DETECCIÓN DE LISTERIA MONOCYTOGENES

Presentado a:
CAMILA ANDREA UBAQUE
Instructora
Centro Nacional de Hotelería, Turismo y Alimentos

Presentado por:
Leidy Ariza
Mireya Garay
Carolina Acosta
Wilson López
Ficha: 2068219

Noviembre de 2020
 NTC 4666 DE 1999

La presente norma describe un método horizontal para la

detección de listeria monocytogenes en productos
destinados para el consumo humano o alimentación
animal, en un medio sólido selectivo y su incubación es de
35°C ± 2 °C durante 24h – 48h.
 CONDICIONES DE CRECIMIENTO

Listeria monocytogenes es ligeramente más resistente al calor que otras

bacterias como Salmonella y Escherichia coli, ya que puede crecer a
temperaturas de hasta 45 ºC. También crece a temperaturas de
refrigeración (4ºC) y resiste la congelación (-18ºC). Es capaz de crecer
en ausencia de oxígeno, por ejemplo en alimentos envasados al vacío o
en atmósfera modificada.
 CONDICIONES DE CRECIMIENTO
También sobrevive a altas concentraciones de sal (como es el caso de las
salmueras para la elaboración de embutidos cárnicos que pueden llegar a
tener hasta un 20% de sal) y pH bajos (hasta 3.3). La Listeria tiene la
particularidad de formar biofilm que la protegen de la acción de las
radiaciones ultravioleta, ácidos, sustancias antimicrobianas, salinidad y
desecación y por lo tanto, disminuyen la eficacia de los procedimientos
de desinfección y descontaminación.
DEFINICIÓN

Listeria monocytogenes: Bacilo corto, Gram (+), mesófilo,

aerobio o anaerobio facultativo que forma colonias típicas en
medios sólidos selectivos.

Detección de listeria monocytogenes: Determinación de la

presencia o ausencia de este microorganismo en una cantidad, peso
o volumen, dado del producto.
 MATERIALES
 Aparato para la esterilización seca horno o autoclave
 Estufa que pueda mantener la temperatura 25 °C ± 2 y
50 °C ± 2
 Incubadoras
 Baño de agua
 Asas plásticas
 PH metro
 Tubos o frascos de ensayo
 Probetas de 50 ml a 1000ml
 MATERIALES

 Pipetas graduadas de vaciado total

 Cajas Petri de 90 mm a 100 mm de diámetro
 Jarras
 Microscopio
 MEDIOS DE CULTIVO
En lo que se refiere a las prácticas habituales de laboratorio.
 Medio de Enriquecimiento
Selectivo Primario.
• Caldo fraser con concentración reducida de agentes selectivos.
pH 7,2 + 0,2 a 25 °C

• Caldo Leb-1.
pH 7,4 ± 0,2 a 25 °C

• Caldo Palcam.
pH 7,2 ± 0,2 a 25 °C
MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO
SELECTIVO SECUNDARIO

• Caldo Fraser con agentes selectivos.

pH 7,2 ± 0,2 a 25 °C

• Caldo Leb-2.
pH 7,4 ± 0,2 a 25 °C.
 MEDIOS DE CULTIVO
SÓLIDOS SELECTIVOS

• Primer medio: Agar OXFORD.

pH 7,0 +_ 0,2 a 25 °C.

• Segundo medio: Agar PALCAM.

pH 7,2 ± 0,2 a 25 ‘C

• Agar triptona soja-Extracto de levadura (TSYEA)

 MEDIO DE CULTIVO
LÍQUIDO
• Caldo de tiptona soja Extracto de levadura (TSYEB).
pH 7,3 ± 0,2 a 25 °C

• Agar base con sangre de cordero.

pH 7,2 + - 0,2 a 25 °C.

• Caldo base para fermentación de

carbohidratos ( RMNOSA, XILISA,MATINOL)
pH 6,8 ± 0,2 a 25 °C
 Medios de cultivo

• Prueba de camp y sepas para ensayo

pH 6,8 ± 0,2 a 25 °C.

• Solución de peroxido de hidrógeno.

