas por la apertura. que agregan los GR a temperaturaambiente. pudiendo aparecer falsos conteos bajos de leucocitos ( WIC / WOC ) Títulos altos de aglutininas frías. . 3. MVC.1. La turbidez producida por conteos elevados de células blancas.

Hematocrito :
Se mide en % y representa la proporción total de GR en la sangre. • No se mide directamente con los citómetros de flujo y se calcula a partir del VCM y en número de GR. Tiene menor presición El hematocrito es medido electrónicamente : “ el pulso que es generado cuando los GR pasan a través de la abertura es proporcional a su volumen “. Se determina comparando el volumen total o acumulado de GR al volumen total de sangre en los 11.7ul de la dilución 1:500

El conteo diferencial manual está sujeto a varios errores
• • • • • Errores en la preparación del frotis Errores en la tinción del frotis Distribución celular Interpretación celular Número de células contadas

Un buen diferencial automatizado debe ser capaz de : 1. Identificar células normales y anormales 2. Resultados reproducibles en conteos repetitivos 3. El conteo debe exceder largamente ( 8,000 – 32,000 cel. ) al tradicional conteo manual ( 100 – 200 células ) 1. El conteo debe llevarse a cabo en un mínimo lapso de tiempo 1. Se debe tener capacidad de almacenamiento de datos

cloro . los neutrófilos se tiñen en varios tonos de gris 4. una mezcla de peróxido de hidrógeno y 4 . la heparina de los gránulos del basófilo reacciona con el azul alciano.Solo un ejemplo : Tinción Citoquímica 1. eosinófilos y neutrófilos son identificados por su contenido de perooxidasa 2. la esterasa monocítica reacciona con el alfa naftil butirato.1 – naftol se adiciona para colorear los gránulos peroxidasa positivos 3. los eosinófilos se tiñen de negro 5. el alfa naftol se libera y se combina con la fucsina básica diazotizada en la mezcla para formar precipitado rojo intracelular 7. una tinción usada para demostrar mucopoliscaridos 8. los neutrófilos con alta actividad peroxidasa son contados como juveniles 6. Los linfocitos permanecen sin ser coloreados .

Gráfica de Control de los Indices Eritrocitarios 1 +3% 0% .3% + 3% 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 VCM HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .

signo de obturación parcial del orificio de recuento +3% VCM 0% .Desplazamiento del VCM yHCM en la misma dirección.3% + 3% HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .

3% + 3% HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .Desviación de la HCM y CCMH en el mismo sentido decreciente. causada por desajustes en la calibración de la Hb o recuento de hematíes +3% VCM 0% .

3% + 3% HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .Patrón con un pico de desviación positiva del VCM y HCM. causada por la incorporación de muestras de enfermos con marcada macrocitosis. +3% VCM 0% .

0 2.0 12.5 1.0 24.12 0 0. 10 8Change ( % ) 6420-2 -4 -6 -8 WBC RBC HB MCV PLT HCT Time ( h ) -10 .0 8.0 4.0 .Effect of specimen storage at room temperature ( 18º .20ºC ) 0n the complete blood count parameters of the Abbott CD 3500 blood analyzer.0 48.

Efecto del almacenamiento a temperatura ambiente ( 18 -20 ºC ) sobre el conteo diferencial de leucocítos. resultados del autoanalizador hematológico Abbott CD 3500 20 10 0 Linfocitos v Change ( % ) -10 -20 Neutrófilos Eosinófilos Monocitos -30 -40 -50 -60 0 0.5 1 2 4 8 12 24 48 Basófilos Time ( h ) .

ADVIA 60 Algunas de sus Características •18 Parámetros: WBC. •Tarjetas de Memoria "Smart Cards". para resultados. PDW. Granulocítos. Pct. •Histogramas de WBC. PLT. •Capacidad: 55 muestras/hora con identificación por teclado alfanumérico y reporte de alarmas por fallas en el conteo o por resultados patológicos. Monocitos. (% y conteo absoluto). Linfocitos. MPV. Hgb. Interfase: salida RS 232 . Hct MCV. Muestreo: 10 ul sangre total en tubo cerrado con limpieza automática del capilar de muestreo. RDW. MCHC. RBC. calibración y control de calidad. RBC & PLT.

21 .Sismex SF .3000 SX .

COULTER .

CELL-DYN 4000 .

SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADO CELL DYN 4000. CON EL LAMINADOR SMS – 5H2901 MUCHAS GRACIAS ! .

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