MEDIOS DE CULTIVO

MICROBIOLOGICOS
CONCEPTOS:
 Dado el pequeño tamaño de los microorganismos, la cantidad de información que puede
obtenerse de un individuo es muy limitada. Por ello es necesario el estudio de poblaciones,
que contienen miles o millones de individuos. Estas poblaciones se obtienen al hacer crecer
los microorganismos bajo condiciones más o menos bien definidas, se conocen como
cultivos.

 La mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite el crecimiento y la

reproducción de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad es lo que
conocemos como Medio de Cultivo

Medio de
cultivo

Cultivo
 El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo.
Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es
atacado por aquellas que crecen en él.
 AGAR
DISUELTO

AGAR
PRESIPITADO
( SIN DISOLVER)
 También se añaden colorantes que actúan como indicadores para
detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del
crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa
como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH
ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide
el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de
cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia
y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.

TEMPERATU
TEMPERATU
RA
RA

NUTRIENTES
NUTRIENTES
Y
Y FACTORES
FACTORES GRADO
GRADO DE
DE
DE
DE HUMEDAD
HUMEDAD
CRECIMIENT
CRECIMIENT
O
O

ACIDEZ
ACIDEZ O
O PRESIÓN
PRESIÓN DE
DE
ALCALINIDA
ALCALINIDA OXÍGENO
OXÍGENO
D
D
 • Un medio de cultivo adecuado ha de contener como mínimo, carbono, nitrógeno,
azufre, fósforo y sales inorgánicas, vitaminas y otras sustancia inductoras del
crecimiento; sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones
para las reacciones químicas que tengan lugar.
DISPONIBILIDAD DE • Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es
NUTRIENTES utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
ADECUADOS
nitrógeno y carbóno

• Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos

como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido
• Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, su
CONSISTENCIA inconveniente es que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente sino a
ADECUADA DEL temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante
MEDIO

• Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal.
Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los
microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera
PRESENCIA (O sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen
AUSENCIA) DE mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy
OXÍGENO Y OTROS reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
GASES cualquiera de las citadas condiciones.
 MEDIO DE CULTIVO
MEDIO DE CULTIVO SOLIDO
LIQUIDO

MEDIO DE CULTIVO
SEMI SOLIDO
 • Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de
las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas
CONDICIONES en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria
ADECUADAS DE
HUMEDAD para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

• La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay
excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos
LUZ AMBIENTAL

• La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de
ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos.
No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano
pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales
pH
 • Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos
crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los
patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen
TEMPERATURA
rangos más amplios.

• Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que
puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados
en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua
ESTERILIDAD DEL a presión como agente esterilizante)
MEDIO
Tipos de medios de cultivo

* MEDIOS DE * MEDIOS DE M EDIOS DE MEDIOS DE

CULTIVO CULTIVO CULTIVO ENRIQUECIMIENTO.
GENERALES. SELECTIVOS. DIFERENCIALES. •son aquellos medios en
• Permiten el •llevan incorporadas • incorpora los cuales a un medio
crecimiento de una determinadas determinadas base se le añaden
gran variedad de sustancias que sustancias que nos determinadas sustancias
microorganismos. inhiben el crecimiento permiten diferenciar nutritivas que son
Pertenecen a esta de un microorganismo entre dos tipos de necesarias para el
categoría las y facilita el microorganismos. Ej. crecimiento de un
infusiones de crecimiento del El agar de sal y microorganismo
extractos de carne y microorganismo que manitol: nos permite exigente.. Por ejemplo el
peptona, una mezcla nos interesa. diferenciar en el caso caldo selenito cistina o el
de composición Pertenecen a esta de los staphylococos, caldo agar sangree.
similar a la de los categoría el caldo los que utilizan el
líquidos orgánicos, lactosa bilis verde manitol en su
que se utiliza para brillante o el agar metabolismo de los
muchas bacterias Salmonella-Shigella. que no.
patógenas
ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases
sellados bajo las condiciones que señale el fabricante.
Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25°), con
poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben
almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o
vapor.
Cada lote de medio de culti
vo, una
vez preparado, esterilizado,
revisado
y en su presentación final,
se identifica mediante una
etiqueta con el nombre del
medio de cultivo 
correspondiente, el número
 de lote y la fecha de
caducidad. Se almacenan
en frigorífico a 4ºC
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
REVISIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Es importante comprobar que el medio se  comporta correctamente.

Las pruebas que debes hacer para tener seguridad son:
 
Revisión macroscópica: Se examina el medio a simple vista, atendiendo a su color,
a su opalescencia y transparencia, a la humedad en las placas ya preparadas y
a la posible aparición de precipitados.
Vigilancia de Ph: Porque la mayoría de los microorganismos se desarrollan mejor
en medios con un pH neutro.
Vigilancia de la esterilidad: Se lleva a cabo incubando a 30 ºC durante 72 horas
una pequeña porción, representativa del lote de medio preparado, para
comprobar que allí no crecen gérmenes.
Prueba de la eficacia: En una pequeña porción representativa del medio
preparado, se inocula un microorganismo
 normalmente el propio fabricante aconseja el más adecuado y se cultiva. Así
se comprueba si en el medio de cultivo preparado ese microorganismo se
desarrolla correctamente.
TIPOS DE SIEMBRAS
MICROBIOLOGICAS
MÉTODO DE SIEMBRA POR ESTRÍA
 Se toma una muestra de la población mixta
 Se hacen estrías sobre la superficie de un medio
sólido preparado en una placa Petrí. Conforme se
van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se
van depositando en la superficie del medio menos
microorganismos.
 Se flamea el asa, se toca en la región donde se han
realizado las últimas estrías y se continúa la siembra
con la misma técnica, en la superficie de medio sin
sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se
logra separar células individuales.
 Se incuba a temperatura adeucuada
MÉTODO DE SIEMBRA EN PROFUNDIDAD

