PRINCIPIOS DE INTERPRETACION DEL HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

Lic. TM Boris Valdivia Vizarraga Servicio de Hematología Hospital Nacional “ Guillermo Almenara Irigoyen “ ESSALUD

Introducción
• El desarrollo de los Autoanalizadores hematológicos comenzó en la década de los 50 con los hermanos Wallace y Joseph Coulter, quienes inventaron en 1956 el primer contador automático de células sanguíneas • Hasta 1973 los hermanos coulter mantuvieron sus diseños en forma exclusiva, desarrollándolos y mejorándolos • Posteriormente otros fabricantes introducen nuevos modelos basados en el mismo principio • En 1980 se introduce el diferencial 3 Diff además del estudio de la serie roja con los cómputos de eritocitos, la determinación de la hemoglobina y el cálculo de los índices eritrocitarios

Hermanos Wallace y Joseph Coulter

Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Unidades Recuento total de glóbulos blancos Porcentaje de neutrófilos Porcentaje de linfocitos Porcentaje de monocitos Porcentaje de eosinófilos Porcentaje de basofilos Valor absoluto de neutrófilos Valor absoluto de linfocitos Valor absoluto de monocitos WBC NEUT % LYNPH % MONO % EO % x 103 / ul % % % % % x 103 / ul x 103 / ul x 103 / ul Abreviarura BASO % NEUT # LYNPH # MONO # .

SD RDW – CV Unidades x 103 / ul x 106 / ul G / dl % fL pg g / dl fL % .Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Valor absoluto de basófilos Recuento total de glóbulos rojos Hemoglobina Hematocrito Volumen Corpuscular Medio Hemoglobina Corpuscular Media Concentración de HGB Corpuscular Media Ancho de Distribución Eritrocitaria Ancho de Distribución Eritrocitaria – CV Abreviarura BASO # RBC HGB HCT MCV HCM MCHM RDW .

Parámetros del Hemograma Automatizado 5 Diff Parametro Unidades Recuento total de Plaquetas Volumen Plaquetario Medio Ancho de Distribución Plaquetario PLT MPV PDW x 106 / ul fL % Abreviarura .

HCM. en la obtención del computo de eritrocitos • Hematocrito electrónico • Hemoglobina • VCM.Estudio de la Serie Roja • Los años y evaluaciones han dado total aprobación a la impedancia eléctrica para el estudio de las serie roja. histogramas que se obtienen de los parámetros de volumen celular Vs distribución de frecuencia . CHCM • Nuevos índices como RDW y PDW • Gráficos de distribución de la población eritroide.

atendiendo a las alarmas que estos equipos mostrarán en sus pantallas .• En el hemograma automatizado por la metodología usada el valor de Hto es menor al método del capilar. . Disminuye 5% ( 1 – 2 unidades del Hto ) • La CHCM deja el significado del método manual debido a la menor variabilidad debido a que el Hto se obtiene electrónicamente • Solo es significativa si presenta variaciones muy importantes ( < 29% ) o elevaciones extremas ( > de 37% ) como se observa en la esferocitosis • Entonces en un caso de anemia la clasificación inicial se realiza con las cifras de HB. constantes corpusculares . Hto. RDW y el histograma • Toda esta información muy valiosa para el clínico debe ser corroborada por el examen microscópico de la serie roja.

4. dejar de realizar el examen microscópico de las células 1. error intramétodo y/o de proceso. que tienen que ver con el tamaño celular. línea celular. Finalmente. los autoanalizadores hematológicos presentan limitaciones : No detectan poiquilocitosis No detectan inclusiones eritrocitarias Lo que nos presentan los fabricantes son distintos tipos de alarmas con diversa sensibilidad.Para tener en cuenta : • A pesar del avance tecnológico alcanzado. 3. . no se debe por ningún motivo. 2.

