BACTERIAS

Prof. MSc. Alberto Maestre

albertomaestrep@correo.unicordoba.edu.co

Curso: Microbiología

Programa de Biología, Unicordoba

2022-I
 Bacterias
Las bacterias son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisión binaria.
Tamaño de procariotas (entre 0.2 μm y 700 μm de diámetro) Ej. Epulopiscium fishelsoni
(>600 μm)
Tamaño bacilos entre 0.5 y 4 μm (diámetro) y 15 μm de largo.
Las de interés médico 0.2 y 2 µm
 En su mayoría son de vida libre
 Algunas son de vida intracelular obligada (Ej. Chlamydia y Rickettsia)

Caulobacter en división Son omnipresentes, están en Epulopiscium fishelsoni

todo lado
 Morfología bacteriana

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Estructura bacteriana
Estructuras obligadas: pared celular, membrana celular, ribosomas y
material genético.
Estructuras facultativas: flagelos, fimbrias, pilis, cápsula y endosporas.
 Membrana plasmática
Presencia de esteroles en metanótrofas y micoplasmas

Colesterol Hopanoides

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Pared celular bacteriana es de peptidoglucano

Estructura global del peptidoglicano

Tomado de: Madigan et al., 2015

Pared celular (enlaces)
 Pared celular bacteriana
Pared celular de Bacterias Gram+

Tomado de: Madigan et al., 2015

Pared celular de Bacterias Gram-

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Estructura del lipopolisacárido de Bacteria
gramnegativas.

El polisacárido O (galactosa, Salmonella Lípido A son el ácido

glucosa, ramnosa y manosa , así KDO=Cetodesoxioctonato caproico (C6), laúrico
como uno o más didesoxiazúcares (C12), mirístico (C14),
(abecuosa, colitosa, paratosa o palmítico (C16) y
tivelosa). esteárico (C18).
Endotoxina: responsables de varias
enfermedades bacterianas.
Shigella y Escherichia

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Periplasma en Gram-

Pared celular de Escherichia coli observada por microscopia electrónica.

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Cápsulas y capas mucosas
Las cápsulas y las capas mucosas pueden ser gruesas o finas, rígidas o flexibles,
dependiendo de su composición y su grado de hidratación.

Micrografía electrónica de transmisión de un

Cápsulas de Acinetobacter observadas
corte fino de una célula de Rhizobium trifolii
por tinción negativa con tinta china
teñida con rojo de rutenio para revelar la
cápsula.

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Fimbrias, pilis
 Pelos de tipo IV
(movilidad de tirones)
Diámetro 6 nm

Deslizamiento sobre
superficie sólida
(Pseudomonas y
Moraxella)

Tomado de: Madigan et al., 2015

Por ejemplo, Fimbrias en especies de Salmonella

(salmonelosis), Neisseria gonorrhoeae (gonorrea) y
Bordetella pertussis (tos ferina).
 Movimiento bacteriano: estructura y función del flagelo
Movimiento por deslizamiento y natación. Tienen de 15 a 20 nm de grosor.
M. Óptica (tinción especial)
M. Electrónica
 Biosíntesis del flagelo
Estudios realizados con Escherichia coli y Salmonella typhimurium indican que
hay más de 50 genes relacionados con el movimiento.
Disposición de los flagelos varia según la bacteria
 Citoplasma bacteriano
Material genético, plásmidos, cuerpos de inclusión, ribosomas
 Inclusiones celulares

poli-beta-
hidroxialkanoat
os (PHA)

Glucógeno

Micrografía en campo claro de células de la bacteria

roja del azufre Isochromatium buderi
Micrografía electrónica de la bacteria Rhodovibrio
sodomensis mostrando gránulos de PHB
Vesículas de gas

Anabaena flosaquae. La célula oscura del centro es un

heterocisto que carece de vacuolas de gas. Micrografía electrónica de transmisión de la
cianobacteria Microcystos.
 Endosporas
Son impermeables a la mayoría de los colorantes

Activación,
germinación y
crecimiento

Ciclo de vida de una bacteria formadora de endosporas

Ej. Clostridium tetani

Ej. Bacillus cereus

Ej. Bacillus subtilis
 Proceso de esporulación
Capas de endospora
Exosporio: proteína
Cutícula: proteínas
Córtex: peptidoglicano
Núcleo…

Dipicolinato de Ca
SASP (pequeñas
proteínas): protegen
de daño UV al DNA

En Bacillus subtilis proceso 8 hrs.

