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INTERPRETACION DE HISTOGRAMAS

SANGUINEOS

AUTOMATIZACIN EN HEMATOLOGA
* Exactitud
* Precisin
* Rapidez
* Standarizacin
* Screening

TOMA DE MUESTRA Y PROCESAMIENTO


* Sangre entera(EDTA-K3)
* Volumen requerido
* Procesamiento dentro de las 4 h
* Conservar refrigerada
* Temperatura ambiente

CMO DIFERENCIAR LOS


DIFERENTES TIPOS DE LEUCOCITOS?

Utilizando sus diferentes caractersticas, TAMAO Y


COMPLEJIDAD CELULAR
Para eso utilizaremos cuatro tecnologas combinadas:
* Citometra de Flujo
* Dispersin de Laser
* Tincin Citoqumica
* Impedancia Elctrica

IMPEDANCIA (RESISTENCIA) ELECTRNICA


PRINCIPIO DE COULTER
Clulas malas conductoras de electricidad
El principio de impedancia en el recuento de
clulas se basa en la deteccin y medicin de
cambios en la resistencia elctrica producida
por las clulas cuando atraviesan una pequea
abertura.
Las clulas suspendidas en un diluyente
conductor de la electricidad, se hacen pasar a
travs de una apertura (orificio), el paso de
cada clula individual aumenta transitoriamente
la impedancia (resistencia) elctrica entre dos
electrodos que estn situados a cada lado de la
apertura causando un cambio en el voltaje entre
los dos electrodos proporcional al cambio de la
resistencia y as, al volumen de la clula que
pasa a travs de la apertura.

LA AMPLITUD DEL PULSO DE VOLTAJE GENERADO ES DIRECTAMENTE


PROPORCIONAL AL TAMAO DE LA PARTCULA.

EL NMERO DE PULSOS ES PROPORCIONAL AL NMERO DE


CLULAS CONTADAS.
El tamao de la apertura para los
GR y PLQ es ms pequeo para
aumentar la sensibilidad del
recuento plaquetario

LO QUE PERMITE LA DISCRIMINACIN Y EL CONTEO DE CLULAS DE


TAMAO ESPECIFICO

CONDUCTIVIDAD ELCTRICA
La radiofrecuencia (RF) o la resistencia a la corriente electromagntica de alto voltaje
a veces se utiliza junto con la la resistencia a la corriente continua de bajo voltaje.
CORRIENTE CONTINUA(CC): altura del pulso ~ volumen celular
RADIOFRECUENCIA (RF): altura del pulso ~ tamao y densidad nuclear

MTODOS PTICOS
PRINCIPIO DE LA CITOMETRA DE FLUJO
las clulas de la muestra son alineadas para que una a una pasen a travs de la
regin sensora donde interceptan un haz de luz focalizado
generando seales pticas (que corresponden a distintas parmetros fsicos o
bioqumicos de cada clula) de dispersin y fluorescencia.
las cuales son convertidas en pulsos elctricos proporcionales, digitalizadas y
almacenadas en la PC.

El nmero de pulsos generado es directamente proporcional al nmero de clulas que


atraviesan la zona de sensora (recuento celular)

ENFOQUE HIDRODINAMICO Sistemas


Impedancia (algunos)
La muestra diluida es inyectada a presin en el
centro de un fluido envolvente dentro de una
cmara cnica, esto genera un flujo laminar
que logra ordenar a las clulas para que
circulan una a una por el centro de la apertura.
El enfoque hidrodinmico aumenta la
exactitud y precisin porque:
disminuye la coincidencia
evita acumulacin de protenas
elimina errores por la recirculacin de
clulas
elimina errores por la deformacin de las
clulas
Otros contadores para disminuir estos errores
utilizan sistemas de limpieza, mecanismo de
retrolavado o flujo de barrido y correccin
electrnica de la coincidencia.