7. 6. la observación microscópica nos permite confirmar lo señalado por los índices hemáticos. 3. 5. asi como.Estudio de la Serie Roja • Por lo tanto. 2. lipemia ictericia severa hemólisis auto-aglutinación por anticuerpos fríos plaquetas gigantes leucemias otras anormalidades . establecer la presencia de anormalidades • Deben considerarse además una serie de interferencias que alteran el hemograma automatizado : • • • • • • • 1. 4.

anemia aplásica Insuficiencia severa de fierro Hemoglobinopatías heterocigóticas Hemoglobinopatías homocigótas Mielofibrosis / anemia sideroblástica Anemia hemolítica Anemia secundaria Talasemia y Hemoglobina S combinada Talasemia MCV elevado RDW CV elevado RDW SD elevado bajo normal normal normal normal normal bajo bajo elevado normal elevado elevado normal normal elevado normal elevado bajo elevado elevado elevado normal elevado bajo .ANEMIA Deficiencia de B12/folato. aglutinación de GR Por anticuerpos fríos. hemólisis Causa inmune.

Principio de Medición por el Método de la Impedancia Eléctrica El número de pulsos eléctricos indica la cantidad de partículas que pasan a través de la apertura y el tamaño de los pulsos es proporcional al volumen de las partículas .

El número total de pulsos corresponde al conteo total de células y La altura de cada pulso es proporcional al correspondiente volumen celular . el cambio de la impedancia eléctrica es detectado como un Pulso.Un pequeño voltaje aparece A travez de los electródos Señal celular Apertura Cuando una célula suspendida en una solución electrolítica pasa a través De la apertura.

Apertura Célula 1 Célula 2 Apertura Cuando 2 o mas células son detectadas en La apertura. . la célula 1 y célula 2 son Detectadas como un gran pulso. por lo tanto Una de las células no es contada ( perdida De coincidencia ). El grado de perdida de Coincidencia depende de la concentración Celular .

VOLUMETRIA No se puede obtener el recuento celular absoluto a menos que se conozca el volumen preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo de recuento .

Talasemia .

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• La cuenta total de leucocitos se da con la impedancia en la mayoría de aparatos • Algunos aparatos usan la impedancia para medir el volumen nuclear y realizar un diferencial 3 Diff. granularidad y estructuras complejas. pero nunca ser los definitivos. con el fin de detectar con mayor precisión : tamaño. morfología nuclear.Estudio de la Serie Blanca • Es en el estudio diferencial de leucocitos donde se han desarrollado mas y nuevas tecnologías. que muestra linfocitos. forma. Mas usados en pacientes saludables . granulocitos y células mixtas • Estos diferenciales se acompañan de histogramas y deben ser tomados en cuenta.

Estudio de la Serie Blanca • Los datos mas confiables para el leucograma electrónico los ofrecen los diferenciales 5 Diff • Estos ofrecen análisis por medi de : • 1. canales de lobularidad . citoquímica • 5. rayo láser ( scatter light ) • 2. impedancia • 4. radiofrecuencia • 3.

• La utilización de citoquímica para detectar los granulocitos se encuentra en algunos instrumentos. la composición y cantidad relativa de diferentes clases de lípidos en la membrana de los leucocitos. con el uso de la peroxidasa. muestra patrones característicos. para basófilos • Análoga a la especificidad de los antígenos. en conjunto con un canal de lobularidad. que son diferentes para cada tipo de célula • Una reacción cito-química. basada en estas características de la membrana es la mejor forma de estos instrumentos para diferenciar granulocitos maduros de los inmaduros .

crioglobulinas criofibrinógeno proteínas monoclonales eritroblastos agregados plaquetarios eritrocitos no lisados microcoagulos heparina circulante . 8. 7. 4. 6. 3. 5.• Causas de interferencia en serie blanca : • • • • • • • • 1. 2.

relación sangre total / anticoagulante. y la no formación de hemólisis y espuma. homogenización. temperatura. Son indispensables para un resultado confiable .Estudio de las Plaquetas • El computo se hace habitualmente por impedancia • La condición de una muestra en circunstancias de tiempo.