Participan >200 genes

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Metabolismo y nutrición bacteriano

El famoso ATP
OBTENCIÓN DE ATP
Tomado de: Tortora, 2007  FOSFORILACIÓN A NIVEL DEL SUSTRATO
 FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
 FOTOFOSFORILACIÓN
 Enzimas y reacciones químicas

Coenzimas

NAD+ (cont. Derivados de

niacina)
NADP+
FMN (cont. Derivados de
rivoflavina
FAD
Coenzima A (CoA ) (cont.
Derivado de ácido pantoténico)

Tomado de: Tortora, 2007

REACCIONES DE OXIDACIÓN Y REDUCCIÓN (REDOX)

Tomado de: Tortora, 2007

VÍAS METABÓLICAS DE PRODUCCIÓN DE ENERGÍA

La mayoría de los microorganismos oxidan hidratos de

carbono como fuente principal de energía celular.

También puede catabolizar lípidos y proteínas para

producir energía

Obtención de ATP de la glucosa: respiración celular y

fermentación
 Glucólisis
 Oxidación de glucosa y se produce ácido pirúvico (la mayoría de los microorganismos).
 Acontecen 10 reacciones catalizadas por enzimas diferentes. No requiere oxígeno.
 VÍAS DE GLUCÓLISIS ALTERNATIVAS

VÍA DE LAS PENTOSAS FOSFATO VÍA DE ENTNER-DOUDOROFF

Opera simultáneamente con la glucólisis 2 moléculas de NADPH y 1 ATP

Degradación de pentosas bacterias gram - negativas, com o las de

los géneros Rhizobium, Pseudomonas y
Producción de pentosas intermediarias Agrobacterium, Azotobacter, etc.

Producción de coenzimas reducidas Identificación de Pseudomonas en el

NADPH laboratorio

Ganancia neta de 1 ATP

Bacterias que utilizan esta vía

B. subtilis, E . coli, L. mesenteroides y E.
faecalis.
 Respiración celular y fermentación

Piruvato

Respiración Fermentación

Aeróbica Anaeróbica
Necesita oxígeno No necesita oxígeno
O2 aceptor final de e- Molécula inorgánica aceptor
final de e- (Dif. O2)
Raramente molécula
orgánica
 Respiración aeróbica

Tomado de: Madigan et al., 2015

 BALANCE ENERGÉTICO R. AERÓBICA

Tomado de: Tortora, 2007

 Respiración anaeróbica
• Pseudomonas y Bacillus, pueden utilizar el ión nitrato (NO3-) como aceptor
final de electrones; éste es reducido a NO₂⁻, N2O o N2.

• Desulfovibrio utilizan sulfato (SO₄²-) como aceptor final de electrones para

formar (H2S).

• Algunas utilizan CO32− para formar CH4

• Las bacterias que utilizan nitrato y sulfato como aceptores finales es un

proceso esencial en los ciclos naturales del nitrógeno y el azufre.

• La producción de ATP siempre es menor que en la respiración aerobia

 Fermentación
Libera energía a partir de azúcares u otras moléculas
orgánicas, como aminoácidos, ácidos orgánicos, purinas y
pirimidinas.

No necesita oxígeno

No necesita recurrir al ciclo de Krebs ni a una cadena

transportadora de electrones.