 A partir de las diluciones seriadas preparadas tomamos

1mL de cada una de ellas y lo depositamos en distintas
placas de Petri vacías y estériles.
 Después añadimos un determinado volumen del medio de
cultivo (10-20 mL) que tenemos en un baño María para
evitar que se solidifique.
 Dejamos solidificar y luego incubamos durante 24 horas
a 37ºC.
 Transcurrido el tiempo realizamos el recuento
 método de siembra en superficie
 El medio de cultivo ya está solidificado en la
placa.
 Preparamos las diluciones seriadas y añadimos
a cada placa 1 mL
 Paraextender sobre la superficie de la placa la
muestra se utiliza un asa
 RECUENTO
MICROBIANO
Para el recuento de microorganismos
presentes en una muestra de agua,
suelo, aire, alimento, cultivos, entre
otros, existen diferentes métodos o
técnicas: Algunas técnicas son directas
y permiten un recuento de todas las células,
tanto las vivas como las muertas.
Las medidas directas incluyen los recuentos directos al
microscopio o recuento electrónico, el recuento en placa, o
el cálculo del número más probable (NMP).
Otras son medidas indirectas y miden una propiedad de la
masa de las células como son la turbidez, el peso seco, o una
actividad metabólica.
 recuentos directos al
microscopio
Se basa en colocar un volumen determinado de células y realizar el conteo
utilizando un microscopio. Para ello se utiliza la cámara de recuento de
Petroff-Hauser o de Neubauer: consistente en un portaobjetos con una
excavación de 0.02 mm de profundidad en un área de 1 milímetro cuadrado,
con una rejilla dividida en 25 cuadrados grandes los cuales a su vez se
subdividen en 16 cuadrados de 4X4 o sea que la muestra se distribuye en 400
celdillas. El recuento celular se calcula así: n x 25 x 50 x 1000 = concentración
de células/ml
 recuentos en placa
 Generalmente la muestra original se diluye para que el número de
colonias no exceda las 300 unidades

 Cuando la muestra se diluye el cálculo del resultado se realiza contando

las colonias en aquellas placas que tengan entre 30 y 300, se promedia y
se multiplica por el factor de dilución; Los resultados se expresan en
unidades formadoras de colonias (UFC), el valor de UFC es un valor
que expresa el número relativo de microorganismos de un taxón
determinado en un volumen de un metro cúbico de muestra.
 Para el recuento de
colonias se emplean
equipos que consiste en
una pantalla iluminada la
cual posee una gran lente
de aumento; pueden ser:
contadores de colonias en
los cuales la caja de petri
se ajusta en una
plataforma y se ilumina
por debajo y al mismo
tiempo la lente aumenta
1.5 veces el tamaño del
objeto.
CUENTA
COLONIAS
 RECUENTOS EN FILTROS DE MEMBRANA

Utilizados cuando el número de bacterias es bajo. Son filtros con un poro de

0,45 mm que retienen las bacterias. Se filtra un volumen dado y se coloca
el filtro sobre una placa del medio de cultivo apropiado.
RECUENTO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP)

Basado en un método estadístico. Dependiendo del número de m.o que

sospechamos que puede tener la muestra existen distintas tablas de
trabajo de números más probables. Se utiliza sobre todo en la
industria, para el análisis de agua.
UTILIDAD DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO
 Los medios de cultivo para microbiología permiten el
crecimiento y desarrollo de diferentes microorganismos
(bacterias, levaduras y mohos) necesarios para el sector
industrial.
 En el área industrial los medios de cultivo son usados
para impulsar el crecimiento de algunos
microorganismos indispensables en la producción y
conservación de alimentos, producción vegetal y animal,
insumos industriales, minería y servicios. esto con el fin
de aportar efectos definidos en el proceso de creación y
comercialización de los mismos.
PRUEBAS DE SUPERFICIE –
MANIPULADORES Y AMBIENTES
 La actual legislación (y cada vez más Normas Técnicas ISO, UNE, BRC…) EXIGEN el
control periódico de la higiene de los manipuladores de alimentos, a fin de garantizar
que no son portadores de microorganismos indeseables que pueden contaminar
cualquier tipo de alimentos o incluso bebidas alcohólicas como el vino o la cerveza.
  La falta de higiene de un manipulador  es la fuente principal de intoxicaciones
alimentarias; por ello debe hacerse especial hincapié en el control de las manos, pero sin
descuidar las fosas nasales y la ropa de trabajo.
 La higiene de un manipulador responsable no garantiza que no se convierta en
contaminante cuando está enfermo o convaleciente; por ello es imprescindible su re-
control periódico
Según las recomendaciones actuales, un manipulador mantiene una higien
adecuada si:
– no es portador de estafilococo dorado (Staphylococcus aureus) o cuando lo es, toma las
medidas adecuadas para no contaminar el ambiente y los alimentos (uso riguroso y continuo de
guantes, máscara, gorro e higiene extrema),

– si no incluye coliformes-E.coli en sus manos, que demostrarían una higiene defectuosa

(contaminación por aguas fecales)

– si no es portador de Salmonella, microorganismo del máximo riesgo para cualquier alimento

(hay personas que son peligrosas portadoras sin padecer ya la enfermedad)

– si el recuento de aerobios no supera ciertos límites, que podemos aconsejar sean siempre
inferiores a 5 ufc/mano en industrias de alto riesgo y a 25 ufc/mano en las demás; en cualquier caso
se registrarán las tendencias en cuanto a recuentos totales de bacterias de los diferentes
manipuladores.

Es habitual buscar el estafilococo en las fosas nasales o la garganta, mientras los otros tres
parámetros se buscan principalmente en las manos y ropas.