Todo equipo automatizado, suministra dos tipos de resultados: un informe


numrico y un informe grafico.
A partir de las seales generadas por los detectores y procesadas automticamente
se presentan en pantalla las representaciones grficas de las distintas poblaciones
celulares mediante citogramas e histogramas.
Los histogramas son grficos de un solo parmetro que proporcionan informacin
sobre el nmero de clulas y la intensidad del parmetro medido (eje X).
Citogramas o dispersogramas relacionan 2 o 3 parmetros. Intensidad del
parmetro 1 (eje Y) vs Intensidad del parmetro 2 (eje X)

EQUIPOS
* IMPEDANCIA + ESPECTROMETRA ABSORCIN : COULTER
(RBC-INDICE HEMATIMTRICOS PLT WBC HB)
* IMPEDANCIA + RADIOFRECUENCIA +
ESPECTROMETRA DE ABSORCIN: 3 DIFF
* IMPEDANCIA + RADIOFRECUENCIA +
ESPECTROMETRA + DISPERCIN DE
LUZ/FLUORESCENCIA/ OTRA : EQUIPOS 5 DIFF

ANALIZADORES HEMATOLGICOS
* Rapidez = 90-150 hemogramas/hora
* 18-25-38 parmetros hematolgicos
* 10000 clulas examinadas
* 40-300 ul de muestra
* Carryover ausente
* 4 a 6 Reactivos utilizados
* En general con 2 tecnologas: Impedancia,
Citoqumica,Optica, Lser/Citometra de flujo,
Radiofrecuencia, VCS.
* Histogramas

BECKMAN COULTER
Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Impedancia
WBC - Impedancia, enfoque hidrodinmico
Plaq. Impedancia (2-20 fl)
Hb Cianometamoglobina modificado (525
nm)
MCV media del volumen de RBC
(histograma)
Medicin indirecta:
Hct, MCHC, y MCH (calculados)
RDW y MPV (CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferencial
VCS volumen, conductividad, dispersin
Reticulocitos
Coloracin Supravital (nuevo azul de
metileno)
VCS

SYSMEX
Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Impedancia, enfoque hidrodinmico
WBC Impedancia, enfoque
hidrodinamico
Platelets Impedancia, enfoque
hidrodinamico
Hb SLS-Hb (555 nm) (oxihemoglobina +
sodio lauril sulfato)
Ht Deteccin de pulsos acumulativos
Medicin indirecta:
MCV, MCHC y MCH (calculados)
RDW y MPV(CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferencial
Deteccin con DC/RF
Emplea lsis diferencial
Reticulocitos
Colorante Supravital (Aramina O)
Deteccin Fluorescente

ABBOTT

Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Impedancia
WBC Dispersin ptica (primaria),
Impedancia (secondaria)
Plaquetas Impedancia (2-30 fl)
Hb Cianomethemoglobina modificada
(540 nm)
MCV volumen medio de RBC
(histograma)
Medicin Indirecta:
Hct, MCHC y MCH (calculados)
RDW (valor relativo equivalente al CV)
WBC Diferencial
MAPSS
Reticulocitos
Coloracin proprietaria
Dispersin Multingulo
Deteccin Fluorescen

SIEMENS

Principios de Medicin
Medicin directa:
RBC Enfoque hjdrodinmico, lser de bajo
y alto ngulo
WBC - Enfoque hjdrodinmico, dispersin
ptica y absorpcin
Platequetas Enfoque hidrodinmico, lser
de ngulo bajo y alto(1-60 fL)
Hb Cianomethemoglobina modificada (546
nm)
MCV volumen medio de RBC (histograma)
Medicin indirecta:
Ht, MCHC y MCH (calculados)
RDW y MPV (CV de sus respectivos
histogramas)
WBC Diferential
VCS volumen, conductividad, dispersin
Reticulocitos
Coloracin Supravital (Oxazina 750)
Dispersin ptica de bajo y alto ngulo

INTRODUCCIN
Mtodo automatizado
HISTOGRAMAS qu son?
Es una grfica de la distribucin de un conjunto de medidas.
Toma datos variables (peso, estatura, tiempo, tamao, etc.) y
despliega su distribucin.
Los procesos inusuales o sospechosos pueden indicar que
un proceso necesita investigacin.
Poblacin

Agrupar

Peso

Graficar

Hombres Mujeres

50-60

////

////

61-70

//

////

71-80

////

//
Sociedad Latinoamericana para la Calidad, 2001

Histogramas en la citometra hemtica

Indican en general:
La distribucin de las clulas segn su tamao.
Promedio del tamao de las clulas dentro de una
poblacin especfica.
La presencia de subpoblaciones clnicamente
significativas.

RECUENTO DE GLBULOS ROJOS Y PLAQUETAS


RBC/ PLT
Impedancia (con/sin enfoque hidrodinmico)
ptico dispersin y/o fluorescencia
Impedancia y ptico
DISCRIMINADORES FLOTANTES

Para determinar cuales son los pulsos que representan los RBC y cuales son los pulsos
que representan las PLTs, los equipos utilizan los discriminadores fijos o flotantes (que
se mueven para adaptarse a las poblaciones celulares).
PLT = 2 - 30 fl (tamao entre 8-12 fl)
RBC = 25 - 250 fl (tamao entre 80-100 fl)

HISTOGRAMA DE ERITROCITOS
RBC: Approx. 25 - 250 fL

LD (Lower Discriminator): 25 a 75 fL
UD (Upper Discriminator): 200 A 250 fL .

ALERTAS PUEDEN DEBERSE:


DESVIACIN A LA IZQUIERDA
RBC fragmentos
Plaquetas gigantes
Microcitos
DESVIACIN A LA DERECHA
WBC fragmentos
Macrocitos
Crioaglutininas

FUENTES DE ERROR

Aglutininas fras:
Bajos contajes de RBC y altos MCV pueden
ser causados por las aglutininas de los
hemates. Si estn presentes, tambin el
hematocrito y los MCHCs pueden ser tambin
incorrectos.
Pueden presentarse en la mononucleosis
infecciosas y en las infecciones por
mycoplasma (neumona).
Si se observan RBC aglutinados en el frotis de
sangre perifricas, calentar la muestra a 37C,
mezclarla y analizarla mientras est caliente

* RBC fragmentados o microcticos:


* Pueden causar conteos bajos de RBC y pueden dar
un aviso en el conteo de las plaquetas puesto que se
vuelven muy cercanas al tamao de las plaquetas y
pueden originar un histograma plaquetario anormal.

* Acmulo de plaquetas y satelitosis:


* Esto causa un conteo falsamente disminuido
de las plaquetas y se puede confirmar revisando
el frotis. Siempre tratar de examinar el borde
del frotis cuand se tienen contajes bajos de
plaquetas.

* Plaquetas gigantes:
* Se aproximan al tamao de un hemate.
Pueden causar que la cola derecha del
histograma permanezca elevada y pueda verse
a la izquierda del histograma de los RBC.

RBC Nucleados:
Estos pueden interferir con los WBC en
algunos instrumentos y ser contados como
leucocitos(linfocitos)

HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
PLT: Approx. 2 - 30 fL
LD (Lower Discriminator): 2 a 5 fL
UD (Upper Discriminator): 25 a 30 fL .
ALARMA
LRI (Low Region Interference)

ALARMA
URI (Upper Region Interference)

Se debe a la acumulacin de datos en la regin


de 2 3 fl. Causas :
Microplaquetas
Se debe a la acumulacin de datos entre los 20
Hemlisis
y 40 fl. Causas :
Fragmentos celulares
Acumulacin de plaquetas
Crioglobulinas
Macroplaquetas
Inclusiones intraeritrocitarias
Eritrocitos Microcticos
Residuos en la apertura
Agregados plaquetarios
Eritrocitos Fragmentados

HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

Un grfico que siga la lnea roja debe


interpretarse como posible agregacin
plaquetaria (el origen intra o
extravascular de la misma no puede
determinarse) o con un aumento en el
nmero
de
plaquetas
grandes,
fragmentos celulares (membranas de
glbulos rojos)
Un grfico que siga la lnea verde debe
interpretarse
como
interferencia
producida por microcitosis marcada,
glbulos rojos de menos de 30 fl.
(recordar que tanto plaquetas como
glbulos rojos se miden por impedancia
en una misma cmara y de manera
simultnea.)

HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

Una agregacin plaquetaria lleva


consigo una disminucin en el
nmero de plaquetas (2 o ms
plaquetas agregadas son contadas
como una de mayor tamao).
Por lo tanto cada vez que se
encuentre una alteracin en la forma
del histograma de plaquetas, debe
investigarse microscpicamente la
muestra en busca de agregacin
plaquetaria.