Utiliza una molécula orgánica como aceptor final de

electrones.
Sólo produce pequeñas cantidades de ATP
Fermentación láctica y alcohólica

Streptococcus y Lactobacillus
(homofermentadores)
PRODUCTOS FINALES DE DIVERSOS TIPOS DE
FERMENTACIÓN MICROBIANA

Tomado de: Tortora, 2007

Catabolismo de Lípidos y proteínas

Tomado de: Tortora, 2007

 Comparación entre R. aeróbica, anaeróbica y fermentación

Tomado de: Tortora, 2007

Usos industriales de distintos tipos de fermentación

Tomado de: Tortora, 2007

Diversidad metabólica entre los distintos organismos
Crecimiento y Nutrición microbiana
Requerimientos físicos (Tº, pH y presión osmótica)

Psicrófilos: 0ºC-15ºC (Tº Óptima)

Sicrótrofos: 0ºC-20/40ºC (relacionados con deterioro de alimentos) (psicrotolerantes)
Mesófilos: 25ºC-45ºC, 37ºC patógenos.
Termófilos: óptima >45ºC hasta 70ºC bacterias y arqueas
Hipertermófilos: > 80ºC arqueas
 pH y presión osmótica

Acidez o alcalinidad de una solución

Mayoría de bacterias crece (6,5 - 7,5)

B. firmus pH 7,5 – 11 (alcalófilo)

Otras crecen (por debajo de pH 4)

Ej. bacterias quimioautótrofas, que se
encuentran en el agua de desagüe de las minas
de carbón y oxidan el azufre para formar ácido
sulfúrico (pH 1)
Casi todos los nutrientes que obtienen
Hongos (pH de 5-6), algunos crecen a pH 2 los microorganismos se encuentran
Producto de metabolismo se producen ácidos y
disueltos en el agua circundante.
afecta el crecimiento bacteriano, ¿Cómo se
soluciona eso en el lab.? Halófilos extremos (15%-30% NaCl)
Osmófilos: alta azúcar
a.a Xerófilos: ambientes secos
Peptonas
Sales de fosfáto
Algunos ejemplos
 Crecimiento y Nutrición microbiana
Requerimientos químicos
Composición química de una célula procariótica
Peso seco célula típica: 50% de C y 12 %
N disponible (NH3, NO3−, N2)

Bacterias asimilan: Los aminoácidos, los

ácidos grasos, los ácidos orgánicos, los
azúcares, las bases nitrogenadas, los
compuestos aromáticos, entre otros.

Autótrofos: CO2, Comp. Inorgánicos =

construir estructuras orgánicas.

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Macronutrientes y
micronutrientes

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Factores de crecimiento: vitaminas

Son sustancias necesarias para el desarrollo

de la biomasa y para la producción de
ciertos metabolitos

Pueden ser vitaminas, aminoácidos, además

de ácidos grasos y esteroles

Muchas fuentes naturales de carbono y

nitrógeno contienen factores de crecimiento.

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Oxígeno (O2)
Tipos de microorganismo en relación con el oxígeno y efectos sobre su crecimiento

Tomado de: Tortora, 2007

Formas tóxicas del oxígeno: Oxígeno singulete (1O2-), radicales libres superóxido (O2-
), anión peróxido (O22-) , radical hidroxilo (OH-).
 Medios de cultivo
Datos de 20021: hay más de 106 especies de microorganismos en el
planeta Tierra1

1030 células de microorganismos2

4x109 estrellas en el Universo

Actualmente podemos cultivar aprox. 1% de los microorganismos

existentes en nuestro planeta.

De aprox. 61 filos de bacterias, 31 no tienen representantes cultivado

1
T. Kaeberlein, K. Lewis,S. S. Epstein. Isolating “Uncultivable” Microorganisms in Pure Culture in a Simulated Natural
Environment. SCIENCE VOL 296. 2002.
2
Whitman, W.B., Coleman, D.C. & Wiebe, W.J. Prokaryotes: the unseen majority. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 6578–6583
Descubrir la diversidad microbiana y cultivar nuevos
microorganismos es un paso importante para:

 Comprender mejor los fenómenos naturales

 Descubrir nuevos bioproductos

 Descubrir nuevas herramientas microbianas. Tal vez podamos

encontrar la solución para:

Salud y longevidad hambre crecimiento sustentable

 Clases de medios de cultivo
Medios definidos y medios complejos

En algunos casos no es tan

importante la composición exacta
Preparación: cantidades precisas
del medio para le crecimiento de
de compuestos mas agua destilada.
organismos.
Composición química exacta
Emplean hidrolizados de
Carbono (C): Fundamental.
productos animales o vegetales:
caseína, carne, soja, extracto de
Medio definido simple: una única
levaduras u otras sustancias muy
fuente de carbono
nutritivas