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Histogramas de Plaquetopenias .

a fin de que las plaquetas como son tan pequeñas no permanezcan en el área de recuento y por lo tanto no se cuenten más de una vez .•COULTER utiliza su tecnología patentada de SWEET FLOW que consiste en hacer circular una corriente de diluyente en la parte inmediatamente posterior de la apertura de eritrocitos.

despues de varias horas pierde confiabilidad. Mieloproliferación . • Los cambios reales dependen de la alteración en la generación medular de plaquetas • Presenta alteraciones en pacientes con plaquetas gigantes • El PDW o ancho de distribución plaquetaria. ya que cambian de forma desde el momento de su extracción.• Ante un recuento plaquetario disminuido. se debe de hacer un examen microscópico de toda la lámina y/o recuento en cámara. • Las plaquetas se comportan de manera particular. para luego estabilizarse. Mielodisplasia. corresponde a la amplitud de distribución o anisocitosis plaquetaria y se encuentra alterado en PTI.

microcitos 3.• Debe tenerse presente que algunas condiciones con producción defectuosa medular liberan plaquetas muy pequeñas y entonces el PDW. pseudotrombicitopenia 2. heparina . fragmetos eritrocitarios 4. microcoagulos 6. inclusiones eritrocitarias 5. ya que el equipo no realiza los cálculos • Es definitivo que toda alteración plaquetaria debe realizarse al examen microscópico • • • • • • • Alteraciones en el recuento automatizado : 1. VPM y P-LCR presentan valores muy bajos • En trombocitopenias es muy útil el histograma.

en el baño de eritrocitos se encuentra una apertura de 50 µm y en el de los leucocitos otra de 100 µm.• Los sistemas COULTER poseen 2 baños. uno de eritrocitos y otro de leucocitos. .

HISTOGRAMAS .

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Método de Conteo Celular por Dispersión de la Luz • Medida a 0º sirve para medir el tamaño celular Medida a 10º mide la complejidad celular Medida a 90º mide la superficie celular y la estructura interna ( granularidad ) Medida a 90ºD mide determinados tipos de granularidad celular • • • .

. que suministran información sobre el tamaño de la célula. se produce la interacción con el rayo láser con ángulos diferentes. la estructura interna. la granularidad y la morfología de la superficie.FOCALIZACIÓN HIDRODINÁMICA • A medida que las células penetran en el área de visualización específica.

dentro de un vehículo líquido. con orientación metodológica. que mide las células en suspensión.• CITOMETRIA DE FLUJO “ Una subdisciplina de la citología analítica. a su paso por una estación de medida ” NCCLS .

. nos revelan su composición interna Una frecuencia alta. sobreimpuesta a la corriente directa. que incide sobre las células para medir su densidad.RADIOFRECUENCIA ( Conductividad ) La conductividad de las ondas de radio A través de las células. generada por un oscilador de cristal.

TECNOLOGÍA VCS • IMPEDANCIA • SCATTER LIGHT • RADIOFRECUENCIA .

RF Centroide inicial De los granulocitos Centroide Inicial de Linfocitos Centroide inicial de Monocitos DC Centroide inicial Del estroma .

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Eosinófilos Neutrófilos Polinucleados Monocítos Basófilos Linfocítos .

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VCS CD CD RF. DC. RF Retic % Citometria de flujo & fluorescencia .PARAMETRO PRINCIPIO WBC RBC/PLT HGB HCT LY. CD. GRAN EO BASO IMI Impedancia Corriente Directa/ enfoque hidrodinámico Lauril Sulfato de sodio (SLS ) Cianmetahemoglobia. Radiofrecuencia ( RF ). Fotométrico Acumulación de la altura de los pulsos Citometria ( MAPSS ). MO.

Velocidad 2. Cálculo automatizado del Hematocrito y constantes 4. Toma de muestra de una cantidad medida 3. Enumeración de partículas Ventajas de los métodos electrónicos : 1. Impresión de resultados .Todo conteo celular comparte tres pasos básicos : 1. Dilución de la sangre 2. Precisión 3.

R.• • El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria de la altura de los pulsos de las células rojas y dividido por el conteo de G. El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el Hematocrito • .R. • El volumen del paquete celular es calculado del MCV multiplicado por el conteo de células rojas • El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y el conteo de G.

pudiendo aparecer falsos conteos bajos de leucocitos ( WIC / WOC ) Títulos altos de aglutininas frías. son responsables de macrocitosis y valores altos de MCHM 2. . pueden alterar el valor de la Hemoglobina. y Hematocrito. En LLC y otras leucemias las células son fácilmente dañadas por la apertura.1. MVC. que agregan los GR a temperaturaambiente. La turbidez producida por conteos elevados de células blancas. 3.

