UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú (DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Departamento Académico de Microbiología y Parasitología

MICROBIOLOGIA GENERAL

Bacterias Anaerobias

Prof. Víctor Crispín Pérez

Los primeros 1000 mill. en anaerobiosis
O<0.5% O: 5-10%
 Respiración
• Obtención de energía por oxidación de sustratos
reducidos (DH2)
• Donante y aceptor de electrones
• Según el tipo de donante de ee:
– Quimiolitotrofos: donante es sustancia inorgánica
– Quimiorganotrofos respiradores el donante es una
sustancia orgánica
• Según el aceptor final de electrones:
– O2: respiración aerobia
– Distinto del O2 / O-combinado: respiración anaerobia
(Membr. Celular sin citocromo-
oxidasa)
 Respiración anaerobia

CO2
Síntesis
ATP Compuesto orgánico Flujo de carbono

Biosíntesis
Flujo de electrones

NO3- Aceptores de
SO4= electrones orgánicos

NADH + H+ + 2 NO3- NAD+ + 2 NO2- + H20

Respiración
anaerobia
 Bacterias anaerobias
• Desarrollo en ausencia de cantidades
significativas de oxígeno (O2) y bajo condiciones
de potenciales redox (Eh) muy reducidos
• No utilizan O2 para obtener su energía.
• Realizan respiración anaerobia o fermentación
• Para algunas el oxígeno es bactericida y para
otras es bacteriostático.
• Los mecanismos de acción tóxica del oxígeno
son diversos (H2O2, radical superoxido, etc.)
• Enzimas: catalasa y superóxido dismutasa (SOD)
 Toxicidad del Oxígeno

O2 + e- → O2- Radical superóxido

O2- + e- + 2 H+ → H2O2 Peróxido de hidrógeno

.
H2O2 + e- + H+→ H2O + OH Radical hidroxilo

(Durante fagocitosis: macrófagos y PMN usan

estos derivados para destruir patógenos)
 Protección contra los tóxicos del Oxígeno
• Superóxido dismutasa:
2O2- + 2 H+ → H2O2 disminuye el radical superóxido
• Catalasa:
2H2O2 → 2H2O + O2
• Peroxidasa:
H2O2 + Sust. reducido → H2O + Sust. oxidado
• Vitamina E, C, glutatión
 Bacterias anaerobias
• Esporas resisten el oxígeno
• Obligados:
- Estrictos: O2 < 0.05 % C. haemolyticum, C. novyi
- Moderados: O2: 0 – 5 % B. fragilis
- Tolerantes: O2: 0 - ? C. histolyticum, C. tertium
• Aerotolerantes: desarrollo escaso en aire
ambiental o en estufa con 5 – 10 % de
CO2; buen desarrollo en anaerobiosis
Distintos aceptores de electrones, y sus productos

Aceptor Producto final

Nitrato Nitritos, óxidos de N y N2
Sulfato Sulfuros
Azufre Sulfuros
CO2 Ácido acético
CO2 Metano
Fumarato Succinato
Fe3+ Fe2+
 Bacterias Anaerobias
• Generalmente metabolismo fermentativo
(compuestos orgánicos como aceptores finales
de electrones)
• Distribución amplia: suelo, agua, lagos,
pantanos, aguas residuales, excrementos
animales (tracto gastrointestinal)
• Hombre: cavidad oral, alrededor de dientes, TGI
(colon: 1000/ 1 coliforme, TGU (vagina), piel
• Bacterias mas frecuentes en la microflora
• Membranas mucosas
 Flora Normal Anaerobia
Cavidad oral y TRS:
Bacilos gram-negativos:
Piel: Porphyromonas Prevotella,
Propionibacterium acnes Fusobaterium nucleatum –
Cocos gram-positivos
Peptostreptococcus Actinomyces
100:1 (ANA/AER)

Tracto genital
femenino:
Bacilos GN: Colon
Porphyromonas Bacilos gram-negativos:
Prevotella bivia- Bacteroides grupo
disiens fragilis–
Cocos y bacilos GP: Cocos y bacilos gram-
positivos - Clostridium,
Clostridium Eubacterium,
Lactobacillus Bifidobacterium
1000:1 (ANA/AER)
 Hábitat

Vagina y cervix Uretra

Prevotella
Prevotella
Porphyromonas
Peptoestreptococcus
Peptoestreptococcus
Fusobacterium
Bacteroides
Veillonella Propionibacterium
Lactobacillus
Eubacterium
Propionibacterium Otros hábitat

Piel Pantanos, suelos, lagos,

Sedimentos de ríos y océanos,
Peptoestreptococcus Aguas negras, alimentos y
Propionibacterium Animales.
 Hábitat: flora normal

Cavidad oral - TRS Intestino grueso

Prevotella Bacteroides frágilis

Porphyromonas Porphyromonas
Bacteroides fusobacterium
Fusobacterium Clostridium
Peptoestreptococcus Bifidobacterium
Veilonella Propionibacterium
Actinomyces

Intestino Delgado
Estómago

Lactobacillus Estreptococos
Lactobacillus
Areas frecuentemente comprometidas
Mas importantes !!
 Bacterias anaerobias
I Esporulados: bacilos gram positivos: Clostridium
II No esporulados:
a) Bacilos gram positivos c) Bacilos gram negativos
Actinomyces (curvados y espiralados)
Bifidobacterium Bacteroides (Prevotella)
Eubacterium Prophyromonas
Lachnospira Borrelia
Lacatobacillus Butyrivibrio
Propionibacterium Campylobacter
b) Cocos gram positivos Fusobacterium
Peptococcus Leptotrichia
Peptostreptococcus Selenomonas
Ruminococcus Succivibrio
Sarcina Treponema
Streptococcus d) Cocos gram negativos
Acidaminococcus
Veilonella
 Importancia de las anaerobias