Limitación: no se puede controlar

su composición nutritiva exacta.
 Medios de cultivo selectivos y diferenciales

Escherichia coli en agar EMB

Agar sangre - Staphylococcus aureus Fuente: Carmen Moreno González

Pseudomonas aeruginosa en Agar cetrimida Fuente: BiotechMichael

 CULTIVO DE ENRIQUECIMIENTO
Algunos ejemplos de medios de cultivo de enriquecimiento
son:

Agar sangre
Agar McConkey
Agar chocolate
Agar Sabouraud
TÉCNICAS ESPECIALES DE CULTIVO

Cámaras para anerobiosis Frasco con vela

Jarra para el cultivo de

bacterias anaerobias en placas
de Petri.

Sobre generador de CO2.

Resumen medios de cultivo
Cultivo de microorganismos en el laboratorio

Preparación medio Esterilización de medio Inocular (procedente de

cultivo puro)

Incubar
Autor(a): Juliana Bitterncour
Medios de cultivo sólidos y líquidos

Medios líquidos
Pichia pastoris Colonias
Autor: Alberto Maestre Forma y tamaño son
variables

Tomado de: Madigan et al., 2015

Técnica aséptica

Tomado de: Madigan et al., 2015

 Métodos de siembra bacteriana

Estría en placa Punción

Con hisopos
Tubo inclinado, siembra en Zig-Zag
Dilución de las suspensiones celulares antes de la siembra en
placa
 CRECIMIENTO DE POBLACIONES
BACTERIANAS
Crecimiento exponencial

Experimento de crecimiento iniciado con una sola célula que tiene un tiempo de generación de
30 minutos

Cada periodo fijo de t se dobla el # de células C. exponencial

Formulación del crecimiento exponencial

Fases del crecimiento bacteriano

Curva típica de crecimiento de una población bacteriana

MEDIDA DELCRECIMIENTO MICROBIANO
RECUENTO DE CÉLULAS TOTALES
Método directo (Cámara de Petroff-Hausser)

Limitaciones del método

1 Sin técnicas especiales de tinción no permite distinguir entre células vivas y células muertas.
2 Las células pequeñas son difíciles de ver bajo el microscopio
3 Se requiere un microscopio de contraste de fases cuando las muestras no se tiñen
4 El método no suele ser adecuado para suspensiones de baja densidad celular
5 Las células móviles se deben inmovilizar antes del contaje
6 Los restos presentes en la muestra pueden contarse erróneamente como células.
Medida de la masa microbiana :
métodos turbidimétricos

Las longitudes de onda más

comúnmente usadas para
medir la turbidez bacteriana
son 480nm (azul), 540 nm
(verde), 600 nm (naranja) y 660
nm (rojo).
Recuento de células viables
 Recuento en placa o recuento de colonias

Volumen de cultivo diluido apropiadamente, que no suele ser superior a 0,1 mL

El número de colonias por placa debe oscilar entre 30 y 300
Método de filtración
 Control del crecimiento microbiano
Reducir la carga microbiana o el número de microorganismos
viables presentes en un material, alimento o en una solución.

Por medios físicos

• Esterilización por calor
• Esterilización mediante radiaciones
• Esterilización por filtración

Por medios químicos

• Antisépticos, desinfectantes y esterilizantes

Agentes antimicrobianos utilizados “in vivo”

• Antibióticos, Antifúngicos y antivíricos

Esterilización por calor húmedo: El autoclave
Esterilización por calor seco: hornos
Filtración
Control de microorganismos con radiaciones

Una lámpara ultravioleta se utiliza para descontaminar la superficie del

interior de una cabina de seguridad biológica.
 Control de los microorganismos por medios químicos

Los antisépticos son los agentes químicos que matan o inhiben

el crecimiento de los microorganismos y que pueden aplicarse a
tejidos vivos dada su escasa toxicidad para los tejidos.

Los desinfectantes son productos químicos que matan a los

microorganismos patógenos y se aplican a objetos inanimados.

Los esterilizantes son desinfectantes que en condiciones

apropiadas matan a todos los tipos de vida microbiana, y se usan
para esterilizar objetos inanimados y superficies.
Sustancias químicas antimicrobianas