Hematocrito :
Se mide en % y representa la proporción total de GR en la sangre. • No se mide directamente con los citómetros de flujo y se calcula a partir del VCM y en número de GR. Tiene menor presición El hematocrito es medido electrónicamente : “ el pulso que es generado cuando los GR pasan a través de la abertura es proporcional a su volumen “. Se determina comparando el volumen total o acumulado de GR al volumen total de sangre en los 11.7ul de la dilución 1:500

El conteo diferencial manual está sujeto a varios errores
• • • • • Errores en la preparación del frotis Errores en la tinción del frotis Distribución celular Interpretación celular Número de células contadas

Un buen diferencial automatizado debe ser capaz de : 1. Identificar células normales y anormales 2. Resultados reproducibles en conteos repetitivos 3. El conteo debe exceder largamente ( 8,000 – 32,000 cel. ) al tradicional conteo manual ( 100 – 200 células ) 1. El conteo debe llevarse a cabo en un mínimo lapso de tiempo 1. Se debe tener capacidad de almacenamiento de datos

eosinófilos y neutrófilos son identificados por su contenido de perooxidasa 2. la esterasa monocítica reacciona con el alfa naftil butirato.1 – naftol se adiciona para colorear los gránulos peroxidasa positivos 3.Solo un ejemplo : Tinción Citoquímica 1. la heparina de los gránulos del basófilo reacciona con el azul alciano. una tinción usada para demostrar mucopoliscaridos 8. los neutrófilos se tiñen en varios tonos de gris 4. una mezcla de peróxido de hidrógeno y 4 .cloro . Los linfocitos permanecen sin ser coloreados . los neutrófilos con alta actividad peroxidasa son contados como juveniles 6. el alfa naftol se libera y se combina con la fucsina básica diazotizada en la mezcla para formar precipitado rojo intracelular 7. los eosinófilos se tiñen de negro 5.

Gráfica de Control de los Indices Eritrocitarios 1 +3% 0% .3% + 3% 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 VCM HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .

signo de obturación parcial del orificio de recuento +3% VCM 0% .Desplazamiento del VCM yHCM en la misma dirección.3% + 3% HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .

Desviación de la HCM y CCMH en el mismo sentido decreciente. causada por desajustes en la calibración de la Hb o recuento de hematíes +3% VCM 0% .3% + 3% HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .

3% + 3% HCM 0% -3% + 3% CCMH 0% -3% .Patrón con un pico de desviación positiva del VCM y HCM. causada por la incorporación de muestras de enfermos con marcada macrocitosis. +3% VCM 0% .

0 24.0 48.Effect of specimen storage at room temperature ( 18º .20ºC ) 0n the complete blood count parameters of the Abbott CD 3500 blood analyzer.0 12.0 2.0 4.0 .12 0 0.5 1.0 8. 10 8Change ( % ) 6420-2 -4 -6 -8 WBC RBC HB MCV PLT HCT Time ( h ) -10 .

5 1 2 4 8 12 24 48 Basófilos Time ( h ) . resultados del autoanalizador hematológico Abbott CD 3500 20 10 0 Linfocitos v Change ( % ) -10 -20 Neutrófilos Eosinófilos Monocitos -30 -40 -50 -60 0 0.Efecto del almacenamiento a temperatura ambiente ( 18 -20 ºC ) sobre el conteo diferencial de leucocítos.

Hgb. Hct MCV. MCHC. calibración y control de calidad. PLT. Linfocitos. para resultados. MPV. RBC & PLT. (% y conteo absoluto). Interfase: salida RS 232 . •Tarjetas de Memoria "Smart Cards". RBC. Monocitos. Muestreo: 10 ul sangre total en tubo cerrado con limpieza automática del capilar de muestreo. RDW. •Capacidad: 55 muestras/hora con identificación por teclado alfanumérico y reporte de alarmas por fallas en el conteo o por resultados patológicos. Pct. PDW.ADVIA 60 Algunas de sus Características •18 Parámetros: WBC. •Histogramas de WBC. Granulocítos.

21 .3000 SX .Sismex SF .

COULTER .

CELL-DYN 4000 .

CON EL LAMINADOR SMS – 5H2901 MUCHAS GRACIAS ! .SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADO CELL DYN 4000.

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