• Resistencia a la colonización patógena

– Depletan el oxígeno
– Depletan nutrientes
– Producen enzimas y toxinas
• Producción de vitamina K
• Absorción grasa
• Regulación del colesterol
Infección anaerobia: características Generales

• Producción de pus fétida

• Formación de abscesos
• Gran destrucción de tejidos
• Polimicrobianas
• Próximo a superficie mucosa
• Producción de gas (crepitación)
• Necrosis
 Estudio de anaerobios
1. Morfología de la célula y de la colonia (Cultivo)
2. Producción de pigmento
3. Formación de endosporas
4. Beta-hemólisis en agar de sangre
5. Picaduras en el medio
6. Fluorescencia con la luz ultravioleta
7. Movilidad
8. Índice de crecimiento
9. Olor característico del cultivo
10. Producción de catalasa
11. Crecimiento en presencia de bilis al 20%
12. Patrones específicos de la susceptibilidad a los antibióticos
13. Efectos del cultivo en agar yema de huevo
14. Producción de indol
15. Hidrólisis de la esculina
16. Subproductos metabólicos característicos de la fermentación de la
glucosa (identificación por cromatografía de gases)
17. Producción de toxinas
 Cultivo de bacterias anaerobias:
• Requieren condiciones de anaerobiosis,
con potencial redox bajo
• Eh bajo, se logra con medio reductor:
- Medios de cultivo con sustancias
reductoras: cisteína (0.5 – 0.8%), sulfito
ferroso, caldo tioglicolato
• Cultivo en medio semisólido en
profundidad: en tubos de 10-13 mm x 180-
200 mm
Medios de cultivo con sustancias reductoras

Cisteína (0.5 – 0.8%)

Sulfito ferroso
Caldo tioglicolato
 Cultivo de bacterias anaerobias
• Medios de cultivo
enriquecidos (extracto
de levadura, sangre,
suero, líquido ascítico)
y con restos de tejidos
de órganos vitales:
cerebro, corazón,
riñón, hígado, carne
magra
Cooked meat medium
 Cultivo de bacterias anaerobias
• En condiciones de anaerobiosis por eliminación
del O2 (del aire) mediante procedimientos físicos
y químicos:
i) Generación de vacío: bomba de vacío
ii) Bloqueo del ingreso del aire (con
parafina estéril)
iii) Método del pirogalol alcalino
 Método del pirogalol alcalino

Medio de Cultivo Base

Mesa

iii) Transformación del O2 ambiental en agua:

- Mezcla alcalina: carbonato potasio 3 g
pirogalol 3 g
tierra de infusorios 15 g
(sobre conteniendo 3 g de mezcla por placa)
Jarra Anaeróbica • Reacción:
NaHCO3 + Ac cítrico +
BHNa + H2O 2H2 y CO2
Pd
• 2H2 + O2 2H2O

• Es usual colocar un
indicador de anaerobiosis.

• Se obtiene un ambiente libre

de oxígeno

(Jarra Gaspak)
 Conversión del O2 en CO2

Por reacción
química del
oxígeno contenido
en un recipiente
cerrado,
Al encender la vela
el oxígeno se
Convierte en CO2
 Cámara para anaerobios
Mezcla de gases H2 (5 %), CO2 ( 5-10 %) y N2 (85-90 %)
 Cultivo de anaerobios: Identificación

Procedimiento a seguir con cada colonia:

Prueba de tolerancia
Descripción
al oxígeno (CA)
macroscópica
(en agar chocolate en
frasco con vela) Colonia
Coloración de Gram
 Identificacion presuntiva Gram

1- Bacilos Gram negativos:

Discos potencia especial :
Vc 5µg+ Cs 10µg + Ka 1000 µg 2- Bacilos Gram positivos:
Indol Esporulados: No esporulados:
Bilis Nitrato Glucosa Catalasa
Esculina Catalasa CAMP reversa Nitrato
Gelatina Urea Indol
Lipasa Lecitinasa
Indol 4- Cocos Gram
positivos:
3- Cocos Gram
negativos: SPS Indol
Nitrato Nitrato Esculina
Fluorescencia (UV) Catalasa Urea
Fluorescencia, Bacilos gram negativos (Prevotella sp.)
 Fluorescencia bajo luz UV

Bacteria
Color
Porphyromonas
Rosa
o naranja
P. gingivalis
No
fluorece
Prevotella pigmentadas
Roja
Fusobacterium sp
 Cromatograma (de gases)
De productos metabólicos y componentes de la
pared celular
 Bacterias según col. Gram
Intra Wall
Gram+ Gram- Acid Fast Cellular Less

Cocci Rod Spiral Rod Cocci M.t. Rickettsia Mycoplasma

M.l. Coxiella
N.c. Erlichia
Chlamydia
Staph. Strep. Non-spore Spore Treponema Neisseria
Borrelia Moraxella
Leptospira
Fil Rod +O2 -O2

B.a. C.b. Curve

S. a. A A.i. C.d. Straight
S. e. B L. m. B.c. C.t.
S. s. Pn C.p.
C.d. Vibrio
Vir
Campylobacter
+O2 +/-O2 -O2 Other Helicobacter

P.a. Enteric Bact.

Resp. Zoo GU
Bordetella. Yersinia H. ducreyi
H. influenzae Pasteurella Gardnerella
Legionella Brucella Calymmatobacterium
Francisella
Streptobacillus
Anaerobios de Importancia Clínica

Coloración Gram