Se utiliza una solución al 3 % (mlm
METODO DE DETECCION EN
EL LABORATORIO
Enriquecimiento primario

• Se pesan 25 gramos de la muestra en 225 ml de caldo

selectivo (FRASER, LEB-1, PALCAM).
• Se lleva a incubación por un periodo de 24 horas a
temperatura de 30°C ± 2°C.
 Enriquecimiento secundario

• Luego del enriquecimiento primario se inocula 0.1 ml en un

tubo de 10 ml de medio selectivo(caldo FRASER, LEB-2 o
PALCAM).
• Se incuba por un periodo de 24 a 48 horas a una
temperatura de 30°C ± 2°C.
 aislamiento

• Del cultivo obtenido en el enriquecimiento primario se

toma por medio de un asa y se siembra en medio selectivo
(agar OXFORD) .
• Se repite el mismo procedimiento con el enriquecimiento
secundario, se realiza siembra en el medio selectivo (agar
PALCAM).
• se incuban las cajas obtenidas con temperatura de 35°C±
2°C por un periodo de 24 horas o hasta 48 horas.
 CONFIRMACION
Selección de colonias para su confirmación
• Se toma de cada caja 5 colonias sospechosas de listeria spp.
• Se extienden las colonias en la superficie de las cajas de agar
• (TSYEA) ,para permitir que las colonias se desarrollen bien
separadas.
• Estas cajas se incuban por un periodo de 18 a 24 horas con
temperatura de 35°C ± 2°C.
 CONFIRMACION

También se puede hacer pruebas de confirmación por:

• Catalasa
• Tinción de gram
• Prueba de motilidad.
• Ensayo de hemólisis
• Utilizando carbohidratos
• Prueba de CAMP
 EXPRESION DE RESULTADOS

• De acuerdo a la interpretación de resultados se registra PRESENCIA

o AUSENCIA de L. Monocytogenes.
• En el informe se debe especificar método utilizado, temperaturas y
resultados obtenidos.
GENERALIDADES DE LA LISTERIA
MONOCYTOGENES

Listeria Monocytogenes pertenece a la

familia Listeriaceae. Se trata de un
bacilo Gram positivo, con un tamaño de
0,5 - 2 x 0,5 micras, patógeno
intracelular facultativo del sistema
reticuloendotelial y móvil a
temperaturas entre 20ºC y 25ºC.
 Enfermedades
Listeriosis: infección normalmente asintomática y
de ocurrencia relativamente baja. La infección se
puede manifestar de diversas formas, como las que
se indican a continuación:
• Gastroenteritis febril aguda
• Listeriosis local o cutánea
• Listeriosis óculo-glandular
• Listeriosis del sistema nervioso central
• Listeriosis tifoidea
SALUD PUBLICA

• Brote de infecciones
por Listeria vinculado a carnes
frías y quesos cortados en
tiendas o secciones deli
• Brote de infecciones
por Listeria vinculado a jamón
SALUD PUBLICA
El Centro de Control y Prevención de Enfermedades de Estados
Unidos (CDC) reportó uno de los brotes de mayor impacto por L.
monocytogenes en el año 2000, debido al consumo de queso fresco
tipo mexicano, elaborado de forma artesanal con leche cruda
contaminada. En este brote se reportaron 12 casos, 11 mujeres con
edad promedio de 21 años y un hombre de 70 años que desarrolló un
absceso cerebral. Del total de mujeres 10 estaban embarazadas, de
ellas 5 abortaron, 3 tuvieron parto prematuro y en dos casos, se
presentaron infecciones en los neonatos. La tasa de hospitalización fue
del 100%.
 Palabras claves
• Inocular: introducir algo que puede crecer y reproducirse
• Listeriaceae: es una familia de bacterias Gram positivas.
• Sistema reticuloendotelial: Célula derivada de monocitos con
capacidad fagocítica, situada principalmente en el tejido conjuntivo.
• CDC: son uno de los componentes operativos más importantes del
Departamento de Salud y Servicios Humanos.
• Neonato: ​Es un bebé ​recién nacido que tiene 28 días o menos desde
su nacimiento, bien sea por parto o por cesárea
Gracias
